全 文 ：臭牡丹根正丁醇提取物镇痛作用的研究＊
刘建新　周　俐　周　青　连其深
(赣南医学院药理教研室 ,赣州 341000)
摘要　目的:研究臭牡丹根正丁醇提取物对疼痛小鼠的影响 。方法:化学方法制备臭牡丹根正丁
醇提取物。镇痛试验中 ,采用扭体实验和热板法 ,在热板法中小鼠分别注射臭牡丹正丁醇与纳洛酮
或吗啡与纳洛酮 ,探测药物对不良刺激的延迟时间 。炎性疼痛试验中 ,采用角叉菜胶诱发大鼠脚趾
肿胀模型 ,前列腺素类含量的测定通过紫外可见光分光光度法 ,经过 0.5 mol/L氢氧化钾甲醇溶
液 ,在 50℃的温度中为异构后 ,在波长为 278nm处检测。结果:腹腔注射臭牡丹提取物 ,发现能明
显抑制 0.6%醋酸诱发疼痛(P<0.01),在热板法中 ,在给臭牡丹药 15分钟 、30分钟 、60分钟 、90
分钟后小鼠明显延长对不良刺激反应时间 。实验表明同时给予臭牡丹提取物与纳洛酮 15分钟 、30
分钟 、60分钟 、90分钟后小鼠明显延长对不良刺激反应时间 ,提示纳洛酮不能翻转其镇痛作用。在
抗炎试验中 ,臭牡丹提取物呈剂量依赖性地抑制由角叉菜胶诱发炎性肿胀的前列腺素生成 。结论:
臭牡丹正丁醇提取物具有镇痛作用 ,该作用阿片受体无关 ,与抑制前列腺素合成有关 。
关键词　臭牡丹;正丁醇;前列腺素;角叉菜胶
THESTUDYONANTINOCICEPTIVEEFFECTOFCLERODENDRONBUNGEISTEUDRO-
OTSN-BUTYLALCOHOLEXTRACTINMICE
LIUJian-Xin, ZHOULi, ZHOUQing, LIANQi-Shen
(DepartmentofPharmmacology, GannanMedicalColege, Ganzhou341000)
Abstract　Objective:ToinvestigatetheefectofclerodendronbungeisteudrootsN-butylalcoholextract
onnociceptivepaininmice.Methods:N-butylalcoholextractofclerodendronbungeisteudrootswas
prepared.Intheantinociceptivetests, miceperformedwithwrithingtest, andhotplatetest.Inthehot
platetest, micewereadministerednaloxone(40mg/kg, i.p.)withtheN-butylalcoholextractsormor-
phineinjections.Latencytonociceptivehotstimulationofmicewasdeterminedwithhotplatetest.Inthe
inflammatorypaintests, Carageenan-inducedhindpawedemainratswereprepared.Prostaglandin
(PG)contentassayedbyUv-visspectrophotometrywith278nmafter0.5 mol/LKOHmethanolreagent
dissimilating.catalyzingtheisomerizationat50℃.Results:Theextract, administeredviaintraperitoneal
injectionsignificantlyreducedthenociceptionproducedby0.6% aceticacid(P<0.01).Theextract
prolongedthelatencyreactioninthehot-platetestin15min, 30min, 60min, 90 mininmice.Theex-
tractadministeredincombinationwithnaloxonemarkedprolongedthelatencyreactioninthehot-platein
15 min, 30min, 60min, 90min, suggestingthatnaloxonedidnotreverttheactionoftheextractefect.
Intheanti-inflammatorytests, theextractmarkedlysuppressedthegenerationofPGinadose-dependent
mannerininflamedpawschalengedbycarrageenan.Conclusions:N-butylalcoholextractofcleroden-
dronbungeisteudrootshaveanantinociceptiveefect.Theanalgesicefectisnotassociatedwiththeacti-
vationofopioidreceptorsbutassociatedwiththegenerationofPGsuppressed.
