全 文 ：梧桐花黄酮的提取及其抑菌、抗病毒效果
　 　 王尊民，高秀妹，赵庆友，赵昌亮，左雪梅，梁漫飞，崔国林，杨世发，钟世勋，朱瑞良＊　（山东农业大学
　　　动物科技学院 山东省动物生物技术与疫病防治重点实验室，山东 泰安２７１０１８）
摘要：以１０倍原料质量的６０％乙醇在７５℃条件下对梧桐花进行浸提，并对总黄酮的含量进行了测定。为了研究梧
桐花总黄酮对多种常见畜禽病原的体外抑菌、抗病毒作用，采用培养基打孔法，观察梧桐花总黄酮对致病菌的抑菌作
用；采用试管法，检测梧桐花总黄酮的最小抑菌浓度；采用细胞培养技术，检测梧桐花总黄酮对新城疫病毒（ＮＤＶ）和
法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）在细胞内增殖的抗病毒作用。结果显示，梧桐花总黄酮对供试菌均具有抑菌作用，其中对四联
球菌、八叠球菌、大肠杆菌、禽波氏杆菌的抑菌效果最好，抑菌直径Ｄ＞１６ｍｍ；梧桐花总黄酮在３．１２５ｇ／Ｌ时能够１００％
抑制ＮＤＶ在ＣＥＦ内增殖；梧桐花总黄酮在１．５６３ｇ／Ｌ时能够１００％抑制ＩＢＤＶ在ＣＦＥ内增殖；梧桐花总黄酮在体外质
量浓度为１．５６３ｇ／Ｌ时可直接灭活所有ＮＤＶ；梧桐花总黄酮在体外质量浓度为０．７８１ｇ／Ｌ时可直接灭活所有ＩＢＤＶ。
结果表明，梧桐花总黄酮具有体外抑菌和抗病毒作用，为将其研制成新型、绿色环保的中草药制剂提供了试验基础。
关键词：梧桐花；黄酮；畜禽致病微生物；抑菌；抗病毒
中图分类号：Ｓ８５３．７；Ｓ８５２．６１；Ｓ８５２．６５　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００５－４５４５（２０１３）０２－０２７２－０５
Ａｎｔｉｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｐｈｏｅｎｉｘ　ｔｒｅｅ
ｆｌｏｗｅｒ
ＷＡＮＧ　Ｚｕｎ－ｍｉｎ，ＧＡＯ　Ｘｉｕ－ｍｅｉ，ＺＨＡＯ　Ｑｉｎｇ－ｙｏｕ，ＺＨＡＯ　Ｃｈａｎｇ－ｌｉａｎｇ，ＺＵＯ　Ｘｕｅ－ｍｅｉ，ＬＩＡＮＧ　Ｍａｎ－ｆｅｉ，
ＣＵＩ　Ｇｕｏ－ｌｉｎ，ＹＡＮＧ　Ｓｈｉ－ｆａ，ＺＨＯＮＧ　Ｓｈｉ－ｘｕｎ，ＺＨＵ　Ｒｕｉ－ｌｉａｎｇ＊　（Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏ－
ｒａｔａｒｙ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｄｉｓｅａｓｅ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉ′ａｎ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ２７１０１８，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｐｈｏｅｎｉｘ　ｆｌｏｗｅｒ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ　６０％ｅｔｈａｎｏｌ　ａｓ　１０ｔｉｍｅｓ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｏｅｎｉｘ
ｆｌｏｗｅｒ　ａｔ　７５℃，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｏｅｎｉｘ　ｆｌｏｗｅｒ　ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ．Ｗｅ　ｕｓｅｄ　ｔｈｅ
ｄｒｉｌｅｄ　ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ａｇａｒ　ｍｅｄｉｕｍ　ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｏｆ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂａｃｔｅ－
ｒｉａ　ｔｏ　ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ　ａｎｄ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｏｅｎｉｘ　ｆｌｏｗｅｒ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｍｍｏｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ
ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ，ｂｙ　ｄｏｕｂｌｅ　ｄｉｌｕｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｗｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｍｉｎｉｍａｌ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ａｇａｉｎｓｔ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ．Ｗｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｃｅｌ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｐｈｏｅｎｉｘ　ｆｌｏｗｅｒ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ　ｋｉｌｉｎｇ　ＮＤＶ　ａｎｄ　ＩＢＤＶ，ａｓ　ｗｅｌ　ａｓ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｎｇ　ｔｈｅｉｒ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａ－
ｔｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｗａｓ　ｎｏｔａｂｌｅ．Ａｍｏｎｇ
ｔｈｅｍ，ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ａｇａｉｎｓｔ　Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ　ｔｅｔｒａｇｅｎｕｓ，Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ，ｓａｒｃｏｍａｓ，Ｂｏｒ－
ｄｅｔｅｌｌａ　ａｖｉｕｍ ｗａｓ　ｂｅｓｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｉａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ｗｅｒｅ　ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　１６ｍｍ．Ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎ－
ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｗａｓ　３．１２５ｇ／Ｌ，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＤＶ　ｉｎ　ＣＥＦ　ｃｏｍ－
ｐｌｅｔｅｌｙ；ｗｈｅｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｗａｓ　１．５６３ｇ／Ｌ　ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＩＢＤＶ
ｉｎ　ｔｈｅ　ＣＥＦ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ；ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗａｓ　１．５６３ｇ／Ｌ，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｋｉｌ　ａｌ　ＮＤＶ
ｄｉｒｅｃｔｌｙ；ｗｈｅｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｗａｓ　０．７８１ｇ／Ｌ，ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｋｉｌ　ａｌ　ＩＢＤＶ　ｄｉｒｅｃｔｌｙ．
Ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗｅｒ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｏｅｎｉｘ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｈａｖｅ　ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ　ａｎｄ　ａｎｔｉｖｉｒａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ，ａｎｄ　ｐｒｏｖｉｄｅ　ａ　ｂａｓｉｓ　ｏｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　ｏｆ　ａ　ｎｅｗ　ｇｒｅｅｎ　ｈｅｒｂａｌ　ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ．
收稿日期：２０１１－１２－０２
