全 文 ：［收稿日期］ 20120927(008)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81160559)
［第一作者］ 黄洁玲，硕士在读，从事壮药药效学研究，Tel:15994352152，E-mail:zhengshuiwuxiang22@ 163. com
［通讯作者］ * 钟鸣，研究员，从事壮药药效学研究，Tel:13707881236，E-mail:gxmyszm@ 163. com
排钱草总生物碱对人肝星状细胞增殖
及肝纤维化相关胶原蛋白、细胞因子的影响
黄洁玲1，钟鸣2* ，余胜民2
( 1. 广西中医药大学，南宁 530001; 2. 广西壮族自治区民族医药研究院，南宁 530001)
［摘要］ 目的:观察排钱草总生物碱对人肝星状细胞系 Lx-2 增殖及分泌肝纤维化相关胶原、细胞因子的影响。方法:
Lx-2 细胞调整细胞密度为 1. 0 × 105个 /mL，以 0. 1 mL /孔接种于 37 ℃培养，设空白对照组，排钱草总生物碱 100，75，55，40，30，
20，15，10 mg·L －1组，给药 48 h后，采用噻唑蓝(MTT)法检测 Lx-2 细胞增殖;Lx-2 细胞调整细胞密度为 1 × 105个 /mL，以 0. 1
mL /孔接种于 37 ℃培养，设空白对照及秋水仙碱(6. 25 mg·L －1) ，排钱草总生物碱 40，20，10 mg·L －1组，给药 48 h 后，采用酶
联免疫吸附法(ELISA)法检测 Lx-2 细胞上清液Ⅰ型胶原(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COLⅢ)、Ⅳ型胶原(COLⅣ)和转化生长因子 β1
(TGF β1)、血小板衍生生长因子(PDGF)含量。结果:与对照比较，排钱草总生物碱在质量浓度为 100，75，55，40，30，20，15，
10 mg·L －1能够浓度依赖性的抑制 Lx-2 细胞增殖，抑制率分别为 49. 4%，25. 9%，24. 7%，15. 3%，15. 3%，12. 9%，2. 35%，
1. 18%;与对照相比，排钱草总生物碱 40 mg·L －1能显著抑制 COLⅠ，COLⅢ，COLⅣ和 TGF β1，PDGF的分泌(P ＜ 0. 05 或者P ＜
0. 01)。结论:排钱草总生物碱对 Lx-2 细胞的增殖和 COLⅠ，COLⅢ，COLⅣ，TGF β1，PDGF的分泌有抑制作用。
［关键词］ Lx-2;排钱草总生物碱;增殖;胶原;细胞因子
［中图分类号］ Ｒ285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)13-0283-04
［doi］ 10． 11653 /syfj2013130283
Effects of Total Alkaloids from Phyllodium pulchellum on Proliferation of Human
Hepatic Stellate Cells and Collagen，Cytokines Ｒelated to Hepatic Fibrosis
HUANG Jie-ling1，ZHONG Ming2* ，YU Sheng-min2
(1. Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China;
2. Guangxi Zhuang Autonomous Ｒegion Thnopharmacy Ｒesearch Institute，Nanning 530001，China)
［Abstract］ Objective:To observe the effect of total alkaloids from Phyllodium pulchellum on proliferation
of human hepatic stellate cell line Lx-2 and the impact on secretion of collagen and cytokines which are related to
liver fibrosis． Method:After recovery，Lx-2 cells in logarithmic growth were diluted to a concentration of 1 × 105 /
mL，and inoculated 0. 1 mL in hole in incubator at 37 ℃，blank control group was set up，the concentration of the