Keywords　Clerodendronbungeisteudroots;n-butylalcohol;Prostaglandin;Carrageenan
＊江西省自然科学基金资助项目(0440013);江西省卫生厅中医药科研基金资助项目(2003A34)
·349·中国疼痛医学杂志 ChineseJournalofPainMedicine2007, 13, (6)
　　臭牡丹(clerodendronbungeisteud)属马鞭草科
植物的干燥根 ,分布于我国四川 、江西 、福建 、广东等
省 。临床多用于疽 、疔疮 、乳腺炎 、关节炎 、肝炎等疾
病的治疗 [ 1] 。我们曾报道臭牡丹水提取物具有镇
痛 、抗炎 、抗变态反应等作用 [ 2 ～ 4] 。因此本研究通过
对其黄酮 、生物碱等组分提取 ,确定其镇痛活性成
分 ,同时初步研究其干预疼痛的作用 。
材料与方法
1.试剂与动物　臭牡丹采自赣州 ,取适量臭牡
丹根加 10倍量的蒸馏水煮沸 20分钟后过滤 ,残渣
再用蒸馏水加热提取一次。合并两次滤液 ,浓缩后
三倍量 95%的乙醇放置 48h后 ,减压过滤并回收滤
液中的乙醇至无醇味 。分别用氯仿提取得总生物碱
组分 、用醋酸乙酯提取得总黄酮组分 、正丁醇提取物
组分 ,备镇痛试验用。角叉菜胶 ,加拿大进口分装 ,
用生理盐水稀释分 10g/l供试验用。其他试剂均为
分析纯 。
动物 昆明种小鼠 ,体重(19±2)g,雌雄兼用 ,赣
南医学院实验动物中心提供。大鼠 , 体重 (215 ±
25)g, 雌雄兼用 ,江西省实验动物中心提供 ,合格证
号为 JXA-2004118。
2.臭牡丹正丁醇提取物对热刺激诱发痛的镇痛
效应　取雌性小鼠 46只 ,体重 18g～ 22g,随机分为
5组:分别为对照组 ,臭牡丹 Ⅰ组(ip, 0.5 g/kg, n=
10), Ⅱ组(ip, 1 g/kg, n=10),吗啡组(ip, 10 mg/
kg, n=10),臭牡丹总黄酮组(ip, 4g/kg, n=8),臭
牡丹总生物碱组(ip, 4 g/kg, n=8)。用 GJ-8402型
热板测痛仪致痛(55±0.5℃)。以小鼠舔后足作为
痛反应的指标 ,选择痛阈潜伏期不超过 30 s的小
鼠 , ip给药后 15, 30, 60, 90min各测一次痛阈。
3.纳洛酮干预吗啡 、臭牡丹正丁醇提取物镇痛
作用　取雌性小鼠 30只 ,体重 18 g～ 22 g,随机分
为 3组:分别为对照组 (ip,同体积的生理盐水 +纳
络酮 40 mg/kg, ),臭牡丹正丁醇提取物 Ⅱ组(ip, 1
g/kg+纳络酮 40 mg/kg),吗啡组(ip, 10 mg/kg+纳
络酮 40 mg/kg, )。用 GJ-8402型热板测痛仪致痛
(55±0.5℃),方法同上 。 ip给药后 15、 30、60、 90
min各测一次痛阈。
4.臭牡丹正丁醇提取物对冰醋酸诱发痛的镇痛
效应　取小鼠 50只 ,雌雄兼用 ,体重 18g～ 22g,随
机分为 3组:分别为对照组 ,吗啡组 ,臭牡丹 Ⅱ组 。
对照组腹腔生理盐水 10 ml/kg;吗啡小鼠腹腔注射
100mg/kg。臭牡丹 Ⅱ组小鼠腹腔注射 1 g/kg。给
药 , 40min后 ip0.6%冰醋酸 0.2 ml,分别记录 10
min内各组小鼠扭体次数。
5.臭牡丹正丁醇提取物抑制角叉菜胶引起大鼠
炎痛因子的效应　取大鼠随机分为空白组(ipNS, n
=6), 、模型组(ipNS, n=6)、地塞米松组(ip2mg/
kg)、臭牡丹正丁醇提取物 Ⅰ组(ip0.5g/kg), 、Ⅱ组
(ip1g/kg)。模型组 ,地塞米松组 ,臭牡丹组 Ⅰ 、Ⅱ
分别腹腔给药 30分钟后每鼠右后足跖皮内注射 0.
