全 文 ：２０１２年
第３２卷 第２期
河北大学学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｅｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｅｄｉｔｉｏｎ）
２０１２
Ｖｏｌ．３２Ｎｏ．２
山苦菜嫩茎直接分化无性系的建立
张卓，王艳，王晓旭，李慧，姜长阳
（辽宁师范大学 生命科学学院，辽宁 大连 １１６０８１）
摘 要：为了保护山苦菜资源，满足人们对种苗栽培的需求，分别以山苦菜茎尖、叶片、叶柄和无芽嫩茎为
外植体，进行直接分化不定芽的诱导培养．结果表明：嫩茎是直接分化出不定芽的理想材料，最佳分化培养基为
ＭＳ＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ；１／４ＭＳ＋ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ
是分化芽生根的理想培养基；山苦菜再生苗移栽的理想基质是１／２园土＋１／２河沙，移栽成活率为９８．４％，移栽
成活苗定植的成活率为９８．８％．本实验证明：在适宜条件下可由嫩茎直接分化建立起山苦菜无性系．
关键词：山苦菜；直接分化；生根；无性系
中图分类号：Ｑ９４５ 文献标志码：Ａ 文章编号：１０００－１５６５（２０１２）０２－０１８０－０７
Ｃｌｏｎｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｉｒｅｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｅｎｄｅｒ
ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ＺＨＡＮＧ Ｚｈｕｏ，ＷＡＮＧ Ｙａｎ，ＷＡＮＧ Ｘｉａｏ－ｘｕ，ＬＩ Ｈｕｉ，ＪＩＡＮＧ Ｃｈａｎｇ－ｙａｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌｉａｏｎｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ １１６０８１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｐｒｅｓｅｒｖｅ ｔｈｅ ｗｉｌｄ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ ｍｅｅｔ ｔｈｅ ｎｅｅｄｓ ｏｆ ｇｅｒｍｃｈｉｔｓ ｆｏｒ ｐｌａｎｔｉｎｇ，ｍｅｒｉ－
ｓｔｅｍｓ，ｌｅａｖｅｓ，ｓｔｉｐｅ ａｎｄ ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｕｄｓ ｏｆ Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｔｏ ｉｎｄｕｃｅ ｄｉｒｅｃｔ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ｗｉｔｈｏｕｔ ｂｕｄｓ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｏｎｅ ｏｆ ｔｈｅ ｆｏｕｒ ｓｔｕｆｓ ｆｏｒ ｄｉｒｅｃｔ
ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｗｉｔｈｏｕｔ ｃａｌｕｓ，ＭＳ＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ ３０ｇ／Ｌ
ｗａｓ ｔｈｅ ｐｅｒｆｅｃｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｄｉｒｅｃｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ；ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｕｄｓ ｗａｓ
