全 文 ：接骨木提取物有效成分含量与抑菌活性的关系
＊
孙　华　张　涛　王桂清
（聊城大学 农学院，山东 聊城２５２０５９）
摘　要　采用索氏提取法对接骨木叶片进行平行提取和顺序提取，并采用生长速率法测定了提
取物对灰葡萄孢菌的抑菌活性，采用比色法测定了提取物中可溶性糖、可溶性蛋白、总黄酮和盐
酸小檗碱的含量，以研究接骨木提取物有效成分含量与抑菌活性的关系，为接骨木活性物质的研
究及更好的开发利用该属植物提供理论基础．结果表明，接骨木不同溶剂提取物的抑菌效果与以
上四种有效成分的含量有关：提取物中可溶性糖或可溶性蛋白的含量越高，其对菌丝生长的促进
作用越强，总黄酮或盐酸小檗碱的含量越高，其对菌丝生长的抑制作用越强．
关键词　接骨木，有效成分吗，抑菌活性
中图分类号　Ｓ６８８　　文献标识码　Ａ　　文章编号　１６７２－６６３４（２０１１）０３－００３９－０４
随着对植物源抑（杀）菌剂的研究，目前在许多植物体中都发现了具有抑（杀）菌的活性物质，结构类型
也较多，几乎涉及了各类植物成分．从化合物结构分，植物中抑（杀）菌有效成分主要有四大类：萜类化合物
及其衍生物；生物碱、酰胺及蛋白质等含氮含硫化合物；脂肪类化合物，主要是长链碳烷和脂肪酸；芳香族
化合物，包括酚类、黄酮类以及芪类等，其中香精油（酯、醛、酮、萜烯等的化合物）是高等植物中最常见的抑
菌有效成分［１－３］．接骨木属植物是集药用价值与观赏价值为一体的植物，在民间作为一种古老的药用植物
经常用于接骨、活血、止痛、祛风、清热、解毒等［４］，说明接骨木属植物含有具有生物活性的化学成分．国内
外对该属植物的化学成分和药理活性方面的研究已进行了大量工作，研究发现接骨木含有黄酮类及盐酸
小檗碱等活性物质［５－６］，但这些研究大都是以动物为试材，研究对人类某些疾病方面的作用，对植物病菌作
用及其活性成分含量的研究的甚少．本研究采用不同的提取方法对接骨木成熟叶片中的活性物质进行提
取，并对其抑菌活性与有效成分含量进行测定，研究接骨木提取物有效成分含量与抑菌活性的关系，为其
活性物质的研究及能更好的开发利用该属植物提供理论基础．
１　材料和方法
１．１　植物样品的制备
以接骨木成熟叶片为材料，８月初采于聊城大学校园内，将其进一步阴干，粉碎，过３８０μｍ孔径筛．
为有效提取活性物质，选用极性不同的溶剂（极性：石油醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜丙酮＜乙醇）组成一个
溶剂梯度，采用索氏提取法对接骨木的叶粉进行６ｈ的平行提取提取和顺序提取，温度控制在溶剂的沸点
附近．平行提取为准确称取叶片粉末２０ｇ，共５份，滤纸包扎好，装入２５０ｍＬ索氏提取器中，分别用１５０
ｍＬ石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇进行提取．顺序提取为准确称取７０ｇ叶粉，按照溶剂极性有小到大
第２４卷　第３期
２０１１年９月
　　　聊城大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．）
Ｖｏｌ．２４Ｎｏ．３
Ｓｅｐ．２０１１
＊ 收稿日期：２０１１－０４－２５
基金项目：山东省自然科学基金资助项目（Ｙ２００８Ｄ５７）
通讯作者：王桂清，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｇｕｉｑｉｎｇ＠ｌｃｕ．ｅｄｕ．ｃｎ．
的顺序，先经石油醚提取，残渣再经氯仿提取，依次类推．所得抽提液经减压过滤，旋转蒸发仪浓缩，即得黏
稠膏状粗提物，称重后，计算其提取率，再置于４℃冰箱保存备用．
１．２　提取物抑菌活性测定
