全 文 ：接骨木提取物对灰葡萄孢菌的离体抑菌活性研究
＊
张 涛 孙 华 王桂清
（聊城大学 农学院，山东 聊城２５２０５９）
摘 要 采用生长速率法测定了接骨木叶不同溶剂（石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇）粗提取
物对灰葡萄孢菌菌丝生长的影响．结果表明，接骨木不同溶剂提取物对灰葡萄孢菌的菌丝生长表
现出抑制和促进两种作用，其中乙酸乙酯顺序提取物的抑菌效果较好，各浓度都表现出抑制作
用；２ ０００ｍｇ／Ｌ的乙醇顺序提取物的抑菌效果最好，抑制率为２９．９２２ ２％．本试验为开发新型植
物源抑菌剂提供了理论依据．
关键词 接骨木，灰葡萄孢菌，生长速率法，抑制作用
中图分类号 Ｓ４７６ 文献标识码 Ａ 文章编号 １６７２－６６３４（２０１１）０３－００４３－０４
接骨木（Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｗｉｌｌｉａｍｓｉｉ Ｈａｎｃｅ）为忍冬科（Ｃａｐｒｉｆｏｌｉａｃｅａｅ）接骨木属（Ｓａｍｂｕｃｕｓ Ｌｉｎｎ）的多年生
木本植物．该属为珍贵的药用植物，英国植物药典、芬兰法定植物药名录和法国规定用于临床的植物药名
录均收载了接骨木属植物［１］．公元前４００年，希腊医师Ｔｈｅｏｐｈｒａｓｔｕｓ和Ｇａｌｅｎ等都视这种树木及其浆果
为“自然界最伟大的药用植物”［２］．该属植物所含的化学成分复杂，具有多种生物活性物质．近年来，国内外
学者从不同角度对其药理作用、生物活性及临床方面作了较为深入的研究，也发现了一些新的作用，如抗
病毒和抗菌活性等［３，４］，但接骨木属植物的化学成分是否对农林业植物致病菌具有抑制作用还未见报道．
本试验以接骨木的不同溶剂提取物为试材，以灰葡萄孢菌为靶标，初步研究不同溶剂提取物对菌丝生长的
抑制作用，为开发新型植物源抑菌剂提供理论依据．
１ 材料和方法
１．１ 植物提取物的制备
以接骨木成熟叶片为材料，８月初采于聊城大学校园内，将其进一步阴干，粉碎，过３８０μｍ孔径筛．为
有效提取活性物质，选用极性不同的溶剂（极性：石油醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇）组成一个溶剂梯
度，采用索氏提取法对接骨木的叶粉进行６ｈ的平行提取提取和顺序提取，温度控制在溶剂的沸点附近．
平行提取为准确称取叶粉２０ｇ，共５份，滤纸包扎好，装入２５０ｍＬ索氏提取器中，分别用１５０ｍＬ石油醚、
氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇进行提取．顺序提取为准确称取７０ｇ叶粉，按照溶剂极性有小到大的顺序，先
经石油醚提取，残渣再经氯仿提取，依次类推．所得抽提液经减压过滤，旋转蒸发仪浓缩，即得黏稠膏状粗
提物，称重后，计算其提取率，再置于４℃冰箱保存备用．
提取率（％）＝
提取干物质重量（ｇ）
样品总重量（ｇ） ×１００％．
１．２ 供试菌株
引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ．Ｅｘ Ｆｒ．），由聊城大学农学院植保系植物病理学
第２４卷 第３期
２０１１年９月
聊城大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．）
Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．３
Ｓｅｐ．２０１１
＊ 收稿日期：２０１１－０５－０８
基金项目：山东省自然科学基金资助项目（Ｙ２００８Ｄ５７）
通讯作者：王桂清，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｇｕｉｑｉｎｇ＠ｌｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
实验室提供．
１．３ 药液的配制
供试药剂为接骨木５种不同溶剂的提取物，用微量丙酮和二甲基亚砜混合液将每种备提物充分溶解
后，用无菌水配置成２０ ０００ｍｇ／Ｌ的母液，二倍稀释法稀释成２０ ０００、１０ ０００、５ ０００、２ ５００、１ ２５０ｍｇ／Ｌ的
５个浓度梯度备用．
１．４ 生物测定方法
采用生长速率法［５］测定接骨木的不同提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制效果．所用培养基为ＰＤＡ
培养基，药液终浓度分别为２ ０００、１ ０００、５００、２５０、１２５ｍｇ／Ｌ．菌饼直径０．５ｃｍ，每皿１块，３次重复，２０±
