全 文 ：— 37 —现代中药研究与实践2011年第25卷第2期Chin Med J Res Prac,2011 Mar.,Vol.25 No.2
祖 师 麻 为 瑞 香 科 植 物 黄 瑞 香 Daphne giraldii
Nitsche. 陕甘瑞香 Daphne tangutica Maxim. 或 Daphne
retusa Hemsl. 的干燥茎皮和根皮。具有祛风除湿，
活血止痛的功效，临床多用于风湿痹痛、关节炎、
类风湿性关节痛等 [1]。类风湿性关节炎 (Rheumatoid
Arthritis, RA) 是一种慢性进行性的自身免疫性疾病 ,
以关节滑膜炎及对称性、破坏性的关节病变为主要
特征 [2]。目前，祖师麻在临床上主要是以片剂、注射
剂、膏药等剂型应用，其中片剂收载于《中国药典》
2010 版。祖师麻在不同制剂中的应用，均存在有效
部位不明确，有一定的刺激性等缺点 [3]。在通过对祖
师麻提纯后的试验，虽然在保持其抗炎镇痛活性的前
提下降低了用药量，但仍存在有较强刺激性。为此本
祖师麻抗类风湿性关节炎有效部位的药效学研究
陈乐天，静芸芸，狄留庆 *，许惠琴，吴 皓，单进军
（南京中医药大学，江苏 南京 210046）
摘要：目的 研究祖师麻抗类风湿性关节炎的有效部位。 方法 采用系统溶剂提取法对祖师麻进行提
取、分离得到不同部位的提取物。以抗炎镇痛、刺激性等为指标，通过动物实验确定了祖师麻治疗类风湿
性关节炎的有效部位及不良反应的部位。结果 乙酸乙酯提取物和正丁醇提取物为祖师麻抗类风湿关节炎
的有效部位，刺激性主要来源于石油醚部位。结论 初步确定了祖师麻抗类风湿关节炎的有效部位，为祖
师麻开发成新剂型奠定了基础。
关键词：祖师麻 ；类风湿关节炎 ；有效部位
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2011)02-0037-04
Study on the Daphne giraldii Nitsche. Effective Parts of Anti-Rheumatoid Arthritis
CHEN Le-tian, JIN Yun-yun, DI Liu-qing, XU Hui-qin, WU Hao, SHAN Jin-jun
(College of Pharmacy, Nanjing University of Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)
Abstract: Objective To research the effective parts of anti-rheumatoid arthritis of Daphne giraldii
Nitsche. Methods The different parts of the Daphne giraldii Nitsche. were extracted and separated by the
methods of system solvent extraction. Setting anti-inflammatory analgesic and irritating as indicators, the
effective part of rheumatoid arthritis and site of adverse reactions were determined by the animal experiment.
Results Ethyl acetate extract and n-butanol extract were effective parts of anti-rheumatoid arthritis, and irritating
parts of Daphne giraldii Nitsche. was mainly from petroleum ether extract. Conclusion The effective parts of
anti-rheumatoid arthritis of Daphne giraldii Nitsche. was identified initially, which provided the foundation of new
dosage.
