全 文 ：山东科学
SHANDONG SCIENCE
第 26 卷 第 1 期 2013 年 2 月出版
Vol． 26 No． 1 Feb． 2013
收稿日期:2012-07-18
作者简介:王瑞华(1987 －) ，女，硕士研究生，研究方向为药用真菌学及中药质量控制。Email:sdzyywrh2010@ 163． com
* 通讯作者，徐凌川(1962 －) ，男，教授，研究方向为中药质量控制与品质评价和药用真菌分类与鉴定。Email:xulingchuan518@ sina． com
DOI:10． 3976 / j． issn． 1002 － 4026． 2013． 01． 010
不同加工方法杜梨叶中鞣质的含量测定
王瑞华，侯彩婷，邹昀员，田易玲，刘玉红，徐凌川*
( 山东中医药大学药学院，山东 济南 250355)
摘要:采用磷钼钨酸 －干络素法对不同加工方法杜梨叶中鞣质的含量进行测定。室温浸提过夜提取鞣质，在磷钼钨酸与
多酚类物质的显色反应进行到 90 ～ 120 min时，于 760 nm波长处，分别测定供试样品溶液中的总酚和不被吸收的多酚的
吸光度，以吸光度之差用标准曲线法求得鞣质含量。在 1 ～ 10 μg /mL范围内，线性关系良好( r = 0． 997 9)。平均回收率
为 98． 58% ( n = 6) ，RSD为 0． 51%。此条件下，未发酵的杜梨叶鞣质平均含量在 0． 60%，渥堆发酵的杜梨叶未检出鞣质。
关键词:杜梨叶;磷钼钨酸 －干酪素法;鞣质;含量测定
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1002-4026(2013)01-0047-04
Determination of tannin content in leaves of Pyrus betulaefolia Bge．
with different processing methods
WANG Rui-hua ，HOU Cai-ting ，ZOU Yun-yuan ，TIAN Yi-ling，LIU Yu-hong，XU Ling-chuan*
(School of Pharmacy，Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)
Abstract∶ We employ phosphorus molybdenumtungsten acid casein method to determine tannin content of two different
products from the leaves of Pyrus betulaefolia Bge． ． Tannins were extracted to be soaking at room temperature by staying
overnight When the color reaction between phosphomolybdium Tungslic acid and phenolic acids was carrying through
90 ～ 120 min，absorbency of tolal phenolic acids and unabsorbable phenolic acids was delermined respectively at The
wavelength of 760 nm． Tannins content is derived by spectrophotometry difference and standard curve method． Better
linear relationship (r = 0． 997 9)exists in the range of 1 ～ 10 μg /mL． We obtain average recovery rate of 98． 581% (n = 6)
and RSD of 0． 51%． Tannins average content of unfermented leaves is 0． 60%，and tannins is not detected in the leaves of
fermentation under this condition．
Key words∶ Pyrus betulaefolia Bge．;phosphorus molybdenum-tungsten acid casein;tannin;content determination
