全 文 ：·方药纵横·
＊陕西省“１３１１５”科技创新工程技术研究中心
基金项目（ＮＯ．Ｓ２０１０ＺＤＧＣ１０５）；
陕西省食品药品监督管理局项目（ＮＯ．２００９ＺＢ４０）。
△通讯作者
椒目种皮的石蜡切片制备方法及显微鉴别研究＊
曹　蔚　薛美玲　谢艳华　袁佳妮　杨　倩　王四旺△　第四军医大学药学系天然药物学教研室（西安７１００３２）
　摘　要　目的：对芸香科植物花椒的种子进行种皮横切片最佳制备方法的研究，并进行组织、粉末鉴
别，为花椒、椒目药材品种鉴定提供参考。方法：通过取材、固定、脱水、透明、浸蜡、切片、染
色等过程的考察，制备椒目种皮的石蜡切片。对种皮横切片显微观察和粉末鉴定。结果：椒
目种皮固定液应适量加入甘油软化，切片的最佳条件为切片厚度２０μｍ，染色剂选择１％番
红溶液（９５％乙醇配制）染色２ｈ，１％固绿（５０％乙醇配制）染色１ｍｉｎ。镜下可见明显的表
皮上皮细胞、石细胞。结论：该制片方法可得到染色清晰、组织结构完整的椒目种皮的石蜡
切片；其种皮显微特征可作为椒目、花椒质量标准制定的参考依据。
　主题词　椒目　种皮　石蜡切片 显微鉴定
　【中图分类号】　Ｒ　２８４．１　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】　１０００－７３６９（２０１２）０３－０３５２－０３
　　椒目为芸香科植物青椒（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｓｃｈｉｎｉｆｏ－
ｌｉｕｍＳｉｅｂ．ｅｔＺｕｃｃ）或花椒（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍ
Ｍａｘｉｍ）的干燥成熟种子。因其形圆黑亮，似目珠而得
名［１］。我国大部分地区均有分布。椒目苦、辛、寒，有
毒，归脾、膀胱经。具有行水消肿，平喘的功效。用于
水肿胀满，小便不利，痰饮喘逆仁［２］。９０年代对椒目
的研究发现其仁油中含α－亚麻酸１７％－２０％，成为α－
亚麻酸开发的新资源［３］。近年对椒目仁油分析发现，
其α－亚麻酸含量约占１６％－３０％［４］。α－亚麻酸及其代
谢物具有益智、保护视力、降血脂、降血压、抑制血小板
凝聚、抗血栓形成、延缓衰老、抗过敏及抑制癌症的发
生和转移等作用。所以，在医药和保健品等领域有广
阔的应用前景［５］。
为了保证临床用药的安全性、有效性，我们对椒目
的质量标准进行了研究。目前显微鉴定是确定中药材
品种和质量的一种重要的鉴定方法，其中组织构造特
征的鉴定是必不可少的。石蜡切片法由于具有容易操
作，能连续切片，容易贴附在玻片上，经石蜡包埋后可
永久保存等诸多优点，是生药学研究的主要显微鉴定
方法。目前关于动植物组织石蜡切片的制作也有不少
报道，但因椒目质地坚硬，石蜡切片的制作难度较大，
有关椒目种皮的石蜡切片制作未见报道，本实验对椒
目种皮石蜡切片方法进行探索，成功制作种皮的石蜡
切片，并进行显微鉴定，为质地坚硬的种子类药材的切
片提供了参考，为花椒药材质量评价提供科学依据。
１　材料与方法　１．１　材　料　 椒目样品采自
陕西省韩城市，经西安交通大学医学院药学系牛晓峰
教授鉴别为芸香科植物花椒的干燥成熟种子。
１．２　 仪器与试剂　 仪器：ＺＴ－１２Ｊ生物组织自
动脱水机（湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公
司）；ＪＢ－Ｌ６生物组织包埋机、包埋机冷台（武汉俊杰电
子有限公司）；ＪＪＱ－Ｐ２０１６Ｊ生物组织切片机（武汉俊杰
电子有限公司）；Ａｘｉｏｓｋｏｐ４０显微镜（蔡司光学仪器国
际贸易有限公司）。试剂：５１－５５℃熔点的切片石蜡（天
津市科密欧化学试剂有限公司）、番红（天津市科密欧
化学试剂有限公司）、固绿（国药集团化学试剂有限公
司）；ＦＡＡ固定液（６０％乙醇１８０ｍＬ、冰醋酸１０ｍＬ、
甲醛１０ｍＬ，考虑到椒目质地坚硬加入１０ｍＬ甘油软
化［６］）；黏合剂（蛋清、稀甘油以１∶１混合，纱布过滤至
无泡沫［７］）；其它实验用试剂均为国产分析纯。
１．３　 实验方法　１．３．１　样品前处理　 挑取
