全 文 ：第 33 卷第 1 期
2013 年 2 月
林 产 化 学 与 工 业
Chemistry and Industry of Forest Products
Vol． 33 No． 1
Feb． 2013
doi:10． 3969 / j． issn． 0253－2417． 2013． 01． 022
HPLC法同时测定凤尾草中 5 种黄酮类成分的含量
收稿日期:2012 － 01 － 04
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30960495)
作者简介:刘建群(1970 －) ，男，江西萍乡人，教授，博士，中药活性成分及质量评价研究方向;E-mail:liu5308@ sina． com。
LIU Jian-qun
刘建群，任晓静，舒积成，张 锐，张 维，潘景行
( 江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室，江西 南昌 330004)
摘 要: 建立高效液相色谱法，同时测定 10 个不同产地凤尾草中 5 种黄酮类成分:新西兰牡荆
苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素的含量。使用 Diamonsil C18色谱柱( 4． 6 mm × 250 mm，
5 μm) ，以乙腈 － 0． 1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱( 0～10 min，15 ∶ 85; 20～30 min，25 ∶ 75;
35～40 min，50 ∶ 50) ，流速 1． 0 mL /min，检测波长 350 nm，柱温 25 ℃。结果新西兰牡荆苷、忍冬
苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素 5 个黄酮类化合物在测定的范围内峰面积与浓度之间均表现出
良好的线性( r≥0． 999，n = 5) ，加样回收率分别为 97． 18% ～ 105． 20% ( RSD 为 1． 72% ～ 3． 20% ) 、95． 02% ～ 104． 92%
( RSD为 1． 96% ～ 2． 93% ) 、98． 45% ～ 103． 70% ( RSD 为 1． 66% ～ 2． 70% ) 、96． 41% ～ 104． 73% ( RSD 为 1． 03% ～ 3．
46% ) 、95． 82% ～ 99． 34% ( RSD为 1． 85% ～ 3． 95% ) 。结果表明凤尾草中 5 种黄酮含量的地区差异性不大，各地区凤尾
草中 5 种黄酮类化合物总含量在 0. 5 ～ 2． 2 mg /g范围内。
关键词: 凤尾草;黄酮;高效液相色谱法
中图分类号:TQ35; R285． 5 文献标识码:A 文章编号:0253 － 2417( 2013) 01 － 0117 － 04
Simultaneous Determination of Five Flavonoids in
Pteris multifida Poir． by HPLC
LIU Jian-qun，REN Xiao-jing，SHU Ji-cheng，ZHANG Rui，ZHANG Wei，PAN Jing-hang
(Key Laboratory of Modern Preparation of TCM，Ministry of Education，Jiangxi University of
Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)
Abstract:An HPLC method was established to the determination of five flavonoids (vicenin-2，lonicerin，rhoifolin，luteolin and
apigenin)in Pteris multifida． Separation was carried out on a Diamonsil C18 column (4． 6 mm × 250 mm，5 μm)． The mobile
phase was acetonitrile-water (containing 0． 1% formic acid)with gradient elution (0 － 10 min，15 ∶ 85;20 － 30 min，25 ∶ 75;
35 － 40 min，50 ∶ 50)． The flow rate was 1． 0 mL /min at 25 ℃，and the detection wavelength was set at 350 nm． The average
recoveries for vicenin-2，lonicerin，rhoifolin，luteolin and apigenin were 97． 18% － 105． 20% (RSD1． 72% － 3． 20%) ，
