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假蒟提取物对人工感染鸡柔嫩艾美耳球虫病的疗效研究



全 文 :收稿日期:2015 - 06 - 16;修回日期:2016 - 02 - 17
基金项目:中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(1630
032015042;1630032015046 );海 南 省 重 大 科 技 项 目
(ZDZX2013008 - 4)
作者简介:王定发(1979 - ),男,助理研究员,博士,研究方
向为动物营养与饲料科学,wangdingfa197945@ aliyun. com.
通信作者:周汉林(1971 - ),男,研究员,硕士,研究方向为
热区畜禽营养与饲料资源开发利用,zhouhanlin8@ 163. com.
假蒟提取物对人工感染鸡柔嫩
艾美耳球虫病的疗效研究
王定发1,周璐丽1,李 韦2,周 雄1,周汉林1
(1.中国热带农业科学院 热带作物品种资源研究所,海南 儋州 571737;2.海南大学
农学院,海口 570228)
中图分类号:S853. 75;S855. 9 文献标识码:A 文章编号:1004 - 7034(2016)05 - 0186 - 04
关键词:假蒟提取物;柔嫩艾美耳球虫;人工感染;盲肠病变;抗球虫指数
摘 要:为了研究假蒟提取物对鸡感染柔嫩艾美耳球虫的防治效果,试验选取 270 只 1 日龄文昌鸡公
鸡,随机均分为 6 个处理组,即 3 个对照组和 3 个假蒟提取物组,其中 3 个假蒟提取物组分别饲喂加
有 200,400,600 mg /kg假蒟提取物的雏鸡饲料。于 15 日龄时,除阴性对照组外均人工感染柔嫩艾美
耳球虫。结果表明:日粮中添加假蒟提取物可降低感染球虫鸡的血便、死亡率、盲肠卵囊数,提高相对
增重率。说明假蒟提取物可改善感染球虫鸡的盲肠病变情况,降低死亡率,提高相对增重率,对防治
鸡球虫病具有一定效果。
Study on the therapeutic effect of Piper sarmentosum extract on the chickens
artificially infected with Eimeria tenella coccidiosis
WANG Dingfa1,ZHOU Luli1,LI Wei2,ZHOU Xiong1,ZHOU Hanlin1
(1. nstitute of Tropical Crops Genetic Resources,Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences,Danzhou 571737,China;
2. College of Agriculture,Hainan University,Haikou 570228,China)
Keywords:Piper sarmentosum extract;Eimeria tenella;artificial infection;cecal lesion;anticoccidial index
Abstract:To study the preventive and therapeutic effect of Piper sarmentosum extract on the chickens infected with Eimeria tenella,two hundred
and seventy 1 - day - old Wenchang roosters were randomly divided into six groups,including three control groups and three Piper sarmentosum
extract groups,respectively. Three Piper sarmentosum extract groups were fed the chicken feed added with Piper sarmentosum extract powder at
200,400 and 600 mg / kg. All groups except the negative control group were artificially infected with Eimeria tenella at 15 days of age. The re-
sults showed that the supplementation of Piper sarmentosum extract in the diet could reduce bloody stool,mortality rate,cecal oocyst count and
increase the relative weight gain rate of chickens. The results indicate that Piper sarmentosum extract can improve the cecal lesions in the chick-
ens infected with Eimeria tenella,and reduce the mortality rate and increase the relative weight gain rate,which has a certain effect on the pre-
vention and treatment of chicken coccidiosis.
