全 文 ：［成分分析］
GC法测定椒目仁油中油酸、亚油酸及 α-亚麻酸
肖会敏， 何 悦， 杨 倩， 王四旺* ， 王剑波， 谢艳华
(第四军医大学药学系，陕西 西安 710032)
收稿日期:2011-01-26
基金项目:陕西省“13115”科技创新项目(2008ZDKG-61)
作者简介:肖会敏(1975—) ，男，硕士，主管药师，研究方向:中药学。Tel:(029)84773689，E-mail:xhm_0908@ 163． com
* 通信作者:王四旺(1958—) ，男，硕士，博士生导师，研究方向:中药学。Tel:(029)84773491，E-mail:wangsiw@ fmmu． edu． cn
摘要:目的 建立测定椒目仁油中油酸、亚油酸及 α-亚麻酸的方法。方法 采用十四酸作为内标物，使用氢氧化钾甲醇
溶液将椒目仁油中不饱和脂肪酸甲酯化，再用气相色谱法测定椒目仁油中油酸、亚油酸及 α-亚麻酸。结果 油酸、亚油
酸及 α-亚麻酸浓度分别在 0． 92 ～ 13． 60 mg /mL(r = 0． 999 9)、1． 15 ～ 16． 96 mg /mL(r = 0． 999 9)、2． 02 ～ 29． 94 mg /mL(r
= 0． 999 9)mg /mL范围内呈良好的线性关系;油酸、亚油酸及 α-亚麻酸平均加样回收率及 RSD 值分别为 98． 34%与
0． 26%、98． 43%与 0． 56%、98． 35%与 0． 43% (n = 6) ;3 批椒目仁油中油酸、亚油酸及 α-亚麻酸的平均质量分数分别为
19． 25%、27． 22%、33． 26%。结论 本方法简便易行，准确稳定可靠、重复性好，因此，可以作为椒目仁油的质量控制方
法。
关键词:椒目;椒目仁油;油酸;亚油酸;α-亚麻酸;气相色谱法
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)08-1361-04
GC determination of oleic acid，linoleic acid and α-octadecatrienoic acid in seed
oil of Zanthoxylum bungeanum Maxim
XIAO Hui-min， HE Yue， YANG Qian， WANG Si-wang* ， WANG Jian-bo， XIE Yan-hua
(Department of Pharmacy of The Fourth Military Medical University，Xi’an 710032，China)
ABSTRACT:AIM To establish a GC method for determing the contents of oleic acid，linoleic acid and α-octa-
decatrienoic acid in the seed oil of Zanthoxylum bungeanum Maxim． METHODS Using tetradeconic acid as in-
ternal standard，and methylesterification of seed oil was carried out in potassium-methanol solution，then GC analy-
sis was adopted． RESULTS Oleic acid，linoleic acid and α-octadecatrienoic acid had good linear relationships in
the concentration range of 0． 92 － 13． 60，1． 15 － 16． 96，2． 02 － 29． 94 mg /mL (r = 0． 999 9) ，respectively;the av-
erage rate of recovery and its RSD were 98． 34% and 0． 26%，98． 43% and 0． 56%，98． 35% and 0． 43% (n =
6) ，respectively;the average contents of oleic acid，linoleic acid and α-octadecatrienoic acid were 19． 25%，
27． 22%，33． 26% in three batches’seed oil of Zanthoxylum bungeanum Maxim，respectively． CONCLUSION
It is proved that the method is simple and feasible，and the results are stable，reliable，and good reproducible，and
it can be used for quality control of seed oil of Zanthoxylum bungeanum Maxim．
