全 文 ：西北林学院学报 2008 , 23(6):101 ～ 103
Journal o f No r thw est Fo restry Univer sity
接骨木茎段组织培养技术研究
＊刘志红 , 　李周岐＊
(西北农林科技大学林学院 ,陕西 杨陵 712100)
摘　要:以接骨木带腋芽茎段为外植体 ,研究了其组织培养技术。结果表明:适合接骨木芽启动培
养的培养基为 MS+NAA 0.2 mg · L-1 +6-BA 2.0 mg ·L-1 ,诱导率可达 100%;增殖培养基以
MS+TDZ 0.03 mg ·L-1 +6-BA 2.0 mg ·L-1为宜 ,培养 25 d ,增殖系数可达 3.8;生根诱导的最
适培养基为1/2MS+IBA 0.2 mg ·L-1 +6-BA 0.1 mg·L-1 ,生根率 100%,根长势良好且根毛区长
达2.0 cm左右;移栽以珍珠岩∶腐殖土=1∶2为基质 ,覆盖地膜保湿 7 d ,成活率可达 95%以上。
关键词:接骨木;芽茎;组织培养
中图分类号:S722.37　　　文献标识码:A　　　文章编号:1001-7461(2008)06-0101-03
Tissue Culture of Stem Segment of S ambucus wi lliamsii
LIU Zhi-hong , 　LI Zhou-qi
(Col lege o f Forestr y , Northwest A&F Univer sity , Yang ling , Shaanxi 712100 , China)
Abstract:S tem segment w ith axi llary buds of Sambucus wi l liamsi i were used as explants fo r t issue con-
duct.The results show ed that the medium sui table fo r bud germination w as MS with the combinations of
NAA 0.2 mg ·L -1 and 6-BA 2.0 mg ·L -1 ,w ith the rate of induction of 100%.The optimum culture me-
dium for mult iplication w as M S w ith the combinations of TDZ 0.03 mg · L-1and 6-BA 2.0 mg · L-1 and
af ter 25 d , with multiplicat ion coeff icient 3.8.The most suitable medium for ro oting induction w as 1/2
MS with the combinations of IBA 0.2 mg ·L-1and 6-BA 0.1 mg ·L-1 , w ith rate of root ing 100% and the
leng th of hairy roo t 2.0 cm achieved.When transplanted , combination of perli te and humus in a ra tio o f 1
∶2 as medium and mulching for 7 d w ere adopted , due to w hich the survival rates could reach over 95%.
Key words:Sambucus wi l liamsi i;stems w ith axillary bud;ti ssue cul ture
　　接骨木(S ambucus wi l liamsi i)为忍冬科接骨木
属落叶灌木 ,广布于我国北方地区 。接骨木为顶生
聚伞状圆锥花序 ,花冠辐状 ,黄白色 ,花期 6-7月;
核果状浆果 ,近球形 ,紫红色 ,果期 8-9月。接骨木
枝叶茂密 ,果实累累 ,色泽鲜艳 ,可作行道树 、配植草
坪 ,是庭园观赏 、园林绿化的优良树种 ,也是堤岸固
坡 、农田防护林及荒山绿化的理想树种 ,具有很高的
观赏价值和生态功能 ,亦是良好的用材树种。开发
利用接骨木具有较高的经济效益 、社会效益及生态
效益[ 1-2] 。
目前 ,我国接骨木繁殖主要以扦插为主 ,但扦插
繁殖系数低 、速度慢 ,阻滞了新优品种的快速繁殖 。
顾玉红等[ 3-4] 对金叶接骨木的组织培养技术进行了
探讨 ,但增殖较慢 ,生根率较低。在前人研究的基础
上[ 3-19] ,以接骨木茎段为外植体 ,对其组织培养技术
