全 文 ：学 报
Journal of China Pharmaceutical University 2014，45(4) :434 － 437
UPLC法同时测定胆木中 6 种成分的含量
陈家全
1
，徐光富
1
，王 慧
1，2
，王静静
2
，朱粉霞
2*
(1中国药科大学分析化学教研室，南京 210009;2江苏省中医药研究院国家中医药管理局
中药口服制剂释药系统重点研究室，南京 210028)
摘 要 建立胆木药材中原儿茶酸、绿原酸、短小舌根草苷、3-表短小舌根、异常春花苷内酰胺和喜果苷同时测定的
UPLC方法。采用 Acquity BEH C18色谱柱(2. 1 mm × 100 mm，1. 7 μm) ，乙腈-0. 1%甲酸为流动相，梯度洗脱，流速为
0. 4 mL /min，进样量为 2 μL，柱温为 40 ℃的色谱条件。在选定的色谱条件下，6 种成分均能达到良好分离，并对方法进行
了系统的验证。结果表明，线性关系良好(Ｒ2 ＞ 0. 999 6) ，日内、日间精密度 ＲSD≤ 4. 05%，加样回收率为 96. 59% ～
101. 8%。本方法简便、快速、准确，可用于胆木药材的质量控制。
关键词 胆木;化学成分;含量测定;超高效液相色谱法
中图分类号 Ｒ917 文献标志码 A 文章编号 1000 － 5048(2014)04 － 0434 － 04
doi:10． 11665 / j． issn． 1000 － 5048． 20140409
Simultaneous determination of six main compounds in Nauclea officinalis by
ultra-performance liquid chromatography
CHEN Jiaquan1，XU Guangfu1，WANG Hui1，2，WANG Jingjing2，ZHU Fenxia2*
1Department of Analytical Chemistry，China Pharmaceutical University，Nanjing 210009; 2Key Laboratory of New Drug Delivery System
of Chinese Materia Medica，Jiangsu Provincial Academy of Chinese Medicine，Nanjing 210028，China
Abstract A UPLC method was established for the simultaneous determination of protocatechuic acid，chlorogen-
ic acid，pumiloside，3-epi-pumiloside，strictosamide and vincosamide in Nauclea officinalis. The experiment was
performed with an Acquity BEH C18 ( 2. 1 mm × 100 mm，1. 7 μm) column and the mobile phase consisting of
acetonitrile and 0. 1% formic acid with gradient elution. The flow rate of 0. 4 mL /min and the injection volume of
2 μL as well as the column temperature of 40 ℃ were employed. Under the above-mentioned condition，6 compo-
nents in Nauclea officinalis were separated completely and the method was fully validated. Good linearity ( Ｒ2 ＞
0. 999 6 ) ， precision of inter- and intra-day ( ＲSD≤4. 05% ) together with average recoveries of 96. 59% -
101. 8% were obtained. The method was proved to be rapid and accurate and can be used for the quality control
of Nauclea officinalis.
Key words Nauclea officinalis; chemical constituents; determination of content; UPLC
This study was supported by the National Natural Science Foundation of China ( No. 81203001)
胆木又名乌檀、熊胆树、树黄柏，为茜草科乌檀
属乔木，其以枝、干、皮入药。主要分布于海南、广
东、广西省区，为我国重点保护的珍稀野生植物物
种之一。胆木性味苦、寒，有清热解毒、消肿止痛之
功效。我国南方民间常用于感冒发热、肺炎、肠炎、
痢疾、湿疹、皮疹、脓疡等病的治疗［1］。胆木的主
要活性成分为生物碱，国内外学者先后从其皮、枝
干、叶中分离得到 40 余种生物碱［2－ 5］。其中，吲哚
类是其特征性生物碱成分，异常春花苷内酰胺及其
