全 文 ：食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品安全与检测
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2011年 第36卷 第10期
[5]　王竹,王光亚.蔬菜中VK的测定——HPLC法[N].营养学
报,1999,21(4):450-454
[6]　龙洲雄,胡海山,万春花.HPLC法测定保健食品中VK1[J].
现代测量与实验室管理,2007,(3):36-37
[7]　聂西度.高效液相色谱法测定谷物中VK1的含量[J].食品
研究与开发,2005,26(4):130-131
[8]　铁晓威,黄棣华,黄百芬.高效液相色谱柱后衍生法测定
食品中的VK1[J].2002,28(9):34-37
[9]　李孝宁.高效液相色谱法分析定量黄豆油中VK1[J].上海
农业科技,1988,(5):36-38
张岭苓1，李 楠1，徐凌川2*，秦国培2，殷法杰2，蒋海强2
(1.湖南省白沙溪茶厂有限责任公司，安化 413515；
2.山东中医药大学，济南 250355)
摘要：采用70 %乙醇提取杜梨(Pyrus betulaefolia Bge.)叶中的总黄酮，探讨了以芦丁为对照
品，Al(NO3)3为显色剂，分光光度法测定总黄酮的可行性。建立了NaNO2-Al(NO3) -NaOH与芦
丁的反应体系，在510 nm处测吸光度值，得回归方程Y=0.0024X+0.009，标准曲线相关系数
r=0.9995，平均加样回收率98.1%，相对标准偏差0.98。在此条件下，不同炮制方法所得杜梨
叶总黄酮含量测定结果分别为：日晒夜露传统制法8.32%，渥堆变红后日晒法6.45%。实验
证明：杜梨叶总黄酮含量较高，可作为富含黄酮的药物资源加以开发利用，且从总黄酮含量
看，传统的日晒夜露法优于渥堆变红加工法。
关键词：杜梨叶；总黄酮； 分光光度法； 含量测定
中图分类号：TS 272.7 文献标志码： A 文章编号：1005-9989(2011)10-0269-03
Determination of total fl avonoids in leaves of
Pyrus betulaefolia Bge. from different processing methods
ZHANG Ling-ling1, LI Nan1, XU Ling-chuan2*, QIN Guo-pei2, YIN Fa-jie2, JIANG Hai-qiang2
(1.Hunan Provincial Baishaxi Tea Industry Co., Anhua 413515;
2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355)
Abstract: The total fl avonoids was extracted from the leaves of Pyrus betulaefolia Bge. with 70% ethanol, to
discuss the feasibility of Al(NO3)3 as colour reagent with rutin as reference substance for evaluation on the
content of total fl avonoids by spectrophotometry. To establish a reaction between the rutin with the system of
不同炮制方法的杜梨叶中总黄酮含量
测定
收稿日期：2011-02-21 *通讯作者
作者简介：张岭苓(1983—)，女(苗族)，湖南人，中级制茶师，主要从事安化黑茶加工工作。
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2011.10.018
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杜梨Pyrus betulaefolia Bge.为蔷薇科梨属乔木，
又称棠梨、海棠梨、野梨子、土梨、灰梨[1]，在
我国分布较广。据《本草纲目》记载棠梨味酸、
甘、涩、寒；无毒。烧熟食用，可治泄泻痢疾。
《救荒本草》记载“杜梨叶微苦，嫩叶炸熟，水
洗淘净，用油、盐调拌可以食用，也可蒸晒后
代茶饮。湖南安化当地人有端午后采收棠梨叶的
传统习惯，将鲜叶采摘回家后放于院中，日晒夜
露，约达20 d后，叶片自然变红干燥，悬挂收藏
