全 文 ：＊通讯作者
文章编号:1007-4287(2011)04-0634-03
草花粉过敏性鼻炎
与HLA-DQA1基因的相关性探讨
李海峰1 ,魏庆宇2＊ ,李静玫1
(中国人民解放军第 202 医院 1.感染控制科;2.变态反应科 ,辽宁 沈阳 110812)
摘要:目的　研究沈阳地区 草花粉过敏变应性鼻炎患者 HLA-DQA1基因与 草花粉过敏易感性的关系。 方法
　用聚合酶链反应-序列特异性引物技术(PCR-SSP),检测 HLA-DQA1 基因在 74 例以 草花粉过敏为主的 AR(Allergie
Rhinit s , AR)患者及 54 例对照组间的分布 , 并统计分析了二者间的分布差异。结果　74 例变应性鼻炎患者疾病组
HLA-DQA1＊0104基因发生率(37.8%)明显高于对照组(0%), P <0.01 有显著性差异。而疾病组 HLA-DQA1＊0501 基
因发生率(3.38%)明显低于对照组(24.07%),(P <0.01)有显著性差异。结论　提示 HLA-DQA1＊0104可能是 AR的
易感基因 ,HLA-DQA1＊0501 可能是 AR的抗性基因 。
关键词:变应性鼻炎;基因;HLA;PCR-SSP
中图分类号:R765.21 文献标识码:A
Linkage of allergic rhinitis with HLA-DQA1 gene　LI Hai-feng , WEI Qing-yu , LI J ing-mei.(The 202nd Hospital of PLA ,
Shenyang 110812 , China)
Abstract:Objective　To investigate whether susceptibility to allergic rhinitis associated with HLA-DQA1 alleles.Methods　Us-
ing PCR-SSP(sequence-specific primer polymerase chain reaction), we tested the frequency distribution of HLA-DQA1 alleles in 74
patients with allergic rhinitis(AR)and 54 healthy controls from Shenyang China.Results　The frequence of HLA-DQA1＊0104 was
higher in AR than in controls(37.8% vs 0%, P<0.01);The frequence of HLA-DQA1＊0501 was lower in AR than in controls
(3.38% vs 24.07%, P<0.01).Conclusion　HLA-DQA1＊0104 might be predisposing genes of AR;HLA-DQA1＊0501 might
confer protection against AR.
Key words:Allergic rhinitis;Gene;HLA;PCR-SSP
(Chin J Lab Diagn , 2011 , 15:0634)
　　目前认为变应性鼻炎是一种多因素疾病 ,其发
病除与环境 、免疫等有关外 ,还有明显的遗传倾向 ,
但其致病基因尚不清楚。研究发现 HLA-D 区是在
Ⅱ类区域中最具多态性的 A类基因 ,而且 DQA1对
疾病遗传易感性的作用引起了有关学者的高度重
视。本研究用聚合酶链反应-序列特异性引物技术
(poly merase chain reaction-sequence specific primer
PCR-SSP),研究 HLA-DQA1基因型在沈阳地区 草
花粉过敏(allergic rhinitis ,AR)患者中的分布 ,统计分
析了 HLA-DQA1基因型与 AR的相关性 ,在基因的
水平上探讨AR的发病机制 。
1　材料与方法
1.1　对象选择
AR组:选择本院就诊以 草花粉过敏为主 ,发
病有明显季节性的 AR患者 74 例 ,其中男 30例 ,女
44例 ,平均年龄 33岁 ,其中最大 58岁 ,最小 12岁 。
对照组:选择健康体检人群 ,排除有过敏史及家族过
敏史的健康人群 54人 ,其中男 27人 ,女 27 ,人平均
年龄35岁。
1.2　模板制备
采用饱和氯化钠盐析法提取基因组 DNA。
1.3　引物的设计
按照文献[ 1] ,根据 HLA-DQA1位点等位基因所
编码蛋白质第二外显子的不同设计出特异性引物
(由联星生物公司提供)12对 ,可鉴别 10个等位基
因特异性。
1.4　PCR-SSP方法
1.4.1　SSP 只能与某一等位基因片断的碱基序列
互补结合 ,从而特异的扩增 HLA-DQA1等位基因片
断 。
1.4.2　PCR体系:在 0.5ml的 Eppendorf管中依次
加入2 μl缓冲液 、1 μl dNTP(25 mmol/L)、引物对(25
pmol/L)各 1 μl 、模板 DNA 100 ng 、Taq-DNA 聚合酶
0.5μl ,用 ddH2O补充至最终体积 20 μl。循环条件:
—634— Chin J Lab Diagn ,Apri l ,2011 , Vol 15 , No.4
预变性 94℃1 min ,变性94℃20 s ,复性65℃50 s ,延