１℃光照培养箱中培养．待对照菌落直径在３ｃｍ以上时，用十字交叉法测量菌落直径．根据菌落直径求抑
制生长的百分率，公式如下
校正直么（ｃｍ）＝菌落平均直径（ｃｍ）－菌饼直径（０．５ｃｍ）；
抑菌率＝
对照校正直径（ｃｍ）－处理校正直径（ｃｍ）
对照正直径（ｃｍ） ×１００％．
１．５ 数据分析方法
应用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ软件和ＤＰＳｖ３．０１专业版软件进行数据统计分析．
２ 结果与分析
２．１ 接骨木不同溶剂的提取率
表１ 接骨木各样品的提取率
提取溶剂 样品重（ｇ） 提取物重（ｇ） 提取率（％）
平行提取
石油醚 ２０ １．７９６ ４ ８．９８２ ０
氯仿 ２０ １．９１２ ７ ９．５６３ ５
乙酸乙酯 ２０ １．９２４ ５ ９．６２２ ５
丙酮 ２０ ３．２８３ ７ １６．４１８ ５
乙醇 ２０ １．６５０ ９ ８．２５４ ５
顺序提取
石油醚 ７０ ６．２４４ ０ ８．９８２ ０
氯仿 ７０ ３．３５７ ７ ４．７９６ ７
乙酸乙酯 ７０ ０．２０８ ０ ０．２９７ １
丙酮 ７０ ２．６４６ ０ ３．７８０ ０
乙醇 ７０ ０．７２４ ２ １．０３４ ６
接骨木成熟叶片采用５种溶剂分别进行
了平行提取与顺序提取，溶剂蒸干后，各样品
的提取率如表１所示．
提取率的高低反应出植物材料在溶剂中溶
解量的多少．由表１看出，在平行提取中，５种不
同溶剂的提取率之间差异较大，丙酮的提取率
最高，为１６．４１８ ５％；氯仿和乙酸乙酯次之，分
别为９．５６３ ５％与９．６２２ ５％；石油醚与乙醇间的
提取率较低，为８．９８２ ０％与８．２５４ ５％．顺序提
取时，总体趋势为提取率随溶剂极性的增大而
降低，其中石油醚的提取率最高，为８．９８２ ０％；
乙酸乙酯的提取率最低，仅为０．２９７ １％．
２．２ 接骨木提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的作用
２．２．１ 接骨木平行提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的作用．以生长速率法测定了接骨木的５种平行提取物
对灰葡萄孢菌菌丝生长的作用，试验结果如表２所示．
表２ 接骨木平行提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用
提取溶剂
菌落直径抑制率（％）
１２５ｍｇ／Ｌ ２５０ｍｇ／Ｌ ５００ｍｇ／Ｌ １ ０００ｍｇ／Ｌ ２ ０００ｍｇ／Ｌ
石油醚 １１．１７８ ６±０．７４５ １ａＡ ６．８４３ ０±０．２５６ ２ａＡ －１．８４３ ７±０．０９２ ８ａＡ －１．４４３ ０±０．０８０ ９ａＡ －４．２２３ ２±０．０６３ ３ｂＢ
氯 仿 －２．６５１ ８±０．３７７ １ｃＢ －１．４７０ ８±０．０２３ ７ｂＢ ２．６５３ ７±０．１５１ ５ａＡＢ ２．６６１ １±０．０００ｌａＡ ４．４２５ ２±０．００２ ３ａＡ
乙酸乙酯 ７．９６５ １±０．１４３ ３ｂＡ －１７．６９６ １±１．２５１ ５ｄＣ －２３．００５ ３±１．２５１ ７３ｃＣ －２２．１２３ ６±０．０００ １ｂＢ －１７．６９７ １±１．２５１ ６ｄＤ
丙 酮 －１０．６１７ １±０．４２５ ９ｄＢ －１４．４５０ ３±１．０２０ １ｃｄＣ －３．２４３ ７±０．２４６ ６ａＡＢ －４．４３１ １±０．０２６ ３ａＡ －６．１９２ ２±０．０００ １ｃＣ
乙 醇 －６．１９１ ３±０．０００ １ｃｄＢ －７．０７７ ２±０．２５１ ４ｃＢＣ －１３．２７０ ５±０．５３０ ９ｂＢＣ －６．１９２ ２±０．０１３ ４ａＡ ５．３１０ ３±０．２７１ ６ａＡ
４４ 聊 城 大 学 学 报（自 然 科 学 版） 第２４卷
由表２可知，同一提取物的不同浓度对灰葡萄孢菌菌丝生长的作用存在差别，如石油醚提取物对灰葡
萄孢菌菌丝生长的抑制率随提取物浓度的增大而降低，浓度为１２５－２５０ｍｇ／Ｌ时，主要起抑制作用，浓度
为５００－２ ０００ｍｇ／Ｌ时，则表现出促进作用．不同溶剂粗提取物在同一浓度下对灰葡萄孢菌菌丝生长的作
用是不同的，如当提取物浓度为１２５ｍｇ／Ｌ时，石油醚和乙酸乙酯提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长起抑制作用，
抑制率分别为１１．１７８ ６％和８．７５５ １％；氯仿、丙酮及乙醇提取物则起促进作用，促进率分别为２．６５１ ８％、
