全 文 ：第３８卷　第１０期
２０１０年１０月
西北农林科技大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．Ｅｄ．）
Ｖｏｌ．３８ Ｎｏ．１０
Ｏｃｔ．２０１０
中国野葡萄锌指蛋白基因的克隆及生物信息学分析
＊
文志丰，赵素平，王西平，王　倩
（西北农林科技大学 园艺学院，农业部西北园艺植物种质资源应用重点开放实验室，陕西 杨凌７１２１００）
［摘　要］　 【目的】在受白粉病菌侵染的中国野葡萄叶片中克隆锌指蛋白基因全长，研究葡萄抗白粉病的分子
机制。【方法】在前期采用ｍＲＮＡ差异显示技术获得的中国野葡萄华东葡萄株系白河３５－１抗白粉病基因表达差异
ｃＤＮＡ片段Ｔ１１ＧＧ／Ｂ０３２４－２９２的基础上，利用ｃＤＮＡ末端快速扩增（ＲＡＣＥ）技术克隆了该ｃＤＮＡ全长序列，并结合生
物信息学方法对所获取的序列进行分析。【结果】该ｃＤＮＡ全长２　６６３ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ登录号 ＨＭ００８６２１），具有完整的
开放阅读框，基因全长２　２２３ｂｐ，编码１个由７４０个氨基酸组成的锌指蛋白（Ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ），５′和３′非翻译区长度
分别为３９５和４４ｂｐ。多重比较分析表明，该基因推导的氨基酸序列与拟南芥、蒺藜苜蓿、水稻的Ｃ３Ｈ亚型ＣＣＣＨ型
锌指蛋白的同源性分别为６１％，７０％和６０％。【结论】利用ＲＡＣＥ技术获得了锌指蛋白基因全长，为进一步研究锌指
蛋白基因与葡萄抗白粉病的关系奠定了基础。
［关键词］　中国野葡萄；白粉病；锌指蛋白；转录因子；ＲＡＣＥ；生物信息学
［中图分类号］　Ｑ７８５ ［文献标识码］　Ａ ［文章编号］　１６７１－９３８７（２０１０）１０－０１３１－０７
Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ
ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖｉｔｉｓ　ｐｓｅｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ
ＷＥＮ　Ｚｈｉ－ｆｅｎｇ，ＺＨＡＯ　Ｓｕ－ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｘｉ－ｐｉｎｇ，ＷＡＮＧ　Ｑｉａｎ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｇｅｒｍｐｌａｓｍ
ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ，Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ　７１２１００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ａ　ｆｕｌ　ｌｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｏｆ　ａ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ｗａｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖｉ－
ｔｉｓ　ｐｓｅｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ　ｗｈｉｃｈ　ｗｅｒｅ　ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｕｎｃｉｎｕｌａ　ｎｅｃａｔｏｒ（Ｓｃｈｗ．）Ｂｕｒｒ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ
ｏｆ　ｇｒａｐｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｔｏ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ　ｗｅｒｅ　ｓｔｕｄｉｅｄｓ．【Ｍｅｔｈｏｄ】Ｔｈｉｓ　ａｒｔｉｃｌｅ　ｗａｓ　ｂａｓｅｄ　ｏｎ　Ｔ１１ＧＧ／Ｂ０３２４－２９２
ｃＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖｉｔｉｓ　ｐｓｅｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ　Ｂａｉｈｅ　３５－１，ｔｈｅ　ｃＤＮＡ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｃａｍｅ　ｆｒｏｍ　ｍＲＮＡ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｄｉｓｐｌａｙ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　ｆｕｌ－ｌｅｎｇｔｈ　ｃＤＮＡ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｗａｓ　ｃｌｏｎｅｄ　ｂｙ　ｒａｐｉｄ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｃＤＮＡ　ｅｎｄｓ（ＲＡＣＥ）ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ．Ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ　ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ．【Ｒｅｓｕｌｔ】Ｔｈｅ　ｃＤＮＡ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｃｏｎｓｉｓｔｅｄ　ｏｆ　２　６６３ｂｐ（ＧｅｎＢａｎｋ　ａｃｃｅｓｓｉｏｎ　ｎｕｍｂｅｒ　ＨＭ００８６２１）ａｎｄ
ｈａｄ　ａｎ　ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ（ＯＲＦ）ｏｆ　２　２２３ｂｐ，ｅｎｃｏｄｅｄ　ａ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　７４０ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ，ｔｈｅ　ｎｏｎ－
ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　５′ａｎｄ　３′－ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒｅｇｉｏｎ　ｗａｓ　３９５，４４ｂｐ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌ－
ｙｓｉｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｏｎ　ａｃｉｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｓｈａｒｅｄ　ｉｄｅｎｔｉｔｙ　ｔｏ　６１％，７０％ａｎｄ　６０％ｗｉｔｈ　Ａ．ｓｔｈａｌｉａｎａ，
Ｍ．ｔｒｕｎｃａｔｕｌａａｎｄ　Ｏ．ｓａｔｉｖａ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｆｕｌ－ｌｅｎｇｔｈ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ
