全 文 ：Ｊ．ＳＨＡＮＸＩ　ＡＧＲＩＣ．ＵＮＩＶ．（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
学报（自然科学版）２０１３，３３（２） ００３０００
收稿日期：２０１２－１２－０７　　　修回日期：２０１２－０１－０６
作者简介：贾丽艳（１９７９－），女（汉），山西汾阳人，讲师，在读博士，研究方向：食品生物技术。
基金项目：山西农业大学青年基金项目（４１２５５６）
复合酶法提取零余子多糖工艺的优化
贾丽艳，任盛财
（山西农业大学 食品科学与工程学院，山西 太谷０３０８０１）
摘　要：利用复合酶法对零余子多糖的提取工艺进行研究，为零余子的开发利用提供技术依据。在单因素的基础上，
通过二次正交分析法优化提取工艺条件，最终确定复合酶提取工艺的最佳参数为纤维素酶添加量２％，果胶酶添加量
为１．５％，酸性蛋白酶添加量２％，提取温度４０℃，ｐＨ　５．５，酶解时间３ｈ。在此条件下，零余子多糖得率为１５．８０％。
关键词：零余子；多糖；复合酶
中图分类号：Ｏ６３６．１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１６７１－８１５１（２０１３）０２－０１３０－０６
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｏｎ　Ｂｕｌｂｉｌ　Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
Ｊｉａ　Ｌｉｙａｎ，Ｒｅｎ　Ｓｈｅｎｇｃａｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｏｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｈａｎｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ　Ｓｈａｎｘｉ　０３０８０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｃ　ｄａｔａ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇ　ａｎｄ　ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｂｕｌｂｉｌ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｐｏｌ－
ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｅｎｚｙｍｅｓ．Ｔｈｅ　ｆｏｒｅｃａｓｔｉｎｇ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｓｅｔ　ｕｐ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘ－
ｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｓｉｎｇｌｅ－ｆａｃｔｏｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍｕｍ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：２％
ｃｅｌｕｏｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ　ｐｌｕｓ　１．５％ｐｅｃｔｉｎａｓｅ　ａｎｄ　２％ａｃｉｄ　ｐｒｏｔｅａｓｅ　ａｔ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　４０℃ａｎｄ　ｐＨ　５．５ｆｏｒ　３ｈ．Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｗａｓ　１５．８０％．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｂｕｌｂｉｌ；Ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；Ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｅｎｚｙｍｅ
　　零余子（Ｂｕｌｂｉｌ）系多年生草本植物的珠芽，它
和山药同属于薯蓣科薯蓣属（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａｏｐｐｏｓｉｔｅ
Ｔｈｕｎｂ）的不同器官，俗称“山药豆”，主产于在山
西、河南、河北、江苏、山东等地［１］。零余子味甘温、
