全 文 ：·论 著·
排钱草总生物碱对实验性肝纤维化动物
相关指标的作用
钟鸣 余胜民 黄琳芸 杨增艳
【摘要】 目的 观察排钱草总生物碱对实验性肝纤维化的作用效果及其作用机制。方法 采用四氯化碳(CCl4)诱
导肝纤维化模型 ,分别按阻断肝纤维化实验研究方法和治疗肝纤维化实验研究方法 ,从血清相关指标 、肝脏羟脯氨酸含
量和病理组织学等观察排钱草总生物碱的疗效 ,以秋水仙碱作为阳性对照药。结果 排钱草总生物碱能显著降低肝纤
维化大鼠血清 ALT 、HA 、γ-球蛋白及肝组织羟脯氨酸含量。肝脏病理组织学检查亦显示良好的作用效果。结论 排钱
草总生物碱具有较好的抗肝纤维化作用。
【关键词】 排钱草总生物碱;血清相关指标;肝脏羟脯氨酸;肝脏病理检查
The ef fect of total desmodium pulchellum alkaloids on the relevant markers of experimental hepatic fibrosis animals
ZHONG Ming , YU Shengmin , HUANG Linyun , et al. Department of Pharmacology , Guangxi National Medical
Research Institute , Nanning , 530001
【Abstract】 Objective To observe the effect of to tal alkaloids of desmodium pulchellum on experimental hepatic fibrosis
in rats and it s mechanism of action.Methods The hepatic fibrosis ra ts models were produced hypodermic by CCl4 injection.
This study was designed to observe the therapeutic effect of to tal alkaloids of desmodium pulchellum by determining the various
serum markers , the liver content of hydroxyproline(Hyp)and observation of the histopathologic changes in comparison with
those in the colchicine group.Results The experimental results show ed that the to tal alkaloids could decrease obviously the
serum glutamic pyruvic transaminase(ALT), hyaluronic acid (HA), gamma-globulin and the Hyp content of liver tissue.
These were also confirmed by the histopa thological changes in the liv er as shown by its antifibrotic effect.Conclusion The to-
tal alkaloids of desmodium pulchellum has good antifibro tic effect.
【Key words】 Total desmodium pulchellum alkaloid;Serum markers;Liver hydroxyproline;Hepatic histopatholog ic
changes nation
国家中医药管理局科研基金课题(97M015)
作者单位:530001 南宁 广西民族医药研究所药理室
排钱草为广西民间常用草药 ,据《中药大辞典》记
载具有清热利湿 、活血祛瘀等功效。民间常用来治疗
急慢性肝炎 、子宫脱垂 、血吸虫病肝脾肿大和跌打损伤
等。Ghosal等[ 1]曾报道了排钱草对动物血压及心律失
常等方面的影响 ,我们也报道了排钱草粗提物(水 、醇
提取物)对大鼠实验性肝纤维化的影响[ 2] 。根据文献
记载和试验证明 ,排钱草含多种吲哚类生物碱 ,为探讨
该药生物碱类是否有直接的抗肝纤维化活性 ,本文观
察了排钱草总生物碱对肝纤维化相关指标的影响 。
材料与方法
一 、实验动物
Wistar大鼠 ,雌雄兼用 ,体重 232.7±13.2g ,购自
广西中西医药研究所实验动物室。
二 、主要试剂
CCl4(广东汕头西陇化工厂 ,批号 980413)、L-羟
脯氨酸(上海康达氨基酸厂 ,批号 931001)、氯氨 T(广
东汕头新宁化工厂 ,批号 980630)、对二甲氨基苯甲醛