drug administered in an order of 100，75，55，40，30，20，15，10 mg·L －1 ． After 48 h of administration，
MTT assay was used to detect cell proliferation． Similarly，after recovery，Lx-2 cells in logarithmic growth were
diluted to a concentration of 1 × 105 /mL，and inoculated 0. 1 mL /hole in incubator at 37 ℃，blank control group
and Colchicine group (6. 25 mg·L －1)were set up． After 48 h of administration，ELISA method was used to detect
Lx-2 cell supernatant for type I collagen (COL I) ，type III collagen (COL III) ，type IV collagen (COL Ⅳ) ，
transforming growth factor β1 (TGF β1)and platelet-derived growth factor (PDGF)content． Ｒesult:Compared
with the control group，Lx-2 cell proliferation was inhibited by the total alkaloids in a concentration-dependent
manner with inhibition rates of 49. 4%，25. 9%，24. 7%，15. 3%，15. 3%，12. 9%，2. 35% and 1. 18%
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Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 13
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accordingly． Compared with the control group，the total alkaloids of 40 mg·L －1 could significantly inhibit COL I，
COL Ⅲ，COL Ⅳ，TGF-β1 and PDGF secretion (P ＜ 0. 05 or P ＜ 0. 01)． Conclusion:The total alkaloids from
P． pulchellum can inhibit the proliferation of Lx-2 cells and the secretion of COLⅠ，COL III，COL IV，TGF-
β1and PDGF．
［Key words］ Lx-2;total alkaloids from Phyllodium pulchellum;proliferation;collagen;cytokines
排钱草为广西民间常用草药，全草含生物碱、酚
类、有机酸和氨基酸等成分［1］。已有研究表明排钱
草总生物碱具有减少由 CCl4 造成的大鼠肝细胞变
性坏死及减轻肝纤维化程度的作用［2］，并能显著降
低猪血清所致免疫性肝纤维化大鼠肝脏Ⅰ型胶原
(COLⅠ)、Ⅲ型胶原(COLⅢ)、Ⅳ型胶原(COLⅣ)及
转化生长因子 β1(TGF β1)的表达
［3］以及 COLI，COL
Ⅲ的 mＲNA 表达［4］。本实验旨在通过体外实验研
究排钱草总生物碱对人肝星状细胞增殖以及对其分
泌胶原、细胞因子的影响。
1 材料
1. 1 细胞 人肝星状细胞系 Lx-2 细胞购自中南大
学湘雅医学院细胞库。
1. 2 试剂 高糖 DMEM 培养基(美国 Gibco 公司，
批号 1079887) ，胎牛血清(美国 Gibco 公司，批号
1069982) ，0. 25% 胰酶(美国 HyClone 公司，批号
SH30042. 01) ，二甲基亚砜(DMSO，北京索莱宝科技
有限公司，批号 302A033) ，MTT(美国 Sigma 公司，
