全 文 ：收稿日期:2007-09-27
基金项目:浙江省科技计划重点项目 (2005C22074);浙江省 “新苗人才计划” (2007R40G2010013)
作者简介:许琰丹 (1983-), 女 , 浙江湖州人 , 硕士研究生 , 从事植物病原真菌及其生物防治研究工作。
注:楼兵干系通讯作者。
浙江淡竹黑腐病的室内药剂筛选及毒力测定
许琰丹1 , 孙志峰1 , 黄照岗2 , 楼兵干1
(1.浙江大学生物技术研究所 , 浙江 杭州 310029;2.浙江省杭州市余杭区森林病虫害防治检疫站 , 浙江 杭州 311100)
摘 要:采用生长速率法和悬滴法分别测定了 14 种常用杀菌剂对浙江淡竹黑腐病病原菌菌丝生长和孢子萌
发的抑制作用 , 并筛选测定了其中 7种杀菌剂对木贼镰刀菌的毒力。 结果表明 , 各杀菌剂对菌丝生长和孢子萌
发有不同程度的抑制作用 , 其中多菌灵 、 根腐宁 、 保鲜克 、 甲基托布津能很好地抑制菌丝生长 , 抑制率分别达
98.33%、 98.33%、 94.31%、 85.28%;而达科宁 、 仙生 、 根腐宁 、 甲基托布津 、 可杀得 2000、 佳爽 、 安克 、 保
鲜克 、 多菌灵对孢子萌发有较强的抑制作用 , 抑制率均在 90%以上。对菌丝生长与孢子萌发均有明显作用的杀
菌剂为多菌灵 、 根腐宁 、 保鲜克和甲基托布津。毒力测定结果表明 , 保鲜克 、 根腐宁 、 多菌灵 、 世高 、 甲基托
布津 、 瑞苗清 、 可杀得 2000 对木贼镰刀菌的 EC50分别为 0.458、 1.455、 1.822、 9.841 、 10.855、 52.741、 64.834
mg/ l。 7种药剂的相关系数均在 0.97以上 , 药剂浓度与抑制作用呈正相关。
关键词:浙江淡竹;黑腐病;杀菌剂;菌丝生长;孢子萌发;毒力测定
中图分类号:S481+.2 文献标识码:A 文章编号:0528-9017(2008)02-0219-03
浙江淡竹 Phyllostachys meyeri McClure属禾本科
竹亚科刚竹属 , 广泛分布于浙江 、 福建 、安徽 、 湖
南 、江西 、 湖北等省的山坡河滩 , 仅在浙江的余
杭 、德清两地面积就达6 000 hm2 。浙江淡竹具有适
应广 、投资省 、 花工少 、 成林快 、 保水保土能力强
等特点 , 是一次性种植 、 长久利用的笋 、 林两用
竹 , 有较高的经济价值 , 素有 “一亩园十亩田” 之
赞誉 , 对改善农民生活 、 促进农村经济发展起到了
积极的推动作用[ 1] 。
浙江淡竹黑腐病始发于 21世纪初 , 主要分布
于余杭 、 德清等地 , 一般竹林株发病率为 20%～
30%, 重者达 80%以上。该病害最初症状为在根
基部竹节出现淡褐色病斑 , 后渐变黑 , 竹梢发黄 ,
叶片脱落。轻者影响竹秆质地 , 重者引起枯萎倒
竹 , 严重影响出笋量与成竹率 , 经济效益明显下
降。经本项目组研究 , 明确引起该病的病原菌为木
贼镰刀菌 Fusarium equiseti(Corda)Sacc[ 2 , 3] 。
目前我国对浙江淡竹黑腐病的研究还未见报
道 , 对该病的防治尚处于盲区 。本文利用生长速率
法和悬滴法 , 分别测定了 14种杀菌剂对浙江淡竹
黑腐病病原菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制作用 ,
并对其中的7种杀菌剂进行了毒力测定 , 以筛选出
可以有效防治淡竹黑腐病病原的高效 、低毒类的杀
菌剂 , 为田间药效试验提供技术参考和依据。
1 材料与方法
1.1 供试菌株与来源
供试菌株为ODF52 , 分离自余杭浙江淡竹黑腐
病病健交界处竹纤维 , 经英国菌种保藏中心 (CAB
