全 文 ：山东科学
SHANDONG SCIENCE
第 24 卷 第 4 期 2011 年 8 月出版
Vol． 24 No． 4 Aug． 2011
收稿日期:2011-02-28
作者简介:王少杰(1963 －) ，男，副研究员，研究方向为工业生物过程分析与调控。
* 通讯作者，Email:xulingchuan518@ sina． com
文章编号:1002-4026(2011)04-0015-03
不同加工方法的棠梨叶中总多糖含量测定
王少杰1，张岭苓2，徐凌川3* ，刘玉红3，蒋海强3
(1．山东省科学院生物研究所，山东 济南 250014;2．湖南省白沙溪茶厂有限责任公司，
湖南 安化 413515;3．山东中医药大学，山东 济南 250355)
摘要:用苯酚 －硫酸法测定了棠梨叶两种加工制品的多糖含量。以葡萄糖为对照品，在波长 490 nm 处测定吸光度，在
0． 01968 ～ 0． 0984 mg范围内吸光度与被测含量具有良好的线性关系。回收实验表明平均回收率为 99． 02%(n = 5)，相
对标准偏差 3． 34%。在此条件下，不同加工方法所得棠梨叶总多糖含量测定结果分别为:日晒夜露传统制法 7． 82%，渥
堆变红后日晒法 5． 27%。实验证明:棠梨叶总多糖含量较高，可作为富含多糖的药物资源加以开发利用。
关键词:棠梨叶;总多糖;苯酚硫酸法;含量测定
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A
Content determination of total polysaccharides in leaves of Pyrus
betulaefolia Bge． from different processing methods
WANG Shao-jie1，ZHANG Ling-ling2，XU Ling-chuan3* ，LIU Yu-hong3，JIANG Hai-qiang2
(1 Biology Institute，Shandong Academy of Sciences，Jinan 250014，China;2 Hunan Provincial Baishaxi Tea Industry
Co． Ltd．，Anhua 413515，China;3 Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)
Abstract ∶ We determined polysaccharides content of two manufactures from the leaves of Pyrus betulaefolia Bge． using
phenol-vitriol method． With the contrast，glucose，we measured their absorbency at the wavelength of 490 nm． A good
linear relationship exists between the absorbency and the determined content in the range of 0． 01968 ～ 0． 0984 mg．
Recovery experiment indicates that the average recovery rate is 99． 02 % (n = 5)and that RSD is 3． 34 %． Determination
results of total polysaccharide contents from different processes are 7． 82% for that prepared by the traditional process of
drying by sun and dewing in night and 5． 27% for that prepared by sun-baked till to red after humidity accumulation．
Experimental results show that the content of total polysaccharide in the leaves of P． betulaefolia Bge． is high． It can
therefore be utilized as a total polysaccharide rich medical resource．
Key words ∶ leaves of Pyrus betulaefolia Bge．;total polysaccharide;method of phenol-vitriol;content determination
棠梨(Pyrus betulaefolia Bge．)为蔷薇科梨属乔木，又称杜梨、海棠梨、野梨子、土梨、灰梨等［1］，在我国分
布较广，资源丰富。据《本草纲目》记载，棠梨味酸、甘、涩、寒;无毒。烧熟食用，可治泄泻痢疾。《救荒本草》
记载，杜梨叶微苦，嫩叶炸熟，水洗淘净，用油、盐调拌可以食用，也可蒸晒后代茶饮。湖南安化当地人有端午
后采收棠梨叶的传统习惯，将鲜叶采摘回家后放于院中，日晒夜露，约达 20 天后，叶片自然变红干燥，悬挂收
藏于灶屋，夏季熬煮饮用，为传统制法;现也有经过渥堆发酵使鲜叶变红，再日晒干燥制成干叶的。两种制法
山 东 科 学 2011 年
所得干叶经熬煮使用，均能达到降暑、解渴、防肠胃不适的效果，其汤色红亮清澈，口感甘甜、润和，多年来一
直是安化地区除了茶以外最传统的饮料之一。本文测定并比较了棠梨叶两种不同加工方法的总多糖含量，
旨在为棠梨叶资源开发与利用提供基本资料。
1 材料、试剂与仪器设备
1． 1 材料与试剂
