全 文 ：落葵果实多糖的提取及含量的测定
赵建芬，李妍，董基，黄清华
（肇庆学院化学化工学院，广东肇庆 526061）
摘 要：考察超声法、索氏法和水提法提取落葵果实多糖的效率，建立测定多糖含量的方法。结果表明：超声法提取率
为 6.240 %，优于其他两种方法；建立苯酚-硫酸比色法测定多糖含量，线性方程为 A=0.065 2C+0.000 2，R2=0.999 1，线
性范围为 1.00 μg/mL～7.00 μg/mL，平均回收率为 99.19 %，RSD为 0.74 %。方法结果稳定可靠，重现性好。
关键词：落葵果实；多糖；提取；含量测定
Extraction and Determination of Polysaccharide from Fruit of Basella rubra L.
ZHAO Jian-fen，LI Yan，DONG Ji，HUANG Qing-hua
（College of Chemistry and Chemical Engineering，Zhaoqing Univeristy，Zhaoqing 526061，Guangdong，China）
Abstract：Studied the extraction efficiency of polysaccharide from the fruits of Basella by ultrasonic method，
Soxhlet method and water extraction method，respectively，and established a method to determine
polysaccharide. The results showed that ultrasonic method was more efficient than the other two methods， the
extraction efficiency was 6.240 %.The content of polysaccharide was measured by Phenol-sulfuric acid assay.
Linear equation was A=0.065 2C+0.000 2 （R2=0.999 1），linear range was covered form 1.00 μg/mL to
7.00 μg/mL. The average recovery of method was 99.19 %，RSD was 0.74 %.The results were stable，accurate
and reliable.
Key words：fruit of Basella rubra L.；polysaccharide；extraction；determination
基金项目：肇庆市科学技术创新计划项目（2011G210）
作者简介：赵建芬（1974—），女（汉），高级实验师，硕士，研究方向：
食品分析。
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.04.008
落葵（Basella rubra L.）又称木耳菜、胭脂菜、紫藤
菜、篱笆菜等，原产于亚洲南部地区，是一类生长迅速、
适应性广、容易栽培的药菜兼用植物，我国各地均可
种植[1]。落葵除含丰富的营养成分外，还含有皂甙、葡
聚糖、黏多糖等药用成分[2]。落葵全株可入药，种子和
叶片入中药味甘。成熟落葵果实为紫红色，含有甜菜
花青素[3]和糖类物质。目前国内外的研究报道中鲜有
从落葵果实中分离多糖的报道。多糖（Polysaccharide）
是由 10个以上单糖通过糖苷键连接而成的聚糖，是构
成生命体的四大基本物质之一。当前的研究表明活性
多糖与增强免疫力、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和降血脂
等密切相关[3]。因此，对落葵果实多糖的提取将为其药
理活性的研究打下基础，并有助于多糖资源的开发和
利用。本工作采用超声法、索氏法和水提法 3种方法
提取落葵果实多糖，苯酚-硫酸比色法测定其含量。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 研究对象
新鲜红花落葵果实：采自高要市莲塘农家菜园。
1.1.2 仪器、试剂
S22/S22PC可见分光光度计：上海棱光技术有限
公司；RE-5299旋转蒸发器：河南巩义市宇翔仪器有
限公司；超声波清洗器 SB25-12D：宁波新芝生物科技
有限股份公司；索氏提取器：购自肇庆顺达有限公司；
BS210S电子天平：北京赛多利斯仪器系统有限公司。
铝片、无水碳酸钠、活性炭，葡萄糖对照品、浓硫酸、石
油醚、95 %乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、正丁醇
等均为分析纯，苯酚为化学纯，药品均购自天津市广
成化学试剂有限公司。
1.1.3 溶液的配置
1.1.3.1 5 %苯酚试剂的制备
称取苯酚 50 g于 100 mL烧瓶中，加入 0.05 g铝
片和 0.025 g碳酸氢钠，蒸馏。收取 182℃馏分。然后称
分离提取