基金项目：山东省泰安市科技发展专项计划资助项目（２０１０３００１）
作者简介：王尊民（１９８５－），男，硕士研究生。
＊通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｕｒｌ＠ｓｄａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
２７２ 　中 国 兽 医 学 报　２０１３年２月　第３３卷　第２期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｖｅｔ　Ｓｃｉ　Ｆｅｂ．　２０１３　Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．２　
DOI:10.16303/j.cnki.1005-4545.2013.02.023
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｈｏｅｎｉｘ　ｔｒｅｅ　ｆｌｏｗｅｒ；ｆｌａｖｏｎｅｓ；ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ｔｏ　ｌｉｖｅｓｔｏｃｋ；ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ；ａｎｔｉｖｉｒｕｓ
＊Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｕｒｌ＠ｓｄａｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　梧桐花，又名龙船花，为马鞭草科植物梧桐的
花，其药性味苦、微辛、性平，归经为肺具有很高的药
用价值。研究表明梧桐花中含有芹菜素、熊果酸、β－
谷甾醇和４－甲氧基－７－羟基黄酮等物质。芹菜素具
有抗氧化、抗细菌、抗病毒的作用，具有抑制Ｇ＋菌，
Ｇ－菌和一些耐药菌株作用，对ＤＮＡ病毒如乙型肝
炎病毒、腺病毒和单纯疱疹病毒也具有一定的抑制
作用［１－２］。熊果酸具有抗炎，抗癌，抗溃疡，抗高脂血
症，降血糖，保肝和调节神经活动的作用［３－８］。β－谷
甾醇是调节炎症、免疫反应、抗癌的防御和细胞凋
亡［９－１０］的关键因子。现在梧桐树在我国的种植面积
正在不断扩大，但主要作为观赏类植物进行种植，对
其药用价值并未进行研究，因此本课题对其体外抗
菌、抗病毒进行了研究。
２０世纪抗生素在在我国得到了广泛的应用，但
是随之而来的药物残留问题严重制约了我国畜牧产
品的出口，寻找抗生素替代品等天然绿色的生物制
剂成为畜禽业研究的方向之一。梧桐花作为天然植
物，其来源广泛，且价格低廉，具有无毒副作用的特
点，其主要成分与抗生素相比较具有潜在的应用价
值。本研究针对引起畜禽疾病的几种主要病原菌和
病毒，探讨梧桐花总黄酮的抗菌、抗病毒效果，为进
一步开发梧桐花制剂提供理论基础，从而将我国丰
富的梧桐花资源与畜牧业的健康发展相结合，扩大
梧桐花的利用价值，促进畜牧业朝向绿色环保方向
发展。
１　材料与方法
１．１　 菌 种、病 毒 及 细 胞 　 金 黄 色 葡 萄 球 菌
ＡＴＣＣ２５９２３、四联球菌、八叠球菌、绿脓杆菌、大肠
杆菌、禽波氏杆菌、鸡伤寒沙门菌Ｃ７９－２０、鸡白痢沙门
菌Ｃ７９－１５、蜡样芽胞杆菌、奇异变形杆菌、溶壁微球
菌，均由山东农业大学生物制品实验室保存；鸡新城
疫病毒（Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｖｉｒｕｓ，ＮＤＶ）ＬａＳｏｔａ株与
鸡传染性法氏囊病病毒（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　ｂｕｒｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ
ｖｉｒｕ，ＩＢＤＶ）ＧＸ８／９９株，由山东农业大学生物制品
实验室保存；鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）由孵化到８日
龄的ＳＰＦ鸡胚自己制备。
１．２　药材准备　将采集的梧桐花置于干燥箱中
６０℃干燥，粉碎，过１２０目筛，称取１ｋｇ梧桐花粉末
（分为若干份），１２倍６０％乙醇回流提取３次，每次
２ｈ，合并滤液，减压浓缩，得乙醇粗提物３７９ｇ。取
乙醇粗提物３００ｇ，正丁醇萃取，萃取液减压浓缩，精
确称取芦丁标准品３０ｍｇ，用９５％乙醇溶解，定容于
１００ｍＬ容量瓶中，测定在波长５１０ｎｍ 处吸光
度［１１］，得到回归方程，计算梧桐花总黄酮的含量。
１．３　试剂和仪器　ＤＭＥＭ 细胞培养液，Ｇｉｂｃｏ公
司产品；胰蛋白酶，Ａｍｒｅｓｃｏ公司产品；胎牛血清，购
自上海泛柯生物科技有限公司；二氧化碳培养箱，
Ｔｈｅｒｍｏ公司产品，型号 ＨＥＲＡｃｅｌ　１５０；芦丁标准
品购自中国兽医药品检查所；无水乙醇、正丁醇均购
自天津凯通化学试剂有限公司。