批号 18180) ，Human Col I ELISA Kit(批号 CK-
E10382H) ，Human Col III ELISA Kit (批号 CK-
E10386H) ，Human Col IV ELISA Kit (批号 CK-
E10385H)、Human TGF β1 ELISA Kit(批号 CK-
E10113H，Human PDGF ELISA Kit 批 号 CK-
E11527H(均为美国 Ｒ＆D Systems公司)。
1. 3 药物 排钱草样品，由广西壮族自治区民族医
院研究院戴斌主任药师鉴定为豆科植物排钱草
Phyllodium pulchellum(L．)Desv． 的根，排钱草总生
物碱由大连医科大学提供。
1. 4 仪器 311 型二氧化碳培养箱(美国 Thermo
Forma公司) ，DMIＲB-Leica 型光学倒置显微镜(德
国 Leica 公司) ，ELX-800 型酶标仪(美国 Bio
Tek) ，TB-215 型丹佛精密天平(德国赛多利斯公
司) ，ZDX-3SB 型座式自动电热压力蒸气灭菌器
(上海申安医疗器械厂) ，80-Z 型台式离心机(上
海手术器械厂) ，DLE560 型超净工作台(荷兰
Clean Air)。
2 方法
2. 1 MTT法检测 Lx-2 细胞增殖 取对数生长期
Lx-2 细胞，以 0. 25%胰酶消化，用完全培养液混悬
细胞，调整细胞密度为 1 × 105 个 /mL，接种于 96 孔
板，每孔 100 μL。在 37 ℃，5% CO2 培养箱预培养
24 h后，轻轻吸弃培养孔中的培养液，分别加入终质
量浓度为 100，75，55，40，30，20，15，10 mg·L －1排钱草
总生物碱的含药培养液，并设空白对照(不含药物
完全培养液) ，每个质量浓度设 4 个复孔，培养 48 h
后，各孔加入 10 μL MTT 溶液，置37 ℃，5% CO2 培
养箱内孵育，4 h 后吸弃培养孔中的培养液，加
DMSO 0. 1 mL /孔，于水平摇床上摇 10 min 待颗粒
完全溶解，于酶标仪 570 nm 处测各孔吸光度(A) ，
取各组平均值，计算细胞生长抑制率。
抑制率 =(1 －实验组 A570 /对照组 A570)× 100%
根据各组的抑制率确定后续试验排钱草总生物
碱适宜的给药浓度。
2. 2 ELISA 法测 Lx-2 细胞上清液 COLⅠ，COLⅢ，
COLⅣ含量 根据 2. 1 结果，选择排钱草总生物碱
对 Lx-2 细胞抑制与对照比无显著差异的剂量 10，
20，40 mg·L －1用于后续实验。
取对数生长期的 Lx-2 细胞，以 0. 25%胰酶消
化，用完全培养液混悬细胞，调整细胞密度为 1 ×
105 个 /mL，接种于 96 孔板，0. 1 mL /孔。在 37 ℃，
5%CO2 培养箱预培养 24 h 后，轻轻吸弃取培养孔
中的培养液。分别加入终质量浓度 10，20，40 mg·
L －1排钱草总生物碱的含药培养液，并设空白(不含
药物完全培养液)及阳性对照(6. 25 mg·L －1秋水仙
碱) ，每个质量浓度设 3 个复孔，培养 48 h 后，小心
收集细胞上清液于 3 000 r·min －1离心 10 min，取上
清，按 ELISA 试剂盒说明书检测 COLⅠ，COLⅢ，
COLⅣ含量。
2. 3 ELISA法测 Lx-2 细胞上清液 TGF β1，PDGF含
量 细胞培养方法同 2. 2。培养 48 h 后，小心收集
细胞上清液于 3 000 r·min －1离心 10 min，取上清液，
按 ELISA试剂盒操作说明书检测 TGF β1，PDGF 的
含量。
2. 4 统计学方法 采用 SPSS 11. 5 软件，数据以
珋x ± s表示，组间比较采用 t检验，P ＜ 0. 05 为有统计
学意义。
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Vol． 19，No． 13
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3 结果
3. 1 对 Lx-2 细胞增殖的影响 作用于 Lx-2 48 h
后，与空白对照组比较，不同剂量的排钱草总生物碱
能抑制 Lx-2 细胞增殖，且其抑制作用呈浓度依赖关
系，见表 1。
表 1 排钱草总生物碱对 Lx-2 细胞增殖的抑制作用(珋x ± s，n = 4)
组别 剂量 /mg·L －1 A 抑制率 /%
对照 － 0. 85 ± 0. 05 －
排钱草总生物碱 100. 0 0. 43 ± 0. 272) 49. 4
