全 文 ：·论 著· 中国医药导报 2016 年 6 月第 13 卷第 16 期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 16 June 2016
假耧斗菜 Paraquilegia microphylla （Royle） Drun-
mm.Et Hutch.为毛茛科的假耧斗菜属植物，主要分布
于西藏、四川、甘肃、云南、青海等地。假耧斗菜为西藏
常用中草药，具有镇痛、催产的功效[1]。 假耧斗菜属植
物中含有皂苷类、酚酸类、黄酮类化合物及生物碱类
化合物[2-13]。 前人从中分离得到 3个黄酮碳苷[9]和 2个
三萜皂苷[10]。 本研究进一步对其化学成分进行研究，
得到 7 个化合物。 见如图 1。 分别为 Paraquinin A
（Ⅰ）、Praquinin B （Ⅱ）、 小檗碱 （Ⅲ）、Menisdaurin
（Ⅳ）、3，4-二甲基苯甲酸 （Ⅴ）、对羟基苯甲酸（Ⅵ）和
己内酰胺（Ⅶ）。 化合物Ⅲ~Ⅶ为首次从该植物中分离
得到 。 采用 MTS 比色法测试了化合物Ⅰ和Ⅱ对
H460、MCF-7和 Hep G2的体外抗肿瘤活性。
图 1 假耧斗菜中分离得到的化合物
1 仪器与材料
核磁共振仪 Varian NMR system 600，Waters 600
假耧斗菜中化学成分的研究
王姣姣 吴 润 李嘉敏 黄 帅 周先礼
西南交通大学生命科学与工程学院，四川成都 610031
[摘要] 目的 研究假耧斗菜中的化学成分。 方法 运用多种方法对其化学成分进行纯化和鉴定， 并运用 3-（4，5-
二甲基吡啶-2）-5-（3-羧基甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2-氢-四唑盐（MTS）比色法考察了化合物Ⅰ和Ⅱ的对肺
癌细胞 H460、 人乳腺癌细胞 MCF-7和人肝癌细胞 Hep G2的体外抗肿瘤活性。 结果 共分离得到 7 个化合物，
分别为：Paraquinin A（Ⅰ）、Praquinin B（Ⅱ）、小檗碱（Ⅲ）、Menisdaurin（Ⅳ）、3，4-二甲基苯甲酸（Ⅴ）、对羟基苯甲酸
（Ⅵ）、己内酰胺（Ⅶ），抗肿瘤活性结果显示化合物Ⅰ和Ⅱ均无细胞毒活性。 结论 化合物Ⅲ~Ⅶ为首次从该植物
中分离得到，并首次测试了化合物Ⅰ和Ⅱ的抗肿瘤活性。
[关键词] 假耧斗菜；化学成分；碳苷；氰苷
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）06（a）-0008-03
Study on chemical constituents of Paraquilegia microphylla
WANG Jiaojiao WU Run LI Jiamin HUANG Shuai ZHOU Xianli
School of Life Science and Engineering, Southwest Jiaotong University, Sichuan Province, Chengdu 610031, China
[Abstract] Objective To investigate the chemical constituents of Paraquilegia microphylla. Methods The constituents
were separated and purified by chromatographic methods, and their structures were elucidated by spectroscopic meth-
ods, compounds Ⅰ and Ⅱ were evaluated for their cytotoxicity against human H460 non-small cell lung cancer cells
(H460), the breast cancer cell line MCF-7 (MCF-7) and human hepatocellular cell line Hep G2 (Hep G2) by [3-(4,5-
dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) method. Results Seven
known compounds were obtained and1identified as Paraquinin A (Ⅰ), Praquinin B (Ⅱ), Berberine (Ⅲ), Menisdaurin
(Ⅳ), 3，4-dimethyl benzoic acid (Ⅴ), 4-hydroxybenzoic acid (Ⅵ) and caprolactam (Ⅶ), the results of the cytotoxicity
about compounds Ⅰ and Ⅱ were inactive against several human cancer cells. Conclusion Compounds Ⅲ-Ⅶ are iso-
lated from this plant for the first time, the cytotoxicity of compounds Ⅰ and Ⅱ against several human cancer cells
were tested for the first time.
