全 文 ：40-41.
[ 5] 李建华 ,申庆亮 , 王洪道 .影响黄栌中漆黄素提取量的
因素 [ J] .中国中药杂志 , 1991, 16(10):614-615.
[ 6] 李建华 , 李洁 ,王效合 , 等.黄栌中漆黄素的提取工艺实
验性研究 [ J] .武警医学 , 1997, 8(3):151-152.
[ 7] RigelskyJM, SweetBV.Hawthom.Pharmacologyand
therapeuticuses[ J] .AmJHealthSystPharm, 2002, 59
(5):417-422.
[ 8] BeierA, KonigsteinRP, SamecV.Clinicalexperiences
withacrataeguspentaerythrity-tetranitratecombination
druginheartdiseasesduetocoronarysclerosisinoldage
[ J] .WienMedWochenschr, 1974, 124 (24):378-811
[ 9] TaskovM.Onthecoronaryandcardiotonicactionofcra-
taemon[ J].ActaPhysiolPharmocolBulg, 1977, 3(4):53-
57.
[ 10] AmmonHP, HandelM.Crataegus.Toxicologyandphar-
macology.PartⅡ:Pharmacodynamics[ J] .PlantaMed,
1981, 43(3):209-239.
[ 11] 刘荣华 , 邵峰 , 邓雅琼 , 等 .山楂化学成分研究进展
[ J].中药材 , 2008, 31(7):1100-1103.
[ 12] 王佃亮 ,刘万顺 , 韩宝芹 ,等 .一种新型海洋纤溶酶体
外抗凝与溶栓作研究 [ J] .中国海洋药物研究杂志 ,
2006, 25(4):37-42.
[ 13] 贺凯 ,高建莉 , 赵光树 .延胡索化学成分 、药理作用及
质量控制研究进展 [ J] .中草药 , 2007, 38(12):1909-
1912.
[ 14] 许翔鸿 ,王峥涛 , 余国奠 ,等 .延胡索中生物碱成分的
研究 [ J] .中国药科大学学报 , 2002, 33(6):483-486.
[ 15] 延玺 ,刘会青 , 邹永青 ,等 .黄酮类化合物生理活性及
合成研究进展 [ J] .有机化学 , 2008, 28(9):1534-
1544.
山楂核馏油体外抗氧化作用的研究
曹　丽 ,孙桂波 ,郭　燕 ,金　文 ,孙　虹 ,斯建勇＊
(中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所 ,北京 100193)
　　摘要　目的:研究山楂核馏油的体外抗氧化作用。方法:以 BHT为阳性对照 , 采用清除 DPPH· 自由基 、还原
力 、铁离子螯合能力 、β-胡萝卜素-亚油酸氧化和小鼠红细胞过氧化损伤的方法测定山楂核馏油的抗氧化作用。结
果:THS有较强的铁离子螯合能力 ,能有效保护红细胞的过氧化溶血 , 具有一定的还原力 , 能抑制 β-胡萝卜素-亚油
酸氧化活性及消除 DPPH·自由基。结论:THS是一种较好的抗氧化剂 , 可作为潜在天然抗氧化剂应用于食品和医
药工业中。
关键词　山楂核馏油;抗氧化活性
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)05-0767-04
收稿日期:2008-09-01基金项目:国家 “ 863”科技攻关重大专项(2006AA10A208)作者简介:曹丽(1966-),女 ,副研究员 ,博士 ,主要从事中药药理研究;E-mail:lcao@implad.ac.cn。＊通讯作者:斯建勇 , Te1:010-62829611, E-mail:jysi@implad.ac.cn。
　　山楂核馏油(tarofhawthornseed, THS)是蔷薇
科植物山里红 (CrataeguspinnatifidaBge.var.major
N.E.Br.)或山楂(CrataeguspinnatifidaBge.)的核
经过干馏而得 ,其医用和食用价值近年来受到关注 。
山楂核馏油可显著抑制多种细菌和真菌 ,研究报道
山楂核干馏油液对黑根霉等霉菌 、啤酒酵母等酵母
