全 文 ：2013 年 3 月 1 日 第 3 期
No． 3 1 March 2013
中 医 学 报
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 28 卷 总第 178 期
Vol． 28 Serial No． 178
* 基金项目:牡丹江医学院科学技术研究项目( 编号: 2010 －
31)
紫外分光光度法测定葎草中总黄酮含量*
Ultraviolet Spectrophotometry Information for Total Content of Flavonoids in the Grass
赵若晗 Zhao Ruohan，石秀梅 Shi Xiumei
牡丹江医学院，黑龙江 牡丹江 157011
Mudanjiang Medical University，Mudanjiang Heilongjiang China 157011
摘要:目的: 探讨葎草中总黄酮含量的测定方法。方法:以芦丁为对照品，采用超声提取法提取总黄酮，用亚硝酸钠-氯化铝-氢
氧化钠显色法，最佳显色条件:亚硝酸钠质量浓度 5%、氯化铝质量浓度 10%、氢氧化钠质量浓度 4%。通过紫外可见分光光
度计测定律草中总黄酮的含量。结果:检测波长为 510 nm，芦丁在浓度 0． 024 1 ～ 0． 064 0 g·L －1范围内呈良好的线性关系，
回归方程: y = 0. 081 7x － 0． 001 8( R2 = 0． 999 5) ，1 h内基本稳定( RSD = 0． 364% ) ，重复性较好( RSD = 0． 600 % ) ，加样回收率
为 99． 46% ( RSD = 1． 685% ) 。结论:紫外可见分光光度计测定葎草中总黄酮的含量，方法简便、快捷，结果准确、可靠。
文献引用:赵若晗，石秀梅．紫外分光光度法测定葎草中总黄酮含量［J］．中医学报，2013，28( 3) : 390 － 391，400．
Abstract: Objective: To investigate the Humulus scandens content determination of total flavone． Methods: Using rutin as control sam-
ple，using ultrasonic extraction method to extract total flavonoids，with sodium nitrite-aluminum chloride-sodium hydroxide colorimetry，
optimum chromogenic conditions: sodium nitrite concentration 5%，aluminum chloride concentration10%，sodium hydroxide concentra-
tion 4% ． Through ultraviolet visible spectrophotometric determination of total flavone content． Results: The detection wavelength was 510
nm，rutin at a concentration of 0． 024 1 － 0． 064 0 g·L －1 range is a good linear relationship，the regression equation: y = 0． 081 7x －
0. 001 8( R2 = 0． 999 5 ) ，1H ( RSD = 0． 364% ) basic stability，good reproducibility ( RSD = 0． 600% ) ，sample recovery rate was
99. 46% ( RSD = 1． 685% ) ． Conclusion: UV visible spectrophotometric determination of total flavone content in Humulus scandens，
method is simple，fast，accurate，and reliable．
Reference citation: Zhao Ruohan，Shi Xiumei． Ultraviolet Spectrophotometry Information for Total Content of Flavonoids in the Grass