(北京化学试剂公司 , 批号 980529)。ALT 、ALB 、TP
试剂盒购自南京建成生物工程研究所 ,血清 HA试剂
盒购自上海海军医学研究所。
三 、药物
排钱草总生物碱由本研究室提取 , 临使用时以
0.1mol/ L盐酸溶解 , 以蒸馏水稀释至所需浓度并调
pH至 6.5 ,秋水仙碱(昆明制药股份有限公司出品 ,批
号 980825)研成粉末 ,以蒸馏水溶解并稀释至所需浓
度。
四 、动物分组与用药
(一)阻断肝纤维化实验研究 Wistar 大鼠 60
只 ,除 15只作正常组(A组),其余 45只用 CCl4 造模。
·168· Chinese Hepatology , Septemper 2001 , Vol 6 , No.3
第1 次造模皮下注射 CCl4 5ml/kg , 以后改为 CCl4
40%花生油溶液 3ml/kg ,每周 2次。模型大鼠随机分
为模型对照组(B组)、排钱草总生物碱组(C 组)和秋
水仙碱阳性对照组(D组),在造模同时 ,C 组以 20mg/
kg(以 20ml/kg 体积)灌胃 , D组以 0.1mg/kg 秋水仙
碱(20ml/kg 体积)灌胃 ,每天 1次 ,连续 6周 。
(二)治疗肝纤维化实验研究 Wistar 大鼠 75
只 ,除 15只作正常对照组(A 组)外 ,其余60只用 CCl4
造模 ,造模方法同阻断肝纤维化实验研究 。模型大鼠
随机分为模型对照组(B组)、排钱草总生物碱高剂量
组(C组)、排钱草总生物碱低剂量组(D 组)和秋水仙
碱阳性对照组(E 组)。完成造模后 C 组每日每鼠以
20mg/kg 、D组每日每鼠以 15mg/kg 给予排钱草总生
物碱 , E 组以 0.1mg/kg 秋水仙碱灌胃 ,每日 1 次 ,连
续 6周。
五 、检测指标及方法
(一)血清 ALT 、ALB 、TP 检测 用日立 7170A
型全自动生化分析检测 。血清 HA用 FF-2008P 自动
放射免疫分析仪检测 。
(二)肝组织羟脯氨酸(Hyp)测定 按有关文
献[ 3]测定 40mg 肝粉中 Hyp含量 。
(三)血清γ-球蛋白测定 用醋酸纤维素薄膜电
泳法 。
(四)肝脏组织病理学检查 分别于造模及治疗6
周后同期取材肝组织 , 10%甲醛固定 ,石蜡包埋 ,制备
病理切片 ,苏木精-伊红染色 ,显微镜观察。
结 果
一 、各组大鼠肝功能结果
各组大鼠肝功能检测结果见表 1 ～ 4。
表 1 对阻断肝纤维化实验大鼠肝功能的影响( x ±s)
组 别 n ALT(U/ L) TP(g/ L) ALB(g/ L) 血清γ-球蛋白
排钱草总生物碱组 15 160.13±23.03＊＊＊■■■ 71.67±3.30＊＊＊ 29.91±1.10＊■■ 16.15±1.99＊＊
秋水仙碱阳性组 15 168.20±62.90＊＊＊■■■ 69.03±4.40＊＊＊ 28.61±2.41■■■ 16.11±1.46＊＊
模型组 15 365.43±51.49■■■ 61.43±3.44■■■ 27.74±3.10■■■ 18.64±2.51■■
空白对照组 15 43.91±19.71＊＊＊ 71.49±2.13＊＊＊ 31.61±1.70＊＊＊ 15.46±2.59＊＊
各组与模型组比较:＊P<0.05 ＊＊P<0.01 ＊＊＊P<0.001;各组与空白对照组比较:■P<0.05 ■■P<0.01 ■■■P<0.001(以下各表
同)。
表 2 对治疗肝纤维化实验大鼠肝功能的影响( x ±s)
组 别 n ALT(U/ L) TP(g/ L) ALB(g/ L) 血清γ-球蛋白
排钱草总生物碱高剂量组 15 84.12±11.11＊＊＊■■■ 69.35±5.60＊＊＊ 36.85±2.65＊＊■■■ 15.09±1.57＊＊■■■
排钱草总生物碱低剂量组 15 80.88±11.41＊＊＊■■■ 69.65±2.66＊＊＊ 36.30±1.64＊＊■■■ 15.65±2.01＊■■
秋水仙碱阳性组 15 79.26±10.24＊＊＊■■■ 70.90±3.81＊＊＊ 35.80±1.75■■ 9.30±2.82＊＊＊
模型组 15 180.83±18.33■■■ 62.31±2.14■■■ 34.65±1.49 19.08±4.50■■■
空白对照组 15 46.88±7.70＊＊＊ 68.90±5.59＊＊＊ 33.90±1.37 10.55±3.56＊＊＊
表 3 对阻断肝纤维化实验大鼠肝脏 Hyp 及 HA含量的影响( x±s)
组 别 n 血清 HA(ng/ml) 肝脏Hyp(mg/ g肝粉)
排钱草总生物碱组 15 49.33±9.36＊ 21.05±2.93＊＊＊
秋水仙碱阳性组 15 47.32±10.17＊＊ 21.69±3.44＊＊
模型组 15 57.45±8.12 26.51±4.12