无毒、主补虚、强腰脚、食之不饥，功能比山药还要
强，可提高人体免疫功能和抗病能力，极具药理研
究价值［２］。
目前，对山药功能性成分的提取及生物学活性
的研究较多［３］，但对零余子的研究却较少，起步较
晚，且主要集中于组织培养、贮藏、栽培、形成机理
及形态结构等方面的研究［４］，营养物质及功能成分
提取的研究较少。薛建平等［５］对山药和零余子营
养成分进行了比较研究，发现零余子中脂肪、总氨
基酸以及必需氨基酸的含量高于山药。盛玮等［２］
对零余子的营养成分进行了分析和评价，发现零余
子的主要成分为碳水化合物和蛋白质，多糖含量
高。鉴于此，研究零余子的多糖的提取工艺及生物
学功能具有重要意义。
目前提取多糖的方法较多，主要有溶剂萃取
法、酸碱提法、超声波辅助提取法、微波辅助提取
法、酶法等，但是用于零余子多糖类化合物提取的
方法研究却较少，利用复合酶法提取零余子多糖未
见文献报道。本文利用纤维素酶、果胶酶、酸性蛋
白酶辅助提取零余子多糖，研究其提取工艺，以期
确定出条件温和，操作简易，提取得率高的新工艺。
１　材料与仪器
１．１　材料
　　零余子（山西汾阳产），纤维素酶（３０００Ｕ·
ｇ－１）、果胶酶（１００万 Ｕ·ｇ－１）、酸性蛋白酶（３０００
Ｕ·ｇ－１），湖州米纯生物技术有限公司；葡萄糖、苯
酚、硫酸、乙醇等试剂均为分析纯。
DOI:10.13842/j.cnki.issn1671-8151.2013.02.004
１．２　仪器与设备
ＢＳ２１０Ｓ电子天平，北京塞多利斯天平有限公
司；ＺＦＤ－Ａ５０９０电热鼓风干燥箱，山海智城分析
仪器制造有限公司；ＨＨＳ电热恒温水浴锅，上海博
迅实业有限公司医疗设备厂；ＴＤＬ－４台式离心
机，上海安亨科学仪器厂；７２２Ｅ可见分光光度仪，
上海光谱仪器有限公司；ＦＺ１０２粉碎机，北京世纪
森朗试验仪器有限公司；ｐＨ 仪，梅特勒－托利多
仪器（上海）有限公司。
２　方法
２．１　酶法提取工艺
　　将新鲜零余子洗净，６５℃烘干，粉碎，过１００目
筛，制得零余子粉。取２０ｇ零余子粉，按一定质量
体积比加入蒸馏水，调节ｐＨ值，加入适量的酶粉，
置于恒温水浴锅中，水浴一定时间后，沸水浴灭酶
１０ｍｉｎ，过滤样品，取滤液测定多糖含量。
２．２　零余子多糖得率的测定
采用苯酚－硫酸法［６］测定多糖得率。
２．３　标准曲线的绘制
采用二倍稀释法［７］构建葡萄糖标准曲线。以
葡萄糖对照品溶液浓度为横坐标（Ｃ），吸光值为纵
坐标（Ａ），绘制标准曲线。
２．４　零余子多糖得率的测定
零余子多糖含量的计算：Ｘ＝Ｙ－０．００２４７．３７９
式中，Ｙ 为吸光值；Ｘ 为相当于葡萄糖标准溶
液的质量浓度／ｇ·Ｌ－１；
提取率的计算：ｙ＝Ｘ×Ｖ×ａｍ×１０００
式中，ｙ为零余子中多糖的提取率／％；Ｘ 为葡
萄糖标准溶液的质量浓度／ｇ·Ｌ－１；Ｖ 为提取的体
积／ｍＬ；ａ为提取液测定时的稀释倍数；ｍ 为零余
子的质量／ｇ。
２．５　单因素试验
采用复合酶法提取零余子中多糖类物质。通
过单因素试验方法测定不同种酶的添加量、反应温
度，反应时间等因素对零余子多糖得率的影响。单
因素试验设计：（１）在５５℃、ｐＨ　７、浸提２ｈ的条件
下进行纤维素酶添加量单因素试验，酶添加量为
０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％、３％。（２）在５５℃、
ｐＨ　７、酶用量１．５％的条件下进行纤维素酶浸提时
间的单因素试验，提取时间为１．５、２、２．５、３ｈ。
（３）在浸提时间２ｈ、ｐＨ　７、酶用量１．５％的条件下
进行纤维素酶浸提温度的单因素试验，提取温度为
４０、４５、５０、５５、６０℃。（４）在温度５０℃、ｐＨ　４、提取
时间２ｈ的条件下进行果胶酶添加量单因素试验，
酶添加量为０．５％、１％、１．５％、２％、２．５％。（５）在
５０℃、ｐＨ　４、酶用量１．５％的条件下进行果胶酶浸
提时间单因素试验，提取时间为１．５、２、２．５、３ｈ。
（６）在浸提时间２ｈ、ｐＨ　４、酶用量１．５％的条件下
进行果胶酶浸提温度单因素试验，浸提温度为３０、
４０、５０、６０℃。（７）在４５℃、ｐＨ　３．５、提取时间２ｈ
的条件下进行酸性蛋白酶浸提时间单因素试验，提
取时间为１％、１．５％、２％、２．５％。（８）在４５℃、ｐＨ
３．５、酶用量２％的条件下进行酸性蛋白酶浸提时
间单因素试验，提取时间为１．５、２、２．５、３ｈ。（９）
在提取时间２ｈ、ｐＨ　３．５、酶用量２％的条件下进行
酸性蛋白酶浸提温度单因素试验，提取温度为３５、
４０、４５、５０℃。以多糖得率为检测指标。
２．６　最优提取条件的确定
在单因素试验的基础上进行酶用量正交试验
设计，正交试验因素水平见表１。
在单因素试验和酶用量正交试验的基础上进行
提取工艺的正交试验设计，正交试验因素水平见表２。
表１　酶用量正交试验因素水平表
