全 文 ：收稿日期:2007-04-17;　修订日期:2007-07-12
基金项目:浙江省嘉兴市科技局基金资助项目(No.2005AY3042)
作者简介:陈伟光(1952-),男(汉族),上海人 ,现任嘉兴学院医学院副教
授 ,主要从事天然药物化学成分的提取分离和定量分析工作.
葎草抗结核分枝杆菌研究
陈伟光 1 , 林　霞1 , 睢凤英 1 , 尹　秀2 , 屠婕红 1 , 盛　静1 , 黄　佳 1
(1.嘉兴学院医学院 ,浙江 嘉兴　314001;　2.浙江大学医学院 ,浙江 杭州　310006)
摘要:目的 研究葎草提取物抗结核菌活性及有效部位。方法 以体外抑菌实验筛选葎草抗结核活性部位 ,采用试管倍
比稀释法测定葎草提取物最低抑菌浓度(MIC),评价其体外抗菌活性。结果 葎草的正丁醇萃取部位对结核分枝杆菌标
准株 H37 RV及临床分离的敏感菌株具有较明显的抗菌作用 ,粗提物的 MIC为 125 μg· ml-1 ,高浓度 1 mg· ml-1时有
杀灭作用。结论 葎草提取物对结核杆菌具有明显的抗菌活性 , 有进一步研究开发的价值。
关键词:葎草;　结核分枝杆菌;　抗菌活性
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)01-0058-01
InhibitoryEffectsagainstTuberculousBacilusofExtractsfromHumulusscandens
CHENWei-guang1 , LINXia1 , SUIFeng-ying1 , YINXiu2 , TUJie-hong1 , SHENGJing1 , HUANGJia1
(1.MedicalSchoolofJiaxingUniversity, Jiaxing, Zhejiang314001, China;2.MedicalColege, ZhejiangUni-
versity, Hangzhou310006 , China)
Abstract:ObjectiveToobservetheactivityofextractsfromHumulusscandensagainsttuberculousbacilusandtofindoutthe
activefraction.MethodsThemethodofbacteriostasisinvitrowasusedtoevaluatetheinhibitoryefectsagainsttuberculousbacil-
lusoftheextractsfromHumulusscandens.MICoftheextractsweremeasuredbythemeansofdoubledilution.ResultsTheN-
butanolextracthadobviousantibacterialactivitytoH 37 RVandthesensitivestrainwhichseparatedfromclinic.MICoftheex-
tractwas125 μg· ml-1 andthehighlevels(1mg· ml-1)oftheextracthadakilingactivity.ConclusionTheextractsofH.
scandenshaveobviousantimicrobialactivityinvitro.Itisworthytobestudiedfurther.
Keywords:Humulusscandens(Lour.)Merr.;　Tuberculousbacillus;　Bacteriostasis
　　近年来 , 全球结核病疫情再度上升 , 受到了世界各国的关注。
全球 1/3人口(约 20亿)感染过结核菌 , 全世界现有结核病人
2 000万 ,每年还会新发生 800 ～ 1 000万肺结核病人 ,死亡约 200
万人。 2000年全国结核病流行病学调查的结果显示 , 我国有 4 ～
5亿人受到过结核杆菌的感染 , 有各类肺结核病人约 800 万 ,每
年新增传染性肺结核患者 150万人 , 有 13万人死于结核病。目
前临床上常用的抗结核药物大多对肝 、肾脏有较大的毒性 , 且易
产生耐药性。因此 , 近年来从天然资源中寻找安全有效的抗结核
药物 , 已引起越来越广泛的重视。葎草是一种民间草药 , 为桑科
植物 Humulusscandens(Lour.)Merr.的全草。含青兰苷 、天门冬
素 、挥发油 、鞣质及树脂 、木犀草素葡萄糖苷 、大波斯菊苷 、牡荆素
等黄酮类成分 , 具清热解毒 、利尿消肿等功效 ,民间用于肺结核潮
热 、胃肠炎 、痢疾 、淋证 、痔疮等证 [ 1] 。早期曾有关于葎草用于治
疗结核病的报道 [ 1] 。 为探索抗结核中药 , 我们对葎草中的成分
进行了初步的分离 , 并进行了葎草提取物对结核分枝杆菌的体外
抑菌活性研究。现报道如下。
1　材料与方法
1.1　材料 葎草采自嘉兴郊区 , 由嘉兴学院生药 、天然药物化学
教研室陈伟光副教授鉴定。采回后切成长 2 cm的小段 , 在阴凉
处用风扇吹干备用。
1.2　菌株 结核菌标准株 H
37
RV, 由杭州市预防保健门诊部检
