全 文 ：2012 第十四卷 第二期 ★Vol.14 No.2
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
收稿日期：2011-07-06
修回日期：2011-08-03
＊ 科学技术部国家“重大新药创制”项目（2009ZX09103-389）：候选药物-异长春苷内酰胺的研究，负责人：丁岗；江苏省科技支撑－社会发展
项目（BE2009618）：围绕中药胆木开展一、四类创新新药的临床前研究，负责人：丁岗。
＊＊ 通讯作者：萧伟，本刊编委，博士生导师，研究员，高级工程师，主要研究方向：中药新制剂的研究与开发，Tel：025-86587935，E-mail：kan－
ionxw2010@126.com。
摘 要：目的：优选胆木心材中异长春花苷内酰胺的提取工艺。方法：以异长春花苷内酰胺提取
得率为评价指标，以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因素，通过正交试验选取最佳
提取工艺。结果：最佳提取工艺为提取所用乙醇浓度为 70%，乙醇加入量为药材的 22倍，提取时间为
4 h，提取次数为 3次。结论：该工艺稳定、合理、可行，可为工业化提取胆木中异长春花苷内酰胺提供
理论依据。
关键词：胆木 异长春花苷内酰胺 正交试验 提取工艺
doi: 10.3969/j.issn.1674-3849.2012.02.035
胆木（Nauclea officinalis Pierre ex Pitard）为茜草
科乌檀属乔木，又名药乌檀、山熊胆、熊胆树，枝、
干、皮入药，性味苦、寒，具有清热解毒、消肿止痛作
用 [1]。我国南方民间常用于感冒发热、肺炎、肠炎、痢
疾、湿疹、皮疹、脓疡等病的治疗。临床有“胆木注射
液”和“胆木浸膏片”用于急性扁桃腺炎、急性咽喉
炎、急性结膜炎及上呼吸道感染 [2]。现代研究表明胆
木中主要有效成分为吲哚类生物碱，其中主要为异
长春花苷内酰胺，含量约为生药的 0.8%~2.5%[3]，国
内外学者研究证明异长春花苷内酰胺具有抗菌、抗
肿瘤、杀疟原虫等作用 [4~6]，为了配合工业化生产，本
实验用乙醇回流法，以异长春花苷内酰胺的提取得
率为指标，优选其最佳提取工艺，为工业化大生产
提供科学、合理的实验依据。
一、仪器与试药
AE 240 十万分之一型电子天平（瑞士梅特勒公
司）；1100 液相色谱仪，DAD 检测器，（美国 Agilent
公司）；BC-R205C 旋转蒸发器（上海贝凯生物化工
设备有限公司）；药材产于海南省，经鉴定为药乌檀
正交试验优选胆木中
异长春花苷内酰胺提取工艺＊
□潘桂玲 （徐州医学院附属医院 徐州 221002）
孟兆青 刘文君 丁 岗 原少伟 苗宏伟 萧 伟＊＊
（江苏中康药物科技有限公司 南京 210017）
江苏康缘药业股份有限公司
中药制药过程新技术国家重点实验室
江苏省企业院士工作站
（ 连云港 222001）
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世界科学技术—中医药现代化★技术应用研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
图 1 对照品和供试品液相色谱图
注：1：异长春花苷内酰胺对照品；2：药材提取液。
Nauclea officinalis Pierre ex Pitard 的心材；异长春花
苷内酰胺对照品（自制，纯度大于 98%）；乙腈为色
谱纯，甲醇、乙醇、磷酸等均为分析纯，水为超纯水。
二、方法与结果
1. 试验方案设计
经预试验，胆木在提取过程中，乙醇浓度、乙醇
用量、提取时间、提取次数对异长春花苷内酰胺的提
取得率有较大影响，因此以乙醇浓度（A）、乙醇用量
（B）、提取时间（C）、提取次数（D）为考察因素，每个
因素选取 3个水平，采用 L9（34）正交表进行实验。因
素水平见表 1。
2. 异长春花苷内酰胺提取工艺
精密称取预先处理好的胆木心材 50 g，按 L9（34）
正交试验表分别回流提取，提取液过滤，合并滤液，
回收乙醇至干，分别用 70%甲醇定容至 100 mL，摇
匀，备用。
3. 异长春花苷内酰胺含量测定[2]
（1）对照品溶液的制备。
精密称取异长春花苷内酰胺对照品 12.46 mg，
置 250 mL量瓶中，加甲醇制成每 1 mL含异长春花