１．４　体外抑菌试验
１．４．１　菌悬液的制备　分别挑取活化后的供试菌
种接种到营养肉汤中，于３７℃培养箱中培养２４ｈ后
作为原菌液，用灭菌生理盐水将各原菌液配制成含
菌数为１０６～１０７　ＣＦＵ／ｍＬ的悬液备用。
１．４．２　打孔法测定抑菌作用　配制营养琼脂平板，
琼脂厚度为４ｍｍ，分别吸取１００μＬ菌悬液，均匀涂
布于培养基表面。用直径７ｍｍ的打孔器在每个平
板上打６个孔，５个孔加入１００μＬ梧桐花总黄酮提
取物，另外１个孔加入等量灭菌生理盐水，每种菌接
种５个板，置３７℃温箱中培养２４ｈ，观察细菌生长
情况，记录抑菌圈直径，并求平均值。
１．４．３　最小抑菌浓度的测定［１２］　采用中药抗菌试
验试管法。取无菌试管４０支，分成４组，每组１０
支，每种供试菌做３组平行，１组阴性对照（只加药
不加菌）。将中草药原液质量浓度稀释至２５ｇ／Ｌ作
为抑菌试验时的起始质量浓度。前３组每管加营养
肉汤培养基２．５ｍＬ，第１管加２．５ｍＬ试验药液混
匀后，依次进行２倍稀释，使１～９管药液浓度分别
为１２．５０，６．２５０，３．１２５，１．５６３，０．７８１，０．３９１，
０．１９５，０．０９７，０．０４９ｇ／Ｌ。除第１０管外其他各管每
管加菌液１２５μＬ，充分混匀后放入恒温振荡培养箱
中，３７℃振荡培养２４ｈ，观察试验结果。药液对照管
第１０管无细菌生长，菌液对照管第１１管有细菌生
长，试验方为有效。以抑制试验菌生长的药液最高
稀释度为该药物对该试验菌的抗菌效价，以其相应
药物浓度为最低抑菌浓度（ＭＩＣ）。
１．５　梧桐花总黄酮体外抗病毒试验
１．５．１　梧桐花总黄酮提取物对ＣＥＦ最大无毒浓度
３７２　中 国 兽 医 学 报　２０１３年２月　第３３卷　第２期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｖｅｔ　Ｓｃｉ　Ｆｅｂ．　２０１３　Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．２
（ＴＣＯ）的测定［１３］　梧桐花总黄酮用维持液配制成
２５ｇ／Ｌ溶液，微孔滤膜滤过，二倍稀释法加入ＣＥＦ
已基本长成单层的９６孔细胞板内，每孔１００μＬ，每
浓度重复５孔，同时设正常细胞对照。在３７℃、５％
ＣＯ２ 条件下培养，每隔１２ｈ显微镜下观察细胞，总
共７ｄ，记录病变情况，与正常细胞相比有无退变、变
形和脱落，并记录梧桐花总黄酮提取物对ＣＥＦ的最
大无毒浓度 （ｍａｘｉｍｕｍ　ｎｏｎ－ｔｏｘｉｃ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，
ＴＣＯ）。
１．５．２　ＮＤＶ、ＩＢＤＶ 对 ＣＥＦ 细胞毒力的测定
（ＴＣＩＤ５０）［１４］　　待ＣＥＦ细胞长成单层后，分别接
种稀释度为１０－１至１０－１１的病毒液，１００μＬ／孔，每个
稀释度接种６个孔，培养６ｄ，每天观察细胞病变
（ＣＰＥ）情况，按Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ［１５］公式计算ＴＣＩＤ５０。
１．５．３　梧桐花总黄酮对 ＮＤＶ和ＩＢＤＶ在细胞内
增殖的抑制作用　待ＣＥＦ基本长成单层细胞时，将
１００ＴＣＩＤ５０／０．１ｍＬ的ＮＤＶ和ＩＢＤＶ分别接种于
９６孔细胞培养板中，每孔０．１ｍＬ，置于３７℃温箱２ｈ。
同时，以ＴＣＯ为各组的起始浓度，梧桐花总黄酮用
维持液做倍比稀释后，作为药液备用。病毒吸附后，
取出温箱的细胞板，弃上清，并用维持液洗２次，再
加入已稀释的各组药液，每孔０．１ｍＬ，每个试验组
设置５个重复，同时设细胞对照组、病毒对照组、以
及金刚烷胺对照组。每日观察１次，记录ＣＰＥ情
况，当病毒对照组达“＋＋＋＋＋”时（注“－”表示无
细胞病变；“＋”表示２０％细胞有病变；“＋＋”表示
４０％；“＋＋＋”表示６０％细胞有病变；“＋＋＋＋”
表示８０％细胞有病变；“＋＋＋＋＋”表示１００％细
胞有病变），终止试验。
１．５．４　梧桐花总黄酮对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ的直接灭活作
用　将预先稀释的药液分别与１００ＴＣＩＤ５０／０．１ｍＬ
的ＩＢＤＶ、ＮＤＶ等体积混合，在３７℃温箱里内２ｈ。
然后接种在长有ＣＥＦ的９６孔细胞培养板里，每孔
０．２ｍＬ，每组５个重复，同时设细胞对照组、病毒对
照组以及金刚烷胺对照组。然后再放入温箱里吸附
２ｈ。取出后倒掉其中液体，用维持液洗２次，每孔
加维持液０．１ｍＬ，置于３７℃、５％ＣＯ２培养箱中培
养，每天观察ＣＰＥ，当病毒对照组的ＣＰＥ达到“＋＋
＋＋＋”时，终止试验。
２　结果
２．１　梧桐花总黄酮含量、最大无毒浓度（ＴＣＯ）及
ＮＤＶ、ＩＢＤＶ的ＴＣＩＤ５０　梧桐花总黄酮含量根据最
终得到的回归方程Ｄ＝０．０１３７　７ｃ＋０．００１　２（Ｒ２＝
０．９９９　５，Ｄ为吸光值，ｃ为梧桐花总黄酮含量）计算
