全 文 ：胆木及其制剂中异长春花苷内酰胺的分离鉴定
和含量测定
李明慧1 , 2 ,丁　岗2 ,沈　鸣2 ,刘景晶1＊
1中国药科大学生命科学与技术学院 ,南京 210009;
2江苏省中药质量控制工程技术研究中心 ,南京 211100
【摘　要】　目的:寻找可以作为评价胆木药材及其制剂质量的指标成分 ,提高胆木药材及其制剂的质量标
准。方法:采用柱层析方法分离化学成分 , 应用光谱法进行结构鉴定;用高效液相色谱法测定其在胆木药材和
制剂中的含量。结果:从胆木药材及其注射液中分离 、鉴定出 1 个含量较高的吲哚类生物碱苷异长春花苷内酰
胺(isovincoside lactone);建立了胆木药材和注射液中异长春花苷内酰胺的HPLC 含量测定方法。 结论:该成分在
胆木药材和注射液中含量较高 ,可用于胆木药材及其制剂的质量控制。
【关键词】　胆木;异长春花苷内酰胺;质量控制
【中图分类号】　R284.1 , R917　　【文献标识码】　A　　【文章编号】　1672-3651(2006)02-0104-03
【收稿日期】　2005-09-01
【＊通讯作者】　刘景晶:教授 ,博导 , Tel:025-83271242 , E-mail:liu-
jingj@public1.ptt.js.cn
　　胆木(Nauclea officinalis Pierre ex Pitard)为茜草
科乌檀属乔木 ,又名药乌檀 ,枝 、干 、皮入药 ,性味
苦 、寒 ,具有清热解毒 、消肿止痛作用 ,可用于多种
感染和炎症。以胆木为原料生产的胆木注射液 、
胆木浸膏片已在临床上应用多年 ,疗效确切[ 1] 。
尽管对胆木的生物碱类成分已有较深入的研
究[ 2] ,但一直没有明确的指标性成分可以用来定
性 、定量控制胆木药材及其制剂的质量[ 1] 。
本文报道从胆木药材及其注射液中首次分离
得到一个吲哚生物碱糖苷-异长春花苷内酰胺
(isovincoside lactone , 又名 strictosamide),同时建立
了胆木药材及其注射液中异长春花苷内酰胺的
HPLC含量测定方法 ,以期为胆木药材及其制剂的
质量控制提供有效手段。
1　仪器与试药
1.1　仪　器
X-4显微熔点测定仪;WZZ-2A 自动旋光仪;
Shimudzu UV-2401(PC)S 紫外分光光度计;Micro-
mass公司 LCT(TOFMS)高分辨质谱仪;Bruker AV-
500核磁共振波谱仪。Mettler AE 240 电子天平 。
Agilent 1100液相色谱仪 , DAD检测器 ,含在线脱
气 、二元高压泵 、自动进样器 、柱温箱。
1.2　试　剂
柱层析用硅胶为青岛海洋化工厂生产;HPD-
100大孔树脂为河北沧州宝恩化工有限公司生产;
乙腈为色谱纯;甲醇 、乙醇 、氯仿 、磷酸等均为分
析纯 ,水为超纯水。
1.3　药　品
胆木药材及其注射液均由海南制药厂提供 ,
药材均产于海南省 ,经南京中医药大学吴德康教
授鉴定为药乌檀 Nauclea officinalis 的心材。
2　分离与鉴定
2.1　提取分离
取胆木心材 5 kg , 加水煎煮 , 水提液浓缩至
1 g·mL-1 ,或取注射液中间体5 L经 HPD-100大孔
树脂柱层析 ,先以水洗脱 ,再以 50%～ 60%乙醇洗
脱 ,收集乙醇洗脱液 ,浓缩蒸干 ,硅胶拌样 ,通过硅
胶柱层析分离 ,以氯仿-甲醇梯度洗脱 ,从氯仿-甲
醇(9∶1)洗脱部分得到 1种淡黄色粉末 1.16 g 。本
品在甲醇中易溶 ,能溶于氯仿 ,在水中微溶。
2.2　结构鉴定
淡黄色粉末(氯仿-甲醇), mp 196 ～ 198 ℃;
[α] 20D -68°(c 0.25 , MeOH);UV(MeOH)λmax 202 ,
226.5 nm;ESI-HRMS显示[M+H] +为499.2068 ,可
推导出分子式为C26H30N2O8;1H NMR、13C NMR见
表 1。以上数据与异长春花苷内酰胺[ 2 ～ 5] 基本一
致 ,鉴定该化合物为异长春花苷内酰胺 。
104　　Chin J Nat Med　Mar.2006　Vol.4　No.2
CJNM
中国天然药物　2006年 3月　第 4卷　第 2期
Table 1　NMR data fof Strictosamide(DMSO-d6)
Position C H Position C H
2 134.64 　　- 16 107.68 　　-
3 52.75 5.02br d(3.9) 17 146.70 7.24d(2.3)
5 42.99 2.97 m
4.78dt(14.8 , 6.4)
18 119.98 5.31dd(10.2, 1.8)
5.35dd(19.4, 1.8)
6 20.71 2.58～ 2.62 m
2.79～ 2.84 m
19
20
133.44
42.47
5.60dt(19.4 , 10.2)
2.58～ 2.62 m
7 108.54 　　- 21 95.94 5.31d(1.8)
8 127.13 　　- 22 163.56 　　-
9 117.71 7.36d(7.8) 1′ 99.08 4.44d(7.9)
10 118.79 6.97t(7.9) 2′ 72.81 2.82 m
11 121.07 7.06td(7.9 , 1.9) 3′ 77.28 2.95-3.12m
12 111.40 7.33d(7.8) 4′ 70.05
13 135.82 　　- 5′ 76.87
14 25.79 1.90td(13.4 , 5.7)
2.48br
6′ 61.11 3.41dt(11.6 , 5.7)
3.66ddd(11.6 ,
5.7 , 1.8)