鸡球虫病是一种主要侵害鸡肠道上皮细胞的原
虫病,它具有发病急、发生率高、流行性强等特点[1]。
鸡感染球虫后,可出现厌食消瘦、贫血、拉血便、精神
萎靡等症状,甚至可导致死亡;在病愈后,生产性能不
良、产蛋率下降。在球虫艾美耳属中,柔嫩艾美耳球
虫危害最大,它主要寄生于鸡盲肠部位,破坏肠黏膜,
引起盲肠肿胀、出血、盲肠芯、血痢等[2]。目前,国内
外主要采用化学药物和抗生素防治鸡球虫病,但其易
引起药物残留、环境污染、肉食品安全及产生耐药性
等诸多问题,从而严重制约养禽业的健康发展。假蒟
具有多种药理作用[3 - 5],近年来已有相关的研究报
道,其提取物在触杀植物病原虫方面具有较好的效
果[6],但其抗鸡球虫方面的研究却鲜有报道。假蒟
提取物具有天然、无残留、安全无污染等优点,本试验
旨在研究假蒟提取物对鸡球虫病的防治效果,为养禽
业开发高品质保健型饲料添加剂提供依据。
1 材料与方法
1. 1 假蒟提取物的制备
·681·
2016(05 上):186 - 189
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2016.0805
假蒟采自海南省儋州市中国热带植物园,将地上
茎叶部分于 65 ℃烘干、粉碎,采用超临界 CO2 萃取
法提取得到假蒟膏状提取物,将其与二氧化硅(吸附
剂)按照 1∶1 比例混合均匀即得假蒟提取物,4 ℃保
存,备用。
1. 2 柔嫩艾美耳球虫子孢子
柔嫩艾美耳球虫子孢子由中国农业大学动物医
学院提供。试验前经人工感染无球虫鸡扩繁 1 次,于
29 ℃孢子化后置 2. 5% K2Cr2O7 溶液中,4 ℃保存,
备用。
1. 3 试验设计及分组
试验前,对试验场所、鸡笼进行严格消毒处理。
选取 270 只 1 日龄海南文昌公鸡(购自海南省儋州市
种鸡场)随机分为 6 个组,每组 3 个重复,每个重复
15 只鸡,分别为阴性对照组(不感染不给药组)、阳性
对照组(感染不给药组)、药物对照组(感染给药组)、
假蒟 1 组、假蒟 2 组、假蒟 3 组,于 15 日龄时,除阴性
对照组口服等量生理盐水外,其余各组均口服柔嫩艾
美耳球虫孢子化卵囊 1 × 105 个 /只,分笼饲喂,自由
采食和饮水。3 个对照组均饲喂雏鸡饲料,假蒟 1
组、假蒟 2 组、假蒟 3 组分别饲喂添加 200,400,
600 mg /kg 假蒟提取物的雏鸡饲料。药物对照组于
攻虫 48 h后,将地克珠利溶液加入饮水中,连用 5 d。
1. 4 测定指标
1. 4. 1 相对增重率 在攻虫后第 1 天清晨至攻虫后
第 9 天清晨,各组鸡逐只空腹称重,并计算相对增重
率。计算公式:相对增重率 =感染组试验鸡的平均增
重 /阴性对照组试验鸡的平均增重 × 100%。
1. 4. 2 存活率 计算存活率。计算公式:存活率 =
(组内总鸡数 -每组因感染球虫死亡的鸡数)/组内
总鸡数 × 100%。
1. 4. 3 血便记分 攻虫后第 4,5,6,7,8 天,参照索
勋等[2]记分系统,对给定的 24 h 范围内(当日
08:00—次日 08:00)的血便情况进行记分,0 分表示
100%的粪便不带血;1 分表示 1% ~ 25%的粪便带
血;2 分表示 26% ~ 50% 的粪便带血;3 分表示
51% ~75%的粪便带血;4 分表示 76% ~ 100%的粪
便带血。
1. 4. 4 病变值 参照参考文献[7]中的标准,根据
剖检后肠道病变的严重程度记分,两侧盲肠病变不一
致时,以严重的一侧为准。盲肠病变记分标准:无肉
眼病变,正常,记为 0 分;盲肠壁有很少量散在的瘀
点,肠壁不增厚,内容物正常,记为 1 分;病变数量较
多,盲肠内容物明显带血,盲肠壁稍增厚,内容物正
常,记为 2 分;盲肠内有多量血液或盲肠芯(血凝块
或灰白色干酪样的香蕉形块状物),盲肠壁明显增厚
(肥厚),盲肠中粪便含量少,记为 3 分;盲肠中充满
大量的血液或肠芯而使盲肠肿大,肠芯中含有粪渣或
不含,记为 4 分,因感染球虫而导致鸡只死亡也记为
4 分。根据盲肠病变记分,计算出全组平均病变记
分,然后求出病变值。计算公式:全组平均病变记
分 =全组病变记分总和 /全组观察鸡只数;病变值 =
每组平均病变记分 × 10。
1. 4. 5 盲肠卵囊值 攻虫后第 9 天清晨,各组鸡逐
只称重处死,取出盲肠内容物。按照 MeMaster’s 法
计算每克内容物中的卵囊数,再按照参考文献[8]中的
方法换算成卵囊值。将卵囊数表示为 a × 106 个 /g,a
值为 0 ~ 0. 1 时,卵囊值为 0;a 值为 0. 11 ~ 1. 00 时,
卵囊值为 1;a值为 1. 1 ~ 1. 9 时,卵囊值为 10;a 值为
2. 0 ~ 5. 9 时,卵囊值为 20;a 值为 6. 0 ~ 10. 9 时,卵
