全 文 ：[文章编号 ] 1000-4718(2010)06-1120-07
[收稿日期 ] 2009-11-20 [修回日期 ] 2010-03-23
＊[基金项目 ]陕西省中医管理局科学基金资助项目(No.2005-076)
■通讯作者 Tel:029-82540986;E-mail:wangshen@fmmu.edu.cn
椒目油A2对不同时相哮喘小鼠肺组织 NF-кB信号
通路及炎症因子表达的影响＊
王俊琴 1 , 马福成 2 , 田卫斌 1 , 王胜春1■ , 赵辉平 1
(第四军医大学西京医院 1药剂科 , 2病理科 , 陕西 西安 710032)
[摘 要 ] 目的:探讨椒目油A2(ZSOA2)对不同时相哮喘小鼠肺组织核因子 -кB(NF-кB)信号通路和炎症
细胞因子的影响。方法:采用腹腔注射 20%Al(OH)3 +10%卵蛋白 (OVA)混合液致敏并每天 1次呼吸道滴入 50
μL(0.4%OVA磷酸缓冲液 pH=7.4)制备小鼠哮喘模型。在滴入后 24h、48h、3d、7d、14d分别处死小鼠 , ELISA
法测定肺灌洗液(BALF)中白细胞介素 -4(IL-4)、白细胞介素 -5(IL-5)、干扰素 -γ(IFN-γ)含量;HE染色
法检测肺组织病理形态学及伊红染色计数炎性细胞分类;Westernblotting法测定肺组织 NF-кB信号通路蛋白表
达。结果:ZSOA2组能显著减少哮喘小鼠各时点肺组织嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞 (LY)(P<0.05);降低各时
点 BALF中 IL-5、IL-4, 升高 IFN-γ的水平;下调肺组织中细胞黏附分子 -1(ICAM-1)、血管内皮黏附分子 -1
(VCAM-1)、核因子抑制蛋白 -α激酶(IKK-α)、磷酸化核因子抑制蛋白(p-IкB)的表达 ,上调肿瘤坏死因子受
体 1 (TNF-R1)和磷酸化核因子 -кB65(p-NF-кB65)蛋白表达水平。结论:ZSOA2治疗 OVA诱发小鼠哮喘是
下调肺组织内 NF-кB信号通路中 IKK-α和 p-IкB表达 , 抑制细胞因子和趋化因子的释放与产生 , 使炎性细胞
浸润程度减弱 , 而产生治疗哮喘的作用。
[关键词 ] 椒苜油;哮喘;NF-кB;白细胞介素 -5;胞间黏附分子 1
[中图分类号 ] R284.1 [文献标识码 ] A doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2010.06.015
EffectsofzanthoxylumseedoilA2 onNF-кBsignalingpathwayandin-
flammatoryfactorinlungtissueofasthmaticmice
WANGJun-qin1 , MAFu-cheng2 , TIANWei-bin1 , WANGSheng-chun1 , ZHAO
Hui-ping1
(1DepartmentofPharmacy, 2DepartmentofPathology, XijingHospital, TheFourthMilitaryMedicalUniversity, Xian
710032, China.E-mail:wangshen@fmmu.edu.cn)
[ ABSTRACT] AIM:ToinvestigatethedynamicinfluenceofzanthoxylumseedoilA2(ZSOA2)onNF-кBsigna-
lingpathwayandinflammatoryfactorinpulmonarytissueofasthmaticmice.METHODS:Thesuspensoid(0.2mLcontai-
ning20% albuminhydroxideand10% ovalbumin)wasadministeredbyintraperitonealinjectiontosensitizetheBALB/c
miceonday1, then0.4% ovalbuminsolution(50 μLinphosphatebuferfluid)wasdrippedintotherespiratorytract