得到黄酮含量为２７．７５ｇ／Ｌ；根据观察细胞病变得
到梧桐花总黄酮 ＴＣＯ为６．２５ｇ／Ｌ；根据表１，由
Ｒｅｅｄ－Ｍｕｅｎｃｈ公式计算出ＮＤＶ和ＩＢＤＶ的ＴＣＩＤ５０
分别为１０－７．５，１０－６．６７。
表１　ＮＤＶ、ＩＢＤＶ对ＣＥＦ毒力的测定（ＴＣＩＤ５０）
病毒
类型
稀释
度
复孔
数
ＣＰＥ
阳性孔数 阴性孔数
阳性孔数
／总孔数
感染
率／％
ＮＤＶ １０－
６　 ６　 ６　 ０　 ６／６　 １００．０
１０－７　 ６　 ４　 ２　 ４／６　 ６６．７
１０－８　 ６　 ２　 ６　 ２／６　 ３３．３
１０－９　 ６　 ０　 ６　 ０／６　 ０．０
ＩＢＤＶ １０－
５　 ６　 ６　 ０　 ６／６　 １００．０
１０－６　 ６　 ５　 １　 ５／６　 ８３．３
１０－７　 ６　 ２　 ４　 ２／６　 ３３．３
１０－８　 ６　 ０　 ６　 ０／６　 ０．０
细胞对照 ０　 ６　 ０　 ６　 ０／６　 ０．０
２．２　抑菌试验结果
２．２．１　抑菌效果　由表２可以看出梧桐花总黄酮
对供试菌均具有抑菌作用，其中对四联球菌、八叠球
菌、大肠杆菌、禽波氏杆菌的抑菌效果最好，抑菌直径
Ｄ＞１６ｍｍ，呈高敏；对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、鸡
白痢沙门菌、鸡伤寒沙门菌、蜡样芽胞杆菌、奇异变形
杆菌的抑菌效果相对较好，抑菌直径１０ｍｍ＜Ｄ＜
１６ｍｍ，呈中敏；产气杆菌抑菌直径Ｄ＜１０ｍｍ，呈
低敏。
表２　梧桐花总黄酮对供试菌的抑菌圈直径（Ｄ） ｍｍ
菌　种 Ｄ 菌　种 Ｄ
金黄色葡萄球菌 １１．２４ 鸡伤寒沙门氏菌 １５．５０
四联球菌 １９．０１ 鸡白痢沙门氏菌 １１．１３
八叠球菌 １７．５４ 蜡样芽胞杆菌 １４．５１
绿脓杆菌 １２．４３ 奇异变形杆菌 １２．４１
大肠杆菌 １６．３４ 产气杆菌 １２．５０
禽波氏杆菌 １７．０７ 无菌水对照 ７．００（孔径）
２．２．２　最小抑菌浓度的测定　梧桐花黄酮对不同供
试菌的 ＭＩＣ差异较大，说明不同细菌对梧桐花黄酮
的敏感性不同，其中对四联球菌最敏感，ＭＩＣ为
１．５６３ｇ／Ｌ，产气杆菌最不敏感，ＭＩＣ为１２．５ｇ／Ｌ（表３）。
表３　梧桐花总黄酮对供试菌的最小抑菌浓度　　　ｇ／Ｌ
菌　种 ＭＩＣ 菌　种 ＭＩＣ
金黄色葡萄球菌 ６．２５０ 鸡伤寒沙门菌 ３．１２５
四联球菌 １．５６３ 鸡白痢沙门菌 ６．２５０
八叠球菌 ３．１２５ 蜡样芽胞杆菌 ３．１２５
绿脓杆菌 ６．２５０ 奇异变形杆菌 ６．２５０
大肠杆菌 ３．１２５ 产气杆菌 １２．５００
禽波氏杆菌 ３１．２５０
４７２ 　中 国 兽 医 学 报　２０１３年２月　第３３卷　第２期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｖｅｔ　Ｓｃｉ　Ｆｅｂ．　２０１３　Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．２　
２．３　抗病毒试验结果
２．３．１　梧桐花总黄酮对 ＮＤＶ和ＩＢＤＶ在细胞内
增殖的抑制作用　由表４可知梧桐花总黄酮能抑制
ＮＤＶ和ＩＢＤＶ 在细胞内的增殖。梧桐花总黄酮
３．１２５ｇ／Ｌ时，能够１００％抑制 ＮＤＶ 在 ＣＥＦ中增
殖；梧桐花总黄酮在１．５６３ｇ／Ｌ时能够１００％抑制
ＩＢＤＶ在 ＣＥＦ中增殖，但与金刚烷胺对照组相比
较，效果较差。
表４　梧桐花总黄酮对ＮＤＶ和ＩＢＤＶ在细胞内增殖的抑制作用
病毒 药物／（ｇ·Ｌ－１） 复孔数
ＣＰＥ
阳性 阴性
阳性孔数
／总复孔数
感染率／％
ＮＤＶ 梧桐花总黄酮
金刚烷胺
６．２５０　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
３．１２５　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
１．５６３　 ５　 １　 ５　 １／５　 ２０
０．７８１　 ５　 ３　 ２　 ３／５　 ６０
０．３９０　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
１．５００　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
ＩＢＤＶ 梧桐花总黄酮
金刚烷胺
６．２５０　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
３．１２５　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
１．５６３　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
０．７８１　 ５　 ２　 ３　 ２／５　 ４０
０．３９０　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