食品研究与开发
Food Research And Development
2013年 2月
第 34卷第 4期
26
取纯苯酚固体 7.5 g，加水溶解并定容至 150 mL，置棕
色瓶内放冰箱备用。
1.1.3.2 葡萄糖标准溶液的配置
称取 105℃干燥恒重的葡萄糖 0.025 0 g，加水溶
解并定容至 250 mL，配成浓度为 100.0 μg/mL葡萄糖
标准溶液，放冰箱备用。
1.2 方法
1.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制
精密量取葡萄糖标准溶液 0.10、0.20、0.30、0.40、
0.50、0.60、0.70 mL置干燥试管中，分别加水至1.00 mL，
加入 5 %苯酚溶液 1.50 mL，浓硫酸 7.50 mL，摇匀。室
温放置 25 min，以不加葡萄糖标液的试剂空白为参比，
在 490 nm[4]处测定吸光度。以吸光度 A为纵坐标，葡萄
糖浓度 C（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，建立线性
回归方程。
1.2.2 落葵果实多糖精制品的制备[4-5]
将新鲜的落葵果实清洗干净，于烘箱中 60℃恒温
干燥 2 d，然后粉碎成粉末，密封备用。
称取落葵果实粉末 50 g，用 250 mL 石油醚于
60 ℃~80 ℃的水浴中回流脱脂 2次，每次 1 h。再用
250 mL 80 % 乙醇于 80 ℃~90 ℃的水浴中回流提取
2 次，每次 2 h，除去单糖、双糖、低聚糖、皂苷类和多酚
类等物质。残渣加水 250 mL，90℃水浴中提取 2次，每
次 2 h。合并两次水提取液，50℃减压浓缩至 75 mL，加
2 g~3 g活性炭进行脱色。经两次脱色后，滤液加 5倍
量 95 %乙醇，放置过夜，抽滤。抽滤后的沉淀加适量
水溶解，采用 Sevag法 [6]脱去蛋白质，即按溶液 1/5体
积加入氯仿-正丁醇（预先配制成体积比为 4∶1混合
液），剧烈振摇 20 min，静置分层，弃去水层与有机层交
界处的变性蛋白，重复一次。取水相，50℃减压浓缩至
适当体积，加 5倍量 95 %乙醇沉淀，沉淀再分别以
95 %乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤 3次，60℃干燥，
即得纯度较高的白色落葵果实多糖。
1.2.3 落葵果实多糖换算因素的测定[4-5]
精确称取 60℃干燥恒重的多糖精制品 0.035 0 g，
水溶解后定容至 100 mL，为多糖精制品储备液。精确
量取多糖精制品储备液 0.20 mL加水至 1.00 mL，按测
定标准葡萄糖溶液的方法测其吸光度，代人回归方程，
算出多糖溶液中葡萄糖的浓度 C，从而计算换算因素：
f = W/CD
式中：W为多糖质量，μg；C为多糖溶液中葡萄糖
的浓度，（μg/mL）；D为多糖的稀释体积 mL。
1.2.4 超声法、索氏法和水提法提取落葵果实多糖及
其含量的测定
称取落葵果实粉末 9份，每份约 0.2 g，按下列步
骤进行多糖的提取：①取 3份样品，分别加入 100 mL
80 %乙醇，于 45 kHz超声提取 40 min，倾去上清液，
再加 100 mL 80 %乙醇重复提取一次，以除去单糖、双
糖和低聚糖。然后减压抽滤。残渣挥去乙醇溶剂后，加
100 mL水，于 45 kHz超声提取 40 min，再加水重复超
声提取一次。合并两次水提取液，反复洗至 250 mL容
量瓶中，定容，作为超声提取法的样品液。②取 3份样
品，分别用 20 mL 80 %乙醇浸泡过夜。再于索氏提取
器中用 80 mL 80 %乙醇回流 2 h，残渣挥去乙醇溶剂
后继续用水回流提取 2 h。用水反复洗至 250 mL容量
瓶中，定容，成为索氏提取法的样品液。③取 3份样
品，分别用 100 mL 石油醚 70 ℃水浴提取 2 次，每次
1 h，以除去油脂。去除石油醚溶剂后，分别用 100 mL
80 %的乙醇于 80℃的水浴中提取 2次，每次 1 h，以除
去单糖和低聚糖。再将残渣用 100 mL水于 90℃的水
浴中提取 2次，每次 1 h。合并两次水提取液并定容为
250 mL，成为水提取法的样品液。
分别精确吸取样品液 1.00 mL，按测定标葡萄糖溶
液的方法测其吸光度，根据回归方程计算浓度 C，按下
式分别计算多糖含量：
多糖含量%=CDf/W×100
式中：C为样品溶液的葡萄糖浓度，（μg/mL）；D为
样品溶液的稀释体积，mL；f 为落葵果实多糖换算因
素；W为样品的质量，μg。
1.2.5 超声法提取多糖重现性和回收率的测定
精密吸取同一超声样品提取液 0.50 mL（5份），分
别精密加入多糖精制品储备液 0.50 mL，按测定标准葡
萄糖溶液方法测其吸光度，检验方法的重现性。
精密吸取同一超声样品提取液 0.50 mL（5份），分
别精密加入葡萄糖标准溶液 0.10、0.20、0.30、0.40、
0.50 mL，按测定标准葡萄糖溶液方法测其吸光度，计
算回收率。
2 结果与分析
2.1 葡萄糖标准曲线的绘制
根据葡萄糖标准溶液的溶度和测得的吸光值，绘
制葡萄糖标准曲线，如图 1 所示。回归方程为 A =