于灶屋，夏季熬煮饮用，为传统制法；现也有经
过渥堆发酵使鲜叶变红，再日晒干燥制成干叶
的。2种制法所得干叶经熬煮使用，均能达到达到
降暑、解渴、防肠胃不适的效果，其汤色红亮清
澈，口感甘甜、润和，多年来一直是安化地区除
了茶以外最传统的饮料之一。本文测定并比较了
两种不同炮制方法杜梨叶总黄酮含量，旨在为杜
梨叶资源的合理开发与利用提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
样品：杜梨叶1号为日晒夜露传统制法干燥
品，2号为渥堆发酵后晒干品：湖南省白沙溪茶厂
有限责任公司质检部；芦丁对照品纯度>98%：本
校天然药物化学研究室自制；乙醚、5% NaNO2、
10% Al(NO3)3、4% NaOH溶液等。
1.2 仪器与设备
UV2800型紫外-可见分光光度计：日立公
司；KQ-500 E超声波清洗仪：江苏昆山超声仪器
有限公司；FE-52A旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪
器厂；FA1104电子天平：上海精密仪器公司。
1.3 试验条件与方法
总黄酮的提取[2-4]：精密称取杜梨叶样品1
号、2号各1.0 g，平行样各3份分别加入70%乙醇
100 mL超声提取3次，每次0.5 h，提取液减压浓缩
蒸去乙醇。浓缩液于分液漏斗中用相同体积的乙
醚洗2~3次，以除去叶绿素及蜡质等，然后用70 %
乙醇定容至100 mL，待测。
以芦丁为标准品，采用分光光度法对杜梨叶
的不同加工样品进行含量测定[5]。
绘制标准曲线[6-8]：精密称取芦丁25 mg，
用70%乙醇溶解并定容至100 mL，使其浓度为
100 μg/mL。将芦丁溶液用70%乙醇稀释成0、
50、100、150、200、250 μg/mL，各取1 mL于
试管中，加70%乙醇1 mL，加入5% NaNO2 300
μL，6 min后加入10% Al(NO3)3 300 μL溶液，6
min后再加入4% NaOH 溶液2 mL，10 min后置分光
光度计在波长510 nm处测定吸光度A值 [9-10]，分
别为：0.017、0.124、0.234、0.370、0.483、
0 . 6 0 4 ， 以 吸 光 度 值 为 纵 坐 标 ， 以 芦 丁 浓 度
(μg/mL)为横坐标，绘制标准曲线。回归方程
为Y=0.0024X+0.009(r=0.9995)，说明本实验在
50.00~250.00 μg/ mL范围内成良好的线性关系
见图1。
图1 芦丁标准曲线图























































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2 结果与分析
2.1 总黄酮含量测定
取经稀释过的样品溶液各1 mL，按上述同样
的步骤和方法测定得A值，从标准曲线查得样品中
NaNO2-Al(NO3)3-NaOH, measure absorbance at 510 nm by spectrophotometer, The regression equation was
Y=0.0024X+0.009; the correlation coefi cient of standard curve was 0.9995, the average recovery was 98.1%,
The relative standard deviation was 0.98%. on this condition, the different processes have obvious effects on
the contents of total fl avonoids in P. betulaefolia Bge. prepared by traditional process(drying by sun,dewing
in night) is 8.32%, while prepared by sun-baked till to red after wet cumulating is 6.45%. According to the
experiment, the contents of fl avornoids was high in P. betulaefolia Bge. and it can be used as the resoure
which is rich in total fl avonoids.