菌 、金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、伤寒杆菌 、痢疾杆菌
等细菌均有一定的抑制作用 ,因此用于治疗湿疹 、神
经性皮炎 、烧伤等 ,具有显著疗效 〔1, 2〕。此外 ,由山
楂核馏油制成的食品烟熏剂 ,用于制作具有烟熏香
味的食品 ,烟香浓郁 ,留香持久 ,且不含 3, 4-苯并芘
等致癌物 ,是国家认可的食品添加剂 〔3〕。
但迄今对山楂核馏油的抗氧化活性未见报道 ,
本实验对山楂核馏油清除 DPPH·自由基 、还原力 、
铁离子螯合能力 、抑制 β-胡萝卜素 -亚油酸氧化和小
鼠红细胞过氧化损伤作用进行了研究。以此评价山
楂核馏油的抗氧化活性 ,旨在为山楂核馏油的应用
提供更充分的理论依据 。
1　材料与仪器
1.1　实验动物　清洁级 ICR小鼠 ,体质量 18 ～ 20
g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司 ,合格
证号为 SCXK(京)2002-0003。
1.2　药物与试剂　山楂 , 购自北京市农贸市场;
β-胡萝卜素 、Tween80为瑞士 Fluka公司产品;1, 1-
二苯基-2-苦基一肼(DPPH· )、Ferrozine(菲洛嗪)、
亚油酸为美国 Sigma公司产品;二丁基羟基甲苯
·767·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 5期 2009年 5月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.05.019
(BHT)、铁氰化钾 、三氯乙酸 、氯化亚铁 、硫酸亚铁 、
氯仿 、甲醇 、过氧化氢等试剂均为国产分析纯。
1.3 　主要仪器　电子天平 (metlerToledo, 0.01
mg/200 g);美国 Bio-TekMQX200型酶标仪;德国
HERAEUSLabofuge400R离心机;旋转蒸发仪 , 752
N型紫外可见分光光度计(上海精密科学仪器有限
公司)等仪器 。
2 　方法
2.1 　山楂核馏油的制备　山楂经去果皮 、果肉后 ,
洗净 、干燥 、粉碎 ,参考文献方法制备核馏油〔4〕。
2.2 　样品还原能力的检测〔5〕　将样品 、BHT分别
按不同浓度溶于 1 mL的蒸馏水中 ,然后加入 2.5
mL0.2 MPBS(pH=6.6)和 2.5 mL1%铁氰化钾
溶液于试管中混匀。混合物在 50℃水浴中反应 20
min,迅速冷却并加入 2.5mL10%三氯乙酸 ,混匀后
以 3 000 ×g离心 10 min。取 2.5 mL上清液加入
0.5mL, 1%三氯化铁溶液混匀 ,以蒸馏水调零 ,在
700nm处测定光密度 D(λ)值。光密度越高 ,说明
反应混合物的还原能力越强。
2.3 　DPPH·清除能力的检测 〔6〕　将 0.2 mL含有
不同浓度的待测样品溶液加入到 3.8 mL0.006%
DPPH·甲醇溶液中 ,混匀。室温下放置 40 min后 ,
于 517nm处测定光密度值 ,光密度值越小 ,表明自
由基清除能力越强。 BHT(溶于甲醇)作为清除 DP-
PH·能力的阳性对照。
清除率 /% =[ 1-D(λ)0 -D(λ)1D(λ)0 ] ×100%
D(λ)0为 3.8 mL0.006%DPPH·甲醇溶液 +0.2 mL
的样品溶剂 , D(λ)1为 3.8 mL0.006%DPPH·甲醇溶液 +
0.2mL的待测样品或 BHT。
2.4 　螯合金属离子能力的测定〔5〕　以 Fe2+为试
验对象 , 过渡金属离子 , 例如铁的不同氧化态
(Fe2 +、Fe3+),能引发和催化脂质过氧化反应。抗
氧化剂通过与金属离子的络合 ,从而可抑制或阻断
脂质氧化的链式反应 。 100 μL待测样品加入 100
μLFeCl2溶于 3.7 mL甲醇中 , 再加入 100 μLfer-
rozine(6mmol/L)混匀后 10 min于 562 nm测光密
度值 ,对 ferozine-Fe2+的抑制率以下面公式计算:
抑制率 /% =D(λ)0 -D(λ)1D(λ)0 ×100%
D(λ)0为不加样品的光密度值 , D(λ)1为加入样品或
阳性对照 BHT的光密度值。
2.5 　对 β-胡萝卜素 -亚油酸氧化体系的抑制实
验 〔5〕　将 2mgβ-胡萝卜素溶于 10mL氯仿 ,混匀后