throughnasalcavitytoestablishtheasthmaticmousemodel.Afterdrippedovalbuminfor24h, 48 h, 3d, 7dand14d,
themicewerekiledatspecifiedtimepoints.Thecontentsofinterleukin-4 (IL-4), interleukin-5(IL-5)andinter-
feron-γ(IFN-γ)inbronchoalveolarlavagefluid(BALF)weredeterminedbyELISA.Thepathologicalchangesofthe
lungtissueswereobservedwithHEstaining.TheinflammatorycelcountswereconductedbyEosinstaining.Theprotein
levelsofadhesionmoleculeandthemoleculesofNF-κBsignalingpathwayinlungtissuesweredeterminedbyWestern
bloting.RESULTS:InZSOA2 treatedmice, thepathologicalinjuryofthelungwassignificantlyattenuatedascomparedto
themodelmice, thecountsofeosinophilsandlymphocyteswerereducedobviouslyinlungbronchialareaofasthmaticmice
atalobservedtimepoints(P<0.05).ThelevelsofIL-5andIL-4decreasedandIFN-γincreasedinBALF.There-
sultsofWesternblottingshowedthatZSOA2 down-regulatedtheproteinlevelsofintercellularadhesionmolecule-1, vas-
cularceladhesionmolecule-1, IkappaBkinasealpha-αandphosphorylationinhibitory-κB.ZSOA2 alsoup-regula-
·1120· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010, 26(6):1120-1126
tedtheproteinlevelsoftumornecrosisfactorreceptor1andphosphorylationnuclearfactor-kappaBinlungtissueatalob-
servedtimepoints.CONCLUSION:ZSOA2 hastherapeuticeffectonasthmabydown-regulatingtheproteinexpressionof
IκB-β andp-IκB, inhibitingthereleasesofcytokinesandchemotacticfactors, andatenuatingtheinfiltrationofinflam-
matorycellsinthelungsofovalbuminchallengedasthmamice.
[ KEYWORDS] Zanthoxylumseedoil;Asthma;NF-kappaB;Interlukin-5;Intercellularadhesionmolecule-1
核因子 -κB(nuclearfactor-kappaB, NF-κB)
为广泛生物活性的核转录因子 ,受多种因素的刺激
而激活 ,激活后可促进细胞因子 、黏附因子和趋化因
子等基因转录 ,参与调控的基因几乎囊栝了与哮喘
发病有关的炎症基因表达 [ 1] 。支气管活检哮喘患者
和卵白蛋白(ovalbumin, OVA)诱导哮喘小鼠肺组织
切片揭示了 NF-κB活化参与哮喘炎症反应历
程 [ 2, 3] 。Yang等 [ 4] 发现 NF-κB是通过促进(inter-