异构体喜果苷为主要吲哚类生物碱;短小舌根草苷
及其异构 3-表短小舌根草苷是仅有的两个喹啉类
生物碱。本课题组前期对胆木制剂的化学成分进
行了系统研究［5－ 7］。结果表明，其中除了含有大量
的生物碱，还有原儿茶酸、绿原酸等酚酸类成分。
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* 收稿日期 2014-03-04 * 通信作者 Tel:025 － 85608672 E-mail:zfxcjq@ 126． com
基金项目 国家自然科学基金资助项目(No． 81203001)
第 4 期 陈家全等:UPLC法同时测定胆木中 6 种成分的含量
此类化合物已被证实具有良好抗氧化、抗感染、抗
微生物等生物活性［8－ 9］，也可能是胆木中的重要药
效成分。为了更全面地对胆木药材的质量进行控
制，本研究采用超高效液相色谱法(UPLC) ，建立
了 6 种主要成分原儿茶酸、绿原酸、短小舌根草苷、
3-表短小舌根草苷、异常春花苷内酰胺和喜果苷
(结构式见图 1)含量同时测定的方法，可用于胆木
药材中活性成分的质量控制。
Figure 1 Chemical structure of six main componentsin
1 材 料
1. 1 药品、药材与试剂
原儿茶酸(protocatechuic acid，批号 110809)和
绿原酸(chlorogenic acid，批号 110753)对照品购自
中国药品生物制品检定所。短小舌根草苷(pumilo-
side)、3-表短小舌根草苷(3-epi-pumiloside)、异常春
花苷内酰胺(strictosamide)和喜果苷(vincosamide)
对照品为实验室自制(纯度按 HPLC 面积归一化法
测定均≥98%，结构均经波谱法验证)［10］。乙腈(色
谱纯)、甲酸(色谱纯) (德国 Merck 公司) ;甲醇(色
谱纯) (山东禹王实业有限公司化工分公司) ;胆木
药材(批次:110101、110102、110103、110802、100801、
110831)由海南制药厂有限公司提供。
1. 2 仪 器
Acquity UPLC(美国 Waters 公司，包括二元高
压梯度泵、真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极
管阵列检测器、Empower 2 色谱工作站) ;MT5 型分
析天平(瑞士 Mettler Toledo 公司) ;Milli-Q 超纯水
机(美国 Millipore公司)。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
Acquity BEH C18色谱柱(100 mm × 2. 1 mm，
1. 7 μm) ;流动相为乙腈(A)-0. 1% 甲酸水溶液
(B) ，梯度洗脱条件:0 ～ 0. 5 min，2% A，0. 5 ～
6 min，2% ～10% A，6 ～ 20 min，10% ～ 33% A;流
速:0. 4 mL /min;柱温:40 ℃;进样量:2 μL。色谱
图见图 2。
Figure 2 UPLC chromatograms of mixed standard solution (A)and herb (B)sample solution at 260 nm and 327 nm
1:Protocatechuic acid;2:Chlorogenic acid;3:Pumiloside;4:3-Epi-pumiloside;5:Strictosamide;6:Vincosamide
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学 报 Journal of China Pharmaceutical University 第 45 卷
2. 2 对照品储备溶液的制备
精密称取对照品原儿茶酸、绿原酸、短小舌根
草苷、3-表短小舌根草苷、异常春花苷内酰胺、喜果
苷适量，分别置 10 mL 棕色量瓶中，甲醇溶解并定
容至刻度，制得对照品储备溶液。
2. 3 供试品溶液的制备
取胆木粉末约 0. 5 g(过 50 目筛) ，精密称定，
置具塞锥形瓶中，精密加入 70%甲醇 50 mL，称重，
超声处理 1 h，放冷，70%甲醇补足失重，摇匀，滤
过，取续滤液，即得。
2. 4 线性关系
精密吸取各对照品储备液配制成含原儿茶酸、
绿原酸、短小舌根草苷、3-表短小舌根草苷、异常春
花苷内酰胺、喜果苷分别为 22. 96，29. 60，47. 60，
19. 95，527. 00，41. 00 μg /mL 的混合对照品溶液，以
70%的甲醇稀释，得系列浓度的混合对照品溶液，
0. 22 μm微孔滤膜过滤，依前述色谱条件进样，测定
各成分峰面积值，以峰面积(A)对质量浓度(c)进行
线性回归。结果如表 1 所示，在测定范围内 6 种成
分的质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系。
Table 1 Linear regression data of the six components
Component Ｒegressive equation Linear range /(μg /mL) Ｒ2
Protocatechuic acid A = 14 891c － 553. 36 0. 23-22. 96 0. 999 9