取出 3 mL加入 250 mL圆底瓶中 ,于旋转蒸发仪上
40 ℃水浴加热 5 min以去除氯仿 , 60 mg亚油酸溶
于 600 mgTween80中 ,再加入到 β-胡萝卜素液中 ,
再加入 150mL的蒸馏水 ,剧烈震荡摇匀 ,成乳状液 ,
吸取 5mL的乳悬液 ,加入 0.2mL的待测样品 ,空白
对照加入 0.2mL的蒸馏水 ,在 470 nm测定一次光
密度 ,反应液在 50 ℃水浴继续加热 60 min,在 470
nm再测定一次光密度。抗氧化活性以下式表示:
抑制率 /% =[ 1-D(λ)0 -D(λ)tD(λ)′
0
-D(λ)′t] ×100%
D(λ)0 、D(λ)′0分别为反应开始和结束时样品的光密
度值 , D(λ)t和 D(λ)′t分别为反应开始和结束时阴性对照
的光密度值。
2.6　对小鼠红细胞过氧化溶血的影响 〔7〕　红细胞
悬液的制备:ICR小鼠眼球取血 ,以 4%的柠檬酸钠
作抗凝剂 ,加入 2 ～ 3倍的生理盐水悬浮。于 4 ℃、
1 000×g,离心 10 min,重复离心洗涤 3次 ,悬浮于
pH=7.4的磷酸缓冲生理盐水中 ,配成 0.5%的红
细胞悬液 ,以 0.5mL红细胞悬液 ,加入 0.1mL的待
测样品 ,同时加入 0.05mL100 mmol/L的 H2O2 ,阴
性对照为等量的生理盐水 ,于 37℃温浴 1h,加 5倍
量生理盐水稀释 , 2 000×g,离心 6 min,上清液于
415 nm处测 D(λ)值。
溶血抑制率 /% =D(λ)H2O2组 -D(λ)实验组D(λ)H2O2组 ×100%
2.7　统计学处理　所有试验均平行 3次 ,数据以
x±s表示 ,结果表示采用 Excel处理。
3　结果
3.1　样品还原能力的检测　样品还原能力法的原
理为:K3Fe(CN)6 +样品※K4Fe(CN)6 +样品氧化
物;K4Fe(CN)6 +Fe3+※ Fe4 [ Fe(CN)6 ] 3 ,在波长
700 nm条件下测定光密度 ,光密度越大 ,则样品的
还原力越大 ,其提供的电子可使 Fe3 +还原成 Fe2 +。
一般情况下 ,样品的还原能力与抗氧化能力呈正相
关。该方法可以评估样品是否为良好的电子供
体〔8〕。由表 1中可以看出 THS的还原能力随质量
浓度的增加而增大 ,当浓度达到 5 000 μg/mL时其
D(λ)值为 1.427,与 250 μg/mL的 BHT[ D(λ)值为
1.321]的作用接近 , THS还原能力虽低于 BHT的还
原能力 ,但 THS作为天然来源的抗氧化剂 ,与 BHT
相比安全性更具有优势 。
3.2　THS对 DPPH·自由基的清除能力　DPPH·
自由基是一种以氮为中心 、十分稳定的自由基 ,其稳
定性主要来自共振稳定作用及三个苯环的空间障
碍 ,而使夹在其中间氮原子上的不成对电子不能发
挥其应有的电子成对作用。 DPPH·自由基甲醇溶
液呈紫色 ,最大吸收波长为 517 nm。如果有其他物
·768· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 5期 2009年 5月
质提供一个电子使此孤电子被配对 ,吸收消失或者
减弱 ,导致溶液颜色变浅 ,在 517 nm处的光密度变
小 ,其变化程度与自由基清除程度呈线性关系 。故
该法可以用来表征某种物质对自由基的清除能力 ,
通常用清除率表示 。清除率越大 ,表明该物质对自
由基的清除能力越强 〔6〕。不同浓度 THS清除
DPPH·自由基的能力见表 2。可以看出 , THS具有
清除 DPPH·自由基的能力 ,随着其质量浓度的增
加 ,对 DPPH·自由基的清除能力逐渐增强 ,表明
THS对 DPPH·自由基的清除能力与其质量浓度存
在明显的剂量 -效应关系 。但 THS对 DPPH·自由
基的清除能力明显低于阳性对照 BHT,二者的 IC50
分别为 5681.25、302.44 μg/mL。
　表 1 　BHT和 THS的总还原力( x±s, n=3)
药物 质量浓度 /(μg/mL) D(λ)700nm
BHT 　15.6 0.284±0.016
31.3 0.383±0.032
62.5 0.561±0.022
125 0.743±0.031
250 1.321±0.065
500 2.020±0.092
THS 156 0.134±0.004
313 0.252±0.017
625 0.360±0.031