ｃｌｏｎｅｄ　ｂｙ　ＲＡＣＥ　ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｗｈｉｃｈ　ｌａｙｓ　ｔｈｅ　ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ
ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｇｒａｐｅ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔａｎｃｅ　ｔｏ　ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　ｇｒａｐｅ；ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ；ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ；ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒ；ＲＡＣＥ；ｂｉｏｉｎ－
＊ ［收稿日期］　２０１０－０３－１８
［基金项目］　国家自然科学基金项目（３０８７１７０１，３０６７１４４６）；教育部新世纪优秀人才支持计划项目
［作者简介］　文志丰（１９８２－），男，湖南东安人，在读硕士，主要从事果树种质资源与生物技术研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｉｆｅｎｇｗｅｎ＠１２６．ｃｏｍ
［通信作者］　王西平（１９６８－），男，陕西蒲城人，教授，博士生导师，主要从事果树种质资源与生物技术研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉｐｉｎｇ＠ｎｗｓｕａｆ．ｅｄｕ．ｃｎ
DOI:10.13207/j.cnki.jnwafu.2010.10.022
ｆｏｒｍａｔｉｃｓ
　　葡萄白粉病（Ｕｎｃｉｎｕｌａ　ｎｅｃａｔｏｒ （Ｓｃｈｗ．）Ｂｕｒｒ）
是危害世界葡萄生产的主要真菌病害之一，每年给
世界葡萄生产造成了很大的经济损失。近年来，随
着分子生物学理论和分子技术的快速发展，研究者
借助现代生物技术手段进行葡萄抗病性研究。目
前，对葡萄白粉病的研究主要是通过葡萄抗病基因
的分子标记、抗病基因的定位与遗传作图、构建白粉
病胁迫下的ｃＤＮＡ文库、抗病标记分子辅助育种和
抗病基因同源类似物的克隆等途径，寻找和筛选葡
萄的抗白粉病相关基因。王跃进等［１］利用 ＲＡＰＤ
技术进行了中国野生葡萄抗白粉病分子标记研究，
获得了中国野生葡萄抗白粉病基因的３个 ＲＡＰＤ
标记。Ｄａｌｂｏ等［２］对葡萄抗白粉病基因（ＰＭ）和抗
黑痘病基因（ＢＥ）进行了ＱＴＬ遗传定位作图研究，
并认为葡萄抗白粉病是多基因控制的。Ｒａｙｍｏｎｄ
等［３］研究认为，在白粉病病原菌胁迫下，抗白粉病葡
萄品种自身所引发的防卫反应，可引起编码 ＷＲＫＹ
等转录因子基因表达量明显的提高。特别是２００７
年以黑比诺为试材的葡萄基因组图谱的成功绘制，
极大地推动了葡萄抗病相关基因的研究［４］。
目前，世界上主要的鲜食葡萄和酿酒葡萄品种
都属欧亚品种（Ｖｉｔｉｓ　ｖｉｎｉｆｅｒａ　Ｌ．），其突出的特点是
品质好，但对白粉病、霜霉病等真菌病害缺乏抗性。
中国是世界葡萄属植物重要的起源地之一，我国野
生葡萄种质资源丰富且多数对白粉病具有较高抗
性，由于其和欧亚葡萄杂交亲和性好，因而可以有效
地将中国野生葡萄白粉病抗病基因与欧亚栽培品种
优良品质基因进行结合［５］，培育优良的抗病葡萄新
品种，这无疑对中国野葡萄抗白粉病基因研究具有
重要的理论意义和实践价值，但目前尚未见这方面
的研究报道。本试验在本课题组前期研究获得的中
国野葡萄华东葡萄株系白河３５－１抗白粉病基因表
达差异ｃＤＮＡ片段的基础上，利用ＲＡＣＥ技术从中
国野葡萄华东葡萄株系白河３５－１中克隆出含该片
段的全长ｃＤＮＡ序列，并结合生物信息学方法对所
获得的锌指蛋白基因的ｃＤＮＡ全长进行分析，以期
为今后葡萄抗病基因功能分析和功能研究奠定理论
基础。
１　材料与方法
１．１　材　料
供试材料为中国野葡萄华东葡萄株系白河３５－
１，取自西北农林科技大学葡萄种质资源圃。
１．２　主要试剂
ＳＭＡＲＴＴＭ　ＲＡＣＥ　ｃＤＮＡ　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ试
剂盒，购自Ｃｌｏｎｔｅｃ公司；ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ　Ｖｅｃｔｏｒ、琼
脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂盒，均购自Ｐｒｏｍｅｇａ公司；
大肠杆菌ＤＨ５α、ＤＬ２０００Ｍａｋｅｒ、Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰ，均
为天根公司产品。
１．３　方　法
１．３．１　总ＲＮＡ的提取及纯化　在田间选取高感
葡萄白粉病叶片，采用压片法进行白粉病人工孢子
接种，接种后套袋，接种５ｄ后采集新鲜叶片放入液
氮中保存。采用改良型ＳＤＳ／酚法提取接种葡萄白
粉病病原菌５ｄ后的叶片总 ＲＮＡ［６］。提取的总
ＲＮＡ中痕量 ＤＮＡ 用 ＤＮａｓｅ１（Ｐｒｏｍｅｇａ，ＵＳＡ）去
除。纯化后的总ＲＮＡ用１０ｇ／Ｌ琼脂糖凝胶电泳，
紫外分光光度计分析总ＲＮＡ的纯度。
１．３．２　锌指蛋白基因的５′ＲＡＣＥ和３′ＲＡＣＥ的扩
增　 以接种葡萄白粉病病原菌５ｄ后的叶片总
ＲＮＡ 为 模 板，参 照 Ｃｌｏｎｔｅｃ 公 司 的 ＳＭＡＲＴＴＭ
ＲＡＣＥ　ｃＤＮＡ　Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　Ｋｉｔ试剂盒说明书进行
反转录，分别合成５′ＲＡＣＥ和３′ＲＡＣＥ　ｃＤＮＡ第一
链。
根据已获得的中国野葡萄华东葡萄株系白河
３５－１抗白粉病基因表达差异ｃＤＮＡ 片段 Ｔ１１ＧＧ／
Ｂ０３２４－２９２［５］，设计３′ＲＡＣＥ和５′ＲＡＣＥ特异引物，
分别 为 ＧＳＰ１：５′ＴＣＡＧＣＧＴＧＡＧＡＡＧＣＡＧＣＡＣ
ＣＡＧＣＡ　３′和ＧＳＰ２：５′ＡＧＣＡＧＣＣＡＡＣＣＣＡＴＴＴＣＡ
ＴＴＴ　ＣＡＴ　３′，２条引物间重叠序列为 ２６３ｂｐ。
３′ＲＡＣＥ和５′ＲＡＣＥ　ＰＣＲ的扩增体系参照 Ａｄｖａｎ－
ｔａｇｅ?２ＰＣＲ　Ｋｉｔ说明书进行。ＰＣＲ扩增循环参数
为：９４℃３０ｓ，７２℃３ｍｉｎ，５个循环；９４℃３０ｓ，６８
℃３０ｓ，７０℃３ｍｉｎ，５个循环；９４℃３０ｓ，６８℃３０
ｍｉｎ，３０个循环；７２℃１０ｍｉｎ。
１．３．３　ＲＡＣＥ扩增片段的克隆及生物信息学分析
　５′ＲＡＣＥ和３′ＲＡＣＥ　ＰＣＲ扩增产物用１２ｇ／Ｌ琼
脂糖凝胶电泳，然后用琼脂糖凝胶ＤＮＡ回收试剂
盒回收特异条带，连接ｐＧＥＭ－Ｔｅａｓｙ载体，转化大
肠杆菌 ＤＨ５α感受态细胞，进行蓝白斑筛选，挑取
白色菌落，放大培养后用 Ｍ１３＋和 Ｍ１３－引物进行
ＰＣＲ扩增，ＰＣＲ扩增循环参数为：９４℃３ｍｉｎ；９４
℃４５ｓ，５７℃４５ｓ，７２℃４５ｓ，３０个循环；７２℃５
ｍｉｎ。将扩增出的目的片段菌液送上海生工生物技
２３１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷
术有限公司测序。
利用ＤＮＡｓｔａｒ软件分析该基因的全长序列，在
ＮＣＢＩ站点里进行相似性比较和氨基酸序列推测，