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｎｚｙｍｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ
水平
Ｌｅｖｅｌｓ
因素
Ｆａｃｔｏｒｓ
Ａ纤维素酶用量
Ｔｈｅ　ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
ｏｆ　ｃｅｌｕｏｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ／％
Ｂ果胶酶
Ｔｈｅ　ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
ｏｆ　ｃｅｌｕｏｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ／％
Ｃ酸性蛋白酶用量
Ｔｈｅ　ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
ｏｆ　ａｃｉｄ　ｐｒｏｔｅａｓｅ／％
Ｄ空白对照
Ｃｏｎｔｒｏｌ
１　 ２　 １　 １．５　 １
２　 ２．５　 １．５　 ２　 ２
３　 ３　 ２　 ２．５　 ３
　　注：提取的工艺条件ｐＨ　４．５，温度４５℃，提取时间２．５ｈ。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ：ｐＨ　４．５，４５℃，２．５ｈ
１３１３３（２） 贾丽艳等：复合酶法提取零余子多糖工艺的优化
表２　零余子多糖提取工艺正交试验因素水平表
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ
水平
Ｌｅｖｅｌｓ
Ａ温度
Ｅｎｚｙｍｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ／℃
Ｂ时间
Ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ／ｈ
Ｃ　ｐＨ值
ｐＨ
１　 ４０　 ２　 ３．５
２　 ４５　 ２．５　 ４．５
３　 ５０　 ３．０　 ５．５
３　结果与分析
３．１　葡萄糖标准曲线的确定
　　葡萄糖标准曲线见图１。根据测定结果，用最
小二乘法进行线性回归，得标准回归曲线方程：
Ｙ ＝４７．３７９　Ｘ＋０．００２　Ｒ２ ＝０．９９１１
　　表明葡萄糖含量与其吸光值成正比。因此，将
样品测得的吸光值与标准曲线对照，可得到样品中
多糖的浓度，进一步得到多糖的得率。
图１　葡萄糖标准曲线
Ｆｉｇ．１　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ｇｌｕｃｏｓｅ
３．２　单因素试验
３．２．１　酶添加量对零余子多糖得率的影响
酶添加量对零余子多糖得率的影响见图２。
随着酶添加量的增大，多糖得率逐渐增大。纤维素
酶、果胶酶和酸性蛋白酶添加量分别为２．５％、
１％、２％时，多糖得率达到最大，分别为１２％、８％
和５．６％。
图２　酶添加量对酶提取多糖得率的影响
Ｆｉｇ．２　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｅｎｚｙｍｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ　ｕｓｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ
２３１ 山 西 农 业 大 学 学 报（自然科学版） ２０１３
３．２．２　浸提时间对酶提取零余子多糖得率的影响
浸提时间对酶提取多糖得率的影响结果见图
３。随着提取时间的延长，多糖得率逐渐提高。当
纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶提取时间分别为
２．５ｈ、２ｈ、２．５ｈ时，多糖得率达到最大，分别为
７．５％、１１％、７．５％。
图３　浸提时间对酶提取多糖得率的影响
Ｆｉｇ．３　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ　ｕｓｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ
３．２．３　浸提温度对零余子多糖提取得率的影响
浸提温度对多糖得率的影响结果见图４。随
着温度的升高，酶活性先增大，零余子多糖得率提
高。提取温度升高至４５℃、４０℃、４５℃时，各种酶
活性分别达到最大，多糖得率也达到最大；浸提温
度高于最适温度时，酶活性逐渐降低，多糖得率也
随之下降。
图４　浸提温度对酶提取多糖得率的影响