引起黄瓜灰霉病的灰葡萄孢菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ　Ｐｅｒｓ．Ｅｘ　Ｆｒ．），由聊城大学农学院植保系植物病理学
实验室提供．采用生长速率法［７］测定接骨木的不同提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制效果．
１．３　接骨木提取物有效成分含量的测定
１．３．１　可溶性糖的提取与测定．称取０．０２ｇ西洋接骨木的不同溶剂提取物，先用微量丙酮与二甲基亚砜
混合液将每种备提物充分溶解后，再加水定容至２５ｍＬ．采用蒽酮比色法［８］对西洋接骨不同溶剂提取物进
行测定．以空白为参比，显色并在６３０ｎｍ波长下测定吸光度，进行三次重复．由标准曲线方程求出糖的含
量（ｍｇ）．
１．３．２　可溶性蛋白的提取与测定．精确称取０．０２ｇ提取物，先用微量丙酮与二甲基亚砜混合液将每种备
提物充分溶解后，再按１：５（Ｗ／Ｖ）加入ｐＨ＝７．０磷酸缓冲液定容至５ｍＬ，在４℃下放置１２ｈ后测定其吸
光度．采用考马斯亮蓝Ｇ－２５０染色法［８］西洋接骨不同溶剂提取物中蛋白进行测定．向各管中加入０．１ｍＬ
样品与３ｍＬ考马斯亮蓝Ｇ－２５０溶液，摇匀，并放置５ｍｉｎ左右，在５９５ｎｍ下比色测定吸光度．
１．３．３　总黄酮的提取与测定．精确称取０．０２ｇ提取物，先用微量丙酮与二甲基亚砜混合液将每种备提物
充分溶解后，用甲醇定容至３ｍＬ．总黄酮的测定采用分光光度法：精密量取０．５ｍＬ样品溶液置于试管
中，加入浓度为５％亚硝酸钠，混匀放置６ｍｉｎ；加入浓度为５％硝酸铝溶液，混匀，放置６ｍｉｎ；加入浓度１
ｍｏｌ／Ｌ氢氧化钠，摇匀，放置１５ｍｉｎ．在波长５１０ｎｍ处测定吸光度．每个样品重复３次．
１．３．４　盐酸小檗碱的测定．精确称取０．０２ｇ提取物，先用微量丙酮与二甲基亚砜混合液将每种备提物充
分溶解后，用无水乙醇定容至５ｍＬ．盐酸小檗碱测定采用分光光度法：用无水乙醇配置浓度为０．５ｍｇ／
ｍＬ作为对照品溶液，在波长４２６ｎｍ处测定吸光度．
１．４　数据分析方法
应用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ　Ｅｘｃｅｌ软件和ＤＰＳｖ３．０１专业版软件进行数据统计分析．
２　结果与分析
２．１　接骨木提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的作用
表１　接骨木不同溶剂提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制效果
提取溶剂
菌丝生长抑制率（％）
平行提取物 顺序提取物
石油醚 －４．２２３　２±０．０６３　３ｂＢ －４．２２３　２±０．０６３　３ｂＢ
氯仿 　４．４２５　２±０．００２　３ａＡ 　 ９．９３４　１±０．３０５　４ｂＡＢ
乙酸乙酯 －１７．６９７　１±１．２５１　６ｄＤ 　２１．３６４　５±１．７７７　３ａｂＡ
丙酮 －６．１９２　２±０．０００　１ｃＣ －５．５６５　５±０．２１７　２ｃＢ
乙醇 　５．３１０　３±０．２７１　６ａＡ 　２９．９２２　２±０．９０３　６ａＡ
　　实验室条件下以生长速率法测定了浓度为
２　０００ｍｇ／Ｌ的接骨木不同溶剂提取物对灰葡
萄孢菌菌丝生长的抑制效果，结果如表１所示．
接骨木平行提取方法中，接骨木不同溶剂提取
物对灰葡萄孢菌的菌丝生长作用有两种，即抑
制作用和促进作用；其中乙酸乙酯提取物的促
进作用最大，为１７．６９７１％ ，乙醇提取物的抑制
作用最大为５．３１０　３％．顺序提取物中乙醇提取
物对灰葡萄孢菌菌丝生长的抑制作用最大，为
２９．９２２　２％，促进率作用最大值为氯仿提取物
的５．５６５　５％．
２．２　接骨木提取物与抑菌活性的关系
接骨木成熟叶片的５种不同极性溶剂的提取物中可溶性糖和可溶性蛋白总含量与黄酮和盐酸小檗碱