1ml的 1%角叉菜胶致炎 , 与之相对应的空白组每
鼠右足跖皮内注射 0.1 ml等体积的生理盐水。致
炎 4小时后分别处死 ,将致炎足自踝关节上 0.5 cm
处剪下 ,称重后剪碎皮肤并置于 4 ml的 PBS(50
mmol/L)液中浸泡 1小时 ,浸泡液离心(4000×g,
15 min, -4℃),取上清液 0.15 ml,加入 0.5 mol/
KOH甲醇溶液 1 ml, 50℃水浴中异构 , 20 min后加
入甲醇 1.5 ml,于 278 nm处测定 OD值 ,以每克炎
症组织相当的 OD值表示前列腺素(PG)含量。
6.统计方法　使用 SPSS11.0统计软件包 , 所
有数据用 X±S表示 ,计量资料采用方差分析的 Post
Hoc检验 ,两组之间的比较用 t检验 , P<0.05为差
异有显著性。
结 果
1.臭牡丹正丁醇提取物对热刺激诱发痛的镇痛
效应
从表 1可以看出 ,热板法对于对照组不同时间
点(15、30、60、90 min)雌性小鼠均有明显的疼痛反
应 ,且对疼痛阈值影响不明显。吗啡组在相应的时
间点与对照组相比 ,均表现具有提高小鼠疼痛的阈
值作用。臭牡丹总黄酮组和总生物碱组在不同时间
点与对照组相比对小鼠疼痛阈值的影响不明显(P
>0.05)。臭牡丹正丁醇组对小鼠疼痛阈值的提高
在不同的时间点(15、30、60、90 min)存在着明显的
剂量 -效应关系。
2.纳洛酮干预吗啡 、臭牡丹正丁醇提取物镇痛
作用
从表 2可以看出 ,对照组(生理盐水 +纳络酮)
在不同时间点(15、30、60、90 min)雌性小鼠均有明
显的疼痛反应 ,且对疼痛阈值影响不明显。吗啡 +
纳络酮组在相应的时间点与对照组比较均不表现提
高小鼠疼痛阈值的作用 ,显示纳络酮能翻转吗啡对
小鼠的镇痛作用。同样方法 ,臭牡丹正丁醇提取物
+纳络酮组与对照组相比纳络酮不能翻转臭牡丹正
丁醇提取物对小鼠的镇痛作用(P<0.01)。
·350· 中国疼痛医学杂志 ChineseJournalofPainMedicine2007, 13, (6)
表 1　臭牡丹正丁醇提取物对热刺激诱发痛阈值效应(X±S)
Table1　EffectofN-butylalcoholextractofclerodendronbungeisteudrootsonthepainthresholdinducedbythethermal
stimulus
组别
group
剂量
(g/kg) 0min 15min 30min 60min 90min
对照组
control - 19.5±4.6 17.7±7.6 18.5±6.2 16.7±4.0 17.4±4.6
吗啡morphine 0.02 22.4±4.8 57.0±9.5ab 60.0±0.0ab 57.0±9.5ab 49.6±12.6a
正丁醇提取物-Ⅰ
n-butanolextract-Ⅰ 0.5 16.3±5.1 32.6±4.8a 42.7±11.74a 38.6±11.5a 30.2±8.9a
正丁醇提取物-Ⅱ
n-butanolextract-Ⅱ 1 18.5±6.2 52.0±11.4ab 44.4±13.4a 50.5±15.7ab 48.1±15.5ab
总生物碱
totalalkaloidsextract 4 19.9±5.2 24.4±3.9 19.25±4.8 20.63±13.9 18.2±4.0
总黄酮
totalflaronoidsextract 4 16.5±2.3 26.4±5.9 18.7±10.5 23.7±9.9 18.5±5.8
a:P<0.01,与对照组比较;b:P<0.01,与正丁醇提取物-Ⅰ比较