Ｆｉｇ．４　Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｒｅａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ　ｕｓｉｎｇ　ｅｎｚｙｍｅ
３．３　复合酶法提取零余子多糖工艺的优化
３．３．１　酶用量正交试验结果与分析
由表３可见，酶对零余子多糖提取得率影响因
素大小为：酸性蛋白酶＞果胶酶＞纤维素酶。复合
酶最佳配比组合为Ａ１Ｂ２Ｃ２，即纤维素酶２％、果胶
酶１．５％、酸性蛋白酶２％，此时零余子多糖得率达
到１５．６０％。
３．３．２　提取工艺正交试验结果与分析
由表４可见，零余子多糖得率的影响因素大小
为提取温度＞提取时间＞ｐＨ；最佳工艺组合
Ａ１Ｂ３Ｃ３；最佳工艺：提取温度４０℃，提取时间３．０
ｈ，ｐＨ　５．５，此时零余子多糖得率达到１５．８０％。
３３１３３（２） 贾丽艳等：复合酶法提取零余子多糖工艺的优化
表３　零余子复合酶法提取多糖酶用量正交试验
Ｔａｂｌｅ　３　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｎ　ｒｅｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｅｎｚｙｍｅｓ　ｆａｃｔｏｒｓ
序号
Ｎｕｍｂｅｒｓ
纤维素酶用量／％
Ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ
ｃｅｌｕｏｓｅ　ｅｎｚｙｍｅ
果胶酶用量／％
Ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
ｏｆ　ｐｅｃｔｉｎａｓｅ
酸性蛋白酶用量／％
Ａｄｄｉｎｇ　ａｍｏｕｎｔ
ｏｆ　ａｃｉｄ　ｐｒｏｔｅａｓｅ
空白对照
Ｃｏｎｔｒｏｌ
多糖得率／％
Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
１　 １　 １　 １　 １　 １３．１６
２　 １　 ２　 ２　 ２　 １５．６０
３　 １　 ３　 ３　 ３　 １３．１４
４　 ２　 １　 ２　 ３　 １５．０２
５　 ２　 ２　 ３　 １　 １２．６３
６　 ２　 ３　 １　 ２　 １２．９７
７　 ３　 １　 ３　 ２　 １４．２０
８　 ３　 ２　 １　 ３　 １３．０６
９　 ３　 ３　 ２　 １　 １２．８２
ｋ１ １４．４　 １４．０７　 １３．０６　 １２．８７
ｋ２ １３．５４　 １４．２０　 １４．９１　 １４．６９
ｋ３ １３．３６　 １２．９８　 １３．２６　 １３．７４
Ｋ１ ４３．２　 ４２．２　 ３９．１９　 ３８．６１
Ｋ２ ４０．６２　 ４２．５９　 ４４．７４　 ４４．０７
Ｋ３ ４０．０８　 ３８．９３　 ３９．７９　 ４１．２２
Ｒ　 ３．１２　 ３．６６　 ５．５５　 ５．４６
表４　零余子酶法提取多糖的工艺正交试验
Ｔａｂｌｅ　４　Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ　ｏｎ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｆｒｏｍ　ｂｕｌｂｉｌ
序号
Ｎｕｍｂｅｒｓ
提取温度／℃
Ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
提取时间／ｈ
Ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｐＨ
空白对照
Ｃｏｎｔｒｏｌ
多糖得率／％
Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｒａｔｅ
ｏｆ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
１　 １　 １　 １　 １　 １３．６３
２　 １　 ２　 ２　 ２　 １１．６４
３　 １　 ３　 ３　 ３　 １５．８０
４　 ２　 １　 ２　 ３　 １４．３０
５　 ２　 ２　 ３　 １　 ９．１０
６　 ２　 ３　 １　 ２　 １１．９４
７　 ３　 １　 ３　 ２　 ９．２７
８　 ３　 ２　 １　 ３　 ８．１５
９　 ３　 ３　 ２　 １　 １０．２７
ｋ１ １１．７８　 １２．４　 １１．２４　 １１．００
ｋ２ ９．２３　 ９．６３　 １３．０７　 １０．９５
ｋ３ １３．６９　 １２．６７　 １１．３９　 １２．７５
Ｋ１ ３５．３４　 ３７．２　 ３３．７２　 ３３．００
Ｋ２ ４１．０７　 ３８．０１　 ３４．１７　 ３８．２５
Ｋ３ ２７．６９　 ２８．８９　 ３６．２１　 ２９．８５
Ｒ　 １３．３８　 ９．１２　 ２．４９　 ５．４０
３．４　验证试验