Key words: Daphne giraldii Nitsche; rheumatoid arthritis; effective parts
收稿日期：2010-05-17
基金项目：国家教育部重点研究项目(208051)；江苏省“青蓝工程”科技创
新团队支持计划。
作者简介：陈乐天（1985－），硕士研究生。研究方向:中药剂型理论与应用研究
*通讯作者：狄留庆，博士，教授。Tel：025-86798226，E-mai l：
diliuqing928@163.com。
文针对祖师麻活性成分类型，采用适宜的提取、分
离、精制方法，制备不同部位，开展药效学筛选研究，
初步确立了祖师麻抗类风湿性关节炎的有效组分，为
祖师麻制剂的二次开发提供依据。
1 实验材料与仪器
1.1 药物及试剂
祖师麻药材（由南京中医药中药鉴定教研室吴
德康教授鉴定，为瑞香科植物黄瑞香 Daphne giraldii
Nitsche 的干燥茎皮）；祖师麻总提物软膏、祖师麻石
油醚部位软膏、祖师麻乙酸乙酯部位软膏、祖师麻正
丁醇部位软膏，载药量均为 3.6 g/g（生药量 / 软膏）
（由本实验室制备）；阿司匹林肠溶片（金陵药业股
份有限公司南京金陵制药厂，产品批号 070301）；醋
酸地塞米松片（天津天药药业股份有限公司，批号 ：
070701）；二甲苯（国医药集团上海化学试剂公司），
弗式完全佐剂（FCA）（Sigma 产品）；蒸馏水为自制；
其他试剂均为分析纯。
1.2 实验动物
·药理药化·
DOI:10.13728/j.1673-6427.2011.02.018
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清洁级 ICR 小鼠，SD 大鼠（上海斯莱克实验
动物有限责任公司提供，许可证号为 SCXK（沪）
2007-0005）；新西兰家兔（南京市江宁县汤山青龙
山 动 物 繁 殖 场 提 供， 许 可 证 ：SCXK（ 苏 ）2002-
0027）。实验家兔单笼用全价颗粒饲料喂养，自由饮水；
室温 20~23 ℃，湿度 50~60%。
1.3 仪器
电子秤、打孔器（孔径 8 mm）、YLS-7B 足趾容
积测量仪。
1.4 统计方法
所有数据用 ±s 表示，样本资料采用组间 t 检验。
2 实验方法与结果
2.1 抗炎镇痛实验
2.1.1 二甲苯致小鼠耳廓肿胀实验 取 18~22 g 清
洁级 ICR 小鼠 120 只，雄性，按体重随机分 12 组，
每组 10 只。分别为 ：模型对照组（M），阿司匹林对
照组（A）， 石油醚（P）高、低剂量组， 乙酸乙酯（E）
高、低剂量组，正丁醇（B）高、低剂量组，水（HF）
高、低剂量组，混合 1（ 乙酸乙酯组＋正丁醇组混合
物 E+B ）高、低剂量组。祖师麻生药的成人日用量
为 6~9 g，按生药量折算成 4 倍量和 2 倍量作为高低
剂量组。各组给药容积均为 20 mL•kg-1，连续给药 7
d。末次给药后 30 min，将 30 μL 二甲苯涂于小鼠右
耳廓，左耳空白对照。1 h 后处死动物，剪下两耳。
在两耳相同部位用 8 mm 打孔器取下两耳片，称重，
以两耳差值作为肿胀度。结果见表 1。
肿胀抑制率 =（给药组肿胀度－模型组肿胀度）/ 模型组肿胀度 ×100%
实验结果表明，乙酸乙酯低剂量组、正丁醇低
剂量组、混合 1 的高低剂量组均能抑制二甲苯所致小
鼠耳廓肿胀，与模型组有显著性差异（P<0.05），且
混合 1 高剂量组能更好地抑制二甲苯所致小鼠耳廓肿
胀，与模型组比较有非常显著性差异（P<0.01）。
2.1.2 醋酸扭体实验 [4] 选取体重为 20±2 g 的清
洁级 ICR 小鼠 84 只，雌雄各半，按体重随机分为 7 组，
即空白组 (C) 、阿司匹林对照组 (A) 、石油醚组 (P)、
乙酸乙酯组 (E)、正丁醇组 (B)、混合 1 组（乙酸乙
酯＋正丁醇组混合物 E+B）、混合 2 组（石油醚＋乙
酸乙酯＋正丁醇组混合物 P+E+B）。除空白组外，各
给药组按体表面积换算成 2 倍等效量灌胃给药，每 d
一次，连续给药一周。于末次给药后 0.5 h，腹腔注
射新鲜配制的 0.6% 冰醋酸，给药体积 0.1 mL•10 g-1。
记录注射致痛剂后 15 min 内鼠的扭体次数，按
下列公式计算药物镇痛抑制率。并对各给药组与空白
对照组间扭体次数进行 t 检验。结果见表 2。
抑制率 %=（ 给药组扭体次数－对照组扭体次数 ）/ 对照组扭体次数 ×100%
结果表明，石油醚部位、正丁醇部位组和混合
1 组有弱镇痛作用，混合 2 组有强镇痛作用。
2.2 大鼠佐剂关节炎实验
雄性SD大鼠100只，按体重随机分为10组。分
别为：①空白对照组（C）；②模型组（M）；③
醋酸地塞米松片组（D）；④总部位组（G）；⑤
石油醚组(P)；⑥乙酸乙酯组(E)；⑦正丁醇组(B)；
⑧水组（HF）；⑨混合1组（E+B）、⑩混合2组
（P+E+B）。将大鼠的空白对照组的右后足趾皮内
注射0.1 mL生理盐水，其余各组每只鼠均在右后足趾