１／４ＭＳ＋ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ｇ／Ｌ；１／２ｃｌａｙｓ ｆｒｏｍ ｇａｒｄｅｎ＋１／２ｓａｎｄｓ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｆｏｒ ｔｒａｎｓ－
ｐｌａｎｔｉｎｇ ｏｆ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｉｎｇ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｗａｓ ９８．４％ａｎｄ ｓｔａｂｌｅ ｐｌａｎｔｉｎｇ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ｗａｓ
９８．８％．Ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｐｒｏｖｅｄ ｔｈａｔ ｃｌｏｎｅ ｔｈｒｏｕｇｈ ｄｉｒｅｃｔ ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ ｃａｎ
ｂｅ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ ｗｉｔｈ ｐｅｒｆｅｃｔ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ；ｄｉｒｅｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ；ｒｏｏｔｉｎｇ；ｃｌｏｎｅ
山苦菜（Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ），又名苦碟子、盘尔草、秋苦荬菜、鸭子食等［１－２］，属菊科，苦荬菜属多年生草本
植物［３］．山苦菜既可食用又可药用，全草入药，具有解热、镇痛、消炎等功效．现代药理研究表明：山苦菜具有
保肝抗炎、抗氧化、抗烟碱、抗病毒和抗白血病等药效［４］．山苦菜新鲜茎叶具有适口性好等优点，已经成为人
收稿日期：２０１１－０９－１６
基金项目：辽宁省高等教育教学改革项目（２００９０３０４）；辽宁师范大学教学改革项目（ＬＳＪＧ：２００９０１０８）
第一作者：张卓（１９８７－），女，辽宁沈阳人，辽宁师范大学在读硕士研究生．
通信作者：姜长阳（１９５３－），男，辽宁大连人，辽宁师范大学教授，主要从事植物技术研究．Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｈａｎｇｙａｎｇｊｉａｎｇ＠１２６．ｃｏｍ
第２期 张 卓等：山苦菜嫩茎直接分化无性系的建立
们极为喜爱的野菜和家禽、家畜喜食的青饲料［５］．研究者的调查发现，在早春大连市场上，山苦菜的嫩芽价格
达２００元／ｋｇ．人们的大量食用和很高的售价，使得以根茎繁殖为主的山苦菜野生资源的分布和数量都急剧
减少，有的地区已成为濒危野菜．现在，在大连郊区已经很难采到野生山苦菜．因此，寻求山苦菜快速繁殖的
方法显得尤为重要．此前已多有关于苦荬菜属植物的研究报道［６－９］，多集中于其食用及药用价值方面，迄今未
见山苦菜组织培养、外植体直接分化并建立无性系的报道．本研究采用组织培养的方法，进行山苦菜直接分
化的研究，建立山苦菜的高效离体再生体系，为满足人们对种苗的需要，并为山苦菜的野生资源的保护、转基
因研究和基因库的建立提供技术基础．
１ 材料与方法
１．１ 材料灭菌及培养条件
将采自大连郊区山坡上生长旺盛的山苦菜植株用清水冲洗干净后，剪成若干５ｃｍ左右的小段，放到
５００ｍＬ的磨口广口瓶中，用自来水振荡洗涤１０～２０ｍｉｎ后，用体积分数０．０５％的安利洗涤液洗涤约１０ｍｉｎ，接
着用无菌水震荡洗涤至无泡沫后置于超净工作台上，用体积分数７５％的乙醇灭菌１０～１５ｓ后，迅速用无菌水振
荡洗涤３～５次，加入质量浓度０．５ｍｇ／Ｌ的ＨｇＣｌ２ 溶液浸泡１３ｍｉｎ，紧接着用无菌水洗涤４～５次［１０］，将无菌材
料转移到覆有干净无菌滤纸的培养皿中，吸干材料表面的水分，待剪切接种［１１］．培养基中琼脂的质量浓度为
５．０ｇ／Ｌ，ｐＨ ５．８～６．０，持续光照时间为１２ｈ／ｄ，光强２ ０００～４ ０００ｌｘ，培养温度１５～２７℃［１２］．
１．２ 方法
１．２．１ 不同种类及不同质量浓度激素对茎尖、叶片、叶柄和嫩茎直接分化的影响