leukin-5, IL-5)转录和翻译来影响嗜酸性粒细胞
(eosinophil, EOS)向呼吸道浸润的 , NF-κB基因敲
除小鼠肺组织因 IL-5、嗜酸性粒细胞活化趋化因子
(eotaxin, EON)缺乏而导致变应性 EOS减少。 NF-
κB转录调节的连接位点位于许多促炎细胞因子与
免疫调节因子的启动区 , 对诱导重症疾病的炎性反
应起着重要作用 [ 5] 。基于哮喘性炎症与肺组织中
NF-κB的活性增加密切相关 ,探讨 NF-κB激活与
抑制炎症因子是有意义的。椒苜油A2 (zanthoxylum
seedoilA2 , ZSOA2)是从芸香科植物刺异叶花椒(zan-
thoxylumbunggeanummaxim)种子分离的提取物 ,对
哮喘治疗有一定疗效 [ 6] ,椒苜油治疗变应性疾病和
哮喘的作用评价和机制还不甚清楚 , 本文观察了
ZSOA2对 OVA诱导哮喘小鼠肺组织炎性反应和 NF-
κB信号通路蛋白表达的影响。
材 料 和 方 法
1 材料
1.1 动物 清洁级雌性 BALB/c小鼠 240只 ,质量
(20.0±2)g(由第四军医大学动物中心提供),动物
合格证号:陕医动证字 SCXK(军)2002-05。
1.2 试剂与药物 白细胞介素 -4(interleukin-4,
IL-4)、IL-5与干扰素 -γ(interferon-γ, IFN-
γ)ELISA检测试剂盒 、Rabbit抗 -肿瘤坏死因子受
体(tumornecrosisfactorа, TNF-R1)购自 Boster;Rab-
bit抗 -磷酸化核因子 -κB(phosphorylationnuclear
factor-kappaB, p-NF-κB)购自 SantaCruz;Rabbit
抗 -细胞间黏附分子(intercelularadhesionmolecule
-1, ICAM-1)、血管细胞黏附分子 (vascularcel
adhesionmolecule-1, VCAM-1)、NF-κB、核因子
-κB抑制蛋白 -β(inhibitory-κB-β , IκB-β)、磷
酸化核因子 -κB抑制蛋白(phosphorylationinhibitory
-κB, p-IκB)、核因子抑制蛋白 -激酶(IkappaB
kinasealpha, IKK-α)、山羊抗兔 HRP标记 IgG购
自 SantaCruz;SaperECLPlas超敏发光液 、聚偏二氟
乙烯(PVDF)膜购自 Milipore;OVA购自 Sigma;氢氧
化铝粉末 Al(OH)3由上海天平胃舒平制药厂生产;
焦碳酸二乙酯(DEPC)购自 Soiarbio;ZSOA2购自西安
前卫药业有限公司。
1.3 仪器 LeicaDMLB生物显微镜;Miaspro图像
分析系统由四川大学计算机图像图形研究所提供;
Travs-BlotSD半干转膜仪 、酶标仪购自 Bio-Rad;
AlphaImager(IS-2200)数字凝胶成像系统购自 USA
Alpha。
2 方法
2.1 哮喘模型建立 小鼠置 20-24 ℃通风良好 ,
相对湿度 45%-65%的实验室内饲养 7d后随机分
为对照组 、哮喘组 、ZSOA2 3组 ,哮喘组与 ZSOA2组均
腹腔注射 20% Al(OH)3 +10% OVA混合液
0.2mL/mouse致敏 ,第 8 d再加强注射上述混合液
0.05mL/mouse致敏 ,对照组用生理盐水代替混合
液 。 2周后 ,每组各取 10只 ,脱臼处死 ,打开胸腔 ,剥
离气管连同肺脏 , 结扎摘取右肺下叶 , 以 0.1%
DEPC水配制 10%甲醛溶液固定 ,常规石蜡包埋切
片行 HE染色 ,剩余组织从气管中插入软管结扎 ,从
软管内注入生理盐水 1 mL,停留 30 s后抽出 ,反复 3
次 , 收集肺泡灌洗液 (bronchoalveolarlavagefluid,
BALF)置试管中 ,收集回收率为 81%, 离心 10 min
(1 500 r/min),吸取上清液 ,置 -80 ℃保存待测细胞
因子(为基础点)。其余哮喘组和 ZSOA2小鼠分别置
呼吸道滴入 50 μL(0.4% OVA磷酸缓冲液 pH=
