全 文 ：[ 7 ]　 K rame rB C, My tilineou C. Alte rations in the
cellula r distribution o f bcl-2, bcl-x and bax in the adult r at
substantia nig ra following st ria tal 6-hydroxydopamine lesions
[ J]. J Neurocy tol, 2004, 33( 2): 213-223.
(收稿 2009-12-05;修回 2009-12-20)
接骨丹胶囊对骨质疏松大鼠骨代谢影响的研究
林　昱　李新田　邱财荣　杨喜民　史锋庆　吴　玫
解放军第三医院 (宝鸡 721004)
　摘　要　目的:探讨长期超生理剂量应用波尼松对大鼠所致的骨质疏松症特点 ,同时观察接骨丹胶
囊对其防治作用。方法: 将 30只♂ SD大鼠随机分成正常对照组、波尼松组和接骨丹胶囊
组 ,每组 10只。正常对照组给予生理盐水 ,其他组先给予波尼松按 2. 7mg. kg-1ig,随后波
尼松组灌喂生理盐水 ,接骨丹胶囊组按 3. 6g. kg-1灌胃。每日 1次 ,连续 12周。实验结束后
用骨组织形态计量学等方法测量股骨的动态参数和静态参数 ,同时测定尺骨的羟脯胺酸
和钙磷含量以及测量股骨的长度和宽度。结果:波尼松组大鼠骨量显著丢失及骨生长受到
抑制 ,而接骨丹胶囊组可明显对抗波尼松对骨的生长抑制作用。结论: 4月龄 SD大鼠服用
波尼松 12周可造成骨质疏松症 ,接骨丹胶囊对其有较好的对抗作用。
　主题词　接骨丹胶囊　骨质疏松　波尼松　大鼠
　【中国中图分类号】　 R681. 1　【文献标识码】　 A　【文章编号】　 1000-7369( 2010) -04-0503-03
　　 接骨丹胶囊为我院应用多年的纯中药制剂 ,由制马前子、
续断、炒杜仲、良姜、麻黄、制没药、鹿茸、牛膝、制乳香、三七等
组成。具有活血化瘀、消肿止痛、强筋壮骨之功效 [1 ]。主要用于
治疗闭合性骨折 [2]和骨质疏松症 [3 ]。为进一步探讨接骨丹胶囊
对骨质疏松症的治疗作用 ,我们对泼尼松造成的骨质疏松模型
大鼠进行治疗 ,并系统地观察接骨丹胶囊对实验性骨质疏松模
型大鼠的作用 ,现报道如下。
1　实验材料和方法　 1. 1　实验动物　 4月龄 SPF级♂
SD大鼠 30只 ,体重 ( 200± 20) g , (西安医科大学实验动物中心
提供 ,质量合格证:陕医动证字 08-005)。
1. 2　试药　接骨丹胶囊 (本院中药制剂中心提供 );醋酸
波尼松原料药 (浙江仙琚制药股份有限公司 )。其他试剂均分析
纯。
1. 3　主要试剂与仪器　 LEICA QWIN图像分析仪 (德国
莱卡 ) ; UV-3010紫外分光光度计 (日本岛津 ) ;电感偶合等离子
体直读光谱仪 (日本岛津 ); AE240电子天平 (梅特勒 -托利多仪
器 (上海 )有限公司 )。 羟脯胺酸测定试剂盒 ( Hpy )购于南京建
成生物试剂公司 ,胆固醇试剂盒 ( CH)、高密度脂蛋白胆固醇试
剂盒 ( HDL )、甘油三酯试剂盒 ( TG)购于北京中生生物工程高
技术公司 ,血糖测定试剂盒 ( Glu)购于保定长城临床试剂公司。
1. 4　实验方法　 30只大鼠随机分为 3组 ,每组 10只 ,正
常对照组给予生理盐水 ,按 5mL /kg灌胃 ;波尼松组给予波尼
松 2. 7mg· kg-1灌胃 ;接骨丹胶囊先给予波尼松 2. 7mg· kg-1灌
胃后 1h给予接骨丹胶囊按 3. 6g· kg-1灌胃 ,每天 1次 ,连续 12
周。 所有动物在实验结束前第 13、 14d各行颈部皮下注射四环