的含量测定结果见表２．
０４ 　 聊 城 大 学 学 报（自 然 科 学 版） 第２４卷
表２　接骨木不同样品活性物质含量的分析
提取方法 提取溶剂
活性物质含量（ｍｇ／ｇ）
可溶性糖（１） 可溶性蛋白（２） 黄酮（３） 盐酸小檗碱（４）
（１＋２）／（３＋４）
平行提取
石油醚 ３７．９４４　５±１．８７５　６ｅＥ　６０１．５９０　２±３５．５３０　６ｂＢ　４９．６５８　２±１．３９２　６ｄＣ　 ３９．３３９　０±１．１８５　８ｂＢ　 ７．１８６　０
氯仿 ５３．７４２　４±４．９５０　３ｄＤ　７３０．８５０　２±１１．５２３　３ａＡ　５９．１３２　３±２．２７７　５ｃＢ　 ５１．８４６　４±０．９５２　３ａＡ　 ７．０６９　８
乙酸乙酯 ７５．２５６　５±１．６５２　３ｃＣ　２８３．０００　０±１９．０６６　７ｅＥ　６３．４８３　０±１．２１０　０ｂＢ　 ４９．００６　７±１．３４４　６ａＡ　 ３．１８４　８
丙酮 １１２．０１２　０±１．４７３　６ｂＢ　３１４．７６１　２±６．６０１　４ｄＤ　７３．３８４　６±２．０４７　５ａＡ　 ３８．１９９　２±０．５８８　６ｂＢ　 ３．８２４　７
乙醇 １３３．５２０　０±２．１４３　２ａＡ　５８１．６７１　３±０．２９４　２ｃＣ　 ７６．７０１　９±１．２０３　５ａＡ　 ３２．２２７　７±０．４９６　６ｃＣ　 ６．５６５　６
顺序提取
石油醚 ３７．９４４　５±１．８７５　６ｄＤ　 ６０１．５９０　２±３５．５３０　６ｂＢ　４９．６５８　２±１．３９２　６ｄＤ　 ３９．３３９　０±１．１８５　８ｃＣ　 ７．１８６　０
氯仿 ６４．１５０　０±２．１９１　３ｃＣ　 ４８７．５５０　０±２４．９７３　２ｄＤ　６５．２８３　０±３．８８５　５ｃＣ　 ５８．４３４　３±０．６８２　７ａＡ　 ４．４５９　４
乙酸乙酯 ６６．５２１　９±２．２１０　１ｃＣ　４８４．４２２　１±５．４７３　８ｄＤ　７１．８８７　８±０．２３０　４ｂＢ　 ４８．１８１　３±１．６２７　０ｂＢ　 ４．５８８　６
丙酮 １９２．１６３　８±１．４８２　４ｂＢ　６８７．８１０　６±０．８９３　３ａＡ　７７．９４２　０±０．２３９　９ａＡＢ　２９．００４　１±０．３０５　２ｄＤ　 ８．２２８　２
乙醇 ２５６．７０１　４±７．８４３　２ａＡ　４６１．９５０　６±１１．２３５　６ｃＣ　７８．８７１　０±０．２３０　５ａＡ　５９．７７９　９±０．１０６　３ａＡ　 ５．１８３　２
　　从表２可以看出，平行提取方法中，乙醇提取物的黄酮含量最高，为７６．７０１　９ｍｇ／ｇ，氯仿提取物的盐
酸小檗碱含量最高，为５１．８４６　４ｍｇ／ｇ，表１的抑菌结果显示，乙醇和氯仿的提取物对灰葡萄孢菌菌丝生
长的抑制作用较强，说明提取物中黄酮或盐酸小檗碱的含量越高，其对菌丝的生长的抑制作用越强．顺序
提取方法中，乙醇提取物的黄酮与盐酸小檗碱含量最高，分别为７８．８７１　０ｍｇ／ｇ与５９．７７９　９ｍｇ／ｇ；乙酸乙
酯中，黄酮含量较高，为７１．８８７　８ｍｇ／ｇ，表１的抑菌效果显示，这两种提取物对灰葡萄孢菌菌丝生长均表
现出较好的抑制作用，说明提取物中黄酮或盐酸小檗碱的含量越高，其对菌丝的生长的抑制作用越强；丙
酮与石油醚提取物中可溶性蛋白均较高，分别为６８７．８１０　６ｍｇ／ｇ与６０１．５９０　２ｍｇ／ｇ，且丙酮中可溶性糖
含量也较高，为１９２．１６３　８ｍｇ／ｇ，表１的抑菌效果显示这两种提取物对灰葡萄孢菌的菌丝生长表现出促
进作用，说明提取物中可溶性糖或可溶性蛋白的含量越高，其对灰葡萄孢菌的菌丝生长的促进作用越强．
３　结论与讨论
采用索氏提取法对接骨木叶片进行平行提取和顺序提取，并采用生长速率法测定了提取物对灰葡萄