7.4),对照组小鼠滴入 50 μL生理盐水诱发哮喘 。
30min后 ,对照组和哮喘组小鼠灌胃(ig)食用油 10
mL·kg-1 , ZSOA2组小鼠 igZSOA2 2.02 g·kg-1 ,每天
1次 ,分别在 24 h、48 h、3 d、7 d、14 d5个时点同基
础点方法采集样本并保存 。每时点每组另取 4只 ,
分别脱臼处死 ,打开胸腔 ,剥离气管连同心 、肺脏 ,从
左心房注预冷生理盐水 5mL冲洗肺脏并剥离 ,用铝
·1121·
箔纸包裹置 -80 ℃保存。
2.2 ELISA法测 BALF液中 IL-4、IL-5、IFN -γ
含量 照 ELISA试剂盒内说明书操作 ,经自动酶标
仪(450 nm)测定各孔的吸光度(absorbance, A),依标
准曲线计算出样本中的 IL-4、IL-5、IFN-γ含量。
2.3 肺组织中 EOS、淋巴细胞(lymphocyte, LY)计
数 应用 HE染色法 , EOS核呈蓝色 , 颗粒呈桔红
色 , LY核呈蓝色 ,胞浆少 ,呈月牙形 。切片在低倍显
微镜下确定支气管区域 ,输入细胞图像分析系统 ,在
×100倍光镜下每张切片组织随机选取 25个视野进
行 EOS与 LY计数 。
2.4 Westernbloting检测肺组织 NF-κB/IκB蛋白
的表达 取冻存于 -80 ℃的肺组织 ,分别置于玻璃
匀浆器中加入 1 mL组织裂解液(裂解液组成:50
mmol/LTris, 150 mmol/LNaCl, 5 mmol/LEDTA,
0.1%SDS, 1% NP-40, 5 mg/Laprotinin, 2 mmol/L
PMSF),在冰浴中反复碾磨使组织均匀地分散在裂解
液中 ,冰浴上裂解 30 min。 4 ℃ 12 000 r/min离心
20 min,上清液即为组织蛋白提取液 , BCA法定量 ,
并调整各上样量 25 μg/泳道 ,经 12% SDS-PAGE
电泳 , 半干转膜 、封闭 ,分别与目的抗体 (1∶300 -
500)杂交 4℃孵育过夜 ,加入辣根过氧化物酶标记
的 II抗(1∶3 000-5 000), 37 ℃孵育 50-70 min,化
学发光 、显影 、压片 ,采用 Gel-proAnalyzer(Bio-
Rad)软件计算目的蛋白表达的灰度值 ,以实验组目
的条带灰度值 /24 h哮喘组目的条带灰度值的比值
为蛋白表达水平 。
3 统计学处理
用 SPSS10.0软件进行处理 ,数据采用 ANOVA
单因素方差分析 ,组间比较用 t检验 ,计量数据以均数
±标准差( x±s)表示 , α=0.05为显著性检验水准。
结 果
1 ZSOA2对各时点哮喘小鼠肺组织形态学的影响
光镜检视可见对照组肺组织结构正常 ,支气管
壁 、肺泡结构 、肺小血管及毛细血管形态未见明显异
常 ,偶见炎细胞散在。哮喘组 24 h和 48 h时点 ,肺
组织可见支气管及血管周围炎性细胞浸润 , 以
EOS、LY和中性粒细胞为主 。 48 h后炎细胞浸润增
加 ,肺血管通透性增加 ,血管周围有水肿现象。支气
管上皮细胞肿胀 、脱落 ,黏膜下黏液腺肥大(黏膜及
黏膜下层水肿明显),肺泡壁明显增厚 ,肺泡腔变小 ,
支气管平滑肌显著增生;7 d气道上皮多处断裂或脱
落 , 上皮纤毛改变 、杯状细胞增多 , 基底膜轻度增厚
且形态不规则 , 细支气管平滑肌轻度肥大 。 14d时 ,
肺组织炎细胞浸润有所减轻 ,支气管管壁轻度增厚 ,
气管和支气管黏膜可见大量杯状细胞化生 ,周围有
大量淋巴滤泡形成 。ZSOA2组各时点肺组织病理学
损伤程度均明显减轻 ,表现在气道内炎症细胞数减
少 ,支气区炎细胞浸润下降 ,肺泡壁无明显增厚 ,肺
泡腔略变小 ,平滑肌略有增厚 , 14 d有淋巴滤泡形
成 ,但比哮喘组明显减轻 ,见图 1。
Figure1.EffectofZSOA2 onpathologyhistologyofpulmonarytissueinasthmaticmiceateachtimepoint(×200).A:control;B:
asthma;C:ZSOA2 treatment.1:24h;2:48 h;3:72 h;4:7 d;5:14d.