素 ( 25mg· kg-1 ) ,作为第一次荧光标记 ,在实验结束前 4、 5d各
行颈部皮下注射 ca lcein( 5mg· kg-1 )作为第二次荧光标记 ,以
在骨表面形成黄色和绿色双荧光标志 ,两次荧光标记间隔时间
为 10d [4] ,可动态观察两次注射期间骨形成的情况。
1. 5　观察指标及测定方法　 1. 5. 1　对大鼠胫骨上段骨
质形态计量学参数静态指标的观察: 采用半自动图像数字化分
析仪对大鼠胫骨上段不脱钙骨的 8μm厚切片测定并计算出骨
的静态参数 ,包括骨小梁面积百分数 (% Tb Ar )、骨小梁数量
( Tb. N )、骨小梁厚度 ( Tb. Th )和骨小梁分离度 ( Tb. Sp) ,并在
5μm切片 (经 Masson-Go ldner T rich rome染色 )中测量计算出
破骨细胞的个数 ( Oc. N )和吸收周长百分数 (% OC. Pm ) ,以观
察骨量和骨结构的变化及了解其可能原因。
1. 5. 2　对大鼠胫骨上段骨质形态计量学动态参数的观
察: 采用半自动图像数字化分析仪对大鼠胫骨上段不脱钙骨的
8μm厚切片测定骨动态参数 ,包括骨小梁荧光周长百分率 (%
L. Pm )、矿化沉积率 ( M AR)、骨表面骨形成率 ( BFR /BS)、新生
骨小梁面积 /骨小梁总面积比值 ( BFR /BV ) ,以了解骨表面矿
化的量和速率。
1. 5. 3　对大鼠骨生化指标的观察: 取左侧尺骨 ,除净附着
肌肉和软组织 ,用 AE240电子天平称量湿重后于 80℃烤箱烘
烤得干重 ( BW ) ,然后将骨标本置于 6mo l / L HCl中恒温消化后
取出过滤 ,取滤液分成 2份 , 1份以 1: 10稀释后用 ICP(电感偶
合等离子体直读光谱仪 )测定微量元素的含量 ,并根据标准品
含量及样品稀释倍数计算出骨中 Ca2+ 、 P3+ 的含量 ;另 1份滤液
按照羟脯胺酸测定试剂盒方法用 UV-3010紫外分光光度计测
定样品中羟脯胺酸吸收度 ,在标准曲线中直接读出其含量。
1. 5. 4　对大鼠骨物理指标的观察: 取左侧股骨 ,除净附着
骨上的肌肉和软组织 ,用 AE240电子天平称量湿重 ( BWW )后
于烤箱烘烤至恒重 ( BDW)。骨髁间窝的距离为股骨长度 ( BL) ;
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股骨曲面的大转子下行至股骨交界处为股骨的宽度 ( DL)。
1. 5. 5　对血清生化指标的影响 :大鼠右心室取血分离血
清后 ,用紫外分光光度法测定血清中高密度脂蛋白 ( HDL )、胆
固醇 ( CH)、甘油三脂 ( TG)及血糖 ( Glu)含量 ;其中 HDL按聚
乙二醇法测定 , CH按 CHOD-PAP法测定 , TG按甘油磷酸氧
化酶 -过氧化物酶法测定 , Glu按葡萄糖氧化酶 -过氧化物酶法
测定。
1. 5. 6　统计学处理: 采用 SPSS11. 5统计软件包处理 ,计
量数据以均数±标准差 (x-± s )表示 ,进行方差分析及相关性分
析。 以 P < 0. 05为差异有统计学意义。
2　结　果　 2. 1　接骨丹胶囊对波尼松大鼠股骨上段形
态计量学静态参数的影响　与正常组比较 ,波尼松组大鼠骨静
态参数中骨小梁面积百分率 (% TbAr)、骨小梁数量 ( Tb. N )、
骨小梁厚度 ( Tb. Th ) ,分别下降 41. 3% 、 35. 2%和 14. 3% (P <
0. 01) ,提示波尼松组大鼠骨质有明显丢失 ;而波尼松组的骨小
梁分离度 ( Tb. Sp)、破骨细胞的个数 ( Oc. N )和吸收周长百分数
(% Oc. Pm)分别增加了 48. 6% 、 215. 8%和 214. 0% (P < 0.