验科提供(购自北京疾控中心)。临床分离结核菌株由嘉兴市第
一医院提供。
1.3　药液的制备 取葎草段(2 cm长)500 g, 75%乙醇回流提取 ,
提取液回收溶剂至无醇味 , 加适量蒸馏水溶解 , 分别依次用石油
醚 、氯仿 、醋酸乙酯 、正丁醇萃取 , 上述各萃取部位回收溶剂后得
各提取物。将各提取物定量溶于 250 ml容量瓶中 , 加 50%乙醇
至刻度 ,超声助溶 , 制成每毫升含相当于 2 g生药的供试药液。
剩余的水溶液挥去正丁醇 , 调节至同样浓度 , 置冰箱中备用
(6℃)。
1.4　含药培养基的制备 按常规方法配制罗氏培养基 ,取上述各
种葎草提取液 1份 ,加入培养基 5份混匀 ,即成 1∶5稀释度的含
药培养基 ,分装中号试管 , 每管 6 ml。每种药液做 3个复管 , 灭菌
后备用 。空白管加 1 ml50%乙醇代替葎草提取液。
1.5　操作步骤 分别取培养 3周的结核菌标准株 H37 RV和临床
分离菌株斜面生长物适量 ,用比浊法稀释成 106个 /ml菌浓度 , 用
吸管反复吸打均匀 [ 2] 。在每支含药和空白对照培养液管中分别
加入 0.1 ml上述 H37RV或临床分离菌株菌液 , 置 37℃恒温培养
箱培养 6周 , 2周后开始观察结核分枝杆菌的生长情况 , 以后每
周观察 。记录结果。
2　结果
2.1　葎草不同提取部位的抑菌作用 葎草的 5种不同提取部位
对结核杆菌生长的抑制作用见表 1。由表 1可知 , 石油醚 、正丁
醇和水提取部位有抑菌作用 ,而以正丁醇提取部位最强。因此 ,
又对正丁醇提取部位做进一步的抗菌活性研究。
表 1　葎草不同提取部位对结核杆菌生长的抑制作用
提取物 H37 RV
1 2 3
临床菌株
1 2 3
石油醚提取部位 - - + - - -
氯仿提取部位 + + + + + +
醋酸乙酯提取部位 + + + + + +
正丁醇提取部位 - - - - - -
剩余的水提取部位 - + + - - +
空白对照 + + + + + +
　　“ -”无菌落生长;“ +”有菌落生长
·58·
时珍国医国药 2008年第 19卷第 1期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.1　
2.2　不同浓度的正丁醇提取物对结核杆菌生长的影响 正丁醇
提取物用 50%乙醇配制成 12mg· ml-1的供试药液 ,再用生理盐
水以 2倍稀释法制成 1∶1, 1∶2, 1∶4, 1∶8, 1∶16等 5个浓度 ,
按上述方法制备不同浓度含药培养基 ,同时设不含药液之空白对
照管。分别接种结核杆菌标准株和临床分离菌株 ,每株结核菌和
每个药物浓度均各设 3个复管。结果见表 2。
表 2　正丁醇提取物对结核杆菌的抑菌作用
浓度
C/mg· ml-1
第 3周
H37RV
1 　2 　3
临床菌株
1 　2　　 3　
第 4周
H37RV
1 　 2 　 3
临床菌株
1 　2　　3　
第 5周
H37RV
1 　2 　 3
临床菌株
1 　 2　　 3　
第 6周
H37RV
1 　 2 　3
临床菌株
1 　2　　3　
2 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
1 - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
0.5 - - - - - - - - + - - - - + - - + - - + + +
0.25 - - - - - - - + + - - + + + ++ + + ++ ++ ++ ++ +
0.125 - - + 　 ＊ + + ++ ＊ + ++ ++ ＊ ++ +++++ ＊
空白对照 + + + + + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ +++++++ ++ +++ +++++++++++++++ +++
　　“ -”未见菌落生长;“ +”有个别菌落;“ ++”有少量菌落;“ +++”菌落数较多;＊未做
　　由表 2可知 , 葎草的正丁醇提取物对结核分枝杆菌标准株
H37 RV及临床分离的敏感菌株都具有较明显的抗菌作用 , 粗提
物的 MIC为 125μg· ml-1 , 高浓度时 1 mg· ml-1 , 第 6周也未
发现菌落 , 对结核分枝杆菌有较强的抑制或杀灭作用。
3　讨论
上述实验研究结果表明 ,葎草的提取物中以正丁醇萃取物的
抗结核分枝杆菌作用最强 ,且有明显的剂量 -效应关系 , 粗提物
在 1 mg· ml-1就能完全抑制结核分枝杆菌的生长。 0.125 μg·
ml-1时 , 在早期也有抑制作用。但本实验所用药物还是粗提物 ,
有待于进一步分离追踪有效成分。此外 , 由于时间关系 , 耐药菌
株事先未做活化培养 ,效果不理想而未收入本文 , 还需进一步验
证。葎草是一种常用中草药 ,大剂量应用也未见毒副作用。而且
分布广泛 , 资源丰富 ,是一种很有希望的抗结核中草药 ,值得进一
步研究开发。
参考文献:
[ 1 ] 　尹海波 ,王　颖 ,郑太坤 ,等.中国葎草属植物的研究进展 [ J].辽宁
中医学院学报 , 2001, 3(1):60.