［J］． China Journal of Chinese Medicine，2013，28( 3) : 390 － 391，400．
关键词:葎草;总黄酮;超声提取法;紫外可见分光光度法
Key words: humulus; total flavone; ultrasonic extraction; ultraviolet visible spectrophotometry
中图分类号 CLC number:R285 文献标志码 Document code:A 文章编号 Article ID:1674 － 8999(2013)03 － 0390 － 03
葎草［Humulus scandends(lour．)Merr．］又名拉拉秧、拉
拉藤等，为桑科植物的全草［1］，分布在我国东北、华北、中南、
西南等地区。另外在亚洲、北美、非洲等地区也均有分布［2］。
在研究葎草提取物的抗菌作用时发现［3］，其水提取液对革兰
阳性菌具有较强的抗菌活性，并证实抗菌作用与葎草中所含
的黄酮类成分有关。本研究通过采用超声提取法提取葎草
中的总黄酮，以芦丁为对照品，以亚硝酸钠-氯化铝-氢氧化钠
为显色剂，建立紫外可见分光光度法测定葎草中总黄酮含量
的方法，从而为合理利用葎草提供科学依据。
1 仪器与材料
752N-紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公
司) ;SK8200HP ULTRASONIC INSTRUMENT(上海科导超声
仪器有限公司) ;AX200 万分之一电子天平(SHMADZU COR-
PORATION JAPAN)。
芦丁标准品(由中国生物制品检定所鉴定) ;葎草(10 月
采摘于牡丹江市北山) ;亚硝酸钠、三氯化铝、氢氧化钠和乙
醇等(所用试剂均为分析纯)。
2 方法与结果
2． 1 芦丁对照品溶液的制备
精密称取经干燥至恒质量的芦丁标准品 20 mg，置于 100
mL容量瓶中，加 80%乙醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液［4］。
2． 2 葎草供试品溶液的制备
取葎草样品放入研钵中粉碎过筛(40 目) ，精密称取约 1
g并置于索氏提取器中，加石油醚 100 mL，回流加热，至提取
液无色，弃去石油醚提取液。待药渣挥散干后，干燥至恒质
量，转移到平底烧瓶中，加 80%乙醇 50 mL密塞称质量，超声
提取 0． 5 h，加活性炭脱色，过滤，取滤液。连续提取 5 次，合
并各分滤液。
2． 3 测定波长的选择
取芦丁对照品溶液 5 mL 置于 25 mL 容量瓶中并加入
5%亚硝酸钠溶液 1mL摇匀，放置 6 min，加 10%氯化铝溶液
1 mL摇匀，放置 6 min，再加 4%氢氧化钠溶液 8 mL摇匀，然
后用 80%乙醇定容至刻度线，摇匀，放置 10 min。同时配制
未加对照品只加入显色剂的溶液作为空白对照溶液。在 440
nm ～ 560 nm波长范围内扫描吸收曲线［4］。结果表明在 510
nm处有最大吸光度。
2． 4 显色剂条件的选择
2． 4． 1 亚硝酸钠浓度的选择 精密量取 5 份 2． 1 项下芦丁
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DOI:10.16368/j.issn.1674-8999.2013.03.060
2013 年 3 月 1 日 第 3 期
No． 3 1 March 2013
中 医 学 报
CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 28 卷 总第 178 期
Vol． 28 Serial No． 178
对照品溶液 4 mL置于 25 mL 容量瓶中，分别加入 1%、3%、
5%、7%、9%浓度的亚硝酸钠溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min，再
加入 10%氯化铝溶液 1 mL，摇匀，静置 6 min，再加入 4%氢
氧化钠溶液 8 mL，然后用 80%乙醇定容至刻度线，摇匀，放
置 10 min。亚硝酸钠浓度在 5%，有最大吸收。在 510 nm处
测得吸光度值，见表 1。
2． 4． 2 氯化铝浓度的选择 精密量取 5 份 2． 1 项下芦丁对
照品溶液 4 mL置于 25 mL容量瓶中，分别 5%亚硝酸钠溶液