１０．６１７１％、６．１９１ ３％．总体看来，平行提取中，接骨木不同溶剂提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长作用有两
种，即抑制作用和促进作用．
２．２．２ 接骨木顺序提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的作用．接骨木５种溶剂的顺序提取物对灰葡萄孢菌菌
丝生长的作用如表３所示．乙酸乙酯和乙醇提取物均对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用随提取物浓度的
增大而增强，其中，乙酸乙酯的抑菌效果最好，各浓度均表现为抑制作用，而乙醇提取物则表现为先促进后
抑制，当２ ０００ｍｇ／Ｌ浓度时，抑菌效果最好，为２９．９２２ ２％；石油醚与丙酮提取物的抑菌效果则随提取物
浓度的增大而呈现降低趋势；氯仿提取物的抑菌效果随提取物浓度的增大表现为先增强后降低趋势，最佳
抑菌效果出现在浓度为５００ｍｇ／Ｌ时，为１２．０２８ ７％．
表３ 接骨木顺序提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用
提取溶剂
菌落直径抑制率（％）
１２５ｍｇ／Ｌ ２５０ｍｇ／Ｌ ５００ｍｇ／Ｌ １ ０００ｍｇ／Ｌ ２ ０００ｍｇ／Ｌ
石油醚 １１．１７８ ６±０．７４５ １ａＡ ６．８４３ ０±０．２５６ ２ａＡ －１．８４３ ７±０．０９２ ８ａＡ －１．４４３ ０±０．０８０ ９ａＡ －４．２２３ ２±０．０６３ ３ｂＢ
氯 仿 １．６１５ ８±０．０００ ０ｂＡ １０．２３３ ３±０．２５３ ９ａＡ １２．０２８ ７±０．２５３ ９ａＡ ６．３４３ ５±０．１４８ ４ｂＢ ９．９３４ １±０．３０５ ４ｂＡＢ
乙酸乙酯 １０．５１５ ０±０．１２７ ９ａＡ １２．０２８ ７±０．１７９ ５ａＡ １４．７２１ ７±０．４０３ ６ａＡ １６．８７６ １±１．０３１ ２ａＡ ２１．３６４ ５±１．７７７ ３ａｂＡ
丙 酮 －７．７１９ ９±０．４８０ ０ｃＢ －７．３６０ ９±０．１８７ ３ｃＣ －４．５４８ ２±０．１１４ ６ｂＢ －４．００９ ６±０．０９１ ２ｃＣ －５．５６５ ５±０．２１７ ２ｃＢ
乙 醇 －１３．５２４ ８±０．４２６ ５ｃＢ －１１．１３１ １±０．２１６ ７ｃＣ －１０．３５３ １±０．３２２ ０ｃＢ －４．３０８ ８±０．１２８ ３ｃＣ ２９．９２２ ２±０．９０３ ６ａＡ
３ 结论与讨论
采用生长速率法测定了接骨木叶的不同溶剂（石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇）粗提取物对引起黄
瓜灰霉病的灰葡萄孢菌菌丝生长的作用．结果表明，接骨木不同溶剂提取物对灰葡萄孢菌的菌丝生长表现
出抑制和促进两种作用．其中乙酸乙酯顺序提取物的抑菌效果较好，各浓度都表现出抑制作用；２ ０００ｍｇ／
Ｌ的乙醇顺序提取物的抑菌效果最好，抑制率为２９．９２２ ２％．
国内外利用植物粗提液及单一药用成分对植物致病菌生长的抑制研究已有许多的报道．Ｍｏｈａｍｅｄ［６］
用２４个科的５８种植物的乙醇提取物测试了对辣椒炭疽等７种病原物的抗菌活性，其中两种胡椒对所有
供试菌具有强烈抑菌活性，其最低抑制浓度在０．０１ｍｇ／Ｌ和１ｍｇ／Ｌ之间．赵纯森等［７］用厚朴叶提取液测
试对禾谷镰刀菌、棉花炭疽刺盘菌等１０种病原真菌都有很强的抑制作用，同时在大田条件下用粗提物对
棉苗立枯病、小麦白粉病和蚕豆赤斑病进行防治，显示出较好的防治效果．张国珍等［８］测试了麻黄和细辛
的挥发油对Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｐａｎａｘ，Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｃａｃｔｏｙｕｒ，Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ ｓｏｌａｎｉ，Ｕｓｔｉｌａｇｏ ｃｏｉｃｉｓ的室内抑菌作
用．结果表明，两种挥发油对这５种真菌的菌丝生长均表现了一定的抑制作用．只是对于不同的真菌抑制
作用生长的浓度有较大差别．另外，利用植物提取物对灰葡萄孢菌的生长抑制作用研究也有报道，王桂
清［９］采用生长速率法和孢子萌发法测定了辽细辛根的不同溶剂（石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醇）的粗提取