进行更全面 、系统的研究 ,以期为接骨木的大规模生
产和新优品种的快速推广奠定基础。
1　材料与方法
1.1　材料
材料为 5月份采自西北农林科技大学校园内生
长健壮 、无病虫害的接骨木 1 a生枝条 。
1.2　方法
1.2.1　材料处理　室外采集的枝条用自来水冲洗
＊　收稿日期:2008-01-18　修回日期:2008-04-16
　基金项目:西安市科技计划项目“秦巴山区重要野生观赏树木引种驯化与快速繁殖技术研究”(FY07107)
　作者简介:刘志红 ,女 ,硕士研究生 ,主要从事林木遗传育种研究。＊通讯作者:李周岐 ,男 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事林木遗传育种研究。 E-mai l:Lzhou qi@yahoo.com.cn。
表面尘垢 ,剪成 5 ～ 6 cm 小段 ,并剪除叶片 ,只留叶
柄基部 0.5 cm 左右 。用毛笔蘸洗洁精轻轻刷干净
枝条 ,自来水冲洗 20 min 后 ,在超净工作台上置入
75%的酒精 30 s ,无菌水冲洗 3次 ,用 0.1%升汞消
毒 10 min ,用无菌水冲洗 5 次 ,消毒滤纸吸干表面
水分 ,切掉两端的褐化伤口。
1.2.2　芽的启动和增殖培养 　以基本培养基 、
NAA和 6-BA(分别标记为 A 、B 、C)为变化因子构
成的 L9(34)正交设计培养基配方 ,进行芽的启动培
养;基本培养基选择 1/3MS(仅调整大量元素 ,以下
同)、1/2M S 、MS 培养基 , 6-BA 采用 1.0 、1.5 、2.0
mg ·L -13 个水平 , NAA 采用 0.1 、0.2 、0.4 mg ·
L
-1
3个水平 。每个组合接种 20瓶 ,每瓶接 1 个外
植体 ,3次重复 ,培养15 d后统计腋芽萌发的比例及
萌发芽的生长状况。从已建立的培养材料上剪取顶
芽或茎段 ,接种在添加不同浓度的 6-BA 、TDZ 和
NAA的 MS 基本培养基上 ,每个组合接种 10瓶 ,每
瓶接 1个外植体 ,3次重复 ,培养 25 d后统计增殖系
数 ,观察材料生长情况。
1.2.3　生根诱导　将获得的生长健壮的无菌苗 ,去
除基部旧切口 ,接种于添加不同浓度 NAA 和 IBA
的 1/2MS 培养基中 ,15 d后观察生根情况 。
1.2.4　移栽　炼苗 4 d后 ,以珍珠岩∶腐殖土=1
∶2为基质 ,用多菌灵灭菌 ,移栽后用地膜保湿 7 d ,
常规管理 25 d后 ,观察其移栽效果 。
1.2.5　培养条件　培养温度(25±2)℃,光照强度
2 000 lx ,光照时间每天 12 h。培养基均附加蔗糖
30 g ·L -1 ,琼脂 6 g · L -1及各种激素 , pH 为 5.8 。
2　结果与分析
2.1　芽的启动培养
外植体接种 7 d后 ,伤口处局部逐渐膨大 ,同时
开始出现芽的启动生长 ,在 S1 ～ S9号培养基上均
可获得健壮的不定芽 。极差计算(表 1)表明 ,各因
素对芽的启动诱导起作用的顺序为 B(NAA)>A
(基本培养基)>C(6-BA)。经方差分析可知 ,基本
培养基和 NAA 浓度对腋芽启动培养有显著影响。
各因素的最优水平分别为 A1 、B2 、C3 ,即所筛选芽
的启动培养最优培养基为 MS+NAA 0.2 mg ·L-1
+6-BA 2.0 mg ·L -1 。
表 1　接骨木芽的启动培养正交试验方案与实验结果
Table 1　Orthogonal test design for advent it ious buds indu ction and result s achieved
处理 组合 A(基本培养基) 激素种类/(mg· L
-1)
B(NAA) C(6-BA) W 诱导率/ %
S1 M S 0.1 1.0 1 76.2
S2 M S 0.2 1.5 2 100.0
S3 M S 0.4 2.0 3 86.5
S4 1/ 2MS 0.1 1.5 3 63.6
S5 1/ 2MS 0.2 2.0 1 90.6
S6 1/ 2MS 0.4 1.0 2 52.3
S7 1/ 3MS 0.1 2.0 2 66.0
S8 1/ 3MS 0.2 1.0 3 80.6
S9 1/ 3MS 0.4 1.5 1 56.4
K 1 87.567 68.600 69.700 74.400
K 2 68.833 90.400 73.333 72.767
K 3 67.667 65.067 81.033 76.900
R 19.900 25.333 11.333 4.133
2.2　增殖培养
通过调整细胞分裂素和生长素的浓度和比例来
协调顶芽和腋芽的生长 ,使其处于对整体较有利的