1250 0.523±0.027
2500 0.977±0.079
5000 1.427±0.083
　表 2　BHT、THS清除 DPPH·自由基能力及对 β -胡萝
卜素 -亚油酸氧化体系的抑制作用( x±s, n=3)
药物 质量浓度 /(μg/mL)
抑制率 /%
DPPH· β-胡萝卜素 -亚油酸
BHT 　15.6 5.5±0.07 3.5±0.09
31.3 9.7±0.13 7.3±0.11
62.5 18.4±0.19 13.4±0.21
125 31.5±1.22 23.1±1.35
250 47.9±1.57 35.4±2.91
500 73.3±4.35 56.7±2.64
THS 156 2.0±0.06 1.3±0.03
313 5.0±0.12 3.9±0.09
625 6.9±0.34 15.4±0.15
1250 13.3±1.22 27.8±1.43
2500 24.9±2.12 45.7±3.23
5000 42.4±3.26 65.3±2.33
3.3　THS对 β-胡萝卜素 -亚油酸氧化体系的抑制
作用　β-胡萝卜素易被氧化而褪去黄色 ,在反应体
系中亚油酸氧化产生过氧化物使 β-胡萝卜素褪色 ,
当反应体系中有抗氧化剂时 ,褪色速度缓慢 ,且褪色
程度与抗氧化活性呈负相关 。本实验观察到未加抗
氧化剂的阴性对照褪色迅速 ,在反应结束时黄色基
本全部退去 ,而阳性对照 BHT和 THS褪色速度均
明显低于对照 , 并呈剂量依赖关系 , 结果见表 2,
BHT和 THS对 β-胡萝卜素-亚油酸氧化体系抑制的
IC50分别为 414.64、3429.74μg/mL。
3.4　THS螯合金属离子能力的测定　一些金属离
子 ,如铁离子 、铜离子在脂质的氧化过程中起催化作
用 ,因此具有金属螯合作用的物质可以间接地起抗
氧化作用 。ferozing能够与 Fe2+形成紫红色的络合
物 ,当其它有竞争力的络合剂存在时 ,紫红色会变
浅 ,因此通过光密度值的变化 , 可以评价物质对
Fe2+的络合能力〔9〕。如图 1所示 , THS可对铁离子
具有络合作用 ,其络合铁离子的能力随质量浓度增
大而提高 ,显示了一定的剂量 -效应关系 ,当质量浓
度为 5 mg/mL时 ,对 ferrozine-Fe2+的抑制率达到
69.5%,本实验未测得 BHT(浓度范围:0.015 ～ 1
mg/mL)螯合铁离子的作用 ,本实验关于 BHT的结果
与 Bounatirou〔5〕 , Chung等〔10〕的文献报道一致 ,而与
Li等〔9〕的研究结果不同 , Bounatirou等 〔5〕认为 , BHT
为单羟基的化合物 ,因此不能与 Fe2 +形成螯合物。
图 1　THS螯合金属离子的能力
　表 3　　　　THS对 H2O2诱导的红细胞氧
化溶血的影响 ( x±s, n=3)
组别 质量浓度 /(μg/mL) D(λ)415nm 抑制率 /%
对照组 - 0.072±0.003 -
H2O2(0.05mL) - 0.975±0.032 -
THS 313 0.931±0.025 4.5
625 0.835±0.021 14.4
1250 0.551±0.014 43.5
2500 0.159±0.017 83.7
5000 0.056±0.005 94.3
10000 0.031±0.002 96.9
·769·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 5期 2009年 5月
3.5 　THS对小鼠红细胞过氧化溶血的影响　结果
3所示 ,随着山楂核馏油浓度的增加 ,对 H2O2诱导
的体外小鼠红细胞氧化溶血的抑制率升高 ,并存在
一定的量效关系 , 5 000 μg/mL时抑制率可达到
94.3%,其 IC50为 1541.78μg/mL,表明山楂核馏油
对 H2O2诱导的红细胞氧化溶血有明显的保护作
用 。
4 　讨论
本实验结果表明 , THS有较强的铁离子螯合能
力 ,能有效保护红细胞的过氧化溶血 ,具有一定的还
原力 ,能抑制 β-胡萝卜素 -亚油酸氧化活性及消除
DPPH·自由基 ,表明 THS是一种较好的天然抗氧
化剂 ,本实验的研究结果可为 THS在食品和药用方
面的进一步开发利用提供实验依据。
参 考 文 献
[ 1] 叶磊.山楂核干馏油抑菌及杀菌作用的研究 [ J] .北京
联合大学学报 , 2003, 17(3):48-51.