并将推测出来的氨基酸序列递交ＮＣＢＩ，利用ＤＮＡ－
ＭＡＮ软件进行多序列比对，用Ｐｒｏｔｐａｒａｍ 预测蛋
白的理化性质（ｈｔｔｐ：／／ａｕ．ｅｘｐａｓｙ．ｏｒｇ），用Ｐｒｅｄｉｃｔ－
Ｐｒｏｔｅｉｎ程序预测蛋白质二级结构（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．
ｐｒｅｄｉｃｔｐｒｏｔｅｉｎ．ｏｒｇ），用 ＷＯＬＦ　ＰＳＯＲＴ程序进行亚
细胞定位（ｈｔｔｐ：／／ｗｏｌｆｐｓｏｒｔ．ｏｒｇ）。
２　结果与分析
２．１　总ＲＮＡ的提取及纯化
图１显示，２８Ｓ和１８ＳＲＮＡ条带清晰，亮度接
近２∶１。紫外分光光度计检测结果显示 ＯＤ２６０ｎｍ／
ＯＤ２８０ｎｍ为１．９０，说明提取的中国野葡萄叶片总
ＲＮＡ完整性好，纯度高，可用于后续试验。
图１　中国野葡萄叶片总ＲＮＡ的电泳检测结果
Ｆｉｇ．１　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ
Ｖ．ｐｅｓｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａｌｅａｖｅｓ
２．２　锌指蛋白基因５′ＲＡＣＥ和３′ＲＡＣＥ片段的扩
增及克隆
以接种葡萄白粉病病原菌５ｄ后的中国野葡萄
华东葡萄株系白河－３５－１叶片总ＲＮＡ为模板，反转
录合成ｃＤＮＡ 第一链，然后分别以引物 ＧＳＰ１、
ＧＳＰ２和Ａｄｖａｎｔａｇｅ?２ＰＣＲ　Ｋｉｔ试剂盒中的 ＵＰＭ
为引物对，进行３′ＲＡＣＥ和５′ＲＡＣＥ扩增。图２和
３显示，３′ＲＡＣＥ　ＰＣＲ扩增得到２条大小分别约为
６００和２５０ｂｐ的ＤＮＡ条带，根据引物设计的位置
可知２５０ｂｐ的ＤＮＡ条带为非特异性扩增条带，将
６００ｂｐ的片段回收测序。５′ＲＡＣＥ　ＰＣＲ扩增得到１
条大小约为２　３００ｂｐ的条带。
图２　中国野葡萄锌指蛋白基因３′ＲＡＣＥ的电泳结果
Ｍ．ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；１．３′ＲＡＣＥ反应产物
Ｆｉｇ．２　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｏｇｒａｍ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ
３′ＲＡＣＥ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖ．ｐｅｓｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ
Ｍ．ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ；１．３′ＲＡＣＥ　ｐｒｏｄｕｃｔ
图３　中国野葡萄锌指蛋白基因５′ＲＡＣＥ的电泳结果
１．５′ＲＡＣＥ反应产物；Ｍ．ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ
Ｆｉｇ．３　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｅｒｏｇｒａｍ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ
５′－ＲＡＣＥ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖ．ｐｅｓｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ
１．５′ＲＡＣＥ　ｐｒｏｄｕｃｔ；Ｍ．ＤＬ２０００Ｍａｒｋｅｒ
２．３　锌指蛋白基因的生物信息学分析
测序结果显示，３′ＲＡＣＥ扩增条带的ｃＤＮＡ实
际长度为５６０ｂｐ，５′ＲＡＣＥ扩增条带的实际长度为
２　３６６ｂｐ。由于３′ＲＡＣＥ 和５′ＲＡＣＥ扩增条带有
２６３ｂｐ的重叠序列，拼接后的ｃＤＮＡ全长为２　６６３
ｂｐ。Ｂｌａｓｔ分析结果（图４）表明，该ｃＤＮＡ具有完整
的开放阅读框架，５′端非编码区长３９５ｂｐ，３′端非编
码区长４４ｂｐ，基因全长２　２２３ｂｐ，编码１个包含７４０
个氨基酸的锌指蛋白。多重比较分析结果（图５）表
明，该基因编码氨基酸序列与蛋白质数据库中的拟
南芥（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ）ＣＣＣＨ 型锌指蛋白
（７６８个氨基酸）有４７６个氨基酸相似，同源性为
６１％；与蒺藜苜蓿（Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ）ＣＣＣＨ 型
锌指蛋白（７２４个氨基酸）有５１４个氨基酸相似，同
源性为７０％；与水稻（Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ）ＣＣＣＨ 型锌指
蛋白（７３４个氨基酸）有４４４个氨基酸相似，同源性
为６０％。
对中国野葡萄锌指蛋白结构的分析发现，在
３０７～３３１氨基酸处有１个Ｃ－ｘ８－Ｃ－ｘ５－Ｃ－ｘ３－Ｈ型锌
指结构域，在１１９～１５３氨基酸处有１个锚蛋白家族
结构域（Ａｎｋｙｒｉｎ　ｄｏｍａｉｎ　ＡＮＫ）。此外，该蛋白的氨
基酸序列还有２个６－磷酸果糖激酶Ⅱ（ＰＦＫ－２）和１
３３１第１０期 文志丰，等：中国野葡萄锌指蛋白基因的克隆及生物信息学分析
个果糖２，６－二磷酸酶。从蛋白质分子结构而言，中 国野葡萄锌指蛋白属于锚蛋白兼锌指蛋白。
４３１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷
图４　中国野葡萄锌指蛋白基因序列及推导的氨基酸序列
单下划线为起始密码子（ＡＴＧ）和终止密码子（ＴＡＧ），双下划线为锌指保守域，加框处为重叠序列区
Ｆｉｇ．４　Ｆｕｌ－ｌｅｎｇｔｈ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｄｅｄｕｃｅｄ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ
ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｆｒｏｍ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖ．ｐｅｓｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａ
Ｔｈｅ　ｓｔａｒｔ　ｃｏｄｅｎ　ＡＴＧ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｓｔｏｐ　ｃｏｄｅｎ　ＴＡＧ　ｗｅｒｅ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｂｙ　ｓｉｎｇｌｅ－ｕｎｄｅｒｌｉｎｅｄ　ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｔｈｅ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ
ｄｏｍａｉｎｓ　ｗｅｒｅ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｂｙ　ｄｏｕｂｌｅ　ｕｎｄｅｒｌｉｎｅ，ｔｈｅ　ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｗｅｒｅ　ｌａｂｅｌｅｄ　ｂｙ　ｐａｎｅ
　　锌指蛋白的Ｐｒｏｔｐａｒａｍ理化性质预测表明，该
锌指蛋白的分子式可能为Ｃ３４５０Ｈ５４４３Ｎ９９１７Ｏ１１２３Ｓ３６，相