杜梨(Pyrus betulaefolia Bge．)为蔷薇科梨属落叶乔木，又名棠梨、海棠梨、野梨子、土梨，常作为庭荫树、
防护林种植于园林及作为砧木［1］。杜梨各个部分均有保健价值［2］，其果实入药，具有消食止痢、治腹泻之
效;枝、叶入药可治霍乱、吐泻不止、转筋腰痛、反胃吐食;树皮入药可治皮肤溃疡。鞣质又称单宁，是保证杜
梨色、香、味的一个重要成分，是一类比较复杂的具有沉淀蛋白质性质的水溶性多元酚类化合物，广泛存在于
植物中。近些年来，随着分析、分离手段及活性成分研究的进步，逐渐发现鞣质具有许多保健价值［2］及药理
活性［3］，可以抗脂质过氧化［4］、清除活性氧［5］，且具有抗艾滋病病毒(HIV)［6］和抗肿瘤［7］等作用，临床应用
山 东 科 学 2013 年
日益受到重视。
目前关于杜梨的研究主要集中在种子、幼苗［8 － 9］，作为砧木嫁接梨树，杜梨叶氨基酸、矿质元素含量测
定［10］，多糖［11］、根皮苷［12］、总黄酮［13］及杜梨果实挥发油含量测定［14］等方面，本实验测定了不同加工方法杜
梨叶中的鞣质含量，为其加工方法选择及开发利用提供参考依据。
1 材料与方法
1． 1 材料与试剂
样品:杜梨叶 1#为日晒夜露传统制法的干燥品，杜梨叶 2#为经过渥堆发酵后的干燥品，均为湖南省白沙
溪茶厂有限责任公司质检部提供，粉粹后过 40 目筛;没食子酸对照品(批号 110831-200803，纯度按含
C7H6O5 计为 90． 1%，供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供;其它试剂均为分析纯;磷钼钨酸试液
的配制［15］:取钨酸钠 100 g，钼酸钠 25 g，加水 700 mL使溶解，加盐酸 100 mL，磷酸 50 mL，加热回流 10 h，放
冷，再加硫酸锂 150 g，水 50 mL和溴 0． 2 mL，煮沸除去残留的溴(约 15 min)。冷却，加水稀释至 1 000 mL，
滤过，即得。本液不得显绿色(如放置后变为绿色，可加溴 0． 2 mL，煮沸除去多余的溴即可)。
1． 2 仪器与设备
Varian Cary 100 紫外 －可见分光光度计 美国瓦里安公司;KQ500E 超声仪，江苏昆山超声仪器有限公
司;FA1104 万分之一电子天平，上海精密仪器公司;FW-100 高速万能粉碎机，北京市永光明医疗仪器厂。
1． 3 方法
1． 3． 1 溶液的配制
1． 3． 1． 1 对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品 5 mg，置 100 mL 棕色容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取 5 mL，置
50 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得(每 1 mL中含没食子酸 0． 05 mg)。
1． 3． 1． 2 供试品溶液的制备
分别取不同加工方法的杜梨叶粉末 3． 5 g，精密称定，置 250 mL棕色容量瓶中，加水 150 mL，放置过夜，
超声处理 10 min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，静置(使固体物沉淀) ，滤过，弃去初滤液 50 mL，精密量取续
滤液 20 mL，置 100 mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，即得。
1． 3． 2 吸收波长的测定
取对照品和供试品溶液各 2． 0 mL，分别置 25 mL棕色容量瓶中，各加入磷钼钨酸试液 l mL，再分别加水
10 mL，用 29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放置 30 min。以相应的试剂为空白，于 200 ～ 800 nm处扫描即
得。
1． 3． 3 标准曲线的制备
精密量取对照品溶液 0． 5，1． 0，2． 0，3． 0，4． 0，5． 0 mL，分别置 25 mL 棕色容量瓶中，编号依次为 1 ～ 6
号，各加入磷钼钨酸试液 1 mL，再分别加水 11． 5，11，10，9，8，7 mL，用 29%碳酸钠溶液稀释至刻度，摇匀，放
置 30 min。以相应的试剂为空白，参照紫外 －可见分光光度法［15］，在吸收波长下测定吸光度，以吸光度为纵