按以上试验得到的最佳提取条件提取零余子
多糖，做３个重复，测得零余子多糖的平均得率为
１５．７２％。验证结果与正交试验结果一致，表明提
取工艺稳定可行。
４　讨论
本研究应用纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶消
化零余子，以此改变细胞的通透性和促进非水溶性
多糖的溶解，从而使得零余子多糖的得率提高到
１５．７２％；但是研究中也发现零余子中的淀粉使得
提取液粘稠度加大，影响了有效成分的扩散，因
此，在以后的试验中应加入糖化能力强的α－淀
粉酶的使用，以加大对淀粉的水解和水溶性多糖
的提取。
４３１ 山 西 农 业 大 学 学 报（自然科学版） ２０１３
５　结论
酶对零余子多糖提取得率影响因素大小为：酸
性蛋白酶＞果胶酶＞纤维素酶。其他因素对零余
子多糖得率的影响大小为：提取温度＞提取时间＞
ｐＨ。复合酶法提取零余子多糖最佳条件为：纤维
素酶添加量为２％、果胶酶添加量１．５％、酸性蛋白
酶添加量２％，提取时间４０℃，ｐＨ　５．５，提取时间
为３ｈ。在此条件下，多糖提取率最高，得率为
１５．８０％。
参　考　文　献
［１］高国栋，赵冰．中国山药产业现状浅谈［Ｊ］．作物研究，２００７（３）：１７９－１８２．
［２］盛玮，薛建平，谢笔钧．怀山药零余子化学成分及其营养评价［Ｊ］．食品科技，２００９，３４（４）：７６－７９．
［３］袁书林．山药的化学成分和生物活性作用研究进展［Ｊ］．食品研究与开发，２００８，２９（３）：１７６－１７９．
［４］龙雯虹，郭华春．薯蓣零余子的研究进展［Ｊ］．云南农业大学学报，２００６，２１（４）：４８６－４８９．
［５］薛建平，祝红蕾，尧俊英．铁棍山药及其零余子营养成分的比较研究［Ｊ］．食品工业科技，２００８，２９（８）：２６７－２６９．
［６］李静静，缪娟，张磊，等．怀山药多糖分析方法及生物活性的研究进展［Ｊ］．安徽农业科学，２０１０，３８（３５）：２０００８－２０００９，２００３９．
［７］秦恩华．零余子多糖的分离纯化及抗氧化研究［Ｊ］．现代食品科技，２００８，２４（１１）：１１０１－１１０３．
（上接第９７页）
参　考　文　献
［１］Ｄｏｎｅｇａｎ　Ｋ　Ｋ，Ｓｃｈａｌｅｒ　Ｄ　Ｌ，Ｓｔｏｎｅ　Ｊ　Ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ，ｆｕｎｇａｌ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ａｎｄ　ｐｌａｎｔ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅ　ｌｅｖｅｌｓ　ｉｎ　ｆｉｅｌｄ　ｐｌｏｔｓ　ｏｆ
ｐｏｔａｔｏ　ｐｌａｎｔｓ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　Ｖａｒ．ｔｅｎｅｂｒｉｏｎｉｓ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９６，５：２５－３５．
［２］Ｐａｌｍ　Ｃ　Ｊ，Ｓｃｈａｌｅｒ　Ｄ　Ｌ，Ｄｏｎｅｇａｎ　ｋ　ｋ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ　ｉｎ　ｓｏｉｌ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｐｌａｎｔｓ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　Ｖａｒ．ｋｕｒｓｔａｋｉδ－ｅｎ－
ｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．Ｃａｎａｄｉａｎ　ｊｏｒｕｎａｌ　ｏｆ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９６，４２（１２）：１２５８－１２６２．
［３］Ｓｉｍｓ　Ｓ　Ｒ，Ｒｅａｍ　Ｊ　Ｅ．Ｓｏｉｌ　ｉｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　ｃｏｔｔｏｎ　ｔｉｓｓｕｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｍｉｃｒｏｃｏｓｍｓ　ａｎｄ　ｆｉｅｌｄ　ｓｔｕｄｉｅｓ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　ａｎｄ　ｆｏｏｄ　ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９７，４５：１５０２－１５０５．
［４］张美俊，杨武德．转Ｂｔ基因棉粉碎叶、蕾样Ｂｔ蛋白降解［Ｊ］．核农学报，２０１１，２５（１）：１４－１９．