Key words: Leaves of Pyrus betulaefolia Bge.; total fl avonoids; spectrophotometry; content determination
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总黄酮的含量(μg/mL)，测得2种样品的总黄酮含
量，以芦丁计分别为：样品1号8.32%(n=3)，样品2
号6.45%(n=3)。
2.2 稳定性试验
取样品溶液，间隔10 min测1次，连续50 min
考察其稳定性，结果A值的RSD为2.73%(n=6)，表
明供试品溶液在室温下放置 50 min较稳定。
2.3 精密度试验
精密吸取芦丁对照品溶液2.0 mL，按2.2
项下方法连续测定6次，测定其吸收度,计算得
RSD=0.59%(n=6)。
2.4 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品1号0.5 g，提取前加
入芦丁对照品适量，按1.3和2.1的步骤操作，计算
回收率(n=6)，测定结果见下表。
药、保健食品等行业人士的高度重视和关注。
实验证明杜梨叶中含有丰富的天然黄酮类成
分，在药物和功能食品方面都有极大的开发利用
价值。
参考文献：
[1]　刘孟军.中国野生果树[M].北京:中国农业出版社,1997:
216-217
[2]　谢海,熊丽,肖英华,等.超声提取法与冷浸法测定中草药
浸出物的结果比较[J].时珍国医国药,2001,12(8):684
[3]　陈洪涛,蔡丹昭,林立波.榕树叶总黄酮超声提取工艺条
件的研究[J].时珍国医国药,2008,19(8):1955-1957
[4]　万茵,谢明勇,梁丽军,等.车前子总黄酮的提取工艺优化
及体外抗氧化作用研究[J].食品科学,2006,27(12):373-
376
[5]　林莺,王酸恩,张小华,等.中药平车前不同部位总黄酮含
量测定[J].长春中医药大学学报,2010,26(1):129-130
[6]　谭萍,李煜.3种车前草叶片总黄酮的含量测定[J].江西中
医学院学报,2005,17(1):54
[7]　谢鸣,彭镰心,刘超,等.紫外分光光度法测定夏枯草微
丸中总黄酮的含量 [J] .西南民族大学学报 (自然科学
版),2006,32(1):136-139
[8]　包贝华,杨建平.分光光度法测定芥穗炭中总黄酮的含量
[J].南京中医药大学学报(自然科学版),2004,20(2):34-36
[9]　郑杭生,李计萍,韩炜,等.紫外-可见分光光度法测定总黄
酮含量的方法学考察要点[J].中成药,2008,30(9):1364-
1365
[10]　杨卿,李杰,朱庆铃.线叶菊总黄酮测定的方法学研究[J].
长治医学院学报,2009,23(6):415-417
[11]　殷法杰,秦国培,蒋海强,等.杜梨叶中根皮苷含量测定[J].
山东中医杂志,2011,30(3):200
[12]　雷林芳,钟晓红,张珉.杜梨叶黄酮的提取工艺研究及其
初步定性分析[J].现代生物医学进展.2009,9(11):30-31
[13]　裴凌鹏,惠伯棣,金宗濂,等.黄酮类化合物的生理活性及
其制备技术研究进展[J].食品科学,2004,25(2):203-207
[14]　张鞍灵,高锦明,王铁清.黄酮类化合物的分布及开发利
用[J].西北林学院学报,2000,15(1):69-74
[15]　曹纬国,刘志勤,邵云,等.黄酮类化合物药理作用的研究
进展[J].西北植物学报,2003,23(12):2241-2247
[16]　李楠,刘元,侯滨滨.黄酮类化合物的功能特性[J].食品研
究与开发,2005,26(6):139-141
表1 加样回收率试验结果
称样量/g 加入量/mg 测得量/mg
回收率
/%
均值
/%
相对标准偏
差/%
0.5031 45.02 88.62 98.3
0.5120 45.11 89.67 98.5
0.5177 45.06 90.88 99.3 98.1 0.98
0.5048 45.01 88.28 97.8
0.5150 45.17 89.67 98.1
0.5114 45.07 87.62 96.4
3 结论
本实验以芦丁为对照品，采用分光光度法
对两种不同炮制方法制出的杜梨叶进行总黄酮含
量测定，实验证明传统制法杜梨叶总黄酮含量为
8.97%，渥堆发酵后晒干品为6.25%，说明杜梨叶
渥堆发酵后总黄酮含量有所降低，该结果与我们
测定的杜梨叶中根皮苷的含量下降结果有相似之
处[11]。另外，结果表明两种样品70%乙醇超声提
取法(室温下操作)，所测杜梨叶总黄酮含量均高于
文献报道的60%乙醇在70 ℃温度下的浸提法所得
5.03%的总黄酮含量[12]。
黄酮类化合物在自然界中分布广泛，主要
存在于植物的叶片、果实和根部，是一类引人瞩
目的广谱生物活性物质[13-14]，资料记载黄酮类具
有抗脑缺血、抗心肌缺血、抗心律失常、消炎镇
痛、保肝护肝、对消化性溃疡的保护、抗病毒、
抗肿瘤作用等。此外，还有大量研究表明黄酮类
天然产物有效成分有降压、降糖、降血脂和抑
制血小板聚集等多种药理作用[15-16]，因此倍受医
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