KEY WORDS:seed oil;Zanthoxylum bungeanum Maxim;oleic acid;linoleic acid;α-octadecatrienoic acid;gas
chromatography
椒目为芸香科植物青椒 Zanthoxylum schinifoli-
um Sieb． et Zucc 或花椒 Zanthoxylum bungeanum
Maxim 的干燥成熟种子。秋季果实成熟时采收，晒
干，除去果皮、果柄及杂质。椒目内外含油，其表皮
层含油 13%左右，内仁含油 15%左右，不饱和脂肪
酸约占总量的 90% ［1］，其中人体必需的亚油酸和
亚麻酸量在 70%以上［2］。人类日常生活食用的油
脂有三种类型:饱和脂肪酸及一价不饱和脂肪酸系
列、亚油酸系列和 α-亚麻酸系列。人类能够利用吸
收的糖和蛋白质来合成饱和脂肪酸及一价不饱和脂
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肪酸，但是人体不能合成亚油酸及 α-亚麻酸，这两
种脂肪酸必须从植物中摄取［3］。文献报道 α-亚麻
酸及其代谢物具有降血脂［4-5］，抗血栓形成、抑制血
小板凝聚［6］，益智、保护视力、延缓衰老、抗过敏及
抑制癌症的发生和转移等作用［7］;亚油酸有助于降
低血清胆固醇和抑制动脉血栓的形成，所以在预防
动脉粥样硬化和心肌梗塞等心血管疾病方面有良好
作用［8］;油酸是一种优质脂肪酸，可以有效地预防
和治疗冠心病、高血压等心血管疾病［9］。椒目仁油
的提取方法主要有压榨法、超临界 CO2 流体萃取法
和化学法等方法［10］。尚未见文献报道同时检测椒
目仁油中的多种不饱和脂肪酸即油酸、亚油酸及 α-
亚麻酸。因此，本实验旨在建立一种准确定量椒目
仁油中的不饱和脂肪酸的方法。
1 仪器与试药
气相色谱仪，Agilent 4890D 型，美国安捷伦公
司;电子分析天平，十万分之一，ME235S 型，德国
Sartorius 公司;对照品:α-亚麻酸(批号 111631-
200802) ，油酸(批号 111621-200608) ，亚油酸(批号
111622-200602) ，中国药品生物制品检定所;椒目仁
油(超临界 CO2 流体萃取
［1］) ，由第四军医大学药物
研究所制备;内标:十四酸，纯度 98%，批号 21801，
上海晶纯化学试剂有限公司;三氟化硼乙醚液，化学
纯，批号 20050426，国药集团化学试剂有限公司;其
余为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 仪器及色谱条件:气相色谱仪
(Agilent 4890D) ;色谱柱:以丁二酸二乙二醇聚酯
(DEGS)为固定相，涂布浓度为 15%不锈钢填充柱，
柱长 2 m，内径 3 mm;柱温:180 ℃;恒温;进样口温
度:300 ℃;检测器:氢焰离子化检测器，温度 300
℃;载气:高纯氮，体积流量 20 mL /min;燃气:氢气，
流量 30 mL /min;空气，体积流量 300 mL /min;进样
量:1 μL;无分流。
2． 2 对照品与供试品溶液的制备
2． 2． 1 对照品溶液的制备 分别精密称取油酸对
照品 9． 19 mg、亚油酸对照品 11． 46 mg、α-亚麻酸对
照品 20． 23 mg各置于 25 mL 锥底烧瓶中，加 5 mL
0． 5 moL /L氢氧化钾-甲醇溶液，置于氮气保护下 65
℃水浴回流 30 min，用流水使冷却后，加 2 mL 三氟
化硼乙醚液，再回流 5 min，用流水使冷却后，加入 3
mL正己烷，5 mL饱和氯化钠溶液，旋涡振摇，静置，
吸出上层置于 5 mL 量瓶中，加正己烷至刻度，作为
对照品母液，备用。
2． 2． 2 内标溶液的制备 以十四酸作为内标，精密
称取 6． 30 mg，按 2． 2． 1 项下制备，得质量浓度为
1． 26 mg /mL，作为内标溶液，备用。
2． 2． 3 供试品溶液的制备 精密称定椒目仁油 50
mg，十四酸 3 mg，分别置于 25 mL 锥底烧瓶中，加 5
mL 0． 5 mol /L氢氧化钾-甲醇溶液，置于氮气保护下
65 ℃水浴回流 30 min，用流水使冷却后，加 2 mL三
氟化硼乙醚液，再回流 5 min，用流水使冷却后，精密
加入 2 mL 正己烷，5 mL 饱和氯化钠溶液，旋涡振
摇，放置片刻，吸出上层，正己烷定容至 2 mL，作为
供试品溶液。
2． 3 方法学考察
2． 3． 1 线性关系考察 精密量取对照品母液0． 05、
0． 33、0． 51、0． 57、0． 69、0． 74 mL，分别置于 2 mL 离
心管中，氮气吹干，各加入 0． 1 mL 内标溶液，溶解，
即得，分别进样。以油酸、亚油酸、α-亚麻酸的峰面
积对十四酸的峰面积的比值(Y1，Y2，Y3)分别对油
酸、亚油酸、α-亚麻酸的浓度(X1，X2，X3)做线性回
归，得方程为 Y1 = 0． 650 3X1 － 0． 025 6，相关系数 r1