皮内注射弗氏完全佐剂 0.1 mL致炎[3]。于造模一周后
灌胃给药，除空白组之外，各给药组按体表面积换
算成2倍等效量按10 mg•kg-1灌胃给药，每 d一次，连
续给药三周。分别于致炎前后的第2 d、第7 d、第15
d、第23 d、第28 d观察测量大鼠右足趾容积，连测二
次，求平均值，计算关节肿胀度。结果见表3。
表1 祖师麻各部位对二甲苯致耳廓肿胀影响（n=10, x±s）
Tab.1 Effects of each fractions of Daphne giraldii on xylene–induced ear
swelling in mice(n=10, x±s)
组别
M
A
P-H
P-L
E-H
E-L
B-H
B-L
HF-H
HF-L
E+B-H
E+B-L
剂量(mg/kg)
150
22.0
11.0
71.3
35.6
70.5
35.3
156.4
78.2
141.8
70.9
耳廓肿胀程度(mg)
15.4±0.9
8.8±1.2**
12.7±1.7
14.7±2.0
13.7±1.2
11.4±1.9*
12.8±0.8
11.5±1.1*
16.4±1.9
15.4±0.9
11.0±1.4*
9.4±1.8**
抑制率(%)
42.9
17.5
4.5
11.0
19.5
16.9
18.1
0.0
0.0
38.9
28.6
Each value represents the mean ± SE of mice (n=10); *P<0.05,
**P<0.01, vs Model Control.
表2 醋酸扭体试验结果（n=12, x±s）
Tab.2 Effects of each fractions of Daphne giraldii on writhing times caused
by acetic acid in mice.(n=12, x±s)
组别
C
A
P
E
B
E+B
P+E+B
剂量(mg/kg)
150
11.04
35.64
35.28
70.92
81.96
扭体次数
38.9±5.9
19.3±7.7**
21.5±9.0**
36.5±10.5
28.8±11.6*
25.7±13.7**
16.8±4.8**
抑制率(%)
50.3
44.7
6.1
26.1
34.0
56.8
Each value represents the mean ± SE of mice(n=10); *P<0.05, **P<0.01
vs Control.
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肿胀率％＝（造模后足容积－造模前足容积）÷ 造模前足容积 ×100%
实验结果表明：大鼠右后足跖注射FCA后，次
日达到最大肿胀度。模型组和各给药组与空白对照
组比较均有显著性差异( P<0.01)；给药三周后，混合
1组、正丁醇组和乙酸乙酯组对踝关节的肿胀产生明
显的抑制作用，且与模型组比较显著性差( P<0.01)。
2.3 皮肤刺激性试验
取家兔 16 只，采用同体左右侧自身对照，分完
整皮肤组（Complete skin）及破损皮肤组（Damaged
skin），每组 4 只，雌雄各半。于给药前 24 h，采用
剪、剃及脱毛剂硫化钠的方法对背部脊柱两侧脱毛，
脱毛面积约为体表面积的 10％，即 15×10 (cm)。破
损皮肤的制作采用一次性注射器针头将去毛消毒皮
肤划伤划一 “#” 形伤口，长宽均约 5 cm，以渗血为度，
左右两侧皮肤的破损程度应基本一致。分别在左侧
和右侧脱毛区涂 0.5 g 的空白基质和药物 : 总部位组
（G）、石油醚组（P）、乙酸乙酯组（E）、正丁醇组（B），
并用无菌纱布及无刺激性胶布加以固定。每 d 一次，
连续涂抹 1 周。于给药 4 d 后将破损皮肤组家兔背部
皮肤作再次划伤，每只家兔单笼饲养。前期药效试验
显示，2 倍等效剂量抗类风湿性关节炎效果较好。所
以，刺激性实验采用 2 倍等效量。于末次给药 24 h 后，
用温水洗去残留的药物，分别在除药后的 1、24、
48、72 h 直至第 7 d，肉眼观察涂抹部位有无红斑和
水肿等情况，参照皮肤刺激反应评分标准（无红斑、
勉强可见红斑、明显可见红斑、中度到严重红斑、紫
红色红斑并有焦痂形成，对应分值从 0 依次递增到 4
进行评分。水肿程度分为无水肿、勉强可见水肿、可
见（边缘高出周围皮肤）、 皮肤隆起约 1 mm，轮廓清
楚、水肿隆起 1 mm 以上并且范围扩大，对应分值从
0 依次递增到 4 进行评分）进行评分，按下式计算各
组动物的平均分值。结果见表 4。
反应平均分值＝（红斑形成总分＋水肿形成总分）÷ 动物数。
*P ＜ 0.01 vs Control
实验结果表明，空白基质对完好皮肤和破损皮
肤均无刺激性。总部位对完好皮肤无刺激性，对破
损皮肤有轻度刺激性 ；石油醚部位对完好皮肤和破
损皮肤均有轻度刺激性，且对破损皮肤刺激性稍大 ；
乙酸乙酯部位和正丁醇部位对完好皮肤和破损皮肤
均无刺激性。刺激性从无到有的排序 ：正丁醇部位 ≈