从无菌材料上剪取茎尖、叶片、叶柄和茎段，其中叶柄和茎段长度为０．５～１．０ｃｍ、叶片为边长０．５ｃｍ
左右块状，茎尖长约０．８ｃｍ．将以上４种材料分别接种于以 ＭＳ为基本培养基并添加不同种类及不同质量
浓度激素的培养基上，置于光照恒温条件下进行直接分化的诱导培养．直接分化实验重复３次，每种培养基
接种培养５０个材料．
１．２．２ 不同生长素对分化芽生根的影响
将嫩茎分化的分化芽从基部剪下，接种到以 ＭＳ为基本培养基，分别附加ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ，ＩＢＡ ０．２ｍｇ／Ｌ，
ＮＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ，２，４－Ｄ ０．２ｍｇ／Ｌ和蔗糖３０ｇ／Ｌ的培养基上．接种时嫩茎植物学形态学下部的生长点接触到培
养基（下同），于变温光照条件下进行生根培养．不同生长素对山苦菜分化芽生根的影响实验重复２次，每种培
养基接种培养８０个材料．
１．２．３ 不同碳源及其质量浓度对分化芽生根的影响
以 ＭＳ为基本培养基，附加的生长素为ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ，分别采用蔗糖、葡萄糖和麦芽糖作为碳源并设
置质量浓度梯度，将分化芽从基部剪下接种到各培养基中，于变温光照条件下进行生根培养．实验重复２次，
每种培养基接种培养８０个材料．
１．２．４ 不同基本培养基对分化芽生根的影响
选用通过上述实验确定的生长素和碳源，即ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ和蔗糖２０ｇ／Ｌ附加到１／４ＭＳ，１／２ＭＳ，ＭＳ，
Ｂ５，Ｎ６和 Ｗｈｉｔｅ ６种不同的基本培养基中，再把从基部剪下的分化芽接种到上述培养基上后，于变温光照条件
下进行生根培养，实验中每种培养基接种８０个分化芽，重复２次．
１．２．５ 试管苗生根继代培养
从生长旺盛的生根试管苗上剪取具有２个生长点的茎段，接种到筛选出的理想生根培养基上，于变温光
照条件下进行继代培养，共接种５０个茎段．生根继代培养实验重复３次，每次实验继代培养６代，接种培养
２００个茎段．
１．２．６ 试管苗的移栽与定植
将培养着生长旺盛，根系发达试管苗的培养瓶打开瓶塞，炼苗４ｄ后移栽到上半层分别为干净河沙、炉
灰渣和１／２园土＋１／２河沙，下半层为肥沃园土的温室花盆中，移栽实验重复２次，共移栽５５０株．
把在温室中移栽成活的试管苗定植到山坡下水库旁的开垦地上，共定植５００株．
·１８１·
河北大学学报（自然科学版） 第３２卷
１．２．７ 数据处理
本实验所有数据均采用ｓｐｓｓ１７．０进行差异显著性分析．
２ 结果与分析
２．１ 不同种类及不同质量浓度激素对茎尖、叶片、叶柄和嫩茎直接分化的影响
观察表明，培养至第６天，个别茎尖的生长点处开始抽芽，但只生长１个芽且向上生长，芽较小且呈黄绿
色，长势较弱；叶片边缘、叶柄两端均开始膨大；茎段无明显变化．培养２０ｄ，茎尖抽出的嫩芽仍较短，且大多
已经开始脱分化形成愈伤组织，叶片边缘和叶柄两端形成了白色或淡黄色的愈伤组织，茎段已由两端或一端
切口直接分化出不定芽（以下称为分化芽），一般抽出２～３个叶片（呈嫩绿色向四周生长）；培养至第４５天观
ａ．正面照；ｂ．底面照．
图１ 山苦菜茎段的直接分化团簇状分化芽
Ｆｉｇ．１ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｄｉｒｅｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｂｕｄｓ ｆｒｏｍ
ｔｅｎｄｅｒ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
察统计，结果见表１．由表１可见，４种材料在 ＭＳ＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋
ＩＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ这一培养基中的分化率均为最高
值，但茎尖、叶片和叶柄分别仅为２２％，１４％和２６％，且叶片和叶柄