95. 02% － 104． 92% (RSD 1． 96% － 2． 93%) ，98． 45% － 103． 70% (RSD 1． 66% － 2． 70%) ，96． 41% － 104． 73% (RSD
1． 03% － 3． 46%) ，95． 82% － 99． 34% (RSD 1． 85% － 3． 95%) ，respectively． These compounds showed good linearity(r≥
0． 999，n = 5)in the detected concentration ranges． There were no significant differences of mass factions of the five flavonoids
from different regions． The total mass factions of the five flavonoids were in the range of 0． 5 － 2． 2 mg /g．
Key words:Pteris multifida Poir．;flavonoids;HPLC
凤尾草为凤尾蕨科植物凤尾草(Pteris multifida Poir．)的全草或根，具有清热解毒、凉血止血、消肿
解毒等功效，民间用于治疗肝炎、菌痢、淋浊、便血、扁桃体炎、痈肿疮毒、湿疹等疾病［1］。1977 年版中国
药典提及凤尾草的功能与主治:清湿热解毒、止血、用于痢疾、黄疸、肝炎、胃肠炎、乳腺炎、白带、崩漏、外
治外伤出血、烧伤和烫伤。中药部颁标准第 5 册还收载了含凤尾草的复方制剂尿感宁冲剂(标准编号:
WS3－B－0949－91)。有研究表明，凤尾草含黄酮类、萜类化合物、甾醇类、挥发油、苯丙素类等成分，具有
118 林 产 化 学 与 工 业 第 33 卷
广谱抗菌、抗肿瘤、抗病毒作用［2－5］。作者研究发现凤尾草对雷公藤甲素(治疗类风湿性关节炎中药成
分)有很好的减毒作用［6］，并从凤尾草中分离鉴定出多个芹菜素类或木犀草素类黄酮。活性测定结果
表明凤尾草黄酮类对雷公藤甲素有减毒作用，黄酮类为凤尾草的活性成分之一，因此有必要对凤尾草黄
酮类含量进行测定。黄酮类化合物测定方法主要有紫外分光光度法和高效液相色谱法等［7］，本研究首
次建立了高效液相色谱法同时测定凤尾草中 5 种黄酮类成分，即新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀
草素和芹菜素，以期为凤尾草药材质量评价和进一步研究奠定基础。
1 实 验
1． 1 仪器、试剂和材料
Agilent1200 高效液相色谱仪(四元泵、柱温箱、VWD检测器和 Agilent 1200 色谱工作站) ;十万分之
一分析天平(AE－240，瑞士梅特勒)。乙腈(HPLC级)TEDIA公司;甲醇、甲酸均为分析纯;水为双蒸水。
新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素对照品均为自制，系从凤尾草提取物中分离得到，
并经 NMR和 MS等光谱法鉴定其结构，HPLC 归一化法测得纯度均为 99 % 以上。从北京市、天津市、
河北石家庄市、河北唐山市、河北邢台市、湖北十堰市、江西南昌市、江西萍乡市、浙江台州市和海南海口
市共收集了 10 批凤尾草全草样品，经江西中医学院药用植物研究室赖学文教授鉴定均为凤尾草(Pteris
multifida Poir．)。
1． 2 溶液配制
1． 2． 1 混合对照品储备液 精密称取对照品新西兰牡荆苷 2． 50 mg、忍冬苷 4． 40 mg、野漆树苷
7． 40 mg、木犀草素 2． 25 mg和芹菜素 7． 75 mg，置于同一 10 mL的容量瓶中，加甲醇溶解定容，制成质量
浓度分别为新西兰牡荆苷 250 mg /L、忍冬苷 440 mg /L、野漆树苷 740 mg /L、木犀草素 225 mg /L 和芹菜
素 775 mg /L的混合对照品储备液。
1． 2． 2 混合对照品溶液 精密吸取混合对照品储备液 1． 00、1． 00、1． 25、1． 25 和 1． 25 mL，分别置于
5 mL、10 mL、25 mL、50 mL和 100 mL容量瓶中，用甲醇稀释定容，得到系列浓度的混合对照品溶液，使
各混合对照品系列浓度范围分别为:新西兰牡荆苷 3． 12～50． 00 mg /L、忍冬苷 5． 50～88． 00 mg /L、野漆树
苷 9． 25～148． 00 mg /L、木犀草素 2． 81～45． 00 mg /L、芹菜素 9． 69～155． 00 mg /L。
1． 2． 3 供试品溶液 精密称取 1 g凤尾草药材粉末，置于 50 mL 具塞锥形瓶中，精密加甲醇 10 mL，称
质量，超声波处理 60 min，放冷后再称质量并用甲醇补足质量差，过滤，取滤液用 0． 45 μm微孔滤膜过滤