图 1 ZSOA2对时点哮喘小鼠肺病理组织学的影响
·1122·
2 各组哮喘小鼠肺 BALF中 IL-5、IL-4、IFN-γ
的测定结果
基础值显示小鼠盐水致敏组 BALF中 IL-5含
量低于 OVA致敏组(P<0.05);IFN-γ含量高于
OVA致敏组(P<0.05)。与对照组比较 ,哮喘组小
鼠各时点 BALF中 IL-5、IL-4含量明显增加(P<
0.05), 7 d达峰值 , IFN-γ含量明显降低 (P<
0.05)。与哮喘组比较 , ZSOA2组在 48 h后 IL-5含
量明显降低(P<0.05), IL-4含量在各时点显著降
低(P<0.05), IFN-γ含量略有增加但无明显差异
(P<0.05),见图 2。
Figure2.EffectofZSOA2 onthelevelsofIL-5, IL-4, IFN-γinBALFofasthmaticmiceateachtimepoint. x±s.n=10.＊ P<
0.05vsasthmagroup.
图 2 ZSOA2对各时点哮喘小鼠肺 BALF中 IL-5、IL-4、IFN-γ的影响
3 ZSOA2对各时点哮喘小鼠肺组织 EOS、LY数的
比较
基础值显示盐水致敏组与 OVA致敏组肺组织
EOS细胞数无明显变化 ,而 OVA致敏组可使 LY数
增加(P<0.05)。与对照组比较 ,哮喘组各时点小鼠
肺组织 EOS、LY数显著增加(P<0.05)。与哮喘组
比较 , ZSOA2组各时点小鼠肺组织 EOS、LY数显著减
少(P<0.05),见图 3。
Figure3.EffectofZSOA2 onEOSandlymphocytecountsinlungbronchialareaofasthmaticmiceateachtimepoint. x±s.n=8.＊P
<0.05 vsasthmagroup.
图 3 ZSOA2对各时点哮喘小鼠肺组织 EOS、LY数的影响
4 对各时点哮喘小鼠肺组织 ICAM -1、VCAM-
1、TNF-R1蛋白表达的影响
对照组各时点小鼠肺组织 ICAM-1、VCAM-1、
TNF-R1表达基本一致 。与对照组比较 ,哮喘组各
时点肺组织 ICAM-1、TNF-R1表达显著上调(P<
0.05), 7d达峰值随后降低;24h、48h、3dVCAM-
1表达显著上调(P<0.05), 48 h达峰值 。与哮喘组
比较 , ZSOA2组各时点肺组织 ICAM-1表达显著下调
(P<0.05);在 24h、48 h、3dVCAM-1表达显著下
调(P<0.05);各时点肺组织 TNF-R1表达随着时
间延长明显上调(P<0.05),见图 4。
5 对各时点哮喘小鼠肺组织 NF-κB蛋白表达的影
响
对照组小鼠各时点肺组织 NF-κB65、p-NF-
κB65蛋白表达基本一致。与对照组比较 ,哮喘组 NF
-κB65、p-NF-κB65表达在各时点明显下调(P<
0.05)。与哮喘组比较 , ZSOA2组 NF-κB65表达随
着时点逐渐上调 , 7 d有明显差异(P<0.05);p-NF
-κB65表达在 48 h后显著上调(P<0.05),见图 5。
6 各组哮喘小鼠肺组织 IκB-β蛋白表达的影响
对照组小鼠各时点肺组织 IKK-α、IκB-β、p-
IκB表达基本一致。与对照组比较 ,哮喘组 3 d后小
·1123·
鼠肺组织 IκB-β、p-IκB蛋白表达显著上调 (P<
0.05)。与哮喘组比较 , ZSOA2组各时点小鼠肺组织
IKK-α表达显著下调(P<0.05);在 3 d后小鼠肺
组织 p-IκB表达显著下调(P<0.05), IκB-β表达
在 24h显著上调(P<0.05), 3d后下调有显著差异
(P<0.05),见图 6。
Figure4.EffectofZSOA2 ontheexpressionofICAM-1, VCAM-1, TNF-R1inlungtissueofasthmaticmiceateachtimepoint. x
±s.n=8.＊P<0.05vsasthmagroup.