1 mL，摇匀，放置 6 min，再分别加入 8%、9%、10%、11%、
12%的氯化铝溶液 1 mL，摇匀，放置 6 min，再加入 4%氢氧
化钠溶液 8 mL，然后用 80%乙醇定容至刻度线，摇匀，放置
10 min。氯化铝浓度在 10%，有最大吸收。在 510 nm 处测
定吸光度值，见表 1。
表 1 芦丁对照品吸光度测定试验亚硝酸钠浓度、氯化铝浓度、氢氧化钠浓度的选择
亚硝酸钠浓度(/%) 吸光度 氯化铝浓度(/%) 吸光度 氢氧化钠浓度(/%) 吸光度
1 0． 344 8 0． 348 2 0． 326
3 0． 341 9 0． 345 3 0． 340
5 0． 364 10 0． 363 4 0． 362
7 0． 335 11 0． 336 5 0． 351
9 0． 339 12 0． 344 6 0． 340
2． 4． 3 氢氧化钠浓度的选择 精密量取 5 份 2． 1 项下芦丁
对照品溶液 4 mL置于 25 mL容量瓶中，分别 5%亚硝酸钠溶
液 1 mL，摇匀，放置 6 min，加入 10%氯化铝溶液 1 m，摇匀，
放置 6 min，分别加入 2%、3%、4%、5%、6%的氢氧化钠溶液
8 mL，然后用 80%乙醇定容至刻度线，摇匀，放置 10 min。氢
氧化钠浓度在 4%，有最大吸收;在 510 nm处测定吸光度值，
见表 1。
2． 5 标准曲线的绘制
精密量取芦丁对照品溶液 0． 0 mL，3． 0 mL，4． 0 mL，5． 0
mL，6． 0 mL，7． 0 mL，8． 0 mL分别置于 25 mL 容量瓶，按 2． 3
项下方法操作。在 510 nm 波长处测定吸光度，以吸光度 A
为纵坐标，浓度 C为横坐标绘制标准工作曲线，得回归方程:
Y = 0． 081 7 X － 0． 001 8，相关系数:R2 = 0． 999 5。线性范围
0． 024 ～ 0. 064 g·L －1，见图 1。
图 1 芦丁对照品在 510 nm波长处吸光度标准曲线
2． 6 稳定性实验
按 2． 3 项下方法配制 6 份芦丁对照品溶液，显色后，放
置 10 min、20 min、30 min、40 min，、50min、60 min 在 510 nm
波长处分别测定吸光度值，见表 2。
表 2 稳定性实验
编号 时间(t /min) 吸光度 平均值 相对标准偏差(/%)
1 0 0． 404
2 10 0． 405
3 20 0． 404
4 30 0． 405 0． 405 0． 364
5 40 0． 406
6 50 0． 406
7 60 0． 408
注:测得吸光度 A平均值为 0． 405，相对标准偏差 RSD = 0． 364%
2． 7 重复性实验
按 2． 3 项下方法先后配制 5 份芦丁对照品溶液。在 510
nm波长处测定吸光度值，见表 3。
表 3 芦丁对照品在 510 nm波长处吸光度重复性实验
编号 吸光度 平均值 相对标准偏差(/%)
1 0． 410
2 0． 405
3 0． 411 0． 408 0． 600
4 0． 407
5 0． 407
注:测得吸光度的平均值为 0． 408，相对标准偏差 RSD = 0. 600%
2． 8 加样回收率实验
精密称取约 20 mg研细过筛的葎草样品 5 份，按 2． 2 项
下方法配制，分别置于 25 mL 容量瓶中，分别加入 0． 5 mL、
1. 0 mL、1． 5 mL、2． 0 mL、2． 5 mL的对照品溶液，按 2． 3 项下
方法。在 510 nm波长处测定吸光度值，见表 4。
表 4 芦丁对照品在 510 nm波长处吸光度加样回收率实验
编号 样品量(m /mg) 对照品量(m /mg) 吸光度 回收率(/%)平均回收率(/%)
1 21． 104 3 0． 1 0． 157 100． 1
2 21． 124 4 0． 2 0． 294 98． 5
3 21． 024 5 0． 3 0． 432 97． 9 99． 46
4 21． 152 8 0． 4 0． 702 101． 2
5 21． 059 2 0． 5 0． 852 99． 6
注:测得总黄酮的加样回收率为 99． 46%，相对标准偏差 RSD =
1. 685%
2． 9 样品含量的测定
取葎草 3 份，按 2． 2 项下方法配制，按 2． 3 项下方法操
作，在 510 nm波长处测定吸光度值，见表 5。
表 5 样品含量的测定
编号 质量(m / g) 吸光度 黄酮量(m /mg)提取率(/%)平均提取率(/%)