即得供试样品溶液。
1． 3 色谱条件
色谱柱为 Diamonsil C18(4． 6 mm × 250 mm，5 μm) ，以乙腈 － 0． 1 % 甲酸水溶液为流动相梯度洗
脱，流动相梯度(0～10 min，15 ∶ 85;20～30 min，25 ∶ 75;35～40 min，50 ∶ 50) ，流速 1． 0 mL /min，检测波长
350 nm，柱温 25 ℃，进样量 5 μL。混合对照品和样品色谱图见图 1。
图 1 混合对照品(a)和凤尾草样品(b)的 HPLC色谱图
Fig． 1 HPLC chromatograms of reference substance (a)and sample (b)
第 1 期 刘建群，等:HPLC法同时测定凤尾草中 5 种黄酮类成分的含量 119
2 结果与分析
2． 1 线性关系考察
精密吸取 1． 2． 2 节下各浓度混合对照品溶液，进样 5 μL，按上述色谱条件测定，以峰面积值为纵坐
标，对照品量(ng)为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程与线性范围(见表 1) ，结果表明呈良好的线性
关系。
表 1 回归方程与线性范围
Table 1 Regression equations and linearity ranges
化合物
compounds
回归方程
regression equations
相关系数
correlation coefficients
线性范围
linearity ranges
新西兰牡荆苷 vicenin-2 Y = 8． 340X + 0． 3576 0． 9995 15． 60 ～ 250
忍冬苷 lonicerin Y = 6． 585X － 0． 9623 0． 9997 27． 50 ～ 440
野漆树苷 rhoifolin Y = 2． 853X + 2． 452 0． 9996 46． 25 ～ 740
木犀草素 luteolin Y = 16． 54X － 4． 699 0． 9999 14． 05 ～ 225
芹菜素 apigenin Y = 14． 02X + 14． 08 0． 9996 48． 45 ～ 775
2． 2 重复性试验
精密称取 5 份产自江西南昌的凤尾草药材粉末各 1 g，按照 1． 2． 3 节方法操作，测定样品中新西兰
牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素的含量，计算含量的 RSD(n = 5)分别为 2． 22 %、
1． 12 %、1． 27 %、1． 67 % 和 1． 54 %，说明重复性良好。
2． 3 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液(新西兰牡荆苷 12． 50 mg /L、忍冬苷 22． 00 mg /L、野漆树苷 37． 00 mg /L、
木犀草素 11． 25 mg /L、芹菜素 38． 75 mg /L)各 5 μL，重复进样 5 次，记录峰面积，测得样品中新西兰牡荆
苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素峰面积的 RSD(n = 5)分别为:1． 09 %、1． 41 %、0． 87 %、
1. 37 %和 0． 76 %，说明精密度良好。
2． 4 稳定性试验
取混合对照品溶液(新西兰牡荆苷 12． 50 mg /L、忍冬苷 22． 00 mg /L、野漆树苷 37． 00 mg /L、木犀草
素 11． 25 mg /L、芹菜素 38． 75 mg /L) ，室温放置 0、2、4、6、8、12 和 24 h，按 1． 3 节色谱条件进行测定，
结果凤尾草中新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素峰面积的 RSD% (n = 7)分别为
1. 62 %、1． 68 %、1． 86 %、2． 16 %和 1． 90 %。说明室温放置 24 h内溶液稳定。
2． 5 加样回收率试验
精密称取已测知含量的凤尾草样品(江西南昌)0． 5 g 共 9 份，精密加入高、中、低 3 个不同浓度
的混合对照品溶液，每个浓度平行 3 份，依法制备样品溶液，按 1 ． 3 节方法测定，计算 5 种化合物的
加样回收率，结果新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素的加样回收率分别为
97． 18 %～105. 20 %(RSD 1． 72 %～3． 20 %)、95． 02 %～104． 92 %(RSD 1． 96 %～2． 93 %)、98． 45 %～
103． 70 %(RSD 1． 66 %～2． 70 %)、96． 41 %～104． 73 %(RSD 1． 03 %～3． 46 %)、95． 82 %～99． 34 %(RSD