International)鉴定 , 为木贼镰刀菌 Fusarium equiseti
(Corda)Sacc , 现保存在英国菌种保藏中心和浙江
大学生物技术研究所。
1.2 供试杀菌剂
25%阿米西达悬浮剂 (Azoxystrobin , 英国先正
达 有 限 公 司);10% 世 高 可 分 散 粒 剂
(Difenoconazole , 瑞士先正达作物保护有限公司);
50%多菌灵可湿性粉剂 (Carbendazim , 江苏苏化集
团新沂农化有限公司);3%佳爽可湿性粉剂
(Zhongshengmycin , 深圳瑞德丰农药有限公司);
43%好力克悬浮剂 (Horizon , 拜耳作物科学公司);
40%根腐宁可湿性粉剂 (Pentachloronitrobenzene +
Carbendazim , 深圳瑞德丰农药有限公司);53.8%
可杀得 2000干悬浮剂 (Copper hydroxide , 美国固信
公司);62.25%仙生可湿性粉剂 (Myclobutanil+
2008年第 2期 219
DOI :10.16178/j.issn.0528-9017.2008.02.042
Mancozeb , 美国陶氏益农公司);25%保鲜克乳油
(Prochloraz , 红太阳集团南京第一农药厂);50%安
克可湿性粉剂 (Dimethomorph , 巴斯夫中国有限公
司);70%甲基托布津可湿性粉剂 (Thiophanate-
Methyl , 日本曹达株式会社);30%特富灵可湿性粉
剂 (Triflumizole , 日本曹达株式会社);30%瑞苗清
水剂 (Hymexazol +Metalaxyl , 日本三共 AGRO 株
式会社);75%达科宁可湿性粉剂 (Chlorothalonil ,
日本 SDS Biotech K.K.)。
1.3 杀菌剂室内抑菌试验
1.3.1 药剂配制
先将 14种供试杀菌剂分别配置 50 倍稀释液 ,
试验浓度按各杀菌剂生产商推荐的田间使用浓度范
围 , 取其中间值 。
1.3.2 病菌孢子培养与孢子悬浮液配制
将供试菌株在 PDA培养基于 25℃恒温黑暗培
养箱中培养 , 待有大量分生孢子产生时 , 加入 4%
蔗糖溶液使孢子充分悬浮并稀释 , 在 10×10 倍显
微镜下每视野中有 80 ～ 100个分生孢子 。
1.3.3 菌丝块的制备
将供试菌株先在 PDA培养基于 25℃恒温黑暗
培养箱中培养 , 待菌落长至直径约 80mm时 , 用直
径为 5 mm打孔器切取菌落外缘制成菌丝块备用 。
1.3.4 杀菌剂对菌株ODF52孢子萌发的影响
分别吸取 50μl孢子悬浮液及等量的农药稀释
液混合 (蔗糖溶液浓度为 4%, 混合后为 2%), 滴
于洁净的凹玻片 , 将玻片放入湿滤纸的保湿培养皿
内 , 并置于 25℃恒温黑暗培养箱中 , 以无菌水替
代农药作对照 , 8 h后定时在显微镜下观察对照孢
子萌发情况。当对照孢子萌发率达到最大时 , 检查
各处理孢子萌发率 , 每处理重复 3次 , 每个重复检
测300个孢子。按下式计算各药剂处理的孢子萌发
率和药剂对孢子萌发的抑制率[ 4] 。并做显著性检
验 , 试验数据处理在 DPS处理平台完成[ 5] 。
孢子萌发率 (%)=萌发的孢子数量
300
×100
抑菌率 (%)=
对照孢子萌发率-药剂处理孢子萌发率
对照孢子萌发率 ×100
1.3.5 杀菌剂对菌株ODF52菌丝生长的影响
按照各杀菌剂稀释倍数要求 , 分别移取一定量
的稀释药液与 100 ml已灭菌的 60℃的 PDA混匀 ,
制成含药 PDA平板待用。取直径 5 mm 的菌丝块放
入平皿中心 , 置 25℃黑暗培养箱内培养 。4次重
复 , 以不含药的 PDA 平板为对照 。14 d 后测量菌
落直径作显著性检验 , 并求出各种药剂的抑菌率。