[Key words] Paraquilegia microphylla; Chemical composition; Flavonoid C-glycoside; Cyanogenic glycoside
[基金项目] 国家自然科学基金资助项目（81402803）；四川
省教育厅创新团队项目（15TD0048）。
[作者简介] 王姣姣（1989.8-），女，西南交通大学 2013 级药
学专业在读硕士研究生；研究方向：天然药物化学。
[通讯作者] 周先礼（1969.1-），男，博士，教授，研究方向：药
物化学。



















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中国医药导报 2016 年 6 月第 13 卷第 16 期 ·论 著·
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 13 No. 16 June 2016
半制备型高效液相色谱仪，质谱仪 Q-TOF micro mass
spectrometer （Waters） 型。色谱用硅胶 G和 H（青岛海
洋化工厂产品），反相硅胶 RP-18（Merck 公司）。
药材于 2012 年 4 月由西藏自治区食品药品检验
所提供，由西藏自治区食品药品检验所格桑索朗副主
任药师鉴定为假耧斗菜。
2 方法与结果
2.1 提取与分离
假耧斗菜地上部分 5.5 kg，用 95%乙醇冷浸提取
3 次，每次 7 d，减压浓缩得到浸膏 330 g。 取 300 g浸
膏悬浮于 50℃的热水中，依次用石油醚﹑乙酸乙酯萃
取，减压浓缩得到石油醚浸膏 A（100 g）、乙酸乙酯浸
膏 B（30 g）和剩余水部分 C。
C 部分经 D-101 大孔树脂柱色谱， 分别用水、
30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脱得 C1～C3；C1 经硅
胶柱色谱，乙酸乙酯 ∶甲醇（25∶1~0∶1）梯度洗脱分为
C1-1～C1-5 五部分，C1-1 经反复硅胶柱层析得到化
合物Ⅰ （158 mg），C1-2 经反复硅胶柱层析得到化合
物Ⅱ（221 mg）；C1-4经反复硅胶柱层析 （乙酸乙酯∶甲醇
15∶1）得到化合物Ⅲ（10 mg）；
B 部分经硅胶柱层析 （石油醚∶乙酸乙酯=1∶0~0∶
1） 得到 B1、B2、B3 三部分；B2部分再经过反复硅胶柱
层析（石油醚∶丙酮=8∶2），结合制备高效液相色谱，得
化合物Ⅴ（25 mg）和Ⅵ（51 mg）。B2部分再经过反复硅
胶柱层析（石油醚∶丙酮 7∶3）得化合物Ⅶ（10 mg）。 B3
部分再经过反复硅胶柱层析（氯仿∶甲醇=9∶1），得化合
物Ⅳ（23 mg）。
2.2 结构鉴定
化合物Ⅰ：黄色粉末，HR-ESI-MS 确定其分子式
C28H32O15（m/z：609.1816 [M+H] +，calcd. for C28H33O15，
609.1819）。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）：δ 6.98，6.98
（s，H-3），6.95，6.90（s，H-8），8.05（d，J = 8.8，H-2，H-
6），7.10（d，J = 8.8，H-3，H-5），3.87（s，H-4），13.49
（s，5-OH），13.50 （s，5-OH），4.69 （d，J = 8.8，H-1），
4.84（d，J = 8.8，H-1）。 13C-NMR（150 MHz，DMSO-
d6）δ：163.8，163.6（C-2），103.9，103.8（C-3），182.5， 182.2
（C-4），160.4，159.4 （C-5），111.0，110.9 （C-6），162.6，
161.6（C-7），93.9，93.5（C-8），156.6，156.3（C-9），105.5，
105.0 （C-10），122.6 （C-1），128.5 （C-2，C-6），114.7
（C-3，C-5），162.6（C-4），55.7（4-OCH3），71.0，70.9