物和精油对灰葡萄孢菌菌丝生长和孢子萌发的作用．结果表明，细辛不同溶剂提取物和精油对灰葡萄孢菌
的菌丝生长和孢子萌发均有一定的抑制作用，并且对孢子萌发的抑制效果要好于对其菌丝生长的抑制效
果；石油醚提取物和精油的抑菌效果较好，对菌丝生长的ＥＣ５０分别为１７７．４４ｍｇ／Ｌ与１５９．９８ｍｇ／Ｌ，对孢
子萌发的ＥＣ５０分别为１７３．２３ｍｇ／Ｌ与１２５．２９ｍｇ／Ｌ；试验还显示细辛所含的主要抑菌活性成分易被极性
小的有机溶剂所提取．同时王桂清等［１０］还研究了辽细辛精油对灰葡萄孢菌的抑菌机理，结果显示辽细辛
精油对胞外果胶甲基反式消除酶、果胶总酶、胞外１，２－β－Ｄ葡聚糖酶和蛋白酶表现为激活作用，对果胶甲
５４ 第３期 张涛等：接骨木提取物对灰葡萄孢菌的离体抑菌活性研究
基半乳糖醛酸酶和胞内１，２－β－Ｄ葡聚糖酶则表现为先激活后抑制再激活作用，对胞内果胶甲基反式消除
酶主要表现为抑制作用；对羧甲基纤维素酶表现为完全的抑制作用，且酶活抑制率与精油浓度成正比．
接骨木作为一种古老的药用植物已得到大量研究，主要体现在医药价值利用方面，如抗皮肤真菌、镇
痛抗炎、降血脂、抗动脉硬化、抑制流感病毒的增殖等［１１－１６］．本研究初步研究了接骨木粗提物对植物致病
菌———灰葡萄孢菌的菌丝生长的抑制作用，其抑菌成分以及抑菌机理还有待于进一步研究．
参 考 文 献
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ｅｌｄｅｒｂｅｒｒｙ ｅｘｔｒａｃｔ（Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｎｉｇｒａＬ．）ｄｕｒｉｎｇ ａｎ ｏｕｔｂｒｅａｋ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ ｐａｎａｍａ．Ａｌｔｅｒｎ Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ Ｍｅｄ，１９９５，１（４）：３６１．
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ｔｏｋｉｎｅｓ：Ｉ．ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ，２００１，１２（２）：２９０．
Ｔｈｅ Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｗｉｌｌｉａｍｓｉ Ｈａｎｃｅ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｔｏ
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Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｗｉｌｌｉａｍｓｉｉ Ｈａｎｃｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｄｅｒｉｖｅｄ ｆｒｏｍ ５ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｏｌｖｅｎｔｓ（ｐｅ－
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ｒｅａｃｈｅｄ ２９．９２２ ２％．Ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｃａｎ ｐｒｏｖｉｄｅ ｔｈｅ ｔｈｅｏｒｙ ｂａｓｉｓ ｆｏｒ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｎｅｗ ｔｙｐｅ ｂｏｔａｎｉｃａｌ ａｎｔｉｂａｃ－
ｔｅｒｉａｌ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｈｅｍｉｃａｌｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ Ｓａｍｂｕｃｕｓ ｗｉｌｌｉａｍｓｉｉ Ｈａｎｃｅ，Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ Ｐｅｒｓ．Ｅｘ Ｆｒ，ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ，ｉｎｈｉｂｉ－
ｔｉｏｎ
６４ 聊 城 大 学 学 报（自 然 科 学 版） 第２４卷