75. 0 0. 63 ± 0. 092) 25. 9
55. 0 0. 64 ± 0. 072) 24. 7
40. 0 0. 72 ± 0. 13 15. 3
30. 0 0. 72 ± 0. 15 15. 3
20. 0 0. 74 ± 0. 10 12. 9
15. 0 0. 83 ± 0. 07 2. 35
10. 0 0. 84 ± 0. 03 1. 18
注:与空白对照组比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与秋水仙碱组比
较3)P ＜ 0. 05(表 2 ～ 3 同)。
3. 2 对 Lx-2 细胞分泌胶原的影响 作用于 Lx-2
细胞 48 h 后，与对照相比较，排钱草总生物碱 40
mg·L －1能显著抑制细胞 COLⅠ，COLⅢ，COLⅣ的分
泌 (P ＜ 0. 05) ，与秋水仙碱组相比无显著差别。与
秋水仙碱组比较，排钱草总生物碱 20，10 mg·L －1
COLⅠ含量明显高于秋水仙碱组(P ＜ 0. 05) ，COL
Ⅲ，COLⅣ含量与秋水仙碱组无显著差别，见表 2。
3. 3 对 Lx-2 细胞分泌 TGF β1，PDGF 的影响 作
用于 Lx-2 细胞 48 h 后，与对照相比较，排钱草总生
物碱 40 mg·L －1与对照相比能显著抑制细胞 TGF
β1，PDGF的分泌 (P ＜ 0. 01 或 P ＜ 0. 05) ，与秋水仙
碱组相比无显著差别。排钱草总生物碱 20 mg·L －1
PDGF含量显著高于秋水仙碱组(P ＜ 0. 05) ，10 mg·
L －1组 TGF β1，PDGF含量明显高于秋水仙碱组(P ＜
0. 05) ，见表 3。
表 2 排钱草总生物碱对 Lx-2 细胞分泌 COLⅠ，COLⅢ，
COLⅣ含量的影响(珋x ± s，n = 3) μg·L －1
组别 剂量 /mg·L －1 COLⅠ COLⅢ COLⅣ
对照 － 59. 15 ± 1. 44 30. 63 ± 1. 38 19. 43 ± 0. 76
排钱草总生物碱 40. 0 44. 94 ± 1. 991) 26. 54 ± 0. 711) 17. 25 ± 0. 731)
20. 0 50. 50 ± 1. 983) 28. 93 ± 2. 90 18. 19 ± 0. 45
10. 0 53. 06 ± 3. 213) 28. 44 ± 2. 43 18. 18 ± 1. 16
秋水仙碱 6. 25 43. 23 ± 2. 751) 24. 64 ± 2. 051) 13. 74 ± 2. 191)
表 3 排钱草总生物碱对 Lx-2 细胞分泌的
TGF β1，PDGF含量的影响(珋x ± s，n = 3) μg·L －1
组别
剂量
/mg·L －1
TGF β1 PDGF
对照 － 18. 99 ± 5. 15 39. 01 ± 3. 45
排钱草总生物碱 40. 0 4. 50 ± 1. 982) 19. 35 ± 1. 211)
20. 0 9. 86 ± 6. 35 34. 56 ± 2. 323)
10. 0 14. 13 ± 4. 633) 34. 14 ± 3. 123)
秋水仙碱 6. 25 2. 32 ± 1. 162) 20. 81 ± 4. 321)
4 讨论
肝纤维化是多种病因导致慢性肝损害的共同结
局，肝星状细胞的激活、增殖是肝纤维化发生的中心
环节［5］。它的激活、增殖，使细胞外基质(ECM)等
合成与降解失衡，肝星状细胞的大量增殖，合成以
Ⅰ，Ⅲ型胶原为主的多种 ECM，在肝脏内过度沉积，
改变肝脏结构，导致肝纤维化。因此，抑制肝星状细
胞的增殖与胶原的分泌对肝纤维化的治疗具有重要
意义。已有研究显示活血化瘀中药及其提取物对肝
星状细胞分泌肝纤维化相关胶原蛋白和细胞因子有
抑制作用［6-10］。排钱草具有清热解毒、祛风行水、活
血消肿的功效，为广西壮族地区临床常用药材，本研
究采用排钱草所提取的总生物碱结果表明在排钱草
总生物碱在 100 ～ 10 mg·L －1时对肝星状细胞的增
殖具有抑制作用，且呈浓度依赖关系。时与对照相
比排钱草 40 mg·L －1对 COLⅠ，COLⅢ，COLⅣ的分
泌具有显著抑制作用(P ＜ 0. 05 或者 P ＜ 0. 01) ，提
示排钱草总生物碱在肝纤维化治疗中可能是通过降
低胶原分泌量起治疗作用。
研究证实 TGF β1 与肝星状细胞的激活关系密
切［6］，是最强的肝纤维化促进因子，它可激活肝星
状细胞，促进肝星状细胞合成、分泌细胞外基质，抑