抑菌率 (%)=
对照平皿菌落直径-加药平皿菌落直径对照平皿菌落直径 ×100
1.4 7种杀菌剂室内毒力测定
1.4.1 供试杀菌剂
根据室内抑菌试验结果 , 筛选出 7种杀菌剂
(保鲜克 、 根腐宁 、 多菌灵 、 世高 、 甲基托布津 、
瑞苗清 、可杀得 2000)进行室内毒力测定 。
1.4.2 含药培养基的制备
将 PDA 培养基灭菌并冷却至 45℃左右 , 再与
各种药剂混合均匀 , 制成各药剂系列浓度的含药培
养基。每种杀菌剂设定 6个浓度。
1.4.3 杀菌剂毒力测定
采用生长速率法 , 用直径为 5 mm 的打孔器取
相同大小的菌丝块 , 分别接种于带药培养基的中
央 。每处理重复 4 皿 , 以不加药培养基为对照。
25℃暗培养 10 d , 采用 “十字” 交叉法测量菌落直
径 。与对照组比较 , 计算菌落生长抑制率 。将抑制
百分率换算成抑制机率值 , 以杀菌剂浓度对数为横
坐标 , 抑制机率值为纵坐标 , 作回归直线 , 求出毒
力回归方程及 EC50 [ 6] 。
2 结果与分析
2.1 室内抑菌试验
2.1.1 杀菌剂对木贼镰刀菌孢子萌发的影响
借助显微镜观察表明 , 在 25℃黑暗条件下培
养 16 h后水处理对照中木贼镰刀菌分生孢子萌发
率为100%;供试的14种杀菌剂在推荐田间使用浓
度下对木贼镰刀菌孢子萌发均有不同程度的抑制作
用 (表 1), 其中 , 达科宁 、 仙生 、 根腐宁 、 甲基
托布津 、 可杀得 2000 、 佳爽 、 安克 、 保鲜克 、 多
菌灵等 9 种杀菌剂对孢子萌发的的抑制率均在
90%以上;阿米西达 、瑞苗清 、 好力克 、 特富灵 、
世高5种杀菌剂的抑菌效果差 , 均低于 50%。
2.1.2 杀菌剂对木贼镰刀菌丝生长的影响
以第 14 d的菌落直径作显著性检验 , 结果表
明 (表 2), 在供试的 14种杀菌剂种 , 以多菌灵和
根腐宁的抑菌作用最强 , 抑菌率高达 98.33%;其
次为保鲜克 , 抑菌率为 94.31%;再次为甲基托布
津 , 抑菌率为 85.28%;好力克 、 瑞苗清 、 仙生 、
世高的抑菌率在 65%～ 72%;其余6种杀菌剂抑菌
效果相对较差 , 抑菌率均低于 40%。
220 2008年第 2期
表 1 不同杀菌剂对木贼镰刀菌孢子萌发的影响
药剂名称 孢子萌发率 (%) 孢子萌发抑制率 (%)
达科宁 0.44 99.56 a A
仙生 0.67 99.33 a A
根腐宁 1.00 99.00 a A
甲基托布津 1.11 98.89 a A
可杀得 2000 1.22 98.78 ab A
佳爽 1.33 98.67 ab A
安克 1.78 98.22 ab A
保鲜克 3.44 96.56 b A
多菌灵 6.67 93.33 c B
阿米西达 51.67 48.33 d C
瑞苗清 81.44 18.56 e D
好力克 98.89 1.11 f E
特富灵 99.11 0.89 f E
世高 99.56 0.44 f E
对照 (CK) 100.00 0.00 f E
注:同列数据后具有相同的小写字母代表经 Duncan新复极差
法检验 , 在 5%水平时差异不显著;具有相同的大写字母
代表在 1%水平时差异不显著。表 2同。
表 2 不同杀菌剂对木贼镰刀菌菌丝生长的影响
药剂名称 菌落直径 (mm) 抑菌率 (%)
根腐宁 0.1±0.2 98.33 a A
多菌灵 0.1±0.2 98.33 a A
保鲜克 0.3±0.3 94.31 a A
甲基托布津 0.9±0.1 85.28 b B
好力克 1.7±0.4 71.57 c C
瑞苗清 1.8±0.1 70.23 cd C
仙生 1.9±0.1 67.89 cd C
世高 2.0±0.1 65.89 d C