坐标，浓度为横坐标，绘制标准线。
1． 3． 4 精密度实验
取 4 号对照品显色后溶液，吸收波长处测定吸光度，连续测定 6 次，在最大吸收波长处测定吸光度，计算
RSD值。
1． 3． 5 稳定性实验
取同一批供试品，按供试品溶液的制备方法操作，吸收波长处测定吸光度，每隔若干时间测定一次，连续
考察 3 h，共测定 6 次，计算 RSD，分析供试品溶液的稳定性。
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第 1 期 王瑞华，等:不同加工方法杜梨叶中鞣质含量测定
1． 3． 6 重复性实验
取杜梨叶 1#粉末，依上述方法处理样品 6 份，按样品含量测定方法测定，计算 RSD，观察其重复性。
1． 3． 7 加标回收实验
取已知鞣质含量的供试品(杜梨叶 1#粉末 2． 3 g)6 份 ，精密称定量，置 250 mL棕色容量瓶中，分别加入
近等量的没食子酸对照品，按供试品溶液制备及 1． 3． 9 样品测定方法测定，并计算鞣质的平均回收率及
RSD。
1． 3． 8 最低检测限和定量限
该方法测定最低检测限为 0． 17 μg /mL，定量限为 0． 51 μg /mL。
1． 3． 9 样品含量测定
总酚:精密量取供试样品溶液 2 mL，置 25 mL棕色容量瓶中，参照标准曲线的制备方法，加入磷钼钨酸
试液 1 mL，加水 10 mL。依法测定吸光度，从标准曲线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)并计算，即
得。
不被吸附的多酚:精密量取供试品溶液 25 mL，加至已盛有干络素 0． 6 g 的 100 mL 具塞锥形瓶中，密
塞，置 30 ℃水浴中保温 1 h，时时振摇，取出，放冷，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液 2 mL，置 25 mL
棕色容量瓶中，参照标准曲线的制备方法，加入磷钼钨酸试液 1 mL，加水 10 mL，依法测定吸光度，从标准曲
线中读出供试品溶液中没食子酸的量(mg)并计算，即得。
按下式计算鞣质的含量:鞣质含量 =总酚量 －不被吸附的多酚量。
2 结果
2． 1 吸收波长的测定
对照品溶液及样品溶液在 760 nm处均有最大吸收，故确定其吸收波长为 760 nm。
2． 2 标准曲线的绘制
在 760 nm下测定对照品溶液吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，得回归方程为:Y = 0． 0009X +
0． 004 1，r = 0． 997 9，结果表明没食子酸在 1 ～ 10 μg /mL之间呈良好线性关系。标准曲线见图 1。
图 1 没食子酸标准曲线图
Fig． 1 Standard curve of gallic acids
2． 3 精密度实验
在波长 760 nm处测定吸光度，RSD =0． 31%(n
=6) ，结果表明仪器精密度良好。
2． 4 稳定性实验
待供试品溶液显色后，在 760 nm 下测定吸光
度，每隔若干时间测定一次，连续考察 3 h，共测定
6 次，结果表明供试品溶液显色后在 30 min 内吸
收度上升较大，在30 ～ 60min 内吸光度稳定，吸光
度 RSD = 0． 47%。表明供试品溶液在 30 ～ 60 min
稳定，故选择在 30 ～ 60 min内测定。
2． 5 重复性实验
供试品溶液显色后，在 760 nm下按样品含量测定方法测定吸光度，RSD =1． 27%(n = 6) ，结果表明重复
性良好。
2． 6 加标回收实验
已知鞣质含量的供试品溶液加入近等量的对照品，在 760 nm下按供试品溶液制备及 1． 3． 9 项下样品测
定方法测定，计算得鞣质的平均回收率为 98． 58%，RSD =0． 51%(n = 6)。结果见表 1。
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表 1 加标回收实验结果
Table 1 Spike recovery rate of tannin in the leaves of Pyrus betulaefolia Bge． and RSD
样品 样品含量 /mg 加标量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均回收率 /% RSD /%
1 13． 81 13． 80 27． 41 99． 27