囊值为 30;a值≥11. 0 时,卵囊值为 40。
1. 4. 6 抗球虫指数(ACI) ACI 是判定药物效力的
指标,采用默克公司的标准计算 ACI。计算公式:
ACI =(相对增重率 +存活率)-(病变值 +卵囊值)。
药效判定标准:ACI ﹤ 120 时,疗效差;160 > ACI≥
120 时,疗效中等;180≥ACI≥160 时,疗效良好;
ACI > 180 时,疗效优秀。
2 结果与分析
2. 1 鸡感染球虫后的发病状态及症状
在攻虫后第 3 天,除阴性对照组外,其他各组鸡
只均出现精神状态不佳、嗜睡、喜扎堆等症状;第 4
天,粪便中能看见少量血便,鸡只采食量减少;第 5 ~
6 天,粪便中血便量明显增多,假蒟 2 组最严重;第
7 ~ 8 天,粪便中血便量渐渐减少,鸡只精神状态逐渐
恢复。在整个试验中,阳性对照组先后因球虫病死亡
6 只鸡,剖检病死鸡只可见,两侧盲肠严重肿胀,盲肠
壁增厚,肠内有大量新鲜血液或血凝块或盲肠芯。
2. 2 假蒟提取物对感染球虫鸡只血便排出情况的
影响
结果见表 1。
由表 1 可知:感染球虫后第 5 ~ 6 天,鸡只的血便
情况假蒟 1 ~ 3 组介于阳性对照组与药物对照组之
间;到第 7 ~ 8 天,假蒟 1 ~ 3 组和药物对照组血便情
况均显著减轻(P < 0. 05),优于阳性对照组。
2. 3 各试验组鸡只攻虫前后体重的变化
结果见表 2。
由表 2 可知,阳性对照组鸡只的相对增重率最
差,与阴性对照组相比显著降低(P < 0. 05)。
2. 4 各试验组鸡只的存活率
结果见表 3。
由表 3 可知:假蒟 2 组、假蒟 3 组存活率均高于
药物对照组、阳性对照组;假蒟 1 组存活率介于药物
对照组与阳性对照组之间。
2. 5 各试验组鸡只盲肠病变情况
结果见表 4。
由表 4 可知,假蒟 1 ~ 3 组盲肠病变程度比阳性
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№. 05,2016
表 1 假蒟提取物对感染球虫鸡只血便评分影响的结果
组别 感染后第 4 天 感染后第 5 天 感染后第 6 天 感染后第 7 天 感染后第 8 天
阴性对照组 0b 0c 0c 0c 0b
阳性对照组 2. 40a ± 0. 55 3. 20a ± 0. 45 3. 00a ± 0. 00 2. 00a ± 0. 00 1. 20a ± 0. 45
药物对照组 2. 00a ± 0. 00 1. 00b ± 0. 00 1. 40b ± 0. 55 1. 20b ± 0. 45 0. 20b ± 0. 45
假蒟 1 组 1. 60a ± 0. 55 2. 60a ± 0. 55 2. 80a ± 0. 84 0. 80b ± 0. 45 0. 20b ± 0. 45
假蒟 2 组 2. 20a ± 0. 71 2. 40a ± 0. 55 2. 20ab ± 0. 84 0. 80b ± 0. 45 0. 20b ± 0. 45
假蒟 3 组 1. 80a ± 0. 45 2. 40a ± 0. 55 2. 60a ± 0. 55 0. 80b ± 0. 45 0. 20b ± 0. 45
注:同列数据肩标字母完全不同表示差异显著(P < 0. 05),含相同字母表示差异不显著(P > 0. 05)。
表 2 各试验组鸡只攻虫前后体重变化的结果
组别 始重 /g 末重 /g 增重 /g
相对增
重率 /%
阴性对照组 69. 32 ± 5. 68 151. 22a ± 11. 38 81. 91a 100a
阳性对照组 72. 20 ± 3. 46 120. 50b ± 12. 60 48. 30b 58. 97b
药物对照组 67. 76 ± 9. 65 136. 49ab ± 11. 11 68. 73ab 83. 91ab
假蒟 1 组 75. 43 ± 1. 27 135. 86ab ± 6. 69 60. 43ab 73. 78ab
假蒟 2 组 73. 15 ± 3. 31 137. 70ab ± 10. 80 64. 55ab 78. 81ab
假蒟 3 组 77. 79 ± 6. 71 140. 09ab ± 5. 56 62. 30ab 76. 06ab
注:同列数据肩标字母完全不同表示差异显著(P < 0. 05),含相同字母或无肩标表示差异不显著(P > 0. 05)。
表 3 各试验组鸡只存活率的测定结果
组别 鸡总数 /只 存活数 /只 存活率 /%
阴性对照组 45 45 100
阳性对照组 45 36 80. 00
药物对照组 45 41 91. 11
假蒟 1 组 45 39 86. 67