苷内酰胺 0.04984 mg的标准品溶液，备用。
（2）胆木药材含量测定溶液的制备。
精密称定胆木药材粗粉 0.5 g，精密加入 50 mL
70%甲醇，精密称定，回流提取 70 min，放冷，用 70%
甲醇补足减失重量，混匀，静置，精密量取上清液
1 mL置 5 mL量瓶中，加 70%
甲醇定容，以 0.45 μm微孔滤
膜滤过，取续滤液即得。
（3）正交试验供试品溶液
的制备。
精密量取“异长春花苷内
酰胺提取工艺”项下溶液 1 mL
转移入 250 mL量瓶中，加适
量 70%甲醇超声处理 10 min，
放至室温，加 70%甲醇定容，
以 0.45 μm 微孔滤膜滤过，取
续滤液作为供试品溶液，备用。
（4）色谱条件。
Lichrospher C18（4.6 mm×
250 mm，5 μm），流动相为乙腈-
水-磷酸（30∶70∶0.1），检测波长
为 226 nm，流速为 1 mL·min-1，柱温 30℃。
（5）标准曲线的绘制。
分别精密量取异长春花苷对照品溶液 0.5、1、2、
4、6、8 mL至 6个 10 mL量瓶中，分别加甲醇至刻度。
精密吸取上述溶液各 10 μL进样，按“正交试验供试
品溶液的制备”项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐
标（Y），对照品进样量（μg）为横坐标（X）绘制标准曲
线，得回归方程：Y=4121.9X-3.8314，r=0.9999；异长春
花苷内酰胺在 0.02492~0.4984 μg范围内线性良好。
（6）样品的测定。
分别精密吸取“胆木药材含量测定溶液的制备”
和“正交试验供试品溶液的制备”项下制备的各供试
表 1 因素水平表
水平
因素
A/% B/倍 C/h D/次
1 50 14 2 1
2 70 18 3 2
3 90 22 4 3
表 2 各因素水平分配表
因素
D1 D2 D3
共 1次 第 1次 第 2次 第 1次 第 2次 第 3次
加
醇
量
B1=14
B2=18
B3=22
14
18
22
8
10
12
6
8
10
6
8
10
4
5
6
4
5
6
时间
（h）
C1=2
C2=3
C3=4
2
3
4
1
2
2
1
1
2
1
1.5
2
0.5
1
1
0.5
0.5
1
0 2 4 6 8 10 12 14
100
80
60
40
20
0
mAU
1
2
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品溶液 10 μL，按上述色谱条件测定。以异长春花苷
内酰胺提取得率为指标进行正交试验，正交试验结
果见表 3，方差分析结果见表 4。
由表 3、表 4 可看出，各因素影响异长春花苷内
酰胺提取的次序为 C>B>A =D。4个因素对提取工艺
的影响均无显著性差异，综合比较各水平，选取最佳
提取工艺为 A2B3C3D3，即提取所用乙醇浓度为
70%，乙醇加入量为药材的 22倍，提取时间为 4 h，
提取次数为 3次。
4. 工艺验证试验
取胆木心材 50 g，共 3份，按最佳提取工艺进行
验证试验。结果异长春花苷内酰胺的提取得率为
0.948%，RSD=0.3%（n=3），高于正交试验中的最高提
取得率 0.925%，经测定，胆木药材中异长春花苷内酰
胺的含量为 1.071%，正交试验最佳工艺的提取转移
率达到 88.5%，较为理想。按照正交试验选择的最佳
工艺放大到 500 g（n=3），测得异长春花苷内酰胺的
提取得率为 0.942%，与上述试验结果吻合，说明工艺
重现性良好。
三、讨 论
在预试验中，分别用水、乙醇为溶剂提取异长春
花苷内酰胺。结果表明，水和 95%乙醇各提取 2次，
异长春花苷内酰胺提取得率分别为 0.433%、0.786%，
水提取效果较差。故选择能耗低、易回收、相对安全
无害的乙醇作为提取溶剂，进行正交试验考察。
本实验以异长春花苷内酰胺的提取得率为指
标，通过正交试验确定了最佳的提取工艺，转移率大
于 85%，为异长春花苷内酰胺后续的纯化工艺奠定
基础。
参考文献
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pro-drug with improved solubility. J Nat Prod, 1999, 62 (10) ∶1427~
1429.