完整的椒目沸水煮沸，将浮于水面的去除，煮沸４ｈ，置
于５９℃恒温水中浸泡２４ｈ，检查至内无白心，可切成
片，再抽滤至无气泡从种子中溢出。
１．３．２　 染色剂配制 　 配制乙醇浓度不同的染
色剂供后续试验使用。
染色剂１∶１ｇ番红加５０％乙醇至１００ｍＬ，超声
数分钟后过滤取滤液制成１％番红溶液；１ｇ固绿加
９５％乙醇至１００ｍＬ，超声数分钟后过滤取滤液制成
１％固绿溶液［８］。
染色剂２∶１ｇ番红加９５％乙醇至１００ｍＬ，超声
数分钟后过滤取滤液１％番红溶液备用；１ｇ固绿加
５０％乙醇至１００ｍＬ，超声数分钟后过滤取滤液制成
１％固绿溶液。
１．３．３　取材与固定　取椒目并将其从中间纵切
为二，浸入ＦＡＡ固定液中固定１周，可长时间保存。
１．３．４　 脱水与透明 材料自固定液中取出后水
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洗，然后依次入６５％乙醇（２ｈ）→７５％乙醇（２ｈ）→
８５％乙醇（２ｈ）→９０％乙醇（２ｈ）→９５％乙醇（２ｈ）→
１００％乙醇（２ｈ）→１００％乙醇︰二甲苯（１︰１）（２ｈ）
→二甲苯（２ｈ）中脱水透明［９］。
１．３．５　 浸蜡与包埋　在盛有材料及二甲苯的
小瓷杯中加入与二甲苯等量的石蜡，然后加盖放在
４０℃恒温箱中３６ｈ。打开小瓷杯上的盖，并将恒温箱
调到６０℃，让二甲苯慢慢蒸发，２４ｈ后把原溶液倾去，
用镊子把材料拨入盛有融熔石蜡的小瓷杯中，每隔２
ｈ换一次纯蜡，共换３次。将石蜡及其中的材料一起
倒入纸盒中，用在酒精灯上加热的镊子把材料整好，迅
速均匀地放入凉水中凝固。
１．３．６　切片、贴片　将蜡块修成上下两边平行
的正方形或长方形，然后粘在小木块上。把小木块装
在切片机上，将蜡块切成１６、２０或２５μｍ 厚的薄片，
切下的薄片连成蜡带。用小玻棒蘸取一点蛋白甘油滴
于一干净的载玻片上涂匀，滴一滴水将选好的平整的
蜡带用毛笔蘸取置于载玻片上，置于４２℃下３～４ｈ蜡
片受热后即慢慢展平。待完全展平后，用解剖针将切
片位置拨正，倾去载玻片上的余水后，将其放在４５℃
左右恒温箱内烤干。
１．３．７　脱蜡　将烤干的切片依次放入二甲苯（５
ｍｉｎ）→二甲苯（５ｍｉｎ）→二甲苯︰乙醇（１︰１）中，以
溶去切片上的石蜡，再将脱蜡后的切片移入无水酒精
（５ｍｉｎ）→９５％酒精（５ｍｉｎ）→８５％酒精（５ｍｉｎ）→
７０％酒精（５ｍｉｎ）。
１．３．８　染色、透明　根据不同的染色剂比较染色
时间，如下：
染色剂１：番红（２ｈ、５ｈ或１１ｈ）→７０％乙醇（１
ｍｉｎ）→８５％乙醇（１ｍｉｎ）→固绿（４０ｓ、５０ｓ或１ｍｉｎ）
→１００％乙醇（１ｍｉｎ）→二甲苯︰乙醇（１︰１）（５ｍｉｎ）
→二甲苯（５ｍｉｎ）→二甲苯（５ｍｉｎ）［１０］。
染色剂２：固绿（４０ｓ、５０ｓ或１ｍｉｎ）→７０％乙醇（１
ｍｉｎ）→８５％乙醇（１ｍｉｎ）→番红（２ｈ、５ｈ或１１ｈ）→
１００％乙醇（１ｍｉｎ）→二甲苯︰乙醇（１︰１）（５ｍｉｎ）→
二甲苯（５ｍｉｎ）→二甲苯（５ｍｉｎ）。
１．３．９　封片　滴一小滴中性树胶于载玻片上，
轻轻盖上盖玻片，烘干。
１．３．１０　粉末制片　取椒目适量，将其研碎，过４
号筛。滴三滴水合氯醛溶液于载玻片上，用针点挑少
许粉末，使之均匀的分散在水合氯醛中，用酒精灯微
热，放置于Ａｘｉｏｓｋｏｐ　４０光学显微镜下观看。
２　结　果　２．１　最佳切片及染色条件　切片厚
度为１６μｍ时组织破碎不完整；２０μｍ 时蜡带平整，
组织完整；２５μｍ时蜡带卷曲，无法展开；选择染色剂
１时番红染不上色，选择染色剂２时番红可以染上色；
番红染色５ｈ、１１ｈ颜色太重，染色２ｈ效果佳；固绿染
色时间长短对染色效果影响不大；所以确定的最佳染
色条件为切片厚度２０μｍ，染色剂２番红染色２ｈ，固
绿染色１ｍｉｎ。经过上述一系列过程制得的永久制
片，其组织完整，细胞界限清楚，番红－固绿二重染色对
比清晰，切片干净。
２．２　显微鉴定　２．２．１　 种皮横切面　种皮表
皮为３～５列径向排列整齐的长方形细胞，内含棕色块
和草酸钙结晶，外壁被有角质层。表皮细胞内为数列