对分子质量为８０　０１０．３，等电点为６．０１，理论推导
的半衰期大于３０ｈ，不稳定参数为６０．８８，属于不稳
定蛋白。该蛋白中相对含量较多的氨基酸有Ｓｅｒ
（２５个，占１７．０％）、Ｐｒｏ（６２个，占８．４％）、Ａｌａ（５４
个，占７．３％）。总的带正电荷的残基（Ａｒｇ＋ Ｌｙｓ）
数为６７，总的带负电荷的残基（Ａｓｐ＋ Ｇｌｕ）数为
７６，亲水性数为－０．４６１，预测该蛋白为水溶性蛋白。
蛋白质二级结构的Ｐｒｅｄｉｃｔ－Ｐｒｏｔｅｉｎ预测显示，该蛋
白质中α螺旋占２３．９２％，β折叠占５．２７％，其他无
规则卷曲占７０．８１％；ＷＯＬＦ　ＰＳＯＲＴ亚细胞定位研
究表明，锌指蛋白在细胞中定位的可能性为细胞
核＞细胞质，推测该锌指蛋白可能位于细胞核中。
３　结论与讨论
锌指蛋白转录因子是真核生物普遍存在的一类
转录因子，在基因的表达调控、细胞分化、胚胎发育
等方面具有重要的作用［７－１３］。近年来的研究还证
实，植物锌指蛋白还参与植物的生殖生长，特别是生
殖器官如花和胚珠的发育［１４］。目前，对锌指蛋白的
研究多集中在植物干旱、低温、盐胁迫等非生物逆境
胁迫方面。研究表明，盐胁迫可以明显提高烟草锌
指蛋白基因ＺＦＰ１８８在烟草自身的表达水平，并提
高转基因植株的抗盐性［１５］。低温和干旱胁迫时，水
稻中的锌指蛋白基因通过调节脯氨酸的水平和清除
自身活性氧，来提高对低温和干旱逆境下的抗性［１６］。
烟草中的锌指蛋白转录因子参与调节精胺介导的信
号转导过程［１７］。
根据锌指蛋白半胱氨酸（Ｃ）和组氨酸（Ｈ）残基
数的不同，可以将锌指蛋白转录因子分为 Ｃ２Ｈ２、
Ｃ２Ｃ２、Ｃ３Ｈ、Ｃ３Ｈ４ 和 Ｃ３Ｈ５ 等 ５ 个 亚 类［１８－１９］。
ＣＣＣＨ型锌指蛋白属于Ｃ３Ｈ亚型锌指蛋白，其广泛
存在于动植物及酵母中［２０］，Ｃ３Ｈ型锌指蛋白是目前
研究较少的一类锌指蛋白。目前只有少数植物中分
离出了ＣＣＣＨ型锌指蛋白基因，如拟南芥、水稻、蒺
藜苜蓿。对拟南芥的ＣＣＣＨ 型锌指蛋白基因的研
究表明，ＣＣＣＨ型锌指蛋白基因直接调节拟南芥心
型胚的发育和形成，并且参与调节拟南芥的开花时
间和花器官的形成［２０－２２］。对水稻ＣＣＣＨ 型锌指蛋
白基因的研究发现，该基因调节水稻叶片的衰
老［２３］。最新的研究表明，ＣＣＣＨ型锌指蛋白是一类
与ＲＮＡ结合的蛋白，可调节 ｍＲＮＡ代谢［２４］，并具
有转录激活功能［２５－２６］，推测其在植物不同组织及不
同发育阶段具有多种功能［２１，２３，２７］，且对其结构和功
能的深入研究，将有助于揭示真核生物的基因调控
机理［２８］。本研究在白粉病菌诱导下克隆的Ｃ３Ｈ亚
型ＣＣＣＨ型锌指蛋白基因，是果树中第一个报道的
锌指蛋白基因，结合ＣＣＣＨ锌指蛋白的结构及功能
预测，以及参照其在拟南芥和水稻中的功能，该
ＣＣＣＨ型锌指蛋白可能参与中国野葡萄的生殖、发
育及抗逆性等过程。葡萄白粉病诱导下的ＣＣＣＨ
锌指蛋白基因的表达分析及其功能研究将是下一步
研究的主要内容。
５３１第１０期 文志丰，等：中国野葡萄锌指蛋白基因的克隆及生物信息学分析
图５　中国野葡萄锌指蛋白与其他植物锌指蛋白转录因子的多重比较
Ｖ－ｐｓｅｕｄｏ．中国野葡萄；Ａ－ｔｈａｌｉ．拟南芥；Ｍ－ｔｒｕｎｃａ．蒺藜苜蓿；Ｏ－ｓａｔｉ．水稻
Ｆｉｇ．５　Ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ
Ｖ．ｐｅｓｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌａｔａａｎｄ　ｆｒｏｍ　ｏｔｈｅｒ　ｐｌａｎｔ　ｓｐｅｃｉｅｓ
Ｖ－ｐｅｓｕｄｏ．Ｖｉｔｉｓ　ｐｓｅｕｄｏｒｅｔｉｃｕｌ；Ａ－ｔｈａｌｉ．Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ；Ｍ－ｔｒｕｎｃａ．Ｍｅｄｉｃａｇｏ　ｔｒｕｎｃａｔｕｌａ；Ｏ－ｓａｔｉ．Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ
［参考文献］
［１］　王跃进，张剑侠，周　鹏，等．中国野生葡萄抗白粉病基因的
ＲＡＰＤ标记 ［Ｊ］．西北农林科技大学学报：自然科学版，２００１，
２９（１）：１－５．
Ｗａｎｇ　Ｙ　Ｊ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｘ，Ｚｈｏｕ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．ＲＡＰＤ　ｍａｒｋｅｒ　ｏｆ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
６３１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷
ｇｅｎｅ　ｔｏ　Ｕｎｃｉｎｕｌａ　ｎｅｃａｔｏｒ　ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　Ｓｃｉ－Ｔｅｃｈ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ：
Ｎａｔ　Ｓｃｉ　Ｅｄ，２００１，２９（１）：１－５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２］　Ｄａｌｂｏ　Ｍ　Ａ，Ｗｅｅｄｅｎ　Ｎ　Ｆ，Ｒｅｉｓｃｈ　Ｂ　Ｉ．ＱＴＬ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｄｉｓｅａｓｅ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ　ｉｒｔｅｒｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｈｙｂｒｉｄｓ　ｇｒａｐｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌ－
ｔｕｒｅ，２００１，１：２１５－２２０．
［３］　Ｒａｙｍｏｎｄ　Ｗ　Ｍ　Ｆ，Ｍａｒｔｉｎ　Ｇ，Ｃｓａｂａ　Ｆ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｏｗｄｅｒｙ　ｍｉｌｄｅｗ　ｉｎ－
ｄｕｃｅｓ　ｄｅｆｅｎｓｅ－ｏｒｉｅｎｔｅｄ　ｒｅｐｒｏｇｒａｍｍｉｎｇ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ　ｉｎ　ａ
ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ　ｂｕｔ　ｎｏｔ　ｉｎ　ａ　ｒｅｓｉｓｔａｎｔ　ｇｒａｐｅｖｉｎｅ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏ－
ｇｙ，２００８，１４６：２３６－２４９．
［４］　Ｔｈｅ　Ｆｒｅｎｃｈ－Ｉｔａｌｉａｎ　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｃｏｎｓｏｒｔｉｕｍ　ｆｏｒ　Ｇｒａｐｅｖｉｎｅ　Ｇｅｎｏｍｅ
Ｃｈａｒａｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｇｒａｐｅｖｉｎｅ　ｇｅｎｏｍｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｓｕｇｇｅｓｔｓ　ａｎ－
ｃｅｓｔｒａｌ　ｈｅｘａｐｌｏｉｄｉｚａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍａｊｏｒ　ａｇｉｏｓｐｅｒｍ　ｐｈｙｌａ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，