样品:棠梨叶 1 号为日晒夜露传统制法干燥品，2 号为渥堆发酵后晒干品，均为湖南省白沙溪茶厂有限
责任公司质检部提供，粉碎后过 40 目筛;无水葡萄糖(中国医药集团上海化学试剂公司，批号 20090514)、苯
酚(北京益利精细化学品有限公司，批号 20080325)。
1． 2 仪器设备
Varian Cary 100 紫外 －可见分光光度计(美国瓦里安公司) ;KQ-500E 超声波清洗仪(江苏昆山超声仪
器有限公司) ;FA1104 电子天平(上海精密仪器公司)。
2 实验方法
2． 1 总多糖的提取［2 － 3］
连续称取 1 号样品和 2 号样品各 1g，各做三份平行，分别精密称定，每份用 95%乙醇超声提取脱脂
30 min，再用 20 倍量蒸馏水 30°C超声提取 30 min，共提取 3 次。提取液滤过，滤液合并，转于 500 mL 容量
瓶，定容至刻度，即为供试液。
2． 2 测定方法［4 － 5］
采用苯酚 －硫酸法测定多糖含量。精密称取干燥至恒重的葡萄糖 24． 6 mg，加适量蒸馏水溶解，转移至
500 mL量瓶中，加水至刻度，即得葡萄糖标准品溶液。称取 5 g 重蒸苯酚，用适量重蒸水溶解，定容至
100 mL，得 5%苯酚溶液。以葡萄糖为标准品，采用分光光度法对棠梨叶的不同加工样品进行含量测定。
2． 3 标准曲线的制备［6 － 7］
分别量取葡萄糖标准溶液 0． 4，0． 8，1． 2，1． 6，2． 0 mL，各以蒸馏水水补至 2 mL，然后加入 5%的苯酚试
剂 1 mL，再迅速加入浓硫酸 5 mL，静止 10 min，摇匀，室温放置 20 min，以 2 mL蒸馏水按同样显色操作为空
白，在 λ490 nm处测定吸光度 A。以吸收度 A为纵坐标，葡萄糖浓度 C为横坐标，得标准曲线。
2． 4 样品含量测定
取样品溶液 0． 5 mL，蒸馏水补至 2 mL，按标准曲线制备方法之操作，测定吸收度，根据标准曲线和样品
浓度计算含量。
3 结果与分析
3． 1 最大吸收波长的选择
取 2． 2 项下的葡萄糖标准品溶液按照 2． 3 中步骤，加入 5%的苯酚和浓硫酸，室温显色后，冷却，在波长
为 200 ～ 600 nm 范围内，用紫外可见分光光度计扫描，测得最大吸收波长为 490 nm。该反应原理是多糖在
浓硫酸的作用下能水解生成单糖，并迅速脱水形成糠醛衍生物，然后与苯酚缩合成有色化合物。因此确定在
490 nm处测定其吸光度。
3． 2 苯酚 －硫酸法测定多糖含量的标准曲线
以吸收度 Y 为纵坐标，葡萄糖的浓度 X 为横坐标，得回归方程:Y = 6． 1337X + 0． 0859，相关系数
r = 0． 9995，表明葡萄糖在 0． 01968 ～ 0． 0984 mg范围内具有较好的线性关系，见图 1。
3． 3 精密度实验
取同一样品液，依法测定 5 次，计算样品中多糖含量，相对标准偏差为 1． 3%(n = 5)。
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第 4 期 王少杰，等:不同加工方法的棠梨叶中总多糖含量测定
图 1 葡萄糖标准曲线图
Fig． 1 A glucose standard curve
3． 4 重现性实验
取样品 5 份，各 1 g，精密称定，提取后进行多糖
的含量测定，计算相对标准偏差为 3． 12%(n = 5)。
3． 5 稳定性实验
对同一供试品液，苯酚 －硫酸法显色后，分别于
0，10，20，40，60 min 时，在 490 nm 处测定吸收度值，
计算相对标准偏差为 1． 13%(n = 5) ，表明吸收度值
在 1 h内基本稳定。
3． 6 加样回收率实验
精密称取已知含量的样品 5 份，分别加入一定量
的葡萄糖对照品，按 2． 3 和 2． 4 项下方法操作进行含
量测定，将测定结果扣除样品中多糖的含量，与加入
对照品的比为加样回收率，结果为 99． 02%，相对标准偏差3． 34%。
3． 7 样品多糖含量
按照上述 2． 3 和 2． 4 项下内容操作，测得 1 号样品多糖含量平均值 7． 82%;2 号样品 5． 27%。
4 讨论
4． 1 渥堆发酵法发酵后总多糖含量有所降低
本实验以葡萄糖为对照品，采用苯酚 －硫酸比色法对两种不同炮制方法制出的棠梨叶进行总多糖含量
测定，实验证明传统制法棠梨叶总多糖含量为 7． 82%，渥堆发酵后晒干品为 5． 27%，说明棠梨叶渥堆发酵后
总多糖含量有所降低，其结果与已经完成的棠梨叶中根皮苷的含量测定结果有相似之处［8］。
4． 2 用苯酚 －硫酸法测定棠梨叶多糖含量更合理
结果表明本实验采用的苯酚 －硫酸法所测得的多糖含量低于蒽酮硫酸比色法［9］，原因是蒽酮硫酸比色
法所测量的值实际上包括样品中全部可溶性碳水化合物的总量。刘晓涵［10］经过统计学分析认为这两种方
法的差异具有统计学意义，因此，在棠梨叶多糖的含量测定中用苯酚 －硫酸法更合理，所得结果符合实际情
况。多糖含量测定值与不同的提取方法也有密切关系，在实际工作中要注意选择最佳方案，应注重效率和经
济节能。
4． 3 棠梨叶中的多糖成分具有广泛的药理作用
实验证明棠梨叶中含有丰富的多糖类成分，多糖具有广泛的药理作用，如作为免疫调节剂，能够激活巨
噬细胞、T淋巴细胞、LAK细胞等多种免疫细胞，促进细胞因子生成，活化补体;具有抗肿瘤、抗病毒、抗感染、
抗消化性溃疡、抗氧化、防衰老、降血糖、降血脂、保肝等作用［11 － 12］，而且毒性相对较低，因此，多糖作为一类
有效物质越来越受到医药工作者的重视。目前对于棠梨叶而言，黄酮类的研究已有较为详尽的报道，但对其
多糖类的研究有待于深入进行，这对于棠梨叶在药物和功能食品方面的开发和利用是不可或缺的。
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