comparedwithcontrol;aP<0.01;compaedwithn-butanolextract-Ⅰ ;b:P<0.01
　　3.臭牡丹正丁醇提取物对冰醋酸诱发痛的镇痛
效应
由表 3可见 ,冰醋酸对不同组别的小鼠均能致
痛 ,产生扭体反应。其中吗啡组与对照组相比明显
能提高冰醋酸致疼鼠的阈值(P<0.01)。臭牡丹正
丁醇提取物组与对照组相比明显提高冰醋酸致疼鼠
的阈值(P<0.01)。
4.臭牡丹正丁醇提取物抑制角叉菜胶引起大鼠
炎痛因子的效应
由表 4可见 ,角叉菜胶能明显提高小鼠的足跖
关节的组织液中前列腺素 (PG)的含量 。模型对照
组中组织液的 PG含量与空白组相比呈显著差异(P
表 2　纳洛酮干预吗啡 、臭牡丹正丁醇提取物镇痛作用(X±S, n=10)
Table2　InterventionaleffectofnaloxonehydrochlorideonantinociceptiveeffectofN-butylalcoholextractofclerodendron
bungeisteudrootsandofmorphineinmice
组别group 剂量 dose(g/kg) 0min 15min 30min 60min 90min
对照组
control - 19.0±5.3 16.5±8.1 18.3±6.4 16.5±3.951 16.8±4.4
吗啡 +纳络酮
morphine+naloxone 0.02 21.8±2.9 17.2±4.2 21.0±5.2 23.4±10.276 22.0±9.9
正丁醇提取物 +纳络酮
n-butanolextract-Ⅱ +naloxone 1 21.5±3.5 36.8±17.9b 43.0±13.5b 55.1±10.8b 52.2±13.4b
与对照组比较:b:P<0.01, comparedwithcontrol
表 3　臭牡丹正丁醇提取物对冰醋酸诱发痛的镇痛效应(X±S)
Table3　EffectofN-butylalcoholextractofclerodendronbungeisteudrootsonthenociceptivepainproducedbyaceticacid
组别
group
剂量
Dose(g/kg)
动物数
thenumberofanimals
扭体数
thenumberofwrithes
对照组
control - 11 61.82±3.74
吗啡组
morphine 0.02 10 1.50±3.17b
正丁醇提取物-Ⅱ
n-butanolextract-Ⅱ 1 10 31.1±11.76b
与对照组比较:b:P<0.01, compaedwithcontrol
·351·中国疼痛医学杂志 ChineseJournalofPainMedicine2007, 13, (6)
<0.001),地塞米松组与模型组相比组织液 PG含
量明显降低 ,呈显著差异 ,表明实验造模成功。给臭
牡丹正丁醇提取物小鼠足趾组织液中的 PG含量降
低呈剂量相关性 ,与模型组相比呈显著性差异。
表 4　臭牡丹正丁醇提取物抑制角叉菜胶引起大鼠炎痛因子前列腺素含量的效应(X±S)
Table4　EffectofN-butylalcoholextractofclerodendronbungeisteudrootsonthecontentofinflammatoryandnociceptive
mediatorsPGchallengedbycarrageenan
组别
group
剂量
Dose(g/kg)
动物数
thenumberofanimals