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Nat Prod Lett, 2001, 15(1)∶43~48.
6 Hu X, Lv YF, Bi K Sh. LC-MS-MS Analysis of Strictosamide in Rat
Plasma，and Application of the Method to a Pharmacokinetic Study.
CHROMATOGRAPHIA, 2009, 69(5)∶1073.
表 3 正交试验结果
试验号 因素
异长春花苷
内酰胺提取得率（%）
A B C D
1 1 1 1 1 0.573
2 1 2 2 2 0.716
3 1 3 3 3 1.036
4 2 1 2 3 0.798
5 2 2 3 1 0.925
6 2 3 1 2 0.841
7 3 1 3 2 0.873
8 3 2 1 3 0.736
9 3 3 2 1 0.841
均值 1 0.775 0.748 0.717 0.780
均值 2 0.855 0.792 0.785 0.810
均值 3 0.817 0.906 0.945 0.857
极差 0.08 0.16 0.23 0.08
表 4 方差分析结果
方差来源 偏差平方和 自由度 方差 F值 P
A 0.010 2 0.005 1.055 ＞0.05
B 0.040 2 0.020 4.415 ＞0.05
C 0.082 2 0.041 9.100 ＞0.05
D 0.009 2 0.005 1.000 ＞0.05
注：F0.05（2，2）=19.00；F0.01（2，2）=99.00。
Optimization of the Extraction Technology of Strictosamide from
Lignum Naucleae by Orthogonal Experiment
Pan Guiling1, Meng Zhaoqing2,3,4,5, Liu Wenjun2,3,4,5, Ding Gang2,3,4,5, Yuan Shaowei2,3,4,5, Miao Hongwei2,3,4,5, Xiao Wei2,3,4,5
(1. Affiliated Hospital of Xuzhou Mediccal College, Xuzhou 221002, China;
2. Jiangsu Zeukov Pharmaceutical S&T. Inc, Nanjing 210017, China;
3. Jiangsu Kanion Parmaceutical Co. Ltd., Lianyungang 222001, China;
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世界科学技术—中医药现代化★技术应用研究
〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica〕
4. State Key Laboratory of Pharmaceutical Process New-tech for Chinese Medicine, Lianyungang 222001, China;
5. Enterprises Academician Workstations in Jiangsu Province, Lianyungang 222001, China)
Abstract: This study was aimed to optimize the extraction technology of strictosamide from Lignum Naucleae. The
extracting technology of strictosamide was optimized by orthogonal experiment with the concentration and amount of
alcohol, extracting time and frequency as factors. The results showed that the optimal extraction technology was to add
22 times of alcohol to the herbal medicine at the concentration of 70%. And the extraction was continued for 4 hours
and repeated for three times. It was concluded that this extraction technology is stable, reasonable and feasible. This
method can provide a theoretical basis for the industrial extraction of strictosamide from Lignum Naucleae.
Keywords: Lignum Naucleae, strictosamide, orthogonal experiment, extraction technology
（责任编辑：李沙沙 张志华，责任译审：王 晶）
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