2 13． 78 13． 80 27． 06 98． 13
3 13． 83 13． 80 27． 37 99． 05
4 13． 79 13． 80 27． 13 98． 32
5 13． 80 13． 80 27． 23 98． 67
6 13． 82 13． 80 27． 07 98． 03
98． 58 0． 51
2． 7 样品中鞣质的含量测定
供试品溶液显色后，在 760 nm下按样品含量测定方法测定吸光度，杜梨叶 1#鞣质含量为 0． 58% ～0． 62%，
鞣质平均含量为 0． 60%，RSD =2． 64%(n =5) ;杜梨叶 2#未检测出鞣质。结果表明，传统制法的杜梨叶鞣质含
量高于渥堆发酵后的。样品中鞣质的含量测定结果见表 2。
表 2 不同加工方法杜梨叶中鞣质的含量测定结果
Table 2 Determination result of tannin in the leaves of Pyrus betulaefolia Bge． with different processing methods
样品 药材量 / g
总酚浓度
/(mg /mL)
总酚含量
/%
不被吸附酚
浓度 /(mg /mL)
不被吸附酚
含量 /%
鞣质含量
/%
鞣质平均
含量 /%
RSD /%
1#
1 3． 500 3 0． 008 0 3． 55 0． 001 7 3． 01 0． 58
2 3． 500 1 0． 008 1 3． 63 0． 001 7 3． 02 0． 59
3 3． 500 6 0． 008 0 3． 58 0． 001 7 3． 01 0． 60
4 3． 500 2 0． 008 3 3． 72 0． 001 8 3． 13 0． 59
5 3． 500 7 0． 008 7 3． 89 0． 001 8 3． 27 0． 62
0． 60 2． 64
2#
1 3． 500 1 0． 004 5 2． 03 0． 001 1 2． 03 0
2 3． 500 4 0． 004 9 2． 17 0． 001 2 2． 17 0
3 3． 500 2 0． 004 7 2． 11 0． 001 2 2． 11 0
4 3． 500 5 0． 004 7 2． 09 0． 001 2 2． 09 0
5 3． 500 7 0． 005 0 2． 25 0． 001 3 2． 25 0
0 —
3 讨论
现有中药鞣质的含量测定方法比较多，最常见的有皮粉法、干络素法、络合量法、比色法和磷钼钨酸 －干
络素法［16］。皮粉法是现在国际上较公认的测定方法，但样品耗用量大，测定时间长且无选择性，测定结果往
往偏高，一般只适用于鞣质含量较高的生药，而且皮粉试剂的供应和质量都较难保证。磷钼钨酸 －干络素法
专属性强，重复性及灵敏度高，实验周期短，操作简单［17］。2005 及 2010 年版《中华人民共和国药典》中鞣质
含量测定方法皆为磷钼钨酸 －干络素法，故本实验选择该方法测定杜梨叶中的鞣质含量。由于鞣质易氧化，
所以实验应在避光条件下操作。因鞣质受热不稳定，故选用室温浸提过夜提取。
本实验结果表明，不同加工干燥方法所测得杜梨叶中鞣质含量有所不同，其中未发酵杜梨叶中鞣质平均
含量为 0． 60%，渥堆发酵干燥的杜梨叶检测到有信号，但未测出鞣质含量。原因可能是杜梨叶在渥堆发酵
加工过程中的高温使其鞣质发生一系列的氧化、聚合、缩合反应，产生大量的水溶性氧化产物(主要是色素
类多酚)和非水溶性转化物(主要是与蛋白质结合的不溶性大分子物质)［18］，使发酵后杜梨叶中的多酚类物
质减少，致使鞣质含量极低，不易检测出;另一方面在渥堆发酵过程中经微生物的作用，鞣质降解，但具体原
因还有待进一步研究。因此，在选择这两种加工方法时，如果杜梨叶煎煮后的口感和色泽差别不大，宜选择
日晒夜露传统的加工方法。
( 下转第 64 页)
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参考文献:
［1］李向红．城市路面井盖管理问题探讨［J］．市政技术，2009，27(6) :560 － 563．
［2］长沙高新开发区玺天科技开发有限公司． 井盖防盗报警器［EB /OL］． ［2012 － 06 － 22］． http:/ /www． xitiantech． com /
Products． asp?art_ID = 6．
［3］连云港溢瑞科技有限公司．电力井盖远程监控系统［EB /OL］．［2012 － 6 － 22］． http:/ /www． lygyr． com /page02． html．