前列腺素含量
controlofPG×10-3
空白组
blank - 6 19.98±3.96
模型组
model 0.02 6 65.28±9.03a
正丁醇提取物-Ⅰn-butanolextract-Ⅰ 0.5 6 48.70±17.44ab
正丁醇提取物-Ⅱ
n-butanolextract-Ⅱ 1 7 33.93±17.69acd
地塞米松
dexameth 0.02 7 31.51±9.04acd
a:P<0.001,与空白组比较 , b:P<0.05,与模型组比较 , c:P<0.001 ,与模型组比较 , d:P<0.05,与正丁醇提取物-Ⅰ比较
comparedwithblank:a:P<0.001;comparedwithmodel:b:P<0.05;comparedwithmodel:c:P<0.001;comparedwithn-butanolextract-Ⅰ :d:
P<0.05
讨 论
臭牡丹具有活血散瘀 ,消肿解毒等功用 。传统
认为臭牡丹的主要有效成分是其生物碱。另据 Na-
gao[ 5]等报道臭牡丹有抗肿瘤活性 ,并通过对臭牡丹
叶甲醇提取物进行活性跟踪 ,分离得抗肿瘤活性组
分 acteoside和 isoacteoside。本实验室前期工作报道
臭牡丹根乙醇提取物具有镇痛等作用。为确定其镇
痛组分 ,本文就其镇痛作用作了进一步的提取 、分
离 ,并追踪其作用 。
热板法是一种经典的快痛实验模型 ,吗啡通过
作用于中枢阿片受体产生镇痛作用。本实验结果表
明臭牡丹正丁醇提取物对热板法小鼠产生强烈的镇
痛效应 ,它的镇痛作用与激动阿片受体无关 。扭体
实验是一种慢性持续性炎性疼痛的实验模型 ,实验
结果提示臭牡丹正丁醇提取物提高冰醋酸致疼鼠的
阈值 ,表明臭牡丹对慢性持续性疼痛小鼠也有镇痛
作用 ,这与文献所报道的结果一致[ 2, 3] 。
炎性介质前列腺素(PGs)有轻度而持久的致痛
作用 ,也能使痛觉感受器增敏。角叉菜胶所致的小
鼠足趾炎症引起局部组织中炎性介质成分 PGE含
量明显提高 ,本文结果显示臭牡丹正丁醇提取物呈
剂量依赖性地降低外周炎性组织中的 PGs的含量 ,
表明臭牡丹减轻炎性疼痛与降低炎性部位 PGs的含
量有关 。
综上所述 ,本文研究确定臭牡丹总黄酮和总生
物碱没有镇痛作用 ,臭牡丹的镇痛作用组分为正丁
醇提取物 ,与 Nagao[ 5]等报道臭牡丹活性组分一致。
它的镇痛的化学物质与 acteoside和 isoacteoside关系
如何 ,还有待今后进一步的研究 。
参 考 文 献
1　江苏新学院.中药大词典.上海:人民卫生出版
社 , 1973:1889.
2　刘建新 ,谢水祥 ,周俐 , 等.臭牡丹根提取物对小
鼠的镇痛效应.中国临床康复 , 2005, 9∶250 ～
251.
3　周红林 ,刘建新 ,周俐 ,等.臭牡丹提取物抗炎镇
痛抗过敏作用的实验研究.中国新药杂志 , 2006,
15∶2027 ～ 2029.
4　刘建新 ,周青 ,周俐 ,等.不同剂量臭牡丹根对大
鼠佐剂性关节炎不同时点的干预效应.中国临
床康复 , 2005, 9∶144 ～ 145.
5　NagaoT, AbeF, OkabeH.Antiproliferativecon-
stituentsintheplants7.LeavesofClerodendron
bungeiandleavesandbarkofC.trichotomum.Bi-
olPharmBul, 2001, 24∶1338 ～ 1341.
·352· 中国疼痛医学杂志 ChineseJournalofPainMedicine2007, 13, (6)