伸72℃20 s。在 PCR自动循环仪上完成 35个循环
后 ,最后 72℃延伸5 min ,迅速冷却至 4℃。
1.5　结果鉴定
取扩增产物在含有 0.5 mg/L溴化乙锭的 1.5%
琼脂糖凝胶中电泳 ,于紫外灯下观察结果
1.6　统计方法
基因频率=阳性基因数/样本数×2
相对危险性(relative risk RR)计算按 Woolf 公
式 ,RR=ad/bc ,式中 a 为群体中携带某一特定 HLA
型别的病人数;d为不携带某一特定型别的对照组
人数;b为不携带某一特定型别的病人数;c 为携带
某一型别的对照组人数。RR>1表示携带该基因易
患AR;RR<1表示携带该基因不易患AR。
2　结果
2.1　PCR特异性扩增产物的鉴定
第11对引物含有内对照带 ,每个样品均为阳性
(在 196 bp位置有一条带)。除此之外如果一个反
应出现一条特意性扩增产物阳性带为纯合子(图
1),如果两个反应分别出现两条特异性扩增产物带 ,
则为杂合子(图 2)。
2.2　HLA-DQA1等位基因频率　见表 1。
疾病组HLA-DQA1＊0104基因发生率(37.8%)
明显高于对照组(0%), P <0.01有显著性差异 ,而
疾病组 HLA-DQA1＊0501基因发生率明显低于对照
组 ,(P<0.01)有显著性差异 。
第 1泳道为 marker , 第 7 泳道和第 12 泳道阳性 , DNA 分型结果为:
DQA1＊0301
图 1　1 号患者 PCR-SSP 技术分析型别
最后泳道为marker ,第 2泳道 、第 6泳道和第 11泳道阳性 , DNA
分型结果为:DQA1＊0102/ 0301.
图 2　3 号患者 PCR-SSP 技术分析型别
表 1　AR组与对照组 HLA-DQA1基因频率比较
HLA-DQA1
等位基因
AR组(n=74)
例数 基因频率%
对照组(n=54)
例数 基因频率% χ2 P 值
0101 2 1.35 4 3.70 1.55 >0.05
0102 5 3.38 5 4.63 0.27 >0.05
0103 18 12.16 15 13.8 0.19 >0.05
0104＊ 56 37.84 0 0 72.6 <0.01
0201 10 6.76 9 8.33 0.24 >0.05
0301 36 24.32 30 27.8 0.59 >0.05
0302 8 5.41 10 9.26 1.53 >0.05
0401 4 2.70 5 4.63 0.71 >0.05
0501＊＊ 5 3.38 26 24.07 29.14 <0.01
0601 4 2.70 4 3.70 0.21 >0.05
　　注:＊RR>164.8, ＊＊RR=0.078
3　讨论
当前 ,大多数学者都认为 AR是一种多基因疾
病 ,是 Ⅰ型变态反应 ,当外界抗原进入鼻腔粘膜 ,个
体产生针对该抗原的特异性 IgE 。暴露于具有相同
变应原的环境中 ,不同个体产生的反应不同 ,并且具
有遗传性 。有文献报道 ,产生 IgE 的调控基因位于
HLA-DR区域 ,在第 11 号和第 5号染色体上[ 2] 。杨
玲等认为在中国东北部汉族人中 AR 患者组 HLA-
DRB1＊0101和 0302等位基因比正常组明显增高[ 3] 。
国内外也有人对各种变应原与 HLA-DQA1 、DQB1的
关联进行了研究 ,如 Torres-Galvan等研究发现在西班
牙人群中任何特殊的 HLA-DRB1/DQA1/DQB1 等位
—635—中国实验诊断学　2011年 4月　第 15卷　第 4期
基因与屋尘螨的过敏发病都有关[ 4] 。
本文通过 PCR-SSP技术对沈阳地区 74例 AR病
人以及 54 例正常健康体检人群 HLA-DQA1 基因多
态性进行群体调查。结果发现疾病组 HLA-DQA1＊
0104基因发生率(37.8%)明显高于对照组(0%), P
<0.01有显著性差异 , RR>164.8提示HLA-DQA1＊
0104可能是 AR的易感基因。而疾病组 HLA-DQA1
＊0501 基因发生率(3.38%)明显低于对照组
(24.07%),(P <0.01)有显著性差异 , RR=0.078 ,
提示 HLA-DQA1＊0501可能是 AR的抗性基因 。
通过群体和家系调查分析病人与正常人的 HLA
多态性 ,是研究 HLA与疾病关联的主要方法 。随着
分子生物学技术的发展 ,建立多种 HLA的 DNA 分型
方法 ,不仅简化了操作过程 ,而且在很大程度上推动
了HLA与疾病关联的研究。本文试图借助 PCR-SSP
技术研究HLA-DQA1等位基因多态性与 AR的相关
性 ,为明确 AR病因学及预后估计提供免疫学方面的
资料 ,同时也为明确 AR的发病机制及探索其免疫治
疗提供了有价值的线索。HLA对 AR的易感性不同
可能影响自身免疫状况 ,进而影响临床表现 ,但 HLA
与AR之间具体关系 ,也就是说在何种机制 、何种遗
传背景情况下 ,触发临床不同类型AR仍是今后有待
于近一步探索的课题 。
作者简介:李海峰(1973-), 男 ,主管技师 ,硕士 ,研究方向:Ⅰ
型变态反应的诊断和临床微生物学检验。
参考文献:
[1] Olerup O , Aleden A , Fogdell A.HLA-DQB1 and-DQA1 typing by PCR
amplification with sequence-specific primers(PCR-SSP)in 2 hours[ J] .