1 1． 021 8 0． 318 12． 247 2 1． 198 6
2 1． 027 9 0． 309 11． 902 6 1． 158 0 1． 155 5
3 1． 010 2 0． 291 11． 213 2 1． 110 0
2． 10 提净实验
分别取 2． 8 中 3 份提取黄酮后的葎草残渣，再按 2． 2 项
下方法提取 1 次，按 2． 3 项下方法操作。测吸光度值平均值
为 0． 000 01，表明用 50 mL 80%乙醇超声提取 5 次葎草中的
总黄酮已基本提净。 ( 下转第 400 页)
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2013 年 3 月 1 日 第 3 期
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CHINA JOURNAL OF CHINESE MEDICINE
第 28 卷 总第 178 期
Vol． 28 Serial No． 178
草、益母草、炮附子、党参与生地黄，在月经期后使用乌鸡白
凤丸，该疗法的有效率约 75%［11］;③将治疗划分为行经期与
经间期。在经间期进行益气养阴，选取知母、墨旱莲、白术、
党参、黄芪、生地黄、女贞子、白芍 8 味药材，在行经期另外添
加 5 味药材:乌贼骨、生蒲黄、椿白皮、茜草与地榆炭;④人为
地把治疗周期分为卵泡期、排卵期、黄体期与月经期。特别
需要注意的是，在最后一个时段，即月经期，需注意药材选
择，进行区别用药。
3 中西医结合治疗
中西医结合是当今医疗界的潮流与发展趋势，中医固
本，西医检查手段先进，两者的结合能够进一步提高治疗效
果。目前，在中西结合治疗崩漏方面，有不同观点。王锦华
等［11］选取甘草、党参、海螵蛸、三七、茜草、地榆炭、艾叶、当
归、黄芪、白芍、补骨脂这些中药材，在西医方面借助雌孕激
素序贯疗法、抗贫血治疗、诊断性刮宫、宫缩剂、止血剂，对崩
漏患者进行治疗，有效率约 97． 0%;肖静等［12］取八珍汤加味
与安宫黄体酮、乙烯雌酚这两类西药，综合治疗崩漏。经期
第 5 天使用中药方，在 5 ～ 22 d使用安宫黄体酮 10 mg，每日
1 次，22 ～ 27 d使用乙烯雌酚，每日 1 次。
综上所述，中药治疗功能性子宫出血的临床，主要包括
中医辨证施治，中药周期疗法，中西结合治疗等。
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及止血机理探讨［J］．广州中医药大学学报，2000，17(4) :312 －
315．
收稿日期:2012 － 12 － 20
作者简介:吴智滢( 1972 － ) ，女，广西龙州人，大学本科，主治
医师，研究方向: 中医内科。
编辑:倪婷婷
( 上接第 391 页)
3 讨论
实验结果表明测定葎草中总黄酮含量最大吸收波长为
510 nm。芦丁在 0． 024 ～ 0． 064 g·L －1范围内线性关系良
好，线性回归方程:y = 0． 081 7x － 0． 001 8，相关系数:R2 =
0. 999 5。
用亚硝酸钠-氯化铝-氢氧化钠显色法，最佳显色条件:亚
硝酸钠质量浓度为 5%、氯化铝质量浓度为 10%、氢氧化钠
质量浓度为 4%。
此方法表明芦丁溶液在 1 h 内基本稳定(RSD =
0. 364%) ，重复性较好(RSD = 0． 271 7%) ，提净完全，样品平
均加样回收率为 99． 46%(RSD = 0． 874 1%) ，表明该方法有
较高的准确度。
本实验采用亚硝酸钠-氯化铝-氢氧化钠显色法，以芦丁
为对照品，通过紫外可见分光光度计测定葎草中总黄酮的含
量，方法简便、快捷，结果准确、可靠。本实验拟定的方法在
一般分光光度计上即可进行。
参考文献:
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江农业科学，2007，48(2) :150 － 153．
收稿日期:2012 － 10 － 20
作者简介:赵若晗( 1990 － ) ，女，黑龙江牡丹江人，硕士研究
生，研究方向: 中草药中生物活性成分分析。
通信作者:石秀梅( 1964 － ) ，女，黑龙江牡丹江人，医学硕士，
教授，主要从事中草药中生物活性成份的化学研究。Email:
sxm1001@ 163． com
编辑:程延安
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