1． 85 %～3. 95 %)。
2． 6 样品测定
不同产地的样品按 1． 2． 3 节方法制备样品溶液，按 1． 3 节色谱条件进行测定，每个产地样品平行测
定 3 次，取峰面积平均值按标准曲线计算含量。10 个不同来源样品的含量测定结果见表 2。
根据表 2 结果分析，总体来看，凤尾草中 5 种黄酮含量的地区差异性不大，以野漆树苷和忍冬苷含
量较高，而新西兰牡荆苷含量较低;各地区凤尾草中 5 种黄酮类化合物总质量分数在 0． 5～2． 2 mg /g范
围内，其中海南海口和江西萍乡样品的 5 种黄酮类化合物总含量较高。
120 林 产 化 学 与 工 业 第 33 卷
表 2 样品测定结果(n =3)
Table 2 Results of sample determination(n =3)
编号
No．
产地
sources
质量分数 mass faction /(mg·g－1)
新西兰牡荆苷
vicenin-2
忍冬苷
lonicerin
野漆树苷
rhoifolin
木犀草素
luteolin
芹菜素
apigenin
质量分数 /
(mg·g－1)
total mass
faction
1 北京 Beijing 0． 161 ± 0． 0078 0． 755 ± 0． 025 0． 515 ± 0． 028 0． 346 ± 0． 016 － 1． 777
2 天津 Tianjin － 0． 211 ± 0． 0093 0． 480 ± 0． 021 0． 379 ± 0． 019 0． 201 ± 0． 013 1． 271
3 河北石家庄Hebei Shijiazhuan － 0． 291 ± 0． 012 0． 442 ± 0． 016 0． 339 ± 0． 020 0． 209 ± 0． 015 1． 281
4 河北唐山 Hebei Tanshan 0． 039 ± 0． 0038 0． 236 ± 0． 011 0． 121 ± 0． 0091 0． 254 ± 0． 015 0． 106 ± 0． 0085 0． 756
5 河北邢台 Hebei Xingtai － 0． 190 ± 0． 0093 － 0． 358 ± 0． 011 0． 175 ± 0． 0084 0． 723
6 湖北十堰 Hubei Shiyan 0． 031 ± 0． 0033 0． 246 ± 0． 0095 0． 712 ± 0． 032 0． 386 ± 0． 014 0． 215 ± 0． 014 1． 590
7 江西南昌 Jiangxi Nanchang 0． 073 ± 0． 0057 0． 365 ± 0． 014 0． 727 ± 0． 024 0． 146 ± 0． 0076 0． 144 ± 0． 013 1． 455
8 江西萍乡 Jiangxi Pingxiang 0． 075 ± 0． 0066 0． 862 ± 0． 025 1． 084 ± 0． 023 0． 056 ± 0． 0048 － 2． 077
9 浙江台州 Zhejiang Taizhou － 0． 059 ± 0． 0047 0． 103 ± 0． 0077 0． 288 ± 0． 013 0． 101 ± 0． 0088 0． 551
10 海南海口 Hainan Haikou 0． 058 ± 0． 0051 0． 521 ± 0． 032 0． 949 ± 0． 053 0． 407 ± 0． 020 0． 286 ± 0． 011 2． 221
3 结 论
3． 1 建立了同时测定凤尾草中 5 种黄酮类成分(新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜
素)含量的 HPLC方法，为凤尾草药材质量评价和进一步研究奠定了基础。使用 Diamonsil C18色谱柱
(4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ，以乙腈 － 0． 1 %甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱(0～10 min，15 ∶ 85;20～
30 min，25 ∶ 75;35～40 min，50:50) ，流速 1． 0 mL /min，检测波长 350 nm，柱温 25 ℃。
3． 2 新西兰牡荆苷、忍冬苷、野漆树苷、木犀草素和芹菜素 5 个黄酮类化合物在测定的范围内峰面积与
浓度之间均表现出良好的线性(r≥0． 999，n = 5) ，加样回收率在 95 %～105 %之间。
3． 3 凤尾草中 5 种黄酮含量的地区差异性不大，以野漆树苷和忍冬苷含量较高，而新西兰牡荆苷含量
较低;各地区凤尾草中 5 种黄酮类化合物总质量分数在 0． 5～2． 2 mg /g范围内，其中海南海口和江西萍
乡样品的 5 种黄酮类化合物总含量较高。
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