紧密排列的石细胞层，部分脱落；石细胞层多为长条
状、类圆形，直径１７～５８μｍ，厚度５～１０μｍ。种皮下
皮细胞为多角形，壁木质化，细胞排列紧密，见图１。
图１　椒目横切面显微照片（×２０）
１色素层；２表皮细胞；３石细胞层；４下皮组织；５草酸钙结晶
　　２．２．２　粉末鉴定　种皮表皮细胞红棕色或棕黑
色、多角形，壁呈连珠状增厚；种皮下皮细胞淡黄色，多
角形，壁具明显的网状纹理，木质化；石细胞呈方形，类
圆形或多角形，孔沟及纹孔明显，可见草酸钙砂晶。
３５３陕西中医２０１２年第３３卷第３期
３　讨　论　显微鉴定是确定中药材品种和质量
的一种重要的鉴定方法，其中组织特征的鉴定是必不
可少的。石蜡切片在组织鉴定技术中是最为广泛应用
的方法，但在椒目的石蜡切片的制作过程中发现：其材
料硬度较大，溶液不宜渗入，给固定、脱水、透明、浸蜡
等过程带来困难，且不容易切成薄片［１１］。一般在制作
干、硬的中药材石蜡切片前，必须先进行软化处理，使
坚硬的药材变得柔软易切成薄片，以易于制作出良好
效果的石蜡切片。此时单纯用水浸泡软化后进行石蜡
切片，往往得不到理想效果。因此，本文在椒目软化处
理时采用煮沸４ｈ，恒温水中浸泡２４ｈ的方法，同时固
定液中添加适量的软化剂，如甘油等，为制作出好的石
蜡切片奠定基础。此外，在染色剂配置时番红可用较
高浓度的乙醇配制，染色时间不宜过长；固绿可用较低
浓度的乙醇配制。采用此法可得到切片干净的永久制
片。
椒目作为地方标准药材收载于《山东省中药材标
准》１９８８年版至２００２年版。目前市场上出售的为芸
香科植物青椒（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｓｃｈｉｎｉｆｏｌｉｕｍ　Ｓｉｅｂ．ｅｔ－
Ｚｕｃｃ）或花椒（Ｚａｎｔｈｏｘｙｌｕｍ　ｂｕｎｇｅａｎｕｍ　Ｍａｘｉｍ）的干
燥成熟种子。本研究由于采收地点和时间的关系未能
进行青椒椒目的种皮石蜡片的制备和显微特征比较。
但据文献报道，花椒和青椒目两种药材因亲缘关系较
近（同属）及分布的大致相同，其显微特征有许多相似
之处，仅在表皮细胞的形状、列数，下皮细胞的层数上
存在一些差异［１　２］。因此，在制定椒目药材标准时可以
种皮上皮细胞、石细胞、草酸钙结晶等为特征辨别真
伪。
参考文献
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［１０］　张贵君．中药鉴定学实验［Ｍ］．第２版．北京：科学
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［１２］　王月敏，郝延军，赵余庆，等．椒目的生药研究［Ｊ］．
中草药，１９９９，３０（５）：３７７－３８０．
（收稿２０１１－０９－２６；修回２０１１－１０－２１）
△ 天津天士力之骄药业有限公司（天津３００１９３）
巴豆霜提取物的成分检测
逄小倩　叶正良△　 李德坤△　周大铮△　 贾　诚　 天津中医药大学（天津３００１９３）
　摘　要　目的：采用不同溶剂对巴豆霜主要有效成分进行提取、分离、定性。方法：先将巴豆霜依次用
石油醚、水提取，再将水提液过 ＡＢ－８大孔树脂柱依次用水、９５％乙醇冲洗分别富集、干燥。
根据理化性质、薄层鉴别结果和波谱数据鉴别化合物结构。结果：得出９５％乙醇冲洗液中
含皂苷、黄酮类成分，并利用ＧＣ－ＭＳ分析得到巴豆霜脂肪油中含癸酸、月桂酸、肉豆蔻酸、
棕榈酸、十八烷酸等十种成分。结论：本研究所用提取分离方法对获得巴豆霜中的活性成分
较为有效。
　主题词　巴豆霜　薄层鉴别 　色谱法，高压液相
　【中图分类号】　Ｒ　２８４．２　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】　１０００－７３６９（２０１２）０３－０３５４－０３
　　巴豆为大戟科植物巴豆Ｃｒｏｔｏｎ　ｔｉｇｌｉｕｍ　Ｌ．的干燥 成熟果实，又名大叶双眼龙、虫蛊草、猛子树。药材主
产于四川、云南等地。性热味辛，有大毒，归胃、大肠
经，外用于蚀疮。巴豆霜为巴豆的炮制加工品，具有峻
４５３ 陕西中医２０１２年第３３卷第３期