上的分化芽都是由愈伤组织分化而来，出现的愈伤组织团块较大，
分化芽长势较弱且畸形苗较多．而以茎段为材料，不仅分化率达到
了１００％（平均每个茎段分化出５６个高度为２．１～３．４ｃｍ的直接分
化芽），而且分化芽向四周生长，长势较好，叶为鲜翠绿色，每个不定
芽具３～６个生长点，整体呈团簇状，无畸形苗，外观生长状态良好，
充满整个三角瓶底部（图１）．由此可见，ＭＳ＋ＢＡ ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ
０．５ｍｇ／Ｌ＋ ＫＴ ０．５ｍｇ／Ｌ这一培养基是诱导茎段直接分化芽的理想培养基．
表１ 不同激素配比对山苦菜不同材料直接分化的影响
Ｔａｂ．１ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｄｉｒｅｃｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｉｘｅｒｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
ρ（激素）／（ｍｇ·Ｌ
－１）
ＢＡ ＩＢＡ ＫＴ
接种数／个
分化率／％
茎尖 叶片 叶柄 茎段
０．２ ０ ０ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ０ｉ
０．２ ０．５ ０ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ２ｈ
０．２ ０ ０．５ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ２４ｅ
０．２ ０．５ ０．５ ５０ ４ｄ ０ｃ ２ｃ ７４ｂ
０．５ ０ ０ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ０ｉ
０．５ ０．５ ０ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ８ｇ
０．５ ０ ０．５ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ５２ｄ
０．５ ０．５ ０．５ ５０ ２２ａ １４ａ ２６ａ １００ａ
０．５ １．０ ０．５ ５０ １８ｂ ６ｂ ８ｂ ６４ｃ
１．０ ０ ０ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ０ｉ
１．０ ０．５ ０ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ２ｈ
１．０ ０ ０．５ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ １８ｆ
１．０ ０．５ ０．５ ５０ ８ｃ ０ｃ ４ｃ １６ｆ
１．０ １．０ ０．５ ５０ ０ｅ ０ｃ ０ｄ ４ｈ
ａ－ｉ表示按ＬＳＤ单因素分析比较法，在５％概率水平上的统计呈显著差异．
·２８１·
第２期 张 卓等：山苦菜嫩茎直接分化无性系的建立
２．２ 不同条件对分化芽生根的影响
２．２．１ 不同生长素对分化芽生根的影响
生根培养２８ｄ观察统计，结果见表２．由表２可见，在添加ＩＡＡ，ＩＢＡ和 ＮＡＡ的培养基上生根率均为
１００％，且以ＩＡＡ为生长素进行生根的分化芽长势最好（图２）．观察发现，分化芽培养至第５天开始生根，从
平均生根数、根长以及苗长势等方面看，变温条件下有利于山苦菜分化芽生根的生长素依次为ＩＡＡ，ＩＢＡ，
ＮＡＡ和２，４－Ｄ．因此，ＩＡＡ是山苦菜分化芽生根的理想生长素．
表２ 不同生长素对分化芽生根的影响
Ｔａｂ．２ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｕｘｉｎｓ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｕｄｓ
ρ（激素）／（ｍｇ·Ｌ
－１）
ＩＡＡ ＩＢＡ ＮＡＡ ２，４－Ｄ
接种数／
个
生根率／
％
平均每株
生根／条
根平均长／
ｃｍ
苗长势
０．２ ０ ０ ０ ８０ １００ ８．８８ａ ５．２４ａ ＋＋＋
０ ０．２ ０ ０ ８０ １００ ８．４１ｂ ５．０１ｂ ＋＋