（Glc-1），79.0，78.9 （Glc-2），77.3，77.2 （Glc-3），
70.2，69.6 （Glc -4），81.6，81.0 （Glc -5），60.7，61.9
（Glc-6），101.2，100.9 （Glc-1），73.9，73.9（Glc-2），
76.0，75.8（Glc-3），69.5，69.4（Glc-4），（Glc-5），
60.4，60.6（Glc-6）。 数据与文献[9]一致，故鉴定化合
物Ⅰ为 Acacetin-6-C-β-D-glucopyranosyl-（1→2）-
β-D-glucopyranoside，俗名为 Paraquinin A。
化合物Ⅱ：黄色粉末，HR-ESI-MS 确定其分子式
C34H42O19 （m/z 755.2397 [M+H]+，calcd. for C34H43O19，
755.2399）。 1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）：δ 6.99，6.96，
（s，H-3），6.95，6.91（s，H-8），8.06（d，J = 8.8，H-2，H-
6）， 7.13（d，J = 8.8，H-3，H-5），3.87（s，H-4），13.49，13.50
（s，5-OH），4.75（d，J = 8.8，H-1），4.73（d，J = 8.8，H-
1），4.72（d，J = 8.8，H-1），4.71（d，J = 8.8，H-1），
4.96（s，H-1），4.97（s，H-1）。 13C-NMR（150 MHz，
DMSO-d6）：163.6，163.5（C-2），103.9，103.6（C-3），182.6，
182.1 （C-4），160.7，159.3 （C-5），111.4，110.7（C-6），
162.5，161.4 （C-7），94.5，94.3（C-8），156.7，156.3（C-9），
105.7，105.1（C-10），122.6（C-1），128.5（C-2，C-6），
114.7（C-3，C-5），162.8（C-4），55.7（4-OCH3），71.0，
70.9 （Glc -1），71.0，70.6 （Glc -2），77.3，77.2 （Glc -
3），70.1，69.7（Glc-4），81.1，81.0（Glc-5），60.9，61.8
（Glc-6），102.0，101.1（Glc-1），76.8，74.9（Glc-2），
73.8，73.3（Glc-3），69.8，69.5（Glc-4），76.4，75.9（Glc-
5），60.3，60.5（Glc-6），100.6，100.5（Rha-1），71.2，
71.1（Rha-2），70.5，70.3（Rha-3），72.1，71.6（Rha-
4），68.4，68.1（Rha-5），17.7，17.6（Rha-6）。以上
数据与文献[9]对照一致，故鉴定化合物Ⅱ为 Acacetin-
6- C - α - L -rhamnopyranosyl-（1→ 2）-β-D-glu-
copyranosyl -（1→2）-β-D-glucopyranoside， 俗名为
Paraquinin B。
化合物Ⅲ：黄色粉末，HR-ESI-MS 确定其分子式
C20H18NO4 （m/z：336.1234 [M+H]+，calcd. for C34H43O19，
336.1236）[14]。与小檗碱对照品共薄层 Rf 值相同，故鉴
定化合物Ⅲ为小檗碱。
化合物Ⅵ：无色固体。 1H-NMR（500 MHz，CD3OD）
δ：5.50 （1H，s，α-H），6.29 （1H，d，J = 9.6 Hz，H-2），
6.21（1H，dd，J = 3.6，9.6 Hz，H-3），4.36（1H，m，H-4），
2.25（1H，m，H-5α），2.02（1H，m，H-5β），4.93（1H，dd，
J = 16，8.4，H-6），4.55（1H，d，J = 7.8，H-1）。 13C NMR
（125 MHz，CD3OD）δ：96.8 （C -α），157.1 （C -1），127.7