Tissue Antigens ,1993 , 41:119.
[ 2] Senchez-Velasco P , Mendizabal L , Anton E M , et al.Association of hyper-
sensitivity to the nematode Anisakis simplex with HLA class Ⅱ DRB1×
1502-DQB1×0601 haplotype[ J] .Hum Immunol ,2000 , 61:314.
[ 3] 杨　玲 ,张庆瑞 ,叶　晶.中国东北汉族人群变应性鼻炎患者HLA-
DRB1基因多态性分析[ J] .中华耳鼻喉科杂志 , 1999 ,34(3):147.
[ 4] Torres-Galvan M J , Quiralte J , Blanco C , et al.Linkage of house dust mite
allergy with the HLA region[ J] .Ann Allergy Asthma Immunol , 1999 , 82:
198.
(收稿日期:2010-11-27)
基金项目:吉林省科技厅立项课题(200705455)
＊通讯作者
文章编号:1007-4287(2011)04-0636-04
急性髓系白血病微小残留病检测的临床意义
孔令环 ,韩　梅＊ ,马寅芙 ,肖中平 ,陈　琳 ,付　
(吉林省人民医院 血液风湿科 , 吉林 长春 130021)
摘要:目的　探讨微小残留病(MRD)检测在急性髓系白血病预测复发及指导治疗的临床意义。方法　选择 32 例
初治急性髓系白血病(除外M3)患者 128 份标本 , 利用多参数流式细胞术(FCM)进行微小残留病检测 , CD45/SSC 设门 ,
选择 2-4 组四色抗体组合 ,从诱导化疗后第 21 天开始 , 每 1-3 个月监测一次。结果　按照首次诱导治疗后第 21 天
MRD水平将 32 例AML分为高(MRD>1×10-2)、中(1×10-2>MRD>1×10-4)、低(MRD<1×10-4)三组。高 、中 、低
三组的2 年复发率依次为83.3%、11.1%、0。其中MRD>1×10-2组2 年复发率最高 ,MRD<1×10-4组预后好 , 两组的
复发概率差异有统计学意义(P<0.05)。形态学与 MRD动态监测两年结果显示 , 其中 26例缓解 , 6例复发。 6例形态
学复发者均在 MRD持续阳性 4-6 个月出现。形态学完全缓解时 MRD阳性组与阴性组的复发率有显著性差异(P <
0.05)。结论　MRD>1×10-2高度提示复发 ,MRD 阳性比形态学复发出现早 , 连续监测MRD对个体化治疗和预测复
发有重要意义。
关键词:免疫表型分析;白血病 ,急性;微小残留病
中图分类号:R733 文献标识码:A
The clinical significance of minimal residual disease detecting in patient with acute myeloid leukemia　KONG Ling-huan , HAN
Mei , MA Yin-fu , et al.(Department of Hematology and Rheumatics , Jilin Provincial Hospital , Changchun , 130021 , China)
Abstract:Objective　To investigate the clinical significance of minimal residual disease(MRD)detection in patient with acute
myeloid leukemia used for predicting relapse and guiding chemotherapy.Methods　128 Bone marrow aspirate were collected from 32
—636— Chin J Lab Diagn ,Apri l ,2011 , Vol 15 , No.4