0.065 2 C+0.000 2，R2=0.999 1，表明在 1.00 μg/mL ～
7.00 μg/mL浓度范围内，葡萄糖标准曲线线性关系良
好，可用于样品液的测定。
2.2 落葵果实多糖换算因素的测定
测得多糖精制品溶液的吸光度 A=0.277，代人回
归方程，算得显色反应液中葡萄糖浓度为 4.258 μg/
mL，则多糖液中葡萄糖的浓度 C=4.258×10.0/0.20=
赵建芬，等：落葵果实多糖的提取及含量的测定分离提取
27
212.9 μg/mL，计算换算因素：f=W/CD。
f = 0.035 0×10
6
212.9×100 =1.644
式中：W为多糖质量，μg；C为多糖液中葡萄糖的
浓度，（μg/mL）；D为多糖的稀释体积，mL。
2.3 超声法、索氏法和水提法提取落葵果实多糖及其
含量的测定
对超声法、索氏法和水提法提取的落葵果实多糖
含量进行测定，计算结果如表 1所示。
从表 1可知，在考察的 3种方法中，超声法提取的
多糖含量是索氏法的 1.62倍，是水提法的 2.65倍。而
且超声法提取时间短，无需加热，大大提高了多糖的
提取效率。由此，超声提取多糖的方法优于其他两种
方法。
2.4 超声法提取多糖重现性和回收率的测定
超声法提取落葵果实多糖重现性测定结果如表 2
所示，回收率测定结果如表 3所示。
如表 2所示，RSD=1.24 %，说明方法重现性良好，
精密度高。
微量组分的回收率在 95 %～110 %，认为方法可
靠[7]。从表 3可知，落葵果实多糖平均回收率高，在微
量组分回收率要求的范围内，且 RSD 值较小，由此
可见，所建立的苯酚-硫酸比色法的准确度高、可靠
性好。
3 结论
1）建立苯酚-硫酸比色法测定多糖的含量，回归方
程为 A=0.065 2C+0.000 2，R2=0.999 1，在 1.00 μg/mL～
7.00 μg/mL浓度范围内，葡萄糖标准曲线线性关系良
好，而且方法可靠、重现性好，测定结果稳定、准确度
高，适用于落葵果实多糖的测定。
2）采用精制落葵果实多糖测得落葵果实多糖对
葡萄糖的换算因子 f=1.644。
3）不同的提取方法对落葵果实多糖的提取率不
同，超声法为 6.240 %，索氏法为 3.854 %，水提法为
2.357 %。三种方法中超声法提取率最高，提取时间最
短，无需加热，所以超声法提取落葵果实多糖的效率
高于其他两种方法。
参考文献：
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化学世界,1995,49(11):581-583
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社,2009:12
收稿日期：2012-05-31
图 1 葡萄糖标准曲线
Fig.1 Standard curve of glucose solution
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
吸
光
度
A
0.0 2.0 4.0 6.0 8.0
浓度 C/（μg/mL）
表 1 3种方法提取落葵果实多糖的含量
Table 1 Content of polysaccharide from the fruits of Basella
extracted by three different methods
表 2 重现性实验结果（n=5）
Table 2 Result of reproducible test（n=5）
样品号 1 2 3 4 5 平均值 RSD/%
吸光度 A 0.427 0.430 0.432 0.421 0.435 0.429 1.24
表 3 回收率实验结果
Table 3 Result of recovery experiment
样品葡萄糖
含量 X1/μg
葡萄糖加
入量 X2/μg
测定量
X3/μg
回收
率/%
平均回
收率/%
RSD/
%
15.45 10.00 25.28 98.30 99.19 0.74
15.45 20.00 35.26 99.05
15.45 30.00 45.07 98.73
15.45 40.00 55.47 100.05
15.45 50.00 65.36 99.82
赵建芬，等：落葵果实多糖的提取及含量的测定 分离提取
项 目
落葵果实
质量/g
吸光度
A
浓度 C/
（μg/mL）
多糖含
量/%
平均值/%
超声提取 0.203 8 0.203 31.20 6.292 6.240
0.203 2 0.201 30.89 6.248
0.201 4 0.197 30.28 6.179
索氏提取 0.201 1 0.123 18.89 3.861 3.854
0.203 0 0.127 19.51 3.950
0.200 3 0.119 18.28 3.751
水提取 0.204 6 0.079 12.12 2.435 2.357
0.200 5 0.071 10.89 2.232
0.204 7 0.078 11.97 2.403
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