01) ,提示该组破骨细胞增多 ,骨吸收增加 ,骨质丢失明显。与波
尼松组比较 ,接骨丹胶囊组大鼠的% Tb. Ar、 Tb. N和 Tb. Th
分别提高了 75. 0% 、 63. 9%和 14. 6% (P < 0. 01);而 Tb. Sp、
Oc. N和% Oc. Pm分别下降了 36. 2% 、 67. 9%和 61. 9% (P <
0. 01)。 各组大鼠股骨上段骨质形态计量学静态参数变化见表
1。
　　表 1　　　　接骨丹胶囊对波尼松大鼠骨形态计量学静态参数的影响 ( x-± s, n= 10)
组　别 % Tb. Ar(% ) Tb. N ( mm-1 ) Tb. Th( (μm) TbSp(μm) Oc. N /BV ( mm-2 ) % Oc. Pm(% )
正常对照组 15. 0± 1. 6 2. 87± 0. 32 51. 34± 1. 81 293. 8± 9. 5 11. 92± 0. 41 0. 86± 0. 16
波尼松组 8. 80± 0. 89 1. 86± 0. 18 44. 01± 2. 62 436. 7± 6. 0 37. 64± 0. 44 2. 7± 0. 57
(波 -正 )÷ 正× 100 -41. 3 -35. 2 -14. 3 48. 6 215. 8 214. 0
接骨丹胶囊组 15. 4± 1. 5 3. 05± 0. 43 50. 42± 2. 13 278. 7± 11. 5 12. 09± 0. 83 1. 03± 0. 35
(接 -波 )÷ 波× 100 75. 0▲ 63. 9▲ 14. 6▲ -36. 2▲ -67. 9▲ -61. 9▲
　　接骨丹胶囊组与波尼松组比较▲ P < 0. 01。
　　 2. 2　接骨丹胶囊对波尼松大鼠股骨上段形态计量学动态
参数的影响　与正常组比较 ,波尼松组大鼠骨动态参数中骨小
梁荧光周长百分率 (% L. Pm )、矿化沉积率 ( M AR)、骨表面骨形
成率 ( BFR /BS)、新生骨小梁面积 /骨小梁总面积比值 ( BFR /
BV )的变化不大 (P> 0. 05) ,但新生骨小梁面积 /骨组织面积的
比值 ( BFR / TV )减少 38. 2% (P < 0. 05)。 提示长期超生理剂量
使用波尼松可使大鼠骨质形成总量减少 ;与波尼松组比较 ,接
骨丹胶囊组大鼠骨质的骨矿化沉积率和骨形成率均有上升 ,其
中 BFR / TV升高了 65. 0% ,提示接骨丹胶囊可显著促进大鼠
骨形成。 各组大鼠的骨形态计量学动态参数变化见表 2。
　　表 2　　　　　接骨丹胶囊对波尼松大鼠股骨上段形态计量学动态参数的影响 ( x-± s, n= 10)
组　别 L. Pm(% ) M AR(μm /d) BFR /BS(μm /d× 100) BFR / BV (% ) BFR / TV (% )
正常对照组 32. 1± 2. 1 0. 87± 0. 12 10. 34± 2. 61 333. 8± 90. 5 48. 9± 10. 41
波尼松组 28. 9± 1. 6 0. 80± 0. 14 8. 41± 1. 20 321. 7± . 101. 3 30. 2± 9. 44
(波 -正 )÷ 正× 100 -10. 0 -8. 0 -18. 7 -1. 6 -38. 2▲
接骨丹胶囊组 29. 4± 1. 4 0. 91± 0. 32 9. 40± 1. 16 328. 6± 115. 0 49. 8± 10. 83
(接 -波 )÷ 波× 100 1. 73 13. 7 12. 0 2. 14 65. 0▲
　　接骨丹胶囊组与波尼松组比较▲ P < 0. 01。
　　 2. 3　接骨丹胶囊对波尼松大鼠骨生化指标的影响　与正
常对照组比较 ,波尼松组大鼠尺骨的羟脯胺酸 ( Hyp)和骨钙
( Ca2+ )含量明显下降 (P < 0. 05) ,磷 ( P3+ )含量变化无差异 (P>
0. 05)。 提示大鼠长期大剂量使用波尼松后可造成骨的有机物
质和骨无机物质同时丢失。 与波尼松组比较 ,接骨丹胶囊可提
高骨的 BW和 Hyp含量分别上升了 ( 41. 0% )和 ( 44. 8% ) , (P <
0. 01)。 各组大鼠生化指标的变化见表 3。
　　表 3　　　　接骨丹胶囊对波尼松大鼠骨生化指标的影响 ( x-± s,n= 10)
组　别 BW( mg ) Hyp(μg /m L) Ca2+ (μg /m L) P3+ (μg /m L)
正常对照组 163± 8. 2 118. 7± 12. 13 567. 4± 26. 51 248. 33± 10. 5
波尼松组 154± 10. 6 91. 8± 10. 14 518. 41± 31. 0 238. 6± . 12. 5
接骨丹胶囊组 217± 11. 6 132. 9± 12. 23 569. 20± 21. 63 247. 6± 15. 1
(接 -波 )÷ 波× 100 41. 0△ 44. 8△ 9. 8 3. 8