为 0． 999 9;Y2 = 0． 563 2X2 － 0． 004 4，相关系数 r2
为 0． 999 9;Y3 = 0． 538 7X3 － 0． 046 8，相关系数 r3
为 0． 999 9，说明油酸、亚油酸、α-亚麻酸的峰面积比
值分别在 0． 92 ～ 13． 60 mg /mL、1． 15 ～ 16． 96 mg /
mL、2． 02 ～ 29． 94 mg /mL浓度范围内呈良好的线性
关系;根据标准曲线中油酸、亚油酸、α-亚麻酸和十
四酸的峰面积计算校正因子与 RSD值分别为 1． 21、
0． 58%，1． 42、1． 76%，1． 49、2． 60%。
2． 3． 2 精密度实验 取线性考察样品溶液
(0． 05 mL母液，氮气吹干，加入 0． 1mL内标溶液)及
供试品连续进样 6 次，测定对照品与供试品对十四
酸峰面积比值(油酸、亚油酸、α-亚麻酸的峰面积对
十四酸峰面积比值)的 RSD 值分别为 1． 51%、
1． 71%、2． 94%，2． 89%、2． 51%、2． 92%，表明仪器
精密度良好。
2． 3． 3 稳定性实验 取线性考察样品溶液(0． 05
mL母液，氮气吹干，加入 0． 1 mL 内标溶液)及供试
品分别在 0、1、2、4、8、12 h 进样，结果测得油酸、亚
油酸与 α-亚麻酸 RSD 值分别为 1． 73%、1． 77%、
2． 32%，2． 39%、2． 46%、2． 27%，表明样品溶液在
12 h内稳定。
2． 3． 4 加样回收率实验 采用加样回收法，取已测
知量的椒目仁油(样品中油酸、亚油酸、α-亚麻酸量
分别为 18． 05%、25． 27%、30． 63%) ，分别添加油
酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品，按供试品溶液制备法
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操作，按上述色谱条件进行测定，测得油酸、亚油酸、
α-亚麻酸加样回收率及 RSD 值分别为 98． 34%与
0． 26%，98． 43%与 0． 56%，98． 35%与 0． 43%，表明
本方法具有良好的回收率。
2． 3． 5 重复性实验 称取椒目仁油，按照供试品方
法制备样品溶液 6 份，测得油酸、亚油酸、α-亚麻酸
的 RSD值分别为 2． 07%、2． 38%，2． 19%，表明本方
法重复性良好。
3 3 批椒目仁油中不饱和脂肪酸的测定
称取椒目仁油，按照供试品方法制备样品溶液，
按上述色谱条件测定 3 批椒目仁油中的油酸、亚油
酸、α-亚麻酸的量，见表 1。
表 1 椒目仁油中不饱和脂肪酸测定结果
Tab． 1 Determination results of the unsaturated fatty acids in semen oil of Zanthoxylum bungeanum Maxim
批次
称样量
/mg
含油酸量
/%
油酸均值
/%
含亚油
酸量 /%
亚油酸
均值 /%
含 α-亚麻
酸量 /%
α-亚麻酸
均值 /%
1
52． 42
52． 18
20． 75
20． 39
20． 58
29． 07
28． 55
28． 81
35． 25
34． 59
34． 92
2
71． 01
68． 03
18． 79
18． 66
18． 73
26． 41
26． 46
26． 46
32． 14
32． 30
32． 30
3
74． 95
73． 83
18． 42
18． 45
18． 44
25． 87
26． 90
26． 39
31． 36
33． 75
32． 56
4 分析与讨论
4． 1 色谱柱选择 试用 HP-5 石英弹性毛细管柱
时，油酸、亚油酸、α-亚麻酸不能分开，仅在 α-亚麻
酸峰处出峰;试用 PEG-20M 毛细管柱时，色谱峰不
能分开;试用 DB-5 毛细管柱时，未见出峰;试用
DEGS不锈钢填充柱时，油酸、亚油酸、α-亚麻酸均
能分开，且分离度大于 1． 5，见图 1。
图 1 椒目仁油供试品 GC图
Fig． 1 GC chromatogram of semen oil of Zanthoxylum
bungeanum Maxim for the test materials
1． 溶剂峰 2． 内标十四酸 3 － 5． 杂质 6． 油酸 7． 亚油酸
8． α-亚麻酸
4． 2 内标的选择 试用棕榈酸(十六酸)、十七酸
时，与杂质峰不能分开;试用二十酸时，在亚油酸峰
与 α-亚麻酸峰间出现，由于两峰之间间距较短，分
离度不能达到要求;试用二十二酸时，峰出现在 α-
亚麻酸峰之后，由于峰高过低，拖尾严重，导致理论
塔板数太低;试用十四酸时，能与溶剂峰、杂质峰分
开，峰形良好，分离度达要求，见图 1、2，故选用十四
图 2 油酸、亚油酸、α-亚麻酸对照品 GC图
Fig． 2 GC chromatogram of oleic acid， linoleic acid，