[ 2 ] 　匡铁吉 ,董　梅 ,宋　萍 , 等.黄连素对结核分枝杆菌的体外抑菌
作用 [ J] .中国中药杂志 , 2001, 26(12):867.
收稿日期:2007-04-02;　修订日期:2007-04-10
基金项目:新疆建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助项目(No.2006GG52)
作者简介:张　芹(1973-),女(汉族),河北邢台人 ,现为石河子大学药学院在读硕士研究生 ,主要从事药物分析与药效学研究工作.
＊通讯作者简介:唐　辉(1967-),女(汉族),重庆人 ,现任新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室教授 ,博士学位 ,主要从事天然药物分析及
新药研究工作.
高效液相色谱法测定天山花楸中的绿原酸含量
张　芹 , 李　鹏 , 唐　辉＊ , 王鲁石 , 李　乐
(新疆特种植物药资源省部共建教育部重点实验室 · 石河子大学药学院 ,新疆 石河子　832002)
摘要:目的 建立 HPLC梯度洗脱法测定天山花楸叶与果中绿原酸含量的方法。方法 采用 ZORBASODSC18(4.6mm ×
15 cm, 5 μm)色谱柱 ,甲醇 -0.02%磷酸溶液为流动相(梯度洗脱),流速为 1.0 ml· min-1 , 检测波长为 326 nm。结果
绿原酸线性范围为 3.952 ～ 19.76 μg/ml,叶中绿原酸含量 1.982% (RSD=0.58%, n=3),平均回收率为 99.42%;果中
绿原酸含量 2.259% (RSD=1.2%, n=3),平均回收率为 99.32。结论 该方法经济 、简便 、快速 、准确 、可靠 , 可用于该药
材的质量控制。
关键词:天山花楸;　绿原酸;　高效液相色谱法;　梯度洗脱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)01-0059-02
Determination ofChlorogenicAcid in SorbustianschanicabyHigh Performance
LiquidChromatography
ZHANGQin, LIPeng,TANGHui＊ ,WANGLu-shi,LILe
(ColegeofPharmacology, ShiheziUniversity, KeyLaboratoryofXinjiangPhytomedicineResources, Xinjiang
Shihezi, 832002, China)Abstract:ObjectiveToestablishmethodsfordeterminationofchlorogenicacidinSorbustianschanica.MethodsTheHPLC
systemconsistedofthecolumnofODSZORBASODS(4.6 mm×15cm, 5μm)columnandMeOH-0.02%H3 PO3 asthemo-bilephase.Theflowratewas1.0 ml· min-1.Thedetectionwavelengthwas326 nm.ResultsThemethodwaslinearwithinthe
rangeof3.952 ～ 19.76 μg/ml.ChlorogenicacidintheleafofS.tianschanicawas1.982%(RSD% =0.58, n=3)andtheaver-
agerecoverywas99.42%.ChlorogenicacidinthefruitofS.tianschanicawas2.259%(RSD% =1.2, n=3)andtheaverage
recoverywas99.32%.ConclusionThemethodissimple, sensitive, quickandhighlyreproductiveanditissuitableforanalysis
ofchlorogenicacidinS.tianschanica.
Keywords:Sorbustianchanica;　Chlorogenicacid;　HPLC;　Gradientelution
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.1 时珍国医国药 2008年第 19卷第 1期