［５］Ｄｏｎｅｇａｎ　Ｋ　Ｋ，Ｐａｌｍ　Ｃ　Ｊ，Ｆｉｅｌａｎｄ　Ｖ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｌｅｖｅｌｓ，ｓｐｅｃｉｅｓ，ａｎｄ　ＤＮＡ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｓ　ｏｆ　ｓｏｉｌ　ｍｉｃｒｏｒｇａｎｉｓｍｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｔ－
ｔｏｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ｖａｒ．Ｋｕｒｓｔａｋｉ　ｅｎｄｏｔｏｘｉｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌｉｅｄ　ｓｏｉｌ　ｅｃｏｌｏｇｙ，１９９５，２：１２１－１２４．
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［７］颜世磊，赵蕾，孙红炜，等．大田环境下转Ｂｔ基因玉米对土壤酶活性的影响［Ｊ］．生态学报，２０１１，３１（１５）：４２４４－４２５０．
［８］Ｓａｘｅｎａ　Ｄ，Ｓｔｏｔｚｋｙ　Ｇ．Ｂａｃｉｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ（Ｂｔ）ｔｏｘｉｎ　ｒｅｌｅａｓｅｄ　ｆｒｏｍ　ｒｏｏｔ　ｅｘｕｄａｔｅｓ　ａｎｄ　ｂｉｏｍａｓｓ　ｏｆ　Ｂｔ　ｃｏｒｎ　ｈａｓ　ｎｏ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ
ｅａｒｔｈ　ｗｏｒｍｓ，ｎｅｍａｔｏｄｅｓ，ｐｒｏｔｏｚｏａ，ｂａｃｔｅｒｉａ，ａｎｄ　ｆｕｎｇｉ　ｉｎ　ｓｏｉｌ［Ｊ］．Ｓｏｉｌ　ｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，３３：１２２５－１２３０．
［９］Ｓｔｏｔｚｋｙ　Ｇ．Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｓｏｉｌ　ｏｆ　ｉｎｓｅｃｔｉｃｉｄａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ　ａｎｄ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ＤＮＡ　ｂｏｕｎｄ　ｏｎ
ｃｌａｙｓ　ａｎｄ　ｈｕｍｉｃ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｑｕａｌｉｔｙ，２０００，２９（３）：６９１－７０５．
［１０］许光辉，郑洪元．土壤微生物分析方法手册［Ｍ］．北京：农业出版社，１９８６：１０２－１３５．
［１１］李晶，刘玉荣，贺纪正，等．土壤微生物对环境胁迫的响应机制［Ｊ］．环境科学学报，２０１３，３３（４）：９５９－９６７．
［１２］张玲，叶正钱，李廷强．铅锌矿区污染土壤微生物活性研究［Ｊ］．水土保持学报，２００６，２０（３）：１３６－１４０．
［１３］Ｄｏｎｅｇａｎ　Ｋ　Ｋ，Ｓｅｉｄｌｅｒ　Ｒ　Ｊ，Ｆｉｅｌａｎｄ　Ｖ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｅｎｅｔｉｃａｌｙ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｕｎｄｅｒ　ｆｉｅｌｄ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ：ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　Ｉ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ａｎｄ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｓｏｉｌ　ｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ｒｅｓｐｉｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｔｏｚｏａ　ｍｅｎａｔｏｄｅ　ａｎｄ　ｍｉｃｒｏａｒｔｈｒｏｐｏｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒ－
ｎａｌ　ｏｆ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｅｃｏｌｏｇｙ，１９９７，３４：７６７－７７７．
５３１３３（２） 贾丽艳等：复合酶法提取零余子多糖工艺的优化