水平 。接种在 S11 ～ S17号培养基上的茎段 , 25 d
后 ,苗高可达 4 cm ,并分化出 1 ～ 6 个小芽 。由表 2
可以看出 ,在试验范围内 ,细胞分裂素与生长素比值
越高 ,增殖系数越大 。接种在添加 0.2 mg · L-1
NAA培养基上的外植体切口处易产生愈伤组织 ,
导致接种体生长缓慢;NAA 为 0.03 mg ·L -1时 ,外
植体多表现为单芽生长 ,可作壮芽培养基 ,较利于不
定芽展叶生根。 TDZ 对接骨木扩繁增殖率有明显
效果 。可见 ,增殖培养基以 MS+ 6-BA 2.0 mg ·
L-1 +TDZ 0.03 mg ·L-1为宜 。
2.3　生根培养
生根培养 10 ～ 15 d 后 ,有辐射状根生成 ,接触
培养基的叶面有愈伤组织生成。20 d后 ,在 S18和
S19中生根率均达 90%上 ,根毛区长达 2.0 cm(表
3)。培养基 S18 、S19中的生根速度最快 ,且根系健
壮 ,生根率高 ,苗生长较快 ,叶片大而伸展 。在附加
IBA 、6-BA 的 S19培养基中 ,比只附加 IBA 的 S18
培养基的根系更粗壮 ,伸长速度快 。说明 6-BA 对
根系的诱导和伸长生长有一定的促进作用。S20中
根的诱导情况不佳 ,大量愈伤组织的生成抑制了苗
和根系的长势 。说明低浓度的 IBA 更利于根系的
诱导和生长 。S19培养基更适合生根培养 。
2.4　练苗及移栽
根长到 2 cm 时 ,将生根苗不开瓶口移到自然光
照下锻炼 2 d ,再开口练苗 2 d后出瓶移栽。以珍珠
岩∶腐殖土=1∶2为基质 ,用多菌灵灭菌 ,移栽后用
地膜保湿7 d ,常规管理 20 d后成 ,活率达 95%以上。
102 西北林学院学报 23 卷　
表 2　接骨木的增殖培养
Table 2　Mu ltiplication culture of S.wil liamsi i
处理组合 激素种类 /(m g· L -1)
NAA 6-BA TDZ
增殖系数/倍 生长情况
S11 0.2 2.0 2.4 基部愈伤组织块直径达 2.0 cm 左右 ,苗高 4 cm ,幼苗生长较慢 ,叶片伸展 ,且有光泽
S12 0.2 1.0 2.3 基部形成愈伤组织较少 ,分化 1～ 4个小芽 ,叶片伸展
S13 0.2 0.5 1.8 基部形成愈伤组织较少 ,苗生长较快 ,叶片伸展有光泽 ,分化 1～ 3个小芽
S14 0.03 1.0 0 基部膨大 ,无愈伤组织形成
S15 0.5 0.03 3.2 苗生长较快 ,叶片伸展有光泽
S16 1.0 0.03 3.7 基部形成愈伤组织较少 ,苗生长较快 ,叶片伸展有光泽 ,分化 3～ 6个小芽
S17 2.0 0.03 3.8 基部的愈伤组织块较少 , 分化 3～ 6个小芽
表 3　接骨木生根试验
Table 3 　Root ing tes t of S.will iamsi i
处理组合
激素种类 /(mg· L -1)
IBA 6-BA
诱导率/ % 平均主根条数 根系生长情况
S18 0.2 0 100 6.3 愈伤组织生根为主 ,根系生长健壮,根毛繁密 ,毛细根较多 ,平均根长 1.7cm 左右
S19 0.2 0.1 100 4.6 皮部和愈伤组织生根均有发生 ,主根健壮 ,侧根少 ,平均根长 2.0cm 左右
S20 0.5 0.1 92 9.5 愈伤组织生长过于旺盛 ,根系生长较慢 ,平均根长 1 cm 左右
3　结论与讨论
基本培养基和激素的浓度配比均影响接骨木的
组织培养 ,诱导和增殖都以 MS 为基本培养基效果
最佳 。在启动诱导时 ,添加 6-BA 2.0 mg · L -1和
NAA 0.2 mg ·L-1的 MS 培养基能取得较好效果 ,
添加 TDZ 0.03 mg · L-1和 6-BA 2.0 mg · L-1的
MS 培养基可达到最快的增殖速度。生根时 ,添加
IBA 0.2 mg · L-1和 6-BA 0.1 mg · L-1的 1/2MS
培养基可得到较好效果。幼苗质量和移栽后的保湿
是确保移栽成活的关键因素 ,健壮的苗子移栽后 ,用
地膜保湿 7 d以上 ,一般可均成活。
在试验范围内 ,细胞分裂素与生长素比值越高 ,
增殖系数越大。但在更大浓度范围内 ,是否仍存在
这种关系 ,需要进一步试验 ,以期获得更优增殖培养
基。生根培养时 ,接触培养基的叶面有愈伤组织生
成 ,不利于外植体生长 ,因此 ,在接种时需注意叶面
不要与培养基接触。
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103第 6 期 　　　　刘志红等　接骨木茎段组织培养技术研究