［4］徐培龙，叶敏，徐建，等．基于 ZigBee组网技术城市窨井实时监测系统［J］．自动化与仪器仪表，2011(4) :65 － 67．
［5］王静霞．一种与 ZigBee /802． 15． 4 协议兼容的 RF模块 XBee /XbeePro及其应用［J］．电子工程师，2007，33(3) :24 － 27．
［6］湛江书，谢晓佳，冯发维．基于 Xbee-Pro的矿井安全检测与监测系统的设计［J］．重庆工商大学学报:自然科学版，2011，28
(2) :207 － 211．
［7］武永胜，王伟，沈昱明．基于 ZigBee技术的无线传感器网络组网设计［J］．电子测量技术，2009，32(11) :121 － 124．
［8］倪肖．飞思卡尔 MC9S08AW60 最小系统设计与实现［J］．软件导刊，2010，9(5) :83 － 86．
［9］孟德军，林志贵，钟晴晴．基于 AW60 的温度采集系统的设计与实现［J］．苏州大学学报:工科版，2010，30(2) :6 － 11．
［10］翟顺，王卫红，张衎，等．基于 SIM900A的物联网短信报警系统［J］．现代电子技术，2012，35(5) :86 － 89．
［11］卢放鸣． ZigBee工业无线通信中的数据管理［J］．中国仪器仪表，2008(S1) :89 － 95．
［12］高汉荣，冯冬芹．工业无线网络的现状及发展趋势［J］．中国仪器仪表，2008(S1) :87 － 89，95．
［13］肖军，储海燕． VC环境下数据库访问技术的比较分析［J］．西安航空技术高等专科学校学报，2012，30(1) :69 － 71．
( 上接第 50 页)
参考文献:
［1］渝德浚． 中国植物志［M］． 北京:科学出版社，1974:366．
［2］李娜，杨文慧，王明，等． 杜梨养生保健价值浅谈［J］． 安徽农业科学，2011，39(32) :19803，19805．
［3］栗世婷，张晓霞，吴蓉瑛． 鞣质药理活性的研究进展［J］． 疾病监测与控制杂志，2010，4(7) :395 － 397．
［4］张杰，詹炳炎，姚学军． 中药石榴皮对生殖器疤疹病毒的灭活作用及其机理探讨［J］． 中国中药杂志，1995，20(9) :556
－ 558．
［5］陈会良，商常发． 抗衰老中药对自由基清除作用的研究进展［J］． 中国中医药杂志，2007，5(7) :14 － 17．
［6］张朝凤，孙启时，王峥涛，等． 乌药茎中鞣质成分及其抗 HIV-1 整合酶活性研究［J］． 中国药学杂志，2003，38(12) :911
－ 914．
［7］赵小亮，周忠波，白红进，等． 杜梨果实热水提取物对 H22 小鼠的抗肿瘤作用［J］． 时珍国医国药，2007，18(12) :2897
－ 2898．
［8］程奇，吴翠云，阿依买木． 不同处理对梨种子休眠与萌发的影响［J］． 塔里木大学学报，2005，17(1) :28 － 30．
［9］刘润进，袁玉清，祝军． 杜梨幼苗根系生长状况观察［J］． 莱阳农学院学报，1998，15 (3) :180 － 183．
［10］赵小亮，邓芳，王金磊，等． 杜梨叶片中氨基酸及矿质元素含量的测定［J］． 塔里木大学学报，2007，19(2) :57 － 59．
［11］王少杰，张岭苓，徐凌川，等． 不同加工方法的棠梨叶中总多糖含量测定［J］． 山东科学，2011，24 (4) :15 － 17，49．
［12］殷法杰，秦国培，蒋海强，等． 杜梨叶中根皮苷含量测定［J］． 山东中药杂志，2011，30(3) :200，215．
［13］张岭苓，李楠，徐凌川，等． 不同炮制方法的杜梨叶中总黄酮含量测定［J］． 食品科技，2011(10) :269 － 271．
［14］吴瑛，赵小亮． 杜梨果实挥发油化学成分的 GC-MS分析［J］． 安徽农业科学，2007，35(19) :5659 － 5660．
［15］曾元儿．中国药典 2010 版(一部) ［M］．广州:中山大学出版社，2010．
［16］厉博文，张东，刘为广，等． 紫萁贯众中鞣质的含量测定［J］． 中国中医药信息杂志，2010，17(11) :45 － 46．
［17］王珅，鲁静． 中药材中鞣质含量测定方法的研究［J］． 中国药事，2004，18(6) :361 － 364．
［18］刘小玲，李颖，姜元欣，等． 广西六堡茶主要特征成分分析［J］． 北京工商大学学报:自然科学版，2012，30(1) :46 － 50．
46