（C-2），140.6（C-3），65.4（C-4），36.1（C-5），72.5（C-
6），118.0 （CN），101.5 （C -1），74.5 （C -2），78.0 （C -3），
71.7（C-4），78.1（C-5），63.1（C-6）。 数据与文献[15]
一致，故鉴定化合物Ⅵ为（4S，6R）-（Z）-6-（β-D-glu-
copyranosyloxy）-4-hydroxy-2-cyclohexene-1，α-ace-
tonitrile，俗名为 Menisdaurin。
化合物 V：无色固体，HR-ESI-MS 确定其分子式
为 C7H6O4 （m/z 139.0395 [M+H] +，calcd. for C7H7O4，
139.0395）。 1H-NMR（500 MHz，CD3OD）δ：7.45（1H，
br.s，H-1），6.79（1H，d，J = 8.4 Hz，H-5），7.43（1H，d，J =
8.4 Hz，H-6）。 13C NMR （125 MHz，CD3OD）δ：169.8
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（COOH），122.4（C-1），116.3（C-2），144.6（C-3），149.8
（C-4），114.2（C-5），122.4（C-6）。 数据与文献 [16]一
致，故鉴定化合物Ⅴ为 3，4-二羟基苯甲酸。
化合物Ⅵ：无色固体，HR-ESI-MS 确定其分子式
为 C7H6O3 （m/z：153.0121 [M-H] - ，calcd. for C7H5O3
153.0188）[17]。 与对羟基苯甲酸对照品共薄层 Rf值相
同，故鉴定化合物Ⅵ为对羟基苯甲酸。
化合物Ⅶ：无色固体，分子式 C6H11NO。 1H-NMR
（500 MHz，CD3OD）δ：2.19 （2H，m，H-2），1.63（2H，m，
H-3），1.35（2H，m，H-4），1.51（2H，m，H-5），3.16（2H，
m，H-6）。 13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：175.9（C-1），
36.9 （C-2），26.7 （C-3），27.5 （C-4），30.0 （C-5），40.1
（C-6）。 数据与文献[18]一致，故鉴定化合物Ⅶ为己内
酰胺。
2.3 细胞毒活性测试
H460、MCF-7 和 Hep G2 细胞用洛斯维（RPMI）
培养基加 10%胎牛血清（FBS）和 1%抗生素（×100）。
化合物Ⅰ和Ⅱ均用二甲亚砜（DMSO）溶解稀释，DM-
SO 的最终浓度不超过 0.1% 。 取对数生长期细胞
H460、MCF-7 和 Hep G2 用胰酶消化后计数， 按 1×
104个/孔种 96 孔平底细胞培养板， 贴壁后弃去培养
基，用 1×PBS 洗 1 遍，加入配好的药物，设不加药空
白及 DMSO 对照，每个浓度 3 个复孔，至 5% CO2 培
养箱内 37℃内孵育 24 h 后终止培养，加入 MTS/电子
偶联剂（PMS）混合液 40 μL/孔，再于 37℃、5%CO2培
养箱中继续孵育 1～4 h后，用全波长酶标仪在 490 nm
波长下检测 OD值[19-21]。
本实验的测定结果表明，化合物Ⅰ和Ⅱ均无体外
细胞毒活性（IC50 > 50 μmol/L，n = 3）。
3 讨论
假耧斗菜为西藏常用中草药，药用历史悠久，疗效
确切，值得进行深入的研究。本研究从假耧斗菜地上部
分的乙醇提取液中分离得到了 7 个化合物，其中化合
物Ⅲ~Ⅶ为首次从该植物中分离得到， 结构类型涉及
黄酮碳苷、酰胺、氰苷、酚酸和生物碱类，并首次运用
MTS比色法测试了化合物Ⅰ和Ⅱ的抗肿瘤活性。实验
结果为该植物化学分类学提供了一定的分类学证据，
同时也丰富了对假耧斗菜的化学成分的深入认识。
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（收稿时间：2016-02-20 本文编辑：赵鲁枫）
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