２００７，４４９：４６３－４６８．
［５］　王西平．中国葡萄属野生种抗白粉病基因克隆与序列分析
［Ｄ］．陕西杨凌：西北农林科技大学，２００４．
Ｗａｎｇ　Ｘ　Ｐ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｓｉｎｇ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｇｅｎｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｒｅ－
ｓｉｓｔａｎｃｅ　ｔｏ　Ｕｎｃｉｎｕｌａ　ｎｅｃａｔｏｒｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｗｉｌｄ　Ｖｉｔｉｓ　ｓｐｅｃｉｅｓ［Ｄ］．
Ｙａｎｇｌｉｎｇ，Ｓｈａａｎｘｉ：Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００４．（ｉｎ　Ｃｈｉ－
ｎｅｓｅ）
［６］　张今今，王跃进，王西平，等．葡萄总 ＲＮＡ 提取方法的研究
［Ｊ］．果树学报，２００３，２０（３）：１７８－１８１．
Ｚｈａｎｇ　Ｊ　Ｊ，Ｗａｎｇ　Ｙ　Ｊ，Ｗａｎｇ　Ｘ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎ　ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ
ｒａｐｉｄｌｙ　ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ　ｔｏｔａｌ　ＲＮＡ　ｆｒｏｍｖｉｔｉｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｆｒｕｉｔ
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，２０（３）：１７８－１８１．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［７］　Ｌｉｎａ　Ｍ，Ｆｒａｎｃｅｓｃａ　Ｆ，Ｒｏｓｓｅｌａ　Ｄ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　Ｋｒüｐｐｅｌ－ｌｉｋｅ　ｚｉｎｃ－
ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＺＮＦ２２４ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ　ａｌｄｏｌａｓｅ　Ａｇｅｎ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｂｙ
ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ＫＡＰ－１ｃｏ－ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ ［Ｊ］．Ｇｅｎｅ，
２００５，３０５：３５－４３．
［８］　Ｗｉｌｅｍｉｊｎ　Ｍ　Ｇ，Ｈｉｄｄｅ　Ｊ　Ｈ，Ｍａｒｉａｎｎｅ　Ｇ　Ｒ．Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎ－
ｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ：Ｔｈｅ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｏｆ
ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ　ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｎ　ｏｒ　ｏｆｆ　ａｔ　ｃｏｍｍａｎｄ
［Ｊ］．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００５，３５４：５０７－５１９．
［９］　Ａｎｄｒｅｗ　Ｃ　Ｊ，Ｂｏ　Ｇ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｔｒｏｌｉｎｇ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓ－
ｓｉｏｎｉｎ　Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ　ｕｓｉｎ　ｇｅｎ　ｇｉｎｅｅｒｅｄ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｒａｎ－
ｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００６，３４（８）：８７７－８７９．
［１０］　王　雷，周伯如，吴丽丽，等．小黑杨环锌指蛋白基因的克隆
与表达分析 ［Ｊ］．植物生理学通讯，２００９，４５（１２）：１１６０－１１６６．
Ｗａｎｇ　Ｌ，Ｚｈｏｕ　Ｂ　Ｒ，Ｗｕ　Ｌ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａ－
ｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｒｉｎｇ　ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　Ｐｏｐｕｌｕｓ　ｓｉｍｏｎｉｉ×Ｐ．
ｎｉｇｒａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００９，４５（１２）：
１１６０－１１６６．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１１］　Ｌｉｕ　Ｌ，Ｗｈｉｔｅ　Ｍ　Ｊ，Ｍａｃｒａｅ　Ｔ　Ｈ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｈｉｇｈｅｒ　ｐｌａｎｔｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ａｌｄｏｍａｉｎｓ，ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９９，２６２：２４７－２５７．
［１２］　Ｎａｇａｏｋａ　Ｍ，Ｓｕｇｉｕｒａ　Ｙ．Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ：ｃｒｅａ－
ｔｉｏｎ，ＤＮＡ　ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｇｅｎｅ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ［Ｊ］．Ｉｎｏｒｇ　Ｂｉｏ－
ｃｈｅｍ，２０００，８２（１－４）：５７－６３．
［１３］　Ｊａｍｉｅｓｏｎ　Ａ　Ｃ，Ｍｉｌｅｒ　Ｊ　Ｃ，Ｐａｂｏ　Ｃ　Ｏ．Ｄｒｕｇ　ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ　ｗｉｔｈ　ｅｎ－
ｇｉｎｅｅｒｅｄ　ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ　Ｒｅｖ　Ｄｒｕｇ　Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，
２００３，２：３６１－３６８．