图 4 ZSOA2对时点哮喘小鼠肺组织 ICAM-1、VCAM-1、TNF-R1蛋白表达的影响
Figure5.EffectofZSOA2 ontheproteinexpressionofNF-κB65、p-NF-κB65inlungtissueofasthmaticmiceateachtimepoint.
x±s.n=8.＊P<0.05 vsasthmagroup.
图 5 ZSOA2对时点哮喘小鼠肺组织 NF-κB65、p-NF-κB65蛋白表达的影响
讨 论
支气管哮喘是由多种炎症细胞参与的慢性变态
反应性疾病 ,炎性细胞通过合成和释放多种炎症介
质及细胞因子而诱发哮喘发作 ,辅助性 TLY控制哮
喘的炎症反应[ 7] 。 EOS是参与哮喘气道炎症最主要
的效应细胞 , EOS募集入肺并释放损伤性介质是气
道炎症中心环节 ,在气道炎症部位释放碱基蛋白 、阳
离子蛋白 、白三烯等炎性物质在组织损伤和临床症
状的发生中起重要作用[ 8, 9] 。 IL-5与 EON在哮喘
中选择性调节 EOS迁移 ,同时内皮细胞及细胞外基
质表达 VCAM-1、ICAM-1对 EOS浸润起着重要作
用 [ 10] 。本实验显示各时点哮喘组小鼠肺支气管区
EOS和 LY数显著增多 ,肺组织 ICAM-1和 VCAM
-1蛋白表达增加 ,这 2种黏附分子促进 EOS和 LY
从毛细血管进入肺组织 ,加强炎症细胞浸润 , BALF
液中 IL-4、IL-5含量显著增加和 IFN-γ水平下
降 ,气道内 EOS和 LY增加 , BALF内存有大量炎症
细胞和上皮细胞 ,提示 IL-5、EON是促进激活 EOS
聚集的因子 。IFN-γ来自 Th1细胞 ,哮喘时 IFN-γ
水平下降其抑制 Th2分化的作用减弱 ,间接促进了
功能亢进。 TNF-R1是哮喘炎症过程中重要的启动
·1124·
Figure6.EfectofZSOA2 ontheproteinexpressionofIKK-α, IκB-β inlungtissueofasthmaticmiceateachtimepoint. x±s.n=
8.＊P<0.05vsasthmagroup.
图 6 ZSOA2对各时点哮喘小鼠肺组织 IKK-α、IκB-β 蛋白表达的影响
因子 , 可诱导多种与炎症有关的细胞因子 、酶及受体
的合成和表达。它还可以激活 NF-κB信号通路 ,
在诱导哮喘多细胞相互作用中发挥重要作用 [ 11] 。本
实验结果显示 OVA诱导这些炎性因子并在小鼠肺
气道和肺泡内释放 ,造成哮喘免疫原气道变应性炎
症的病理过程是支气管黏膜损伤的细胞基础。
ZSOA2干预 OVA诱导小鼠哮喘肺组织炎性反
应 ,各时点小鼠气道内炎性细胞浸润数显著降低 ,
BALF液中 IL-4、IL-5含量明显下降和 IFN-γ水
平增加 ,肺组织支气管区 、肺泡区浸润炎性细胞 EOS
和 LY密度降低 , 肺组织病理学改变明显减轻 。
ZSOA2抑制 EOS、LY浸润肺组织 ,这种抑制作用与抑
制 IL-4、IL-5分泌有关 ,抑制 EOS聚集与激活;也
与肺组织内 ICAM-1、VCAM-1表达降低相关 。
ZSOA2提高 OVA小鼠肺内 IFN-γ水平 ,对 Th1/ Th2
分化失衡有微量调节作用 。ZSOA2降 IL-4、IL-5作
用途径可能通过抑制巨噬细胞 、EOS、LY激活浸润而