空白对照组 15 42.24±8.75＊＊＊ 20.87±3.63＊＊＊
·169·肝脏 2001年 9月第 6卷第 3期
表 4 对治疗肝纤维化实验大鼠肝脏 Hyp 及 HA含量的影响( x±s)
组 别 n 血清HA(ng/m l) 肝脏Hyp(mg/ g 肝粉)
排钱草总生物碱高剂量组 15 51.76±6.46＊＊＊■■ 29.24±5.88■■■
排钱草总生物碱低剂量组 15 55.77±8.17＊＊＊ 26.51±5.00＊■■
秋水仙碱阳性组 15 55.85±13.88 31.21±5.17■■■
模型组 15 74.73±12.8 31.91±7.50■■■
空白对照组 15 58.45±5.19＊＊＊ 21.57±2.50＊＊＊
二 、肝组织病理改变
病理切片正常组大鼠肝苏木精-伊红染色细胞多
呈单核 ,肝板条索状以肝小叶中央静脉为中心呈放射
状排列 ,胶原染色显示肝板间有少许极为纤细的网状
纤维包绕肝窦 ,门脉区偶见纤维分布;模型组大鼠苏木
精-伊红染色见肝小叶失去正常结构 ,肝板排列紊乱 ,
炎症浸润严重 ,小叶散在性坏死 ,特殊染色见汇管区纤
维结缔组织增多 ,形成细小的条索和菲薄的间隔 ,并向
小叶内延伸 ,或见相互连续的纤维隔 ,重新分割肝小
叶;而排钱草总生物碱各组和阳性对照组苏木精-伊红
染色见肝小叶大多能维持正常结构 ,小叶坏死明显较
轻 ,仅见轻度汇管区炎症 ,特殊染色显示结缔组织增生
程度减轻 。
讨 论
肝纤维化是慢性肝病发展过程的一个重要病理过
程和阶段 ,是由于肝脏细胞外基质(ECM)分泌和降解
失衡的结果 。如不及时治疗可以进一步发展成肝硬
化 ,有部分肝炎后肝硬化者还可以发展为肝细胞癌。
在目前对原发病还没有办法根治的情况下 ,减轻肝纤
维化便成为十分重要的治疗目标。随着近年来有关肝
纤维化发生机制的深入研究 ,特别肝细胞外基质和细
胞因子在肝纤维化进程中作用的阐明 ,给抗肝纤维化
找到一些可能的途径 ,如秋水仙碱 、马洛替酯 、α、γ-干
扰素等通过不同的环节抑制胶原基因的转录 、细胞因
子的释放 、前胶原的分泌 、增加胶原酶活性和降解胶原
的分子结构等。中医中药方面 ,应用单味或复方制剂 ,
以活血化瘀 、益气健脾 、养肝滋肾等治则 ,分别通过有
效控制肝细胞变性坏死的发展 ,抑制炎症反应 、加速组
织修复 、减轻肝脂肪性变 、抑制成纤维细胞及储脂细胞
的活跃和增生 、抑制胶原纤维的增生 ,以及调节细胞因
子水平等途径来实现抗肝纤维化功效。
目前抗肝纤维化实验还未找到与人类肝纤维化相
同的动物模型 ,但大多实验采用与人类肝纤维化发病
机制相近似的动物模型 。CCl4 为常用的肝纤维化动
物模型化学诱生剂 ,其所致肝纤维化改变与人类肝纤
维化的形态特征相似 ,比较适合于肝纤维化特别是伴
有活动性病变的慢性肝病所致肝纤维化的防治作用及
其作用机制研究 。对于防治肝纤维化作用的判定指标
大多以血清学诊断评价 、肝组织内 Hyp的含量和肝组
织学检查为主。血清中 HA 的检测及肝脏病理组织学
证实 ,随着肝脏纤维化程度的加重 ,HA的水平明显增
高 ,呈正相关。HA 是反映活动性肝纤维化和肝损害
的定量指标。
本实验结果显示 ,无论是阻断肝纤维化实验抑或
治疗肝纤维实验 ,排钱草总生物碱均具有明显的保肝
作用 ,能显著提高大鼠血清中 TP 和 ALB 含量 ,降低
大鼠血清 HA 、γ-球蛋白含量及ALT 活性 ,从而降低大
鼠肝脏中 Hyp的含量 ,提示排钱草总生物碱既能保护
肝细胞 ,减少肝细胞坏死 ,减少肝脏中纤维组织的形
成 ,又能促进已形成的肝纤维降解 ,从而起到抗肝纤维
化的作用 。秋水仙碱虽然在阻断肝纤维化实验和治疗
肝纤维化实验中亦具有提高大鼠血清 TP 含量 ,降低
大鼠血清 HA 、γ-球蛋白含量及ALT 活性 ,但不能提高
大鼠血清 ALB含量 ,且仅在阻断肝纤维化实验中才显
示有降低 Hpy 含量的作用 ,在治疗肝纤维化实验中作
用不明显 。
参 考 文 献
1 Ghosal S , Banerjee SK , Bhat tacharya SK , et al.Chemical and phar-
macological evaluat ion of Desmodium Pulehellum.Planta Med, 1972 ,
21∶398.
2 钟鸣 ,黄琳芸 ,余胜民 ,等.排钱草对大鼠实验性肝纤维化的影响.
中西医结合肝病杂志 , 1999 , 9∶22.
3 许志勤 ,高兰兴.组织羟脯氨酸测定方法的改进.解放军预防医学
杂志 , 1990 , 8∶40-42.
4 王宝恩 ,王惠吉 ,朱家璇 ,等.中药复方丹参不同剂型治疗肝纤维化
的实验研究.中华肝脏病杂志 , 1993 , 1∶69.
(收稿日期:2001-02-05)
·170· Chinese Hepatology , Septemper 2001 , Vol 6 , No.3