[ 2] 李长青 ,吴伟 , 佟颖 .山楂核提取物杀菌效果及影响因
素的研究 [ J] .中国消毒学杂志 , 2007, 24(1):50-52.
[ 3] 周洪仁 .浅谈我国的干馏香料 [ J] .香料香精化妆品 ,
1999, 27(2):21-22.
[ 4] 李安林 .山楂核馏油的制备 [ J] .中国医药工业杂志 ,
1996, 27(9):389-390.
[ 5] BounatirouS, SmitiS, MiguelMG, etal.Chemicalcompo-
sition, antioxidantandantibacterialactivitiesoftheessen-
tialoilsisolatedfromTunisianThymuscapitatusHoff.et
Link[ J] .FoodChem, 2007, 105(1):146-155.
[ 6] 贾冬英 , 曹冬冬 , 姚开 .荸荠皮提取物对 DPPH· 自由
基清除活性 [ J] .天然产物研究与开发 , 2007, 19(5):
745-747.
[ 7] 刘培勋 ,高小荣 , 徐文清 ,等 .银耳碱提多糖抗氧化活性
的研究 [ J] .中药药理与临床 , 2005, 21(4):35-37.
[ 8] 黄海兰 , 徐波 ,李增新 , 等.崂山蘑菇抗氧化成分提取及
其活性研究 [ J] .食品科学 , 2005, 26(9):61-66.
[ 9] LiXM, LiXL, ZhouAG.Evaluationofantioxidantactivity
ofthepolysaccharidesextractedfrom Lycium barbarum
fruitsinvitro[ J].EuroPolymerJ, 2007, 43(2):488-497.
[ 10] ChungYC, ChangCT, ChaoWW, etal.Antioxidativeac-
tivityandsafetyofthe50% ethanolicextractfromred
beanfermentedbyBacillussubtilisIMR-NK1[ J] .JAgric
FoodChem, 2002, 50(8):2454-2458.
山核桃树皮水提物对荷瘤小鼠抑瘤效应
及对血象的影响研究
张咏莉 ,詹　苗 ,崔玉强 ,毛建文 ,魏凤香 ,李红枝＊
(广东药学院基础学院生物学教研室 ,广东 广州 510006)
　　摘要　目的:探讨山核桃树皮水提物对荷瘤小鼠的抑瘤效应及对血象的影响。方法:采用细胞培养 、小鼠移植
瘤实验 、药物瘤体治疗 、血象分析等方法研究山核桃树皮水提物对荷瘤小鼠抑瘤效应及其血象的影响。结果:皮下
移植瘤动物模型构建成功。在移植瘤小鼠的第 1、2、3周的血象检测结果中 , 山核桃树皮水提物药物高剂量组的白
细胞 、红细胞 、血红蛋白 、淋巴细胞分类数量均显著性高于 PBS组及中 、低剂量组。结论:在肿瘤进展过程中 , 药物
高剂量能显著改善荷瘤小鼠的贫血和免疫状态 ,中 、低剂量的改善作用不明显 ,达一定剂量的山核桃树皮水提物具
有对荷瘤小鼠的抑瘤效应。
关键词　山核桃树皮;抑瘤效应;血象分析
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)05-0770-05
收稿日期:2008-07-08基金项目:2008年广东省社会发展科技计划项目(83046)作者简介:张咏莉(1973-),女,副教授 ,博士 ,主要从事中药材抗肿瘤作用机理研究;Tel:13500027858。＊通讯作者:李红枝 , E-mail:lihong581110@ 163.com。
　　山核桃属胡桃科胡桃属落叶乔木 。据史料记
载 ,山核桃树皮具有清热 、解毒 、止痢 、明目等功效 ,
可用于治疗泄泻 、痢疾 、白带 、目赤 。我国民间有人
用山核桃树皮水煎服用治疗肿瘤 ,但目前关于山核
桃树皮治疗肿瘤的研究报道还很少 ,本文以 BALb/c
荷瘤小鼠为实验模型 ,拟通过对荷瘤小鼠的抑瘤实验
及血象分析来探讨山核桃树皮水提物的抗肿瘤作用。
1　材料与仪器
·770· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 5期 2009年 5月