实现的 。 ZSOA2增加肺组织内 TNF-R1表达 , 由于
TNF-R1诱导多种与炎症有关的细胞因子 、酶及受
体的合成和表达 ,也是细胞凋亡受体 ,它还可以激活
NF-κB信号通路 , 在诱导哮喘多细胞相互作用中
发挥重要作用 ,这可能是 ZSOA2抑制哮喘炎症反应或
是促进 EOS凋亡重要机制。
NF-κB参与调控的基因几乎囊栝了所有与哮
喘发病有关的炎症基因表达 ,同时参与调节炎性细
胞凋亡 [ 12] 。支气管活检哮喘患者和 OVA诱导哮喘
小鼠肺组织切片揭示了 NF-κB活化 [ 2, 3] 。 Yang
等 [ 4]发现 NF-κB是通过促进 IL-5转录和翻译来
影响 EOS向呼吸道浸润的 , NF-κB基因敲除小鼠
肺组织因 IL-5、EON缺乏而导致变应性 EOS减少 。
本实验发现各时点哮喘组小鼠肺组织内 NF-κB65、
p-NF-κB65表达在 3 d明显低于对照组 ,但支气
管周围区炎性细胞浸润密度 、BALF液中 IL-4、IL-
5含量是显著增加。而对照组炎症细胞和前炎症因
子水平却明显低于哮喘组 ,实验结果与文献报道不
吻 。实验发现小鼠哮喘第 72 h、7d、14 d肺内 IкB-
β表达明显增加 ,这种增加与 IкB-β激酶 IKK-α
表达增加相平行 , 24和 48 h与对照组相似 。IкB的
磷酸化 、水解是 NF-κB信号转导的特征。引发 IкB
磷酸化的是 IкB激酶 -α(IKK-α), IкB-β是 NF-
κB活化抑制蛋白。哮喘 72 h、7 d炎症反应加重 ,
IKK-α表达显著增加 ,此时 IкB-β表达也相应增
加 , p-IкB蛋白表达逐渐增加 。IKK-α激活 IкB使
其磷酸化 , p-IкB表达增加 , NF-кB多聚体解离 NF
-κB65暴露入核导致相应炎症因子基因转录增加 。
哮喘组小鼠肺组织 p-IкB表达增加而 p-NF-
κB65表达降低 ,这可能是 NF-κB65暴露入核导致
下降 ,推测哮喘发生时 NF-κB信号通路激活是通
过 IKK-α激活 IкB磷酸化作用参与了迟发性应激
哮喘炎症历程 ,哮喘肺组织 IKK-α激活 IкB磷酸化
·1125·
导致 NF-κB信号通路的 p-NF-κB65表达水平降
低是其特点 。本实验所测炎症因子水平和黏附分子
表达增加 ,炎症细胞浸润和组织学病理性损伤为此
提供了支持 。ZSOA2干预 OVA诱发小鼠哮喘对肺组
织 NF-κB65表达无影响 , 但明显增加 p-NF-
κB65表达。 ZSOA2显著降低 IKK-α表达 , IкB-β
在 24h显著增加随后逐渐降低 , p-IкB蛋白表达显
著下降 ,胞内 P50-P65 -IкB多聚体稳定性增加 ,
IкB磷酸化蛋白水平下调而抑制 NF-κB65暴露入
核 , IL-4、IL-5因子水平下降 ,黏附分子 ICAM-
1、VCAM-1表达下降 ,进入肺组织内变应性 EOS减
少 ,病理组织学结果显示炎症损伤程度明显减轻 。
ZSOA2治疗 OVA诱发小鼠哮喘是下调肺组织内 NF-
кB信号通路中 IKK和 p-IкB表达 ,抑制细胞因子
和趋化因子的释放与产生 ,使炎性细胞浸润程度减
弱 ,而产生治疗哮喘的作用 。
[参 考 文 献 ]
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