特富灵 3.8±0.1 36.45 e D
阿米西达 3.8±0.1 35.79 e D
佳爽 4.0±0.4 33.11 ef DE
可杀得 2000 4.2±0.4 30.43 f DE
达科宁 4.3±0.1 28.43 f E
安克 5.8±0.2 2.34 g F
对照 (CK) 6.0±0.2 0.00 g F
2.2 7种药剂对木贼镰刀菌的毒力测定
在供试的 7种药剂中 , 以保鲜克对菌株ODF52
的毒力最高 , 其 EC50值最小 , 仅为0.458 mg L;其
次为根腐宁和多菌灵 , EC50值分别为1.455 mg L和
1.822 mg L;再次为世高和甲基托布津 , EC50值为
9.841 mg L 和10.855 mg L;瑞苗清和可杀得 2000
毒力最低 , EC50值分别为52.741mg L和64.834 mg L
(表 3)。
表 3 供试杀菌剂对木贼镰刀菌的毒力回归
方程及 EC50值
杀菌剂 相关系数
R 2
毒力回归方程 EC50(mg L)
保鲜克 0.994 17 Y=1.031X+5.349 0.458
根腐宁 0.986 04 Y=0.801X+4.870 1.455
多菌灵 0.992 89 Y=1.586X+4.587 1.822
世高 0.979 56 Y=0.543X+4.461 9.841
甲基托布津 0.986 68 Y=1.949X+2.981 10.855
瑞苗清 0.983 93 Y=0.978X+3.315 52.741
可杀得 2000 0.982 55 Y=1.648X+2.014 64.834
3 小结与讨论
杀菌剂室内抑菌试验结果表明 , 供试的 14种杀
菌剂在田间推荐浓度下对镰刀菌的孢子萌发和菌丝
生长均有不同程度的抑制作用。其中 , 多菌灵 、根
腐宁 、 保鲜克 、 甲基托布津这 4种杀菌剂对菌丝生
长与孢子萌发的抑制效果均很明显;而达科宁 、仙
生 、可杀得 2000 、 佳爽和安克等杀菌剂 , 虽能影响
孢子的萌发但不同时抑制菌丝的生长。这可能是由
于病原菌在PDA平板上 , 获得了比蔗糖溶液更好的
营养 , 导致其菌丝能够生长伸长。但是 , 关于菌丝
生长的抑菌实验只是从菌落直径上进行了测定 , 未
对其形态结构进行进一步的研究 。有些药剂 , 可能
在对菌丝生长程度影响较小 , 但对其菌丝膨大 , 芽
管畸形等形态结构上的变化影响较大。
通过 14种药剂对木贼镰刀菌抑菌效果的初步
测定 , 筛选出7种对菌丝生长和孢子萌发有不同抑
制效果的杀菌剂 (根腐宁 、 多菌灵 、 保鲜克 、 甲基
托布津 、 瑞苗清 、 世高 、 可杀得 2000)。经过进一
步室内毒力测定结果表明 , 供试 7种杀菌剂在一定
浓度内 , 对木贼镰刀菌都有不同程度的抑制作用 ,
并且随着浓度增加抑制作用加强 。根据 EC50计算结
果表明 , 保鲜克对木贼镰刀菌抑制作用最好 , 其次
是根腐宁和多菌灵 , 再次为世高和甲基托布津 , 瑞
苗清和可杀得2000效果最差 。
综合室内抑菌实验和毒力测定的结果 , 常用杀
许琰丹 , 等:浙江淡竹黑腐病的室内药剂筛选及毒力测定 221
菌剂如多菌灵 、 根腐宁 、 保鲜克 、 甲基托布津 、 世
高等对木贼镰刀菌具有很好的抑制效果 。但要将它
们推广应用到林间病害防治之前 , 还需进一步进行
田间药效试验 , 综合分析室内和田间试验研究结
果。另外 , 还需对各种杀菌剂进行综合比较 , 诸如
对植物生长的影响 、对环境的影响 、 成本分析等 ,
并力求经济合理地施用高效低毒杀菌剂[ 7] 。
参考文献:
[ 1] 林新春 , 袁晓亮 , 樊 琳 , 等.浙江淡竹资源与开发利用调
查 [ J] .世界竹藤通讯 , 2005 , 3(3):36-38.