０ ０ ０．２ ０ ８０ １００ ８．６１ｂ ２．３３ｃ ＋
０ ０ ０ ０．２ ８０ ０ ０ｃ ０ｄ ＋
＋＋＋长势很好；＋＋长势较好；＋长势一般．
ａ－ｄ表示按ＬＳＤ单因素分析比较法，在５％概率水平上的统计呈显著差异．
２．２．２ 不同碳源及其质量浓度对山苦菜分化芽生根的影响
接种后每隔７ｄ观察１次生根情况并进行详细记录，培养至第２８天进行第４次观察，结果见表３．观察
发现分化芽培养６ｄ左右开始生根，以蔗糖为碳源的培养基对根的诱导效果要好于葡糖糖和麦芽糖，且添加
蔗糖２０ｇ／Ｌ的培养基上平均根数最多、根平均最长且苗长势最好（图３）．因此蔗糖为诱导山苦菜分化芽生
根的理想碳源，理想质量浓度为２０ｇ／Ｌ．
图２ ＩＡＡ对生根的诱导 图３ ２０ｇ／Ｌ的蔗糖对生根的诱导
Ｆｉｇ．２ Ｒｏｏｔｉｎｇ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｏｆ ＩＡＡ Ｆｉｇ．３ Ｒｏｏｔｉｎｇ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｏｆ ｓｕｃｒｏｓｅ ２０ｇ／Ｌ
表３ 不同碳源对分化芽生根的影响
Ｔａｂ．３ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃａｒｂｏｎ ｓｏｕｒｃｅｓ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｕｄｓ
碳源种类 ρ（碳源）／（ｇ·Ｌ
－１） 接种数／个 生根率／％ 平均每株生根／条 根平均长／㎝ 苗长势
无碳源 ８０ １００ａ ６．２８ｇ ４．２５ｃ ＋
蔗糖
１０ ８０ １００ａ １０．３３ｂ ４．３３ｃ ＋＋
２０ ８０ １００ａ １１．３４ａ ６．３７ａ ＋＋＋
３０ ８０ ９１．７ｂ ９．１８ｄ ５．６５ｂ ＋＋＋
葡萄糖
１０ ８０ １００ａ ９．２７ｄ ４．２１ｃ ＋＋
２０ ８０ １００ａ ９．５９ｃ ４．１５ｄ ＋＋
３０ ８０ ７５ｃ ９．２６ｄ ３．６４ｇ ＋
麦芽糖
１０ ８０ １００ａ ７．５６ｆ ３．９８ｅ ＋
２０ ８０ １００ａ ８．０４ｅ ３．７７ｆ ＋
３０ ８０ １００ａ ６．３６ｇ ２．９１ｈ ＋
＋＋＋长势好；＋＋长势较好；＋长势一般．
ａ－ｈ表示按ＬＳＤ单因素分析比较法，在５％概率水平上的统计呈显著差异．
·３８１·
河北大学学报（自然科学版） 第３２卷
２．２．３ 不同基本培养基对山苦菜分化芽生根的影响
观察表明，接种到培养基中的第４天已有植株开始生根，培养至第２８天时对生根率、平均生根数、根的
长度等进行观察统计，结果见表４．在糖与激素相同的条件下，６种基本培养基中以１／４ＭＳ为基本培养基时
分化芽生根状态最好（图４）．在１／４ＭＳ＋ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／Ｌ这种培养基上培养的分化芽，不仅
生根率１００％（平均每株试管苗生根６．８０条（最多），每条根的平均长度３．９９ｃｍ），而且生根试管苗长势好，
同时上根系白嫩．因此，１／４ＭＳ是山苦菜分化芽生根的理想基本培养基，１／４ＭＳ＋ＩＡＡ ０．２ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２０ｇ／
Ｌ是山苦菜分化芽生根培养的理想培养基．
表４ 不同基本培养基对分化芽生根的影响
Ｔａｂ．４ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍｓ ｏｎ ｒｏｏｔｉｎｇ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｄ ｂｕｄｓ
基本培养基 接种／个 生根率／％ 平均每株生根／条 根平均长／ｃｍ 苗长势
１／４ＭＳ ８０ １００ ６．８０ａ ３．９９ａ ＋＋
１／２ＭＳ ８０ １００ ６．１０ｂ ３．２２ｂ ＋＋
ＭＳ ８０ １００ ５．５２ｃ ３．１７ｂ ＋
Ｂ５ ８０ １００ ４．９８ｄ ２．４５ｄ ＋
Ｗｈｉｔｅ ８０ １００ １．４０ｆ ２．４７ｄ ＋
Ｎ６ ８０ １００ ３．３０ｅ ２．９８ｃ ＋
＋＋长势好；＋长势一般．ａ－ｆ示按ＬＳＤ单因素分析比较法，在５％概率水平上的统计呈显著差异．