α-linolenic acid for standard preparation
1． 溶剂峰 2． 内标十四酸 3． 油酸对照品 4． 亚油酸对照品
5． α-亚麻酸对照品
酸作为内标物。
4． 3 甲酯化方法选择 试验比较了硫酸催化酯化
法［11］、三氟化硼催化酯化法［12］、氢氧化钾甲酯法加
三氟化硼乙醚催化法［13］对其脂肪油衍生化的效果，
结果表明氢氧化钾甲酯法加三氟化硼乙醚催化法甲
酯转化率最高，故选用此法作为甲酯化方法。
综上所述，本方法稳定可靠，回收率高，重复性
良好，因此，可以作为椒目仁油的质量控制方法。
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109．
野生与组培金线莲有效成分的比较及 RAPD分析
顾慧芬1， 庄意丽1， 梅其春2
(1． 上海市中药研究所，上海 201401;2． 复旦大学 生命科学学院，上海 200433)
收稿日期:2010-01-25
基金项目:上海市科委项目(02DZ19171)
作者简介:顾慧芬(1960—) ，女，高级工程师，从事植物药资源及植物药分子研究。Tel:(021)37565589，E-mail:ghuif@ 126． com
摘要:目的 研究人工栽培金线莲替代金线莲野生资源的可行性。方法 比较金线莲组培苗与野生金线莲药材中多糖、
氨基酸及总黄酮的量，采用随机扩增多态性 DNA (RAPD)技术对金线莲组培苗及野生药材进行了基因组 DNA 多态性
分析。结果 多糖和总黄酮的比较表明，金线莲组培苗与野生品(台湾)的多糖和总酮量相近;总氨基酸比较表明，金线
莲组培苗中总氨基酸达 9． 17%，高于野生品的总氨基酸量;通过随机扩增多态性 DNA (RAPD)技术，从中筛选出了能用
于鉴别金线莲组培苗的特异性引物。结论 初步证明通过组织培养获得的金线莲组培苗可以代替其野生品，它是解决
金线莲资源紧缺的有效途径之一。
关键词:金线莲;组培苗;多糖;氨基酸;总黄酮;RAPD
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)08-1364-04
Comparison of effective components and RAPD between wild and tissue culture
seedlings of Anoectochilus roxburghii
GU Hui-fen1， ZHUANG Yi-1i1， MEI Qi-chun2
(1． Shanghai Institute of Chinese Materia Medica，Shanghai 201401，China;2． School of Life Sciences，Fudan University，Shanghai 200433，China)
ABSTRACT:AIM To call for the feasibility study into the scheme for replacing wild Anoectochilus roxburghii by
the tissue culture seedlings． METHODS The contents of ploysaccharides，amino acid and total flavonoids be-
tween wild and tissue culture seedlings of Anoectochilus roxburghii were compared，and the random amplified poly-
morphic DNA (RAPD)was used to analyze both genetic relationship． RESULTS The contents of ploysaccharides
and total flavonoids in the tissue culture seedlings were similar to the wild species from Taiwan district，but the con-
tent of total flavonoids of the tissue culture seedlings reached 9． 17%，was higher than that in the wild species． A
specific primer selected to identify the original species of the tissue culture seedlings was found in the RAPD analy-
ses． CONCLUSION The study preliminarily proved that replacing wild Anoectochilus roxburghii by the tissue
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