假蒟 2 组 45 45 100
假蒟 3 组 45 43 95. 56
表 4 各试验组鸡只盲肠病变评分及病变值的测定结果
组别 盲肠病变评分 /分 病变值
阴性对照组 0b 0
阳性对照组 2. 80a ± 0. 84 28
药物对照组 0. 60b ± 0. 55 6
假蒟 1 组 2. 20a ± 0. 45 22
假蒟 2 组 2. 00a ± 0. 71 20
假蒟 3 组 1. 80a ± 0. 45 18
注:同列数据肩标字母不同表示差异显著(P < 0. 05),字母相同
或无肩标表示差异不显著(P > 0. 05)。
对照组轻,但重于药物对照组。
2. 6 各试验组鸡只盲肠卵囊值
结果见表 5。
表 5 可知,假蒟 2 组、假蒟 3 组与阳性对照组比
较,能显著降低感染球虫鸡只的盲肠卵囊数(P <
0. 05)。
2. 7 假蒟提取物对感染球虫鸡只的疗效
结果见表 6。
由表 6 可知:假蒟 2 组、假蒟 3 组抗球虫指数在
120 ~ 160 之间,属于疗效中等;而假蒟 1 组抗球虫指
表 5 各试验组鸡只盲肠卵囊值的测定结果
组别 盲肠卵囊数 /(个·g -1) 卵囊值
阴性对照组 0c 0
阳性对照组 3 102 222a ± 88 024 20
药物对照组 39 556c ± 6 012 0
假蒟 1 组 3 104 444a ± 667 778 20
假蒟 2 组 2 567 111b ± 295 343 20
假蒟 3 组 2 253 333b ± 230 072 20
注:同列数据肩标字母不同表示差异显著(P < 0. 05)字母相同或
无肩标表示差异不显著(P > 0. 05)。
表 6 假蒟提取物对感染球虫鸡只的疗效
组别
存活
率 /%
相对增
重率 /%
病变值 卵囊值
抗球虫
指数
阴性对照组 100 100 0 0 200. 00
阳性对照组 80. 00 58. 97 28 20 90. 97
药物对照组 91. 11 83. 91 6 0 167. 91
假蒟 1 组 86. 67 73. 78 22 20 118. 45
假蒟 2 组 100. 00 78. 81 20 20 138. 81
假蒟 3 组 95. 56 76. 06 18 20 134. 73
数低于 120,疗效差;药物对照组抗球虫指数为
167. 91,属于疗效良好。
3 讨论
当今国内外防治鸡球虫病主要依靠化学合成药
物和抗生素,但其具有极易产生耐药性、药物残留、污
染环境等缺点。植物提取物是以植物为原料,经过一
系列的物理化学提取过程而得到的具有营养活性的
混合物,具有抗菌、促生长、提高免疫力等功能[9],并
且还具有毒副作用小、无药物残留、不易产生耐药性、
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总第 501 期
安全无污染、经济价廉、资源丰富等优点。从植物中
提取有效成分防治鸡球虫病的研究越来越多,越来越
受到人们的广泛关注。郭红斌等[10]研究发现,青蒿
素与青蒿水提液的抗球虫指数分别为 145. 4 和
172. 6,抗柔嫩艾美耳球虫效果较明显;谭文彪等[11]
研究发现,紫茎泽兰花乙醇提取物抗球虫指数高达
179. 71,具有很好的抗球虫效果。
假蒟是胡椒科属植物,其含有墙草碱、假蒟亭碱、
几内亚胡椒酰胺、苯并二氧戊烷酰胺 B、细辛脂素、芝
麻素、胡椒酸甲酯等多种活性成分,具有抗结核杆菌、
抗真菌和杀灭疟原虫的作用[12 - 13]。研究表明,假蒟
还具有抗炎镇痛、抗氧化等活性[3 - 4,14],并且对植物
病害虫亦表现较高的生物杀虫活性[6,15 - 17],是一种
具有开发潜力的杀虫植物。W. Q. Qin 等[18]研究发
现:假蒟精油中含有肉豆蔻醚,对植物害虫椰心叶甲
可发挥拒食素;抗乙酰胆碱酯酶(AchE)、羧基酯酶
(CarE)、谷胱甘肽 S - 转移酶(GSTs);抑制 Na +,
K + - ATP酶和直接毒性作用。
用假蒟防治鸡球虫病的研究还未见报道。在本
试验中,与阳性对照组比较,假蒟组在降低感染球虫
鸡只血便情况、死亡率、盲肠卵囊数和提高相对增重
率等方面均有较好的效果,说明假蒟对防治鸡球虫病
有一定疗效。这可能是因为假蒟富含具有抗菌、抗氧
化活性的生物碱、黄酮和总酚类[19 - 20],提高了机体的
免疫机能;但假蒟组抗球虫疗效不及地克珠利药物对
照组,原因可能在于对假蒟防治鸡球虫病的作用机理
及其在机体内的药动学、药代学过程还不太清楚;不
同提取方法、提取条件得到的提取物的活性成分种
类、含量不一样;假蒟防治球虫所需要的最佳剂量及
最优剂型还缺乏深入研究。
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