全 文 ：华中医学杂志 20 0 3年第 2 7卷第 5期 2 39
刀豆素 A、 结核特异性转移因子联合应用
对结核菌感染小鼠的保护效应
( 4 30 0 71武汉 )武汉大学医学院护 理 系微生物教研室
刘晓敏
刘先洲
【摘要】 目的 研究刀豆素 A( (知 IA )、结核特异性转移因子 ( P , 1 1 . t卜 FT )联用对结核菌感染小鼠的保护效应及作用机
制。 方法 小鼠感染结核分枝杆菌后 1天起 , 分别给予 C比 IA 和 口域 P 3 n . t卜 T F 治疗 , 观察各组治疗后半数死亡时间 、 一定
时间内的死亡率、 脾脏内结核活菌数 ;检测脾细胞分泌 y 干扰素 ( IF N 一刃 、 I L 4 及腹腔巨噬细胞 ( -P M币)产生 N O 水平。 结果
与感染对照组 、 (如 n A 单用组 、 R弘 1 . -bt 作 单用组比较 , Cb x认联合 P 3 n . t卜T F 组小 鼠半数死亡时间明显延长 , 28 天内的
死亡率明显降低 , 脾脏内结核活菌数明显减少 。 脾细胞分泌 IF N 一下水平明显升高 ; I卜 4 水平降低 。 -P M币产生 N O 显著增加 。
结论 C叨A 、 P S z z l · -bt T F 联合应用对结核菌感染小鼠的保护效应明显好于单用 0 〕n A 或 R弘 1 . t卜 T F 组 。
【关健词 ] 结核分枝杆菌 刀豆素 A 结核特异性转移因子 保护效应
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由于耐多药结核菌株的流行 , 当前 , 探讨使用
免疫制剂增强机体的细胞免疫功能辅助化疗已成为
结核病治疗研究的热点 。 已有研究表明 , 猪脾结核
特异性转移因子 ( P S m · t卜T F )对结核菌感染的小鼠
有较好保护效应 ;近来有研究证实 , 适量刀豆素 A
( Cb rL A )对结核菌感染的小 鼠也有一定保护效应 。
两者联合是否具有协同效应 , 尚未见报告 。 本研究
拟用 C b rL A联合 P S m . t卜T F 治疗结核分枝杆菌感
染的小鼠模型 , 通过半数死亡时间 (几。 ) 、 一定时间
内的死亡率 、 感染动物脾脏结核菌活菌计数及脾细
胞分泌 丫干扰素 ( IF N 一刃 、 IL 4 , 腹腔巨噬细胞 ( P -
M句产生 N O 水平等 , 进行疗效观察 。
材料与方法
一 、 实验动物分组及用药 雄性昆明种小白鼠
80 只 ( 18 一2 9 , S p F级 ) , 每只尾静脉注射 凡 7vR 菌
液 0 . 4 耐 (含湿菌重0 . S gnI ) , 随机分为 8组 , 每组 10
只 。 两组攻毒 十 C ol 认 ( lA , 人 ) ;两组攻毒 + P 3 1 1 . 击
吓 (残 ,残 ) ;两组攻毒 + C dl 认 + P 3 1 1 . 击吓 ( q , q ) ;
两组单纯攻毒 ( lM , 嶙 )为感染对照 ; M l 、 lA 、 马 、 q
组斑组 。 咦 、 戊 、 残 、 q 组成 n组 。
二 、 疗效观察 工组连续观察 28 天 , 计数 M , 、
A ,
、 马 、 q 各组动物毛。及 28 天内的死亡率 。 各组
2 8 天处死及中途死亡的小鼠均无菌取脾 , 按斜面上
菌落数 (C F U )计算每克组织的活菌数 。
三 、 -P M小释放 N O 水平的测定 n 组小鼠于
攻毒后 12 天 , 各组取 8 只 , 眼球放血 , 断椎处死 。
用 N aN q 作标准曲线 , 并将 N坏 的浓度换算成
N O 的含量 。
四 、 脾细胞分泌 IF N 一了、 I L 4 水平的测定 n
组小鼠在取完腹腔细胞以后 , 无菌取出脾脏置盛有
R P M I 一 16 40 液的小平皿中 , 用 E IL S A夹心法按试
剂盒说明书中步骤检测 IF N 一下、 IL 4 水平 。
2 40袅 n trl ah C in a M司 i司 J加皿 1, 2 0() 3 , 勺b王. 27 , 忡 ) . 5
结 果
一 、 Cb n A 与 P S m . t卜FT 联合对结核杆菌感染
小鼠的保护效应 (表 l) 表 1 显示 , q 组 毛。明显
长于 M l 组 ( 尸 < 0 . 0 1 ) , 也长于 A l 、 场 组 (尸 <
0
.