[ 2] Booth C.The Genus Fusarium [ M] .England:CMI kew surrey ,
1971.
[ 3] Wolfgang Gerlach , Helgard Nirenberg.The genus Fusarium:a
pictorial atlas [M] .Berlin:Dahlem , 1982.
[ 4] 李健强 , 刘洪斌 , 刘西莉 , 等.5种药剂对小麦光腥黑穗病菌
的毒力和孢子萌发形态结构的影响 [ J] .农药学学报 , 2000 ,
2(1):41-46.
[ 5] 唐启义 , 冯明光.实用统计分析及其计算机平台 [M] .北
京:农业出版社 , 1997.
[ 6] 庄敬华 , 高增贵 , 陈 捷 , 等.5种杀菌剂对木霉菌及尖孢镰
刀菌的毒力测定 [ J] .植物保护 , 2005 , 31(3):84-86.
[ 7] 张金林 , 庞民好 , 刘颖超 , 等.不同杀菌剂对草坪草病原菌
毒力的作用测定 [ J] .草业学报 , 2006 , 15(1):58-61.
25%吡蚜酮可湿性粉剂等药剂防治
麦田灰飞虱试验初报
程勤海1 , 姚士桐1 , 陆志杰1 , 钱晓明1 , 周惠平2
(1.浙江省海宁市植保土肥站 , 浙江海宁 314400;2.海宁市马桥街道农技中心 , 浙江 海宁 314402)
中图分类号:S481+.9 文献标识码:B 文章编号:0528-9017(2008)02-0222-02
水稻条纹叶枯病是主要由灰飞虱传毒引起的病
毒病 。近年来 , 在海宁市水稻上发生逐年加重 , 目
前尚无治疗病株的药剂 , 生产上主要采取 “治虫控
病 、 切断毒源” 的防治策略。常用药剂扑虱灵 (噻
嗪酮)及蚜虱净 (吡虫啉)防治灰飞虱效果已非常
差 , 海宁市作为典型的粮桑混栽区 , 用敌敌畏和毒
死蜱防治效果虽好 , 但防治季节若遇蚕期高温养 ,
极易引起家蚕中毒 (敌敌畏和毒死蜱都具有熏蒸作
用)。因此 , 筛选出高效低毒且对家蚕安全的药剂 ,
显得尤为迫切 。我们于 2007 年在小麦田进行了
25%吡蚜酮可湿性粉剂等药剂防治灰飞虱的试验 ,
取得了理想的效果 , 现将结果初报如下 。
1 材料和方法
1.1 供试药剂及处理设置
设每 667 m2 用 25%吡蚜酮可湿性粉剂 (江苏
安邦电化有限公司生产)15 、 20 、 30 g;25%扑虱
灵 (噻嗪酮)可湿性粉剂 (江苏常隆化工有限公司
生产)60 g;10%蚜虱净 (吡虫啉)可湿性粉剂
(江苏克胜集团生产)60 g;80%敌敌畏乳油 (南
通江山化工有限公司生产)200 ml;48%乐斯本
(毒死蜱)乳油 (陶氏益农公司生产)90 ml , 另设
清水 (空白)对照 , 共 8个处理。
1.2 试验方法
1.2.1 试验设计
试验设在马桥街道利众村 , 该田小麦长势均
匀 。小麦品种扬麦 158 , 栽培方式为撒播 , 播种日
期 11月21日 , 前茬作物为单季晚稻 。该田土质为
黄松土 , pH 值 6.7 , 肥力中等 , 有机质含量
30 g kg 。试验小区总处理个数为 8个 , 每处理重复 4
次 , 共计32个小区 , 每小区面积为 35.8 m2 , 随机
排列。
1.2.2 药前调查及施药时期
药前考查 ,灰飞虱虫口密度每667m2为186.5
收稿日期:2007-07-05
作者简介:程勤海 (1973-), 男 , 浙江海宁人 , 农艺师 , 主要从事农作物病虫害测报及防治工作。
222 2008年第 2期