15 23.56 2.58～ 2.62 m
3　含量测定
3.1　对照品与供试品溶液的制备
3.1.1　对照品溶液的制备　取异长春花苷内酰胺
适量 , 90 ℃减压干燥 3 h ,精密称定 ,加甲醇分别配
制成 1 mL含异长春花苷内酰胺 19.92μg 、59.76μg
和99.60μg 的溶液。
3.1.2　胆木药材供试品溶液的制备　精密称定胆
木药材粗粉 0.5 g ,精密加入 50 mL 70%甲醇 ,精密
称定 ,回流提取 70 min ,放冷 ,用 70%甲醇补足减
失重量 ,混匀 ,静置 ,精密量取上清液1 mL 置 5 mL
量瓶中 ,加 70%甲醇定容 ,以 0.45 μm微孔滤膜滤
过 ,取续滤液即得。
3.1.3　胆木注射液供试品溶液的制备　因注射液
本身为水溶液 ,故可直接以蒸馏水稀释。精密吸
取胆木注射液 1.0 mL ,置 10 mL 量瓶中 ,以蒸馏水
定容 ,以 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取续滤液即得 。
3.1.4　胆木注射液阴性对照溶液的制备　原制剂
配方中去掉胆木提取物 ,按制剂工艺进行制备 ,得
空白样品 ,按“3.1.3”项下方法处理 ,即得胆木注射
液阴性对照溶液 。
3.2　色谱条件和系统适用性试验
色谱柱:Lichrospher C18(5 μm , 4.6 mm ×250
mm),江苏淮阴汉邦科技公司。流动相:经比较不
同体系流动相的色谱行为 ,结果表明 ,以乙腈-水-
磷酸 (30 ∶70∶0.1)分 离效 果 为 佳。 流速
1 mL·min-1 。测定波长 226 nm 。柱温:30 ℃。进
样量 10μL。
分别精密吸取胆木注射液供试品溶液 、对照
品溶液 、胆木药材供试品溶液 、胆木注射液阴性对
照溶液各 10 μL ,注入高效液相色谱仪 ,在上述色
谱条件下 ,异长春花苷内酰胺峰形对称 ,与相邻组
分色谱峰的分离度大于 1.5 ,达到基线分离 ,阴性
对照溶液无干扰 ,按异长春花苷内酰胺峰计算 ,理
论板数应不低于5 000(Fig 1)。
1:Nauclea of ficinalis injection;2:Isovincoside lactone;3:Nauclea offi ci-
nalis;4:negative injection
Fig 1　HPLC chromatography of Isovincoside lactone
3.3　异长春花苷内酰胺对照品的纯度检测
用“3.2”项下色谱条件检测 ,面积归一化法计
算 ,异长春花苷内酰胺对照品的纯度为 99.1%。
3.4　方法学实验
3.4.1　线性关系考察　精密称取干燥至恒重的异
长春花苷内酰胺 ,加甲醇制成每 1 mL 含 0.996 mg
异长春花苷内酰胺的溶液 , 摇匀 ,即得标准储备
液。分别吸取标准储备液 1 、 2 、 3 、 4 、 5 mL 至 50
mL量瓶中 ,加流动相稀释至刻度 。吸取上述溶液
各 10μL 进样 ,按“3.2”项下色谱条件测定 ,以峰面
积为横坐标 ,对照品进样量(μg)为纵坐标绘制标
准曲线 ,得回归方程:Y =3.069×10-4X +2.253×
10
-3 , r =0.9999;异长春花苷内酰胺在 19.92 ～
99.6 μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。
3.4.2　精密度实验　取胆木药材供试品溶液 ,按
“3.2”项下色谱条件连续进样 5次 ,每次 10 μL ,测
定异长春花苷内酰胺峰面积值 , 结果 RSD =
0.17%,表明仪器精密度良好。
3.4.3　稳定性实验 　同一份胆木药材供试品溶
液 ,分别在 0 、 1 、 2 、 4 、8 h按“3.2”项下色谱条件
进样 10μL ,测定异长春花苷内酰胺峰面积值 ,结
果 RSD=0.14%,表明供试品溶液在 8 h内稳定性
中国天然药物　2006年 3月　第 4卷　第 2期
CJNM
Chin J Nat Med　Mar.2006　Vol.4　No.2　105　
良好 。
3.4.4　重复性实验　取同一批胆木药材粗粉 ,照
“3.1.2”项下方法平行制备 6份供试品溶液 ,按
“3.2”项下色谱条件分别进样 10 μL ,测定异长春
花苷内酰胺峰面积值 ,结果 RSD=1.58%,表明本
测定方法重复性良好 。
3.4.5　加样回收实验　平行取6份已知异长春花
苷内酰胺含量的番阳镇产胆木粗粉 ,0.5 g/份 ,每 2
份为1组 ,分别准确加入异长春花苷内酰胺对照
品4.08 、5.10 、 6.12 mg ,按“3.1.2”项下方法制备
供试品溶液 ,按“3.2”项下色谱条件分别进样10 μL
测定 ,用外标 2 点法计算异长春花苷内酰胺的含
量和加样回收率 , 结果平均回收率为 98.52%
(96.57%～ 100.20%),RSD为 1.55 ,说明本法具有
良好的回收率。
3.5　样品测定
按上述方法测定 10批胆木注射液 、10批胆木
药材(产于海南省)中异长春花苷内酰胺的含量 ,
结果见表 2。
Table 2　Determination results of samples
Nauclea offi cinali s injection
Lot No. Content(mg·mL-1)
Lignum Naucleae
Location Content(mg·g-1)
20030910 0.54 Nansheng(南圣) 13.55
20030912 0.57 Hongmao(红毛) 20.15
20030914 0.66 Maogan(毛感) 20.52