［１４］　杨祥燕，蔡元波，吴青松，等．菠萝锌指蛋白基因 ＡｃＲＣＨＹ１
的克隆与表达分析 ［Ｊ］．园艺学报，２００９，３６（１１）：１５８９－１５９６．
Ｙａｎｇ　Ｘ　Ｙ，Ｃａｉ　Ｙ　Ｂ，Ｗｕ　Ｑ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａ－
ｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ＡｃＲＣＨＹ１ｆｒｏｍ　ｐｉｎｅａｐｐｌｅ
［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ　Ｓｉｎｉｃａ，２００９，３６（１１）：１５８９－１５９６．（ｉｎ
Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１５］　Ｊｉ　Ｈ，Ｘｉａ　Ｙ，Ｗａｎｇ　Ｍ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｒｉｃｅ　Ｃ２Ｈ２－ｔｙｐｅ　ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｌａｃｋｉｎｇ　ＤＬＮ－ｂｏｘ／ＥＡＲ－ｍｏｔｉｆ　ｐｌａｙｓ　ａ　ｒｏｌｅ　ｉｎ
ｓａｌｔ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａｅｔ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ　Ａｃｔａ，２００７，１７６９：
２２０－２２７．
［１６］　Ｊｉ　Ｈ，Ｓｈｕ　Ｊ　Ｓ，Ｄｏｎｇ　Ｑ　Ｘ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｔｏｌｅｒａｎｃｅ　ｏｆ　ｒｉｃｅ　ｔｏ
ｃｏｌｄ，ｄｒｏｕｇｈｔ　ａｎｄ　ｏｘｉｄａｔｉｖｅ　ｓｔｒｅｓｓｅｓ　ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｏｖｅｒｅｘ－
ｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ａ　ｇｅｎｅ　ｔｈａｔ　ｅｎｃｏｄｅｓ　ｔｈｅ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ＺＦＰ２４５
［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，
２００９，３８９：５５６－５６１．
［１７］　Ｙｏｓｈｉｋｏ　Ｍ，Ｙｏｓｈｉｈｉｒｏ　Ｔ，Ｙｕｋｉｋｏ　Ｕ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ
ｎｏｖｅｌ　Ｃｙｓ２／Ｈｉｓ２－ｔｙｐｅ　ｚｉｎｃ－ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ａｓ　ａ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ　ｏｆ　ａ
ｓｐｅｒｍｉｎｅ－ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ　ｉｎ　ｔｏｂａｃｃｏ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，
２００７，１６（４）：７８５－７９３．
［１８］　赵　楠，赵　飞，李金花．锌指蛋白结构及功能研究进展 ［Ｊ］．
生物技术通讯，２００９，２０（１）：１３１－１３４．
Ｚｈａｏ　Ｎ，Ｚｈａｏ　Ｆ，Ｌｉ　Ｊ　Ｈ．Ａｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ
ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｌｅｔｔｅｒｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２０（１）：１３１－１３４．
（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１９］　刘梅芳，周淑芬，徐桂磊，等．一个水稻 ＣＣＣＨ型锌指蛋白基
因的表达模式分析 ［Ｊ］．福建农业学报，２００８，２３（３）：２２５－２３０．
Ｌｉｕ　Ｍ　Ｆ，Ｚｈｏｕ　Ｓ　Ｆ，Ｘｕ　Ｇ　Ｌ，ｅｔ　ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ａ　ｒｉｃｅ
ＣＣＣＨ－ｔｙｐｅ　ｚｉｎｃ　ｆｉｇｅｒ　ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｆｕｊｉａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ
Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２００８，２３（３）：２２５－２３０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［２０］　Ｌｉ　Ｚ，Ｔｈｏｍａｓ　Ｔ　Ｌ．ＰＥＩ　１，ａｎ　ｅｍｂｒｙｏ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒｐｒｏ－
ｔｅｉｎ　ｇｅｎｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｄｆｏｒ　ｈｅａｒｔ－ｓｔａｇｅ　ｅｍｂｒｙｏ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｉｎ　Ａｒａｂｉ－
ｄｏｐｓｉｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，１９９８，１０（３）：３８３－３９８．
［２１］　Ｓｃｈｍｉｔｚ　Ｒ　Ｊ，Ｈｏｎ　Ｌ，Ｍｉｃｈａｌｓ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｒｉｇｄａ　ｅｓｓｅｎｔｉａｌ　ｉｎｔｅｒａｃｔｓ
ｇｅｎｅｔｉｃａｌｙ　ｗｉｔｈ　ｆｒｉｇｄａ　ａｎｄ　ｆｒｇｉｄａ－ｌｉｋｅ　ｔｏ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｈｅ　ｗｉｎｔｅｒ
ａｎｎｕａｌ　ｈａｂｉｔ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００５，
２４（１３２）：５４７１－５４７８．
［２２］　Ｌｉ　Ｊ，Ｃｈｅｘ　Ｘ　Ｈ．Ａ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒ　ｏｆ　ｓｔａｍｅｎ　ａｎｄ　ｃａｒｐｅｌ　ｉｄｅｎｔｉｔｉｅｓ　ｉｎ
Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ，ｃｏｄｅｓ　ｆｏｒ　ａ　ｎｕｃｌｅａｒ　ＲＮＡ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．
Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，２００１，１３（１０）：２２６９－２２８１．
［２３］　Ｋｏｎｇ　Ｚ，Ｌｉ　Ｍ，Ｙａｎｇ　Ｗ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｎｕｃｌｅａｒ　２ｌｏｃａｌｉｚｅｄ