05 ) ; q 组小鼠 28 天内死亡率明显低于 M l 组 (尸
< 0
.
01 )
,也低于 A l 、 残 组 (尸 < 0 . 05 ) ; q 组每克脾
组织细菌数与 M l 组相 比明显减少 (尸 < 0 . 0 1 ) , 也
少于 lA 、 玖 组 ( P < 0 . 05) 。
表 1 4组结核菌感染小鼠的保护效应比较
组别 与
(天 )
28 天内死亡率
(% )
脾脏结核菌数
( x i 05 CF U g/ )
26 士 7
12 土 3
15 士4
4士 2
二 、 Cb n A诱导脾脏细胞培养上清 IF N 一 y 、 I L 4
水平及 -P M争释放 N O 水平的测定结果 (表 2) 表
2 显示 , q 组 I F N 一 y 分泌水平较 峡 组明显升高 ,
也高于 戊 、 残 组 , I L 4 分泌水平 q 组明显低于
Mz 组 , 也低于 凡 、 场 组 ; -P M小释放 N O 水平 q 组
明显高于 峡组 , 亦高于 戊 、 几 组 。
裹 Z G加八诱导脾细胞分泌 IF N 一叭
IL
一
4 水平及 F M币释放 N O 水平
结核菌感染的抵抗能力 。 现已公认亚适剂量的肿瘤
坏死因子 一a( T N F . a )能明显增强 IF N 一下的抗结核效
应 。 笔者观察了适量 Cb n A 联合 P S m · t卜 T F 对结
核菌感染小鼠的保护效应及相关免疫指标的变化 ,
并与单用 Cb几A 、 P lS rn . t卜T F 进行了比较 。 本结果
显示 , 联合用药组对结核菌感染小鼠的保护效应好
于单用 Cb rL A 、 P S l l l . t卜T F 组 , 显示 了一定协同效
应 。 联合用药组 IF N 一 y 明显升高 , IL -4 明显降低 ,
有利于 hT l 细胞的分化 。 hT l 细胞是参与结核免
疫的主要细胞之一 。 hT l 细胞占优势可促进病变向
好的方向转化 。 C冶几A还能激活 M币增加 T N -F a 和
N O 的释放 3[] , 适量的 T N F ~ 。 有利于机体细胞免疫
的发展 。 M小释放的 N O 不仅有利于 M币杀伤结核
杆菌的能力 [’1 , N O 还能促进 IL 12 的分泌 , 而 I L
12 是 hT l 细胞参与结核免疫的关键性细胞因子 s[] 。
本研究显示 , C b n A 联用 P S m · t卜 T F 组腹腔释放
N O 的水平明显高于感染对照组 , 亦高于单独用药
组 , 这也可能是联合用药组保护效应优于单独用药
组的原因 。 本研究初步证实了 Cb n A 与 PS m . 击 T F、
协同效应的设想 , 为今后的临床应用奠定了一定基
础 。 但 Cb几 A对机体也显示一定的毒性效应6[] , 两
者如何联合 , 特别是最佳组合剂量及联用的时机 ,
尚需进一步深人研究 。
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Cù0MIIABIC
参 考 文 献
组别
峡
IF -N 了( p g 1/ n l) IL 一4 (雌南 U)
42 5士 1 19
689 士 15 6
62 7士 13 5
870 士 19 6 母△▲
2 35 士 106
157 土 110
14 9士 12 1
123 土 7 璐△▲
N O (脚d几 )
5
.
9土 1 . 1
8
.
6士 1 . 4
7
.
5土 1 . 1
10
.
7土 3 . 2 . △击
, 与峡 组 比较 尸 < 0 . 01 , △与 戊 组 比较 P < 0 . 05 , ▲与
几 组比较 P < 0 . 05
结核杆菌耐药株的流行增加了结核病化疗的难
度 。 应用免疫制剂增强患者的细胞免疫功能 , 有利
于结核病向好的方面转化 。 P S] m . 洛 T F 能特异性
转移结核细胞免疫功能 , 无疑对感染了结核病的机
体有利 。 (h 1A 作为一种有丝分裂原 , 用于 T 淋巴
细胞的转化试验已被人们所熟知 。 此外 , C b n A 还
能活化巨噬细胞 〔` ] , 有抗感染 、 抗肿瘤等效应 。 近
年有报告 , 适量 〔b n A 预处理小鼠可增强对白色念
珠菌的吞噬 z[] , 也能增强小鼠对粘质沙雷菌感染的
抵抗力 3[] 。 本研究显示适量 Cb n A 还能增强小鼠对
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