20040213 0.26 Heping(和平) 24.53
20040215 0.46 Baisha(白沙) 19.70
20040217 0.57 Shiling(什岭) 20.97
20040219 0.45 Panyang(番阳) 10.33
20040301 0.54 Wushi(乌什) 18.57
20040303 0.58 Changzheng(长征) 12.55
20040305 0.53 Xiangshui(响水) 19.58
4　讨　论
由于分子结构中存在苯胺型和酰胺型共轭效
应 ,异长春花苷内酰胺不但没有碱性 ,还呈现一定
的酸性 ,因此应用常规的酸溶碱沉法处理无法得
到该成分 ,且其在酸性液相色谱条件下可得到较
好的分离 。
异长春花苷内酰胺具有抗癌 、杀疟原虫等生
理活性[ 5 ,6] ,且在胆木药材和胆木注射液中含量较
高 ,可以作为评价胆木药材及其制剂质量的指标
成分 。
参 考 文 献
[ 1] 　叶能良(Ye NL).胆木制剂生产工艺及质量标准简介[ J] .中
草药通讯(Chin Bull Trad Herb Drugs), 1975 ,6(6):341-344.
[ 2] 　康文艺(Kang WY), 杨小生(Yang XS),赵　超(Zhao C),等.
乌檀属植物的吲哚类生物碱成分研究进展[ J] .中草药(Chin
Trad HerbDrugs),2002 , 33(8):762-765.
[ 3] 　Erdelmeier CAJ , Wright AD , Orjala J , et al.New indole alkaloid
glycosides from Nauclea orientalis[ J] .Planta Med , 1991, 57:149-
152.
[ 4] 　Zeches M , Richard B , Bahia LG , et al.Constituants des ecorces
de racine de Nauclea pobeguinii[ J] .J Nat Prod , 1985 , 48(1):
42-46.
[ 5] 　Dai JR , Hallock YF , Cardellina Ⅱ JH , et al.20-O-beta-glucopy-
ranosyl camptothecin from Mostuea brunonis:a potential camp-
tothecin pro-drug with improved solubi li ty[ J] .J Nat Prod , 1999 ,
62(10):1427-1429.
[ 6] 　Abreu P , Pereira A.New indole alkaloids f rom Sarcocephalus lati-
folius[ J] .Nat Prod Lett , 2001 , 15(1):43-48.
Identification and Content Determination of Strictosamide in
Lignum Naucleae and its Injection
LI Ming-Hui1 ,2 , DING Gang2 , SHEN Ming2 , LIU Jing-Jing1＊
1School of Life Science &Technology , China Pharmaceutical University , Nanjing 210009 ;
2Jiangsu Provincial Center for Chinese Medicine Quality Control ,Nanjing 211100 , China
【ABSTRACT】　AIM:To find the criterion constituent in Lignum Naucleae , which can be used to evaluate the quality of Lignum Naucle-
ae and its preparation.METHOD:Chemical constituents were isolated and purified by chromatographic methods;structural identification
was based on chemical and spectroscopic evidences.HPLC was used for quantitative analysis of Lignum Naucleae and its injection.RE-
SULTS:One indole alkaloid was purified and identified as strictosamide.An HPLC method for the determination of strictosamide in
Lignum Naucleae and its injection was established.CONCLUSION:Strictosamide was the main constituent of Lignum Naucleae , which
can be used to control the quality of Lignum Naucleae and its preparation.
【KEY WORDS】　Lignum Naucleae;Strictosamide;Quality control
106　　Chin J Nat Med　Mar.2006　Vol.4　No.2
CJNM
中国天然药物　2006年 3月　第 4卷　第 2期