孢菌的抑菌活性，采用比色法测定了提取物中可溶性糖、可溶性蛋白、总黄酮和盐酸小檗碱的含量，以研究
接骨木提取物有效成分含量与抑菌活性的关系．结果表明，接骨木不同溶剂提取物的抑菌效果与以上四种
有效成分的含量有关；可溶性糖或可溶性蛋含量越高，提取物对菌丝生长的促进作用越强，总黄酮获盐酸
小檗碱含量越高，提取物对菌丝生长的抑制作用越强．
目前在许多植物体中都发现了具有抑菌杀菌的活性物质，结构类型也较多，包括萜类、黄酮类、生物
碱、酚类等，几乎涉及各类植物成分．一方面，在不同的植物中，含有不同的抑菌化合物，如黄连含小檗碱、
黄芩含黄芩苷、地锦草含黄酮类化合物、大黄含蒽醌类化合物（大黄酸、大黄素）、五倍子含鞣酸、桉叶含桉
叶油等，其有效成分对不同微生物均可能有抑菌作用，即广谱抑菌能力；在另一方面中，在同一种植物中可
存在不同的抑菌成分，并发挥不同的抑菌作用，其中每种类型又含有多种结构，如生物碱类［９］．
接骨木属植物含有黄酮类化合物和盐酸小檗碱．黄酮类化合物的药理作用已有较深入的研究，其活性
表现也是多方面的．王娜等［１０］通过对生姜黄酮粗提液的抑菌试验发现，生姜黄酮粗提液对家蚕的猝倒杆
菌和青头败血病菌均有一定程度的抑制效果，且对革兰阴性或阳性菌的抑菌效果没有明显差异．黄琼
等［１１］对战骨中黄酮化合物进行了研究，结果显示正丁醇提取物中的黄酮类化合物具有一定的抗氧化作
用．赵国荣［１２］经过对西洋接骨木的黄酮研究发现，埃及产西洋接骨木黄酮具有利尿与发汗作用，且成熟植
株中含有芦丁．盐酸小檗碱是一种具有药用价值的活性物质．如黄连根茎中的小檗碱是黄连素的主要成
分，有抗菌消炎作用．盐酸小檗碱是一种广谱抗菌药物，对动物真菌和细菌都具有较强的抑制作用．张涛
１４　第３期　　 孙华等：接骨木提取物有效成分含量与抑菌活性的关系 　
等［１３］对盐酸小檗碱抑菌活性进行了测试，发现盐酸小檗碱对大肠杆菌具有较强的抑制作用．对盐酸小檗
碱研究较多的是在人体及动物疾病上的运用．目前通过对盐酸小檗碱的进一步研究发现，盐酸小檗碱还具
有降血糖的作用，李学坚等［１４］利用小鼠模型对芒果苷小檗碱进行了试验，结果表明，芒果苷小檗碱对高血
糖模型小鼠有明显的降血糖作用，但对正常小鼠血糖无明显影响．
本试验只是对接骨木的有效成分含量与抑菌活性的关系做初步的研究，粗提物中成分含量较复杂，提
取物中还含有色素等物质也有可能影响着灰葡萄孢菌丝的生长，还需对粗提物进行进一步的分离提纯研
究．
参 考 文 献
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［２］　周仕涛．我国植物源农药的研究及前景［Ｊ］．西南农业学报，２００４，１７（４）：５２５－５２９．
［３］　Ｋａｐｏｏｒ　Ｒ，Ａｌｉ　Ｍ，Ｍｉｒ　Ｓ　Ｒ，ｅｔａｌ．Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｏｉｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ａｅｒｉａｌ　ｐａｒｔｓ　ｏｆ　Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｓｃｏｐａｒｉａ　Ｗａｌｄｓｔ．＆Ｋｉｔ［Ｊ］．Ｆｌａｖｏｕｒ　ａｎｄ　Ｆｒａｇｒａｎｃｅ
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［１３］　张涛，张爽，胡格，等．酸小檗碱、绿原酸和黄芩苷对大肠杆菌的体外抑菌作用［Ｊ］．中国兽医杂志，２００９，４５（１）：４２．
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２４ 　 聊 城 大 学 学 报（自 然 科 学 版） 第２４卷