乙酸乙酯部位＜总部位＜石油醚部位，由此可推测祖
师麻中的刺激性成分主要存在于石油醚部位，可在不
影响疗效的前提下去除该部位。
3 结果与讨论
本实验对祖师麻的抗炎镇痛进行了验证，并结
合本实验室的前期工艺研究对不同部位进行了二甲
苯致小鼠耳廓肿胀、 醋酸扭体、大鼠佐剂关节炎和皮
肤刺激性试验，初步确定了祖师麻抗类风湿关节炎的
有效部位为乙酸乙酯部位以及正丁醇部位，为祖师麻
制剂的二次开发奠定基础。
研究发现祖师麻的乙酸乙酯提取物和正丁醇提
取物均具有显著的镇痛、抗炎作用，且两者的混合物
的作用强于单一部位 ；其中乙酸乙酯提取物具有良好
的抗炎活性，正丁醇提取物则具有显著的镇痛活性，
两者之间的比例关系如何确定能发挥最佳的抗炎镇
痛作用，有待进一步研究 ；同时，乙酸乙酯和正丁醇
部位的混合物可显著抑制二甲苯所致小鼠耳肿胀，能
显著抑制炎症早期的水肿，推测其抗炎机制可能与抑
表3 祖师麻各部位对AA大鼠右足肿胀度的影响（n=10, x±s）
Tab.3 Effects of Daphne giraldii on swelling rate of the right foot in AA
rats(n=10, x±s)
△ P ＜ 0.05，△△ P ＜ 0.01 vs Control ； * P ＜ 0.05，** P ＜ 0.01 vs model
组别
C
M
D
G
P
E
B
HF
P+E
P+E+B
d2
2.4±0.3
2.8±0.3
2.8±0.3
2.7±0.3
2.8±0.6
2.8±0.5
2.8±0.3
2.8±0.3
2.8±0.3
2.8±0.3
d7
4.90±0.7
4.9±0.7
4.8±0.6
5.0±0.6
4.8±0.7
5.1±1.1
4.9±0.6
5.2±1.7
4.9±1.2
4.8±1.4
d12
6.3±1.4
11.1±0.3△
10.9±1.2
11.0±1.2
12.1±1.2
11.1±1.1
11.5±1.6
11.5±1.7
11.7±1.2
11.3±1.4
d18
12.5±2.5
24.0±1.6△△
3.6±1.1**
20.5±2.8
25.6±4.0
21.9±2.5*
20.3±3.6**
24.2±4.9
18.6±4.4**
25.9±4.3
d23
16.24±2.02
31.1±3.2△△
0±0**
18.2±1.78**
25.04±1.62
20.82±2.6**
19.9±1.5**
27.2±2.0
18.5±1.4**
26.9±2.4*
d28
16.28±4.68
34.8±4.1△△
0±0**
18.85±0.95**
30.98±10.67
19.1±1.53**
18.3±1.1**
28.5±5.4
17.9±1.8**
29.71±7.6
肿胀度（%）
皮肤
状况
完整
皮肤
损伤
皮肤
给药后
时间
1h
24h
48h
72h
4d
5d
6d
7d
1h
24h
48h
72h
4d
5d
6d
7d
空白
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
给药
0.4*
0.4*
0.2
0.1
0.4*
0.1
0.1
0.4*
0.7
0.6
0.4
0.4
0.7
0.6
0.4
0.4
空白
0.7
0.7
0.6
0.4
0.7
0.7
0.6
0.4
1.1
1.2
0.9
0.6
1.1
1.2
0.9
0.6
给药
1
0.9
0.6
0.5
1
0.9
0.6
0.5
1.5
1.5
1.1*
0.9*
1.5
1.5
1.1*
0.9*
空白
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
给药
0.2
0.2
0.2
0.1
0.2
0.2
0.2
0.1
0.2
0.1
0.1
0
0.2
0.1
0.1
0
给药
0
0
0
0
0
0
0
0
0.2
0.2
0.1
0
0.2
0.2
0.1
0
空白
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
表4 皮肤刺激性反应平均分值结果
Tab.4 Average score of skin irritation results
G P E B
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制炎症介质 NO、PG 的合成与释放有关 [5]。
此外，研究发现石油醚部位虽有较好的镇痛活
性，但该部位具有较强的皮肤刺激性，通过文献查阅
[6] 发现该部位是祖师麻不良反应的主要来源。因此是
否将石油醚部位从祖师麻有效部位群中剔除掉，尚待
进一步研究。
参考文献
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activity of zushima [J]. Chin J Chin Mater Med ( 中 国 中 药 杂 志 )，2000，
27 ：401~403.