ＣＣＣＨ２ｔｙｐｅ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ＯｓＤＯＳ，ｉｓ　ｉｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｄｅｌａ－
ｙｉｎｇ　ｌｅａｆ　ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｎ　ｒｉｃｅ（ＯｒｙｚａｓａｔｉｖａＬ．）［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓ－
ｉｏｌｏｇｙ，２００６，１４１（４）：１３７６－１３８８．
［２４］　Ｌａｉ　Ｗ　Ｓ，Ｋｅｎｎｉｎｇｔｏｎ　Ｅ　Ａ，Ｂｌａｃｋｓｈｅａｒ　Ｐ　Ｊ．Ｉｎｔｅｒａｃ－ｔｉｏｎｓ　ｏｆ
ＣＣＣＨ　ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｗｉｔｈ　ｍＲＮＡ；ｎｏｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ｔｒｉｓｔｅｔｒａ－
ｐｒｏｌｉｎ　ｍｕｔａｎｓ　ｅｘｅｒｔ　ａｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｄｅｇｒａｄａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＵ－
ｒｉｃｈ　ｅｌｅｍｅｎｔ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｍＲＮＡｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００２，２７７：
９６０６－９６１３．
［２５］　Ｂａｔｃｈｅｌｄｅｒ　Ｃ，Ｄｕｎｎ　Ｍ　Ａ，Ｃｈｏｙ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｔｉｏｎａｌ
ｒｅｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ　ｅｌｅｇａｎｓ　ｇｅｒｍ－ｌｉｎｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ
ＰＩＥ－１［Ｊ］．Ｇｅｎｅｓ　Ｄｅｖ，１９９９，１３：２０２－２１２．
（下转第１４４页）
７３１第１０期 文志丰，等：中国野葡萄锌指蛋白基因的克隆及生物信息学分析
ｍｅｌｏｎ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ　ｖｕｌｇａｒｉｓ　Ｓ．）［Ｊ］．Ｊ　Ｅｘｐ　Ｂｏｔ，２００９，６０（１）：
１６９－１８５．
［３］　Ａｒｉｚｕｍｉ　Ｔ，Ａｍａｇａｉ　Ｍ，Ｓｈｉｂａｔａ　Ｄ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｐｒｏ－
ｍｏｔｅｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ａｎｔｈｅｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｅｎｅｓ　ｅｎｃｏｄｉｎｇ　ｌｉｐｉｄ　ｔｒａｎｓｆｅｒ
ｐｒｏｔｅｉｎ，ｘｙｌｏｇｌｕｃａｎ　ｅｎｄｏｔｒａｎｓｇｌｕｃｏｓｙｌａｓｅ／ｈｙｄｒｏｌａｓｅ　ａｎｄ　ｐｏｌｙｇａｌａｃ－
ｔｕｒｏｎａｓｅ　ｉｎ　ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐ，
２００２，２１（１）：９０－９６．
［４］　Ｍａｒｉａｎｉ　Ｃ，ＤｅＢｅｕｃｋｅｌｅｅｒ　Ｍ，Ｔｒｕｅｔｔｎｅｔ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍａｌｅ
ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ　ｂｙ　ａ　ｃｈｉｍａｅｒｉｃ　ｒｉｂｏｎｕｃｌｅａｓｅ　ｇｅｎｅ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，
１９９０，３４７（６２９５）：７３７－７４１．
［５］　Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｍｅｅｒ　Ｉ　Ｍ，Ｓｔａｍ　Ｍ　Ｅ，Ｖａｎ　Ｔｕｎｅｎ　Ａ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ
ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　ｉｎ　ｐｅｔｕｎｉａ　ａｎｔｈｅｒｓ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎ
ｍａｌｅ　ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，１９９２，４（３）：２５３－２６２．
［６］　Ｋｏｅｓ　Ｒ　Ｅ，Ｓｐｅｌｔ　Ｃ　Ｅ，Ｒｅｉｆ　Ｈ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃｈａｌｃｏｎｅ　ｓｙｎｔｈａｓｅ
ｍｕｌｔｉｇｅｎｅ　ｆａｍｉｌｙ　ｏｆ　Ｐｅｔｕｎｉａ　ｈｙｂｒｉｄａ（Ｖ３０）：ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ，ｌｉｇｈｔ－
ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｄｕｒｉｎｇ　ｆｌｏｗｅｒ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ａｎｄ　ＵＶ　ｌｉｇｈｔ
ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，１９８９，１２（２）：２１３－２２５．
［７］　Ｃｌｏｕｇｈ　Ｓ　Ｊ，Ｂｅｎｔ　Ａ　Ｆ．Ｆｌｏｒａｌ　ｄｉｐ：ａ　ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　Ａｇｒｏｂａｃ－
ｔｅｒｉｕｍｍｅｄｉａｔｅｄ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ　ｔｈａｌｉａｎａ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ
Ｊ，１９９８，１６（６）：７３５－７４３．
［８］　Ｔｊｏｋｒｏｋｕｓｕｍｏ　Ｄ，Ｈｅｉｎｒｉｃｈ　Ｔ，Ｗｙｌｉｅ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｖａｃｕｕｍ　ｉｎｆｉｌｔｒａ－
ｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｅｔｕｎｉａ　ｈｙｂｒｉｄａ　ｐｏｌｅｎ　ｗｉｔｈ　Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａ－
ｃｉｅｎｓ　ｔｏ　ａｃｈｉｅｖｅ　ｐｌａｎｔ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐ，２０００，
１９（８）：７９２－７９７．
［９］　常小丽，刘雅莉，王跃进，等．百合花特异启动子ＰｃｈｓＡ表达载
体的构建及功能分析 ［Ｊ］．西北农林科技大学学报：自然科学
版，２００９，３７（２）：１３５－１４０．
Ｃｈａｎｇ　Ｘ　Ｌ，Ｌｉｕ　Ｙ　Ｌ，Ｗａｎｇ　Ｙ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ
ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｐｒｏｍｏｔ－
ｅｒ　ＰｃｈｓＡ　ｆｒｏｍ　ｌｉｌｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ａ＆Ｆ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ：
Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ，２００９，３７（２）：１３５－１４０．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１０］　Ｄｅｌａｐｏｒｔａ　Ｓ，Ｗｏｏｄ　Ｊ，Ｈｉｃｋ　Ｊ．Ａ　ｐｌａｎｔ　ＤＮＡ　ｍｉｎｉｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ：
ｖｅｒｓｉｏｎⅡ ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐ，１９８３，１（４）：１９－２１．
［１１］　Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎ　Ｒ　Ａ．Ａｓｓａｙｉｎｇ　ｃｈｉｍｅｒｉｃ　ｇｅｎｅｓ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ：ｔｈｅ　ＧＵＳ
ｇｅｎｅ　ｆｕｓｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ　Ｒｅｐ，１９８７，５（４）：３８７－
４０５．
［１２］　Ｆｉｌｉｃｈｋｉｎ　Ｓ　Ａ，Ｌｅｏｎａｒｄ　Ｊ　Ｍ，Ｍｏｎｔｅｒｏｓ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ｅｎｄｏ－
ｂｅｔａｍａｎｎａｎａｓｅ　ｇｅｎｅ　ｉｎ　ｔｏｍａｔｏ　ＬｅＭＡＮ５ｉｓ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ
ａｎｔｈｅｒ　ａｎｄ　ｐｏｌｅｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００４，１３４
（３）：１０８０－１０８７．
［１３］　Ｒｏｇｅｒｓ　Ｈ　Ｊ，Ｂａｔｅ　Ｎ，Ｃｏｍｂｅ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｃｉｓ－
ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ　ｅｌｅｍｅｎｔｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｂａｃｃｏ　ｌａｔｅ
ｐｏｌｅｎ　ｇｅｎｅ　ｇ１０［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，２００１，４５（５）：５７７－５８５．
［１４］　Ｍｉｔｓｕｄａ　Ｎ，Ｔａｋｅｙａｓｕ　Ｋ，Ｓａｔｏ　Ｍ　Ｈ．Ｐｏｌｅｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｖａｃｕｏｌａｒ　Ｈ＋－ＰＰａｓｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｂｙ　ｍｕｌｔｉｐｌｅ　ｃｉｓ－ａｃｔｉｎｇ　ｅｌｅ－
ｍｅｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ　Ｂｉｏｌ，２００１，４６（２）：１８５－１９２．
［１５］　Ｌｅｗｉｎ　Ｂ．基因Ⅷ精要 ［Ｍ］．北京：科学出版社，２００７：５３５－５５５．
Ｌｅｗｉｎ　Ｂ．ＧｅｎｅⅧｅｓｓｅｎｔｉａｌ［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｐｒｅｓｓ，２００７：
５３５－５５５．（ｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ）
［１６］　Ｚｈｅｎｇ　Ｘ　Ｌ，Ｄｅｎｇ　Ｗ，Ｌｕｏ　Ｋ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｃａｕｌｉｆｌｏｗｅｒ　ｍｏｓａｉｃ
ｖｉｒｕｓ（ＣａＭＶ）３５Ｓｐｒｏｍｏｔｅｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｌｔｅｒｓ　ｔｈｅ　ｌｅｖｅｌ　ａｎｄ　ｐａｔ－
ｔｅｒｎｓ　ｏｆ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｄｊａｃｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅ－ａｎｄ　ｏｒｇａｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｇｅｎｅ　ｐｒｏ－
ｍｏｔｅｒｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ　Ｒｅｐ，２００７，２６（８）：

１１９５－１２０３．
（上接第１３７页）
［２６］　Ｍｕｒａｔａ　Ｔ，Ｙｏｓｈｉｎｏ　Ｙ，Ｍｏｒｉｔａ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅａｒ
ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ａｎｄ　ｅｘｐｏｒｔ　ｓｉｇｎａｌｓ　ｗｉｔｈｉｎ　ｔｈｅ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｚｉｎｃ
ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｉｎ　ＴＩＳ１１ ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ｒｅｓ　Ｃｏｍｍｕｎ，
２００２，２９３：１２４２－１２４７．
［２７］　Ｃａｒｒｉｃｋｄ　Ｍ，Ｌａｉ　Ｗ　Ｓ，Ｂｌａｃｋｓｈｅａ　Ｒ　Ｐ　Ｊ．Ｔｈｅ　ｔａｎｄｅｍ　ＣＣＣＨ
ｚｉｎｃ　ｆｉｎｇｅｒ　ｐｒｏｔｉｅｎ　ｔｒｉｓｔｅｔｒａｐｒｏｌｉｎ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ｒｅｌｅｖａｎｃｅ　ｔｏ　ｃｙｔｏｋｉｎｅ
ｍＲＮＡ　ｔｕｒｎｏｖｅｒ　ａｎｄ　ａｒｔｈｒｉｔｉｓ［Ｊ］．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｅｓ　Ｔｈｅｒ，２００４，６
（６）：２４８－２６４．
［２８］　Ｄｅｌａｎｅｙ　Ｋ　Ｊ，Ｘｕ　Ｒ，Ｚｈａｎｇ　Ｊ，ｅｔ　ａｌ．Ｃａｌｍｏｄｕｌｉｎ　ｉｎｔｅｒａｃｔｓ　ｗｉｔｈ
ａｎｄ　ｒｅｇｕｌａｔｅｓ　ｔｈｅ　ＲＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｎ　Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ｐｏｌｙａｄｅｎｙｌａｔｉｏｎｆａｃｔｏｒ　ｓｕｂｕｎｉｔ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ，２００６，
１４０（４）：１５０７－１５２１．
４４１ 西北农林科技大学学报（自然科学版） 第３８卷