２．２．４ 试管苗生根继代培养与快速繁殖
生根继代培养２５ｄ后观察统计：试管苗成活率和生根率均为１００％，且植株长势较好，叶片呈深绿色无
枯叶（图５），根系发达．统计还证明，生根继代增殖速度为４．８倍／２５ｄ，且几乎没有无效苗．３次重复实验，每
次继代培养６代的结果基本一致．按照这种繁殖速度，理论上１株试管苗１年能繁殖出４．８１４．６株试管苗，即
使除掉各种不利因素，也完全能达到快速繁殖、满足栽培和研究需求的目的．
图４ １／４ＭＳ对生根的诱导 图５ 生根继代培养的试管苗
Ｆｉｇ．４ Ｒｏｏｔｉｎｇ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ｏｆ １／４ＭＳ Ｆｉｇ．５ Ｔｕｂｅ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｏｆ ｒｏｏｔｉｎｇ ｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ
２．２．５ 试管苗的移栽与定植
移栽后３０ｄ统计证明：移栽的理想基质为１／２园土＋１／２河沙，移栽成活５４１株，成活率为９８．４％．定
植后３０ｄ统计证明：定植成活４８８株，成活率为９７．６％．定植成活的试管苗初期生长缓慢，后期生长速度加
快，长势旺盛，根系增加１倍左右，当年开花结果．
３ 讨论
诱导山苦菜４种材料直接分化的实验证明：无芽嫩茎是最适合直接分化的外植体，这表明细胞的结构和
生理状态的不同会导致不同组织在同种条件下产生不同的反应［１３］．当培养基中添加的ＢＡ质量浓度发生变
·４８１·
第２期 张 卓等：山苦菜嫩茎直接分化无性系的建立
化时，对山苦菜分化芽的诱导情况有显著影响，最适质量浓度为０．５ｍｇ／Ｌ，这与蓝桃菊等人［１４］对罗汉果不
同器官直接分化的研究结果一致．ＩＡＡ是植物天然生长素，高质量浓度抑制植物的生长，低质量浓度促进植
物的生长，促进细胞伸长和细胞分化，进而促进植物的生长与发育．已有研究表明，ＩＡＡ对菊科植物生根的
诱导效果较好［１５］，本研究结果也证明ＩＡＡ是诱导菊科植物山苦菜分化芽生根培养的最佳生长素．光不仅作
为一种能源影响光合作用，还作为一种触发信号影响植物生长及发育的许多方面，光照条件不同，植物生长
状态亦不同［１６］，日光为山苦菜生根培养的最佳光照条件．前人的研究表明，作为人工合成的生长素２，４－Ｄ，是
常见生长素中诱导愈伤组织作用最强的［１７－１９］，而对拟南芥试管苗生根抑制作用明显［２０］．本研究证明：在添加
２，４－Ｄ的培养基上分化苗不生根，但在形态学下端出现了愈伤状膨大，经过一段时间的培养形成较多愈伤组
织，这与前人的研究结果一致．
邱奉同等人［１２］对山苦菜组织培养的研究采用的是愈伤组织诱导培养途径，这种方法周期较长．本次研
究成功地获得了无芽嫩茎的直接分化芽，建立了山苦菜的无性系．诱导直接分化不仅操作简单、节省成本，而
且繁殖速度要比以往愈伤再分化的速度快得多，提升了山苦菜快速繁殖的效率，能够更有效地解决各方面对
山苦菜种苗的需求．本研究培养的山苦菜试管苗不仅可为栽培提供较理想的试管苗，而且也为山苦菜野生资
源得到保护、转基因研究和基因库的建立奠定了基础．
参 考 文 献：
［１］中国科学院北京植物所主编．中国高等植物图鉴：第４册［Ｍ］．北京：科学出版社，１９７５：７０２．
ＣＨＩＮＥＳＥ ＡＣＡＤＥＭＹ ＯＦ ＳＣＩＥＮＣＥＳ ＢＥＩＪＩＮＧ ＩＮＳＴＩＴＵＴＥ ＯＦ ＢＯＴＡＮＹ．Ｈｉｇｈｅｒ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｃｈｉｎａ：ｆｏｕｒｔｈ ｖｏｌｕｍｅｓ
［Ｍ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｐｒｅｓｓ，１９７５：７０２．
［２］李书心．辽宁植物志：下册［Ｍ］．沈阳：辽宁科学技术出版社，１９９１：６２０－６２１．
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（责任编辑：赵藏赏）
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