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method of rheumatoid arthritis [J]. Chinese Journal of Cellular and Molecular
Immunology ( 细胞与分子免疫学杂志 )， 2005，21 ：88~89.
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Normal University（Natural Science Edition）1999，35（1）：98~103.
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理实验方法学 ) [M]//3 rded.Beijing: Penple’s Medical Publishing House,
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2009，25（2）：181~183.
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Daphne giraldii Nitsche [J].China Journal of Chinese Materia Medica（中国
中药），2006，31（7）：555~556.
羟基喜树碱对H22 肝癌模型小鼠药效学的研究
胡 巍 1 ，张尚锁 2，方 芸 1*
(1. 南京大学医学院附属鼓楼医院，江苏 南京 210008 ；2. 南京中医药大学，江苏 南京 210029)
摘要：目的 考察羟基喜树碱 (HCPT) 对小鼠 H22 模型的抗肿瘤作用。方法 以小鼠 H22 肝癌模型
为实验观察对象。观察 HCPT 对肿瘤的抑制效果、化疗前后的体重、食物摄取量及生长状况，同时观察
HCPT 对 H22 肝癌模型小鼠肝肾功能的保护作用。结果 阳性药对照组及 HCPT 高、中、低剂量化疗组对
小鼠 H22 肝癌模型均有抑制作用 (P<0.05)，抑瘤率分别为 66.12%、60.26%、50.16%、30.94%。HCPT 化疗
组与肿瘤对照组相比，小鼠的生活状态（体重、反应能力等）均有一定的改善。HCPT 中剂量化疗组对小
鼠的肝肾功能有一定的保护作用，而高剂量化疗组对小鼠的肝肾功能有不可逆的损伤。结论 高、中、低
剂量的 HCPT 对 H22 肝癌模型小鼠的肿瘤生长有不同程度的抑制作用。
关键词：羟基喜树碱 ；药效学 ；肿瘤组织 ；酯 / 盐比值
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1673-6427(2011)02-0040-04
Pharmacodynamics Study of Hydroxycamptothecin on Mice Models of H22
HU Wei1 , ZHANG Shang-suo2 , FANG Yun1
(1.The Affiliated Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School , Nanjing 210008, China;
2.Nanjing University of Traditional Chinese Medicine , Nanjing 210029, China)
Abstract: Objective To investigate the anti-tumor effects of HCPT on the mice models of H22.
Methods The mice models of H22 is the experimental observation of the object. Observing inhibitory effect
of HCPT on the tumor, weight changes, growth status before and after chemotherapy. Results Positive drug
group and HCPT high, medium and low-dose chemotherapy group all inhibit the mice models of H22 (P<0.05),
inhibition rate are 66.12%, 60.26%, 50.16%, 30.94%, respectively. To compare with the model group, the mice
living conditions (weight, reaction ability, and so on) have improved in the HCPT chemotherapy group. HCPT
medium-dose group has protective effect on the liver and kidney function in mice;while HCPT high-dose group
has irreversible damage to the liver and kidney function in mice. Conclusion High, medium and low doses of
HCPT have different levels of inhibition on the H22 tumor models growth .
Key Words: HCPT; pharmacodynamics; tumor tissue; ester / salt ratio
收稿日期：2010-05-27
基金项目：南京市卫生局医学科技发展课题（项目编号YKK08052）
作者简介：胡 巍，女，硕士研究生。研究方向：临床药动学与药效学。
*通讯作者：方 芸，教授，硕士生导师。 Tel: 025-83304616-66669 ; E-mail: njglfy@163.com