１．５００　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
ＮＤＶ对照
ＩＢＤＶ对照
细胞对照
０．０００　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
０．０００　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
０．０００　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
２．３．２　梧桐花总黄酮对 ＮＤＶ、ＩＢＤＶ的直接灭活
作用　由表５可知，梧桐花总黄酮对ＮＤＶ和ＩＢＤＶ
有直接灭活作用。梧桐花总黄酮在１．５６３ｇ／Ｌ时能
灭活所有的ＮＤＶ；梧桐花总黄酮在０．７８１ｇ／Ｌ时能
灭活所有的ＩＢＤＶ，但与对照组金刚烷胺相比较，效
果较差。
表５　梧桐花总黄酮对ＮＤＶ和ＩＢＤＶ的直接灭活作用
病毒 药物／（ｇ·Ｌ－１） 复孔数
ＣＰＥ
阳性 阴性
阳性孔数
／总复孔数
感染率／％
ＮＤＶ 梧桐花总黄酮
金刚烷胺
３．１２５　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
１．５６３　 ５　 ０　 ５　 ２／５　 ０
０．７８１　 ５　 ４　 １　 ４／５　 ８０
０．３９５　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
０．１９９　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
０．５００　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
ＩＢＤＶ 梧桐花总黄酮
金刚烷胺
１．５６３　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
０．７８１　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
０．３９５　 ５　 ２　 ４　 ２／５　 ４０
０．１９９　 ５　 ４　 １　 ４／５　 ８０
０．１００　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
０．５００　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
ＮＤＶ对 照 ０．０００　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
ＩＢＤ对照 ０．０００　 ５　 ５　 ０　 ５／５　 １００
细胞对照 ０．０００　 ５　 ０　 ５　 ０／５　 ０
３　讨论
本试验采用培养基打孔法检测梧桐花总黄酮对
常见致病菌的抑制作用，结果表明梧桐花总黄酮对
１１种常见病原菌均有不同程度的抑制作用：其中对
四联球菌、八叠球菌、大肠杆菌、禽波氏杆菌的抑菌
效果最好；对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、鸡白痢沙
门菌、奇异变形杆菌的抑菌效果较好。对各个供试
菌的 ＭＩＣ进行检测，其中 ＭＩＣ最小的是四联球菌，为
１．５６３ｇ／Ｌ，其中ＭＩＣ最大的是产气杆菌，为１２．５ｇ／Ｌ。
这为梧桐花总黄酮抗菌制剂的开发提供了可靠的试
验依据。
近几年国内学者开始关注中草药尤其是植物提
５７２　中 国 兽 医 学 报　２０１３年２月　第３３卷　第２期　Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｖｅｔ　Ｓｃｉ　Ｆｅｂ．　２０１３　Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．２
取物的抗病毒作用［１１－１９］，但对梧桐花总黄酮的研究
报道较少，本试验选取禽类常见致病病毒 ＮＤＶ和
ＩＢＤＶ，研究梧桐花总黄酮对其细胞内增殖的抑制作
用和直接灭活作用，结果证明，梧桐花总黄酮都能有
效抑制ＮＤＶ和ＩＢＤＶ在细胞内的增殖并且可以直
接灭活这２种病毒，但与金刚烷胺相比效果较差。
本试验为将梧桐花研制成抗病毒制剂提供了试验依
据。
近几年我国疫病频繁发生，这与抗生素的滥用
有着很大的关系，有效地预防及控制传染病的发生
和传播是保证我国养殖业健康发展的首要任务，寻
找绿色、无污染、无公害的抗生素替代品势在必行，
某些天然植物制剂以其来源广、抗菌谱广、无残留等
特点，成为抗生素替代品的首选。利用梧桐花总黄
酮的抗菌、抗病毒的特点，将其开发成为饲料添加剂
以及抗菌、抗病毒药剂，在预防和治疗畜禽疾病、生
产绿色环保、有机的畜牧产品方面有着良好的应用
前景。
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