制细胞外基质的降解，在肝纤维化的起始和持续发
展中起关键作用。研究也同时表明 PDGF具有较强
促进细胞分裂和增殖的活性，是肝星状细胞最强的
有丝分裂原。TGF β1，PDGF 是目前所知的最强大
的促胶原生成因子，在肝纤维化的起始和持续发展
中起关键作用［7］，因此，抑制肝星状细胞 TGF β1 和
PDGF的分泌对肝纤维化的治疗具有重大的意义。
实验研究结果表明排钱草总生物碱对Lx-2细胞
·582·
黄洁玲，等:排钱草总生物碱对人肝星状细胞增殖及肝纤维化相关胶原蛋白、细胞因子的影响
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
TGF β1，PDGF的分泌均具有抑制作用(P ＜ 0. 01 或
P ＜ 0. 05) ，但其作用机制尚未清楚，还有待进一步
研究。
［参考文献］
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［7］ 郑旭锐，李长秦，孙守才，等．加味四逆散对肝纤维化
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［8］ 高湲，陈桂敏，梁振钰，等．芪蚣抗纤方中活血化瘀药
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［10］ 蔡锐，李珊，伍参荣，等．中药加味四逆散对血吸虫病
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［11］ Marra F． Chemokines in liver inflammation and fibrosis
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［12］ 许佳平，白宪光． 慢性乙型肝炎患者外周血 TGF-β1
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学学报，2002，23(8) :688.
［责任编辑 李玉洁］
［收稿日期］ 20120808(018)
［基金项目］ 广东省科技厅课题(2010B030700055)
［第一作者］ 戴勇，硕士研究生，从事呼吸内科专业，Tel:0757-86288545，E-mail:daiyong249@ sohu． com
［通讯作者］ * 段晨霞，硕士研究生，从事呼吸内科专业，Tel:0757-86288545，E-mail:kuaipao424@ sina． com
宣肺化痰方标准煎剂与煮散剂药理作用对比
戴勇1，老昌辉1，魏成功1，黄雪君2，杜铁良2，田宁1，段晨霞1*
( 1. 广东省中西医结合医院呼吸内科，广东 佛山 528000;
2. 广东省中医研究所，广州 510095)
［摘要］ 目的:对比观察宣肺化痰方标准煎剂及煮散剂的药理作用。方法:大鼠分为 8 组，分别灌入等体积蒸馏水、急支
糖浆、宣肺化痰方标准煎剂高、中、低剂量(含生药 46. 80，23. 40，11. 70 g·kg －1)、宣肺化痰方煮散剂高、中、低剂量(含生药
23. 40，11. 70，5. 85 g·kg －1) ，观察对小鼠毛细血管通透性的影响、对氨水致小鼠咳嗽的影响、对磷酸组胺诱发豚鼠哮喘的影
响、对小鼠气管酚红排泌的影响、对慢性支气管炎大鼠超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。结果:宣肺化痰方标准
煎剂和煮散剂均能显著降低小鼠毛细血管通透性;延长小鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数;延长豚鼠引喘潜伏期;增加小鼠气
管酚红排泌量;升高慢性支气管炎大鼠血清 SOD活性，降低 MDA含量。宣肺化痰方标准煎剂和煮散剂比较，两者在同剂量组
级别(高、中、低)之间作用无显著性差异。结论:宣肺化痰方标准煎剂和煮散剂均有显著抗炎、止咳、平喘和化痰作用，两者作
用无显著性差异。
［关键词］ 宣肺化痰方;中药饮片;煮散剂;慢性支气管炎;药效
［中图分类号］ Ｒ285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)13-0286-05
［doi］ 10． 11653 /syfj2013130286
·682·
第 19 卷第 13 期
2013 年 7 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 13
Jul．，2013