　　接骨丹胶囊组与波尼松组比较▲ P < 0. 01。
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　　 2. 4　接骨丹胶囊对波尼松大鼠骨物理指标的观察　与正
常组比较 ,波尼松组大鼠股骨湿重 ( BWW)、股骨干重 ( BDW)、
股骨长度 ( BL)和股骨宽度 ( BD)都明显下降 (P < 0. 05) ,提示波
尼松长期使用后可使大鼠骨质明显丢失 ,同时可显著抑制骨的
生长 ,表现为骨的长度和宽度减少。接骨丹胶囊组大鼠的骨重、
长度和宽度均比波尼松组增加 (P < 0. 05) ,提示接骨丹胶囊可
明显对抗波尼松对骨生长的抑制作用。各组大鼠的骨物理指标
变化见表 4。
　　表 4　　　　接骨丹胶囊对波尼松大鼠骨物理指标的影响 ( x-± s ,n= 10)
组　别 BWW (mg ) BDW(mg ) BL( mm ) BD ( mm)
正常对照组 786± 80. 2 642. 7± 52. 3 32. 7± 0. 61 4. 32± 0. 25
波尼松组 698± 60. 4 567. 8± 40. 15 29. 8± 0. 46 3. 86± . 0. 32
接骨丹胶囊组 835± 87. 5 682. 2± 65. 13 34. 6± 0. 83 4. 31± 0. 26
(接 -波 )÷ 波× 100 19. 63△ 20. 0△ 16. 1△ 11. 7△
　　接骨丹胶囊组与波尼松组比较 ,△ P < 0. 05。
　　 2. 5　接骨丹胶囊对波尼松大鼠血清生化指标的影响　与
正常组比较 ,波尼松组大鼠胆固醇 ( CH)及血糖 ( Glu)含量上升 ,
而高密度脂蛋白 ( HDL )和甘油三酯 ( TG )下降 (P < 0. 05);与波
尼松组比较 ,接骨丹胶囊可明显降低 Glu和 HDL、 TG的含量
升高 (P < 0. 05) ,各组大鼠血清生化指标见表 5。
　　表 5　　　　接骨丹胶囊对波尼松大鼠血清生化指标的影响 ( x-± s, n= 10, mg /dl)
组　别 Glu HDL CH TG
正常对照组 56. 32± 8. 3 63. 8± 6. 2 112. 15± 6. 21 138. 26± 12. 1
波尼松组 73. 23± 9. 5 51. 9± 7. 1 123. 21.± 10. 2 103. 16± . 8. 12
接骨丹胶囊组 61. 12± 8. . 6 62. 2± 8. 3 111. 21± 11. 32 124. 82± 10. 2
(接 -波 )÷ 波× 100 -16. 5△ 19. 85△ -9. 74 21. 0△
　　接骨丹胶囊组与波尼松组比较△ P < 0. 05
　　 3　讨　论　实验结果显示 ,接骨丹胶囊组大鼠的% Tb.
Ar、 Tb. N、 BFR /TV、 Tb. Th骨质的骨矿化沉积率和骨形成率
明显提高 ;而 Tb. Sp、 Oc. N和% Oc. Pm下降 ;还可提高骨的
Hyp和 Ca2+ 含量。 大鼠的骨重、长度和宽度均比波尼松组明显
增加 ,降低 Glu和升高 HDL的含量。提示接骨丹胶囊有明显对
抗波尼松的骨生长抑制作用 ,能有效防治由波尼松引起的骨质
丢失。 骨的成分包括骨矿和骨有机物质 ,骨矿含量比例大有利
于骨的硬度 ,而骨有机物质比例大有利于骨的韧性 ,骨有机物
质中骨胶原占 90%以上 ,主要由成骨细胞分泌产生 , Hyp是骨
胶原中特殊成分 ,约占 12. 5% ,测定骨 Hyp含量可反映骨有机
物质的相对含量 [5]。 在本实验中 ,接骨丹胶囊能增加骨有机物
质的含量 (骨 Hyp含量明显增高 ) ,提示接骨丹胶囊对增加骨的
韧性效果明显。
接骨丹胶囊方中的马前子具有通络止痛、消肿散结、改善
微循环和血液流变学、抑制血小板聚集的作用。 三七有活血散
瘀、消肿止痛之功效。鹿茸含有神经节苷酯、硫酸软骨素 A、雄
激素、雌二醇及生物活性肽等物质 ,具有温肾壮阳、益精补气、
强筋健骨作用。牛膝、续断、杜仲具有逐瘀通络 、滋补肝肾、续筋
接骨之功效。可促进骨对钙的吸收 ,提高血钙和血磷的含量 ,有
利于骨钙化。 方中乳香、没药有活血散瘀、通经止痛、消肿生肌
之功效。 其治疗骨质疏松症的作用机理与该药能滋补肝肾 ,并
具有活血化瘀、消肿止痛、强筋壮骨、扩长毛细管、改善微循环
有关。由于血液循环的改善 ,矿物质在骨骼的沉积 ,从而发挥其
治疗骨质疏松的作用。
参考文献
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药理学研究 [ J].中国药房 , 2001, 12(增刊 ): 6-7.
[ 2]　李新田 ,盖　静 ,王志贤 .接骨丹胶囊的制备及临床
观察 [ J].中成药 , 2002, 24( 8): 638-639.
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(收稿 2009-11-15;修回 2009-12-10)
505陕西中医 2010年第 31卷第 4期