Chlorogenic acid A = 10 800c － 1294. 9 0. 30-29. 60 0. 999 6
Pumiloside A = 25 183c + 679. 94 0. 48-47. 60 1. 000 0
3-Epi-pumiloside A = 26 259c － 151. 06 0. 20-19. 95 1. 000 0
Strictosamide A = 12 843c + 52 176 5. 27-527. 00 0. 999 7
Vincosamide A = 20 500c － 1 840. 3 0. 41-41. 00 0. 999 9
2. 5 精密度及回收率
精密称取胆木粉末 6 份，每份按“2. 3”项下制
备供试品溶液及“2. 1”项下进行检测，各成分峰面
积值的 ＲSD≤2. 74%。同样方法，平行制备 3 份供
试品溶液，连续 3 d检测，考察日间精密度，各成分
含量的 ＲSD≤4. 05%，结果见表 2。
精密称定已知含量的胆木样品约 0. 5 g，加入
定量对照品，按“2. 3”项下制备供试品溶液及
“2. 1”项下进行检测，计算回收率，结果见表 2。各
成分的回收率在 96. 59% ～ 101. 8%之间，ＲSD 均
小于 5. 0%，表明方法的准确度较高。
Table 2 Precisions and recoveries of the six components (珋x ± s)
Component
Intra-day /
(μg /mL)
(n = 6)
Inter-day /
(μg /mL)
(n = 3)
Ｒecovery /
%
(n = 6)
Protocatechuic acid 0. 11 ± 0. 003 0. 11 ± 0. 002 100. 8
Chlorogenic acid 0. 26 ± 0. 004 0. 27 ± 0. 005 96. 59
Pumiloside 0. 11 ± 0. 002 0. 11 ± 0. 002 98. 75
3-Epi-pumiloside 0. 073 ± 0. 002 0. 074 ± 0. 003 101. 8
Strictosamide 9. 68 ± 0. 20 9. 56 ± 0. 20 101. 6
Vincosamide 0. 097 ± 0. 002 0. 095 ± 0. 003 98. 63
2. 6 稳定性
取胆木供试品溶液，配置后置棕色进样小瓶
中，分别于 0，2，4，8，12，24 h 测定 6 种成分色谱峰
的峰面积值，计算其含量的 ＲSD(%) ，分别为
0. 73、3. 11、0. 88、1. 13、1. 98 和 2. 10，表明供试品
溶液中 6 种成分在 24 h内是稳定的。
2. 7 样品测定
取不同批次样品各 0. 5 g，精密称定，按“2. 3”
项下方法分别制备供试品溶液，各进样 2 μL，以各
成分峰面积按外标法对其中的原儿茶酸、绿原酸、
短小舌根草苷、3-表短小舌根草苷、异常春花苷内
酰胺和喜果苷进行测定，结果见表 3。
Table 3 Contents of the six components in Nauclea officinalis samples
Component /
(mg /g)
Batch No.
110101 110102 110103 110802 100801 110831
Protocatechuic acid 0. 11 0. 11 0. 033 0. 045 0. 040 0. 032
Chlorogenic acid 0. 055 0. 26 0. 42 0. 086 0. 050 0. 048
Pumiloside 0. 74 0. 11 0. 37 0. 31 0. 55 0. 77
3-Epi-pumiloside 0. 11 0. 073 0. 11 0. 053 0. 048 0. 080
Strictosamide 7. 22 9. 68 19. 77 11. 73 14. 72 7. 42
Vincosamide 0. 16 0. 097 0. 099 0. 13 0. 094 0. 11
3 讨 论
UPLC 具有超高压、超高灵敏度、超高分离度
等特点，在中药等复杂体系的分离分析上具有明
显优势。本研究首次采用 UPLC 同时测定了胆木
药材 6 种成分的含量。结果表明，异常春花苷内
酰胺含量最高，各批次药材中的成分含量具有一
定的差异性，这与我们前期对胆木制剂(浸膏片
634
第 4 期 陈家全等:UPLC法同时测定胆木中 6 种成分的含量
和注射液)中的化学成分研究结果［5－ 7］是一致的。
但在前期研究中［5－ 7］发现，制剂中不仅含有原儿
茶酸和绿原酸，还含有新绿原酸和隐绿原酸。而
在本实验中对胆木药材分析发现，新绿原酸和隐
绿原酸未被检测到，这些差别很可能与胆木浸膏
片和胆木注射液的生产工艺有关，有待于进一步
研究。
本实验用二极管阵列检测器检测，在分析对照
品的同时进行了 190 ～ 400 nm全波长紫外扫描，结
果原儿茶酸最大吸收波长为 260 nm，绿原酸最大
吸收波长为 327 nm，短小舌根草苷和 3-表短小舌
根草苷最大吸收波长为 245 nm，异常春花苷内酰
胺和喜果苷最大吸收波长为 226 nm，所以实验中
分别选择了各成分的最大波长为测定波长。
实验中对流动相也进行了系统考察。分别选
用了甲醇-水溶液，乙腈-水溶液，乙腈-0. 1%乙酸水
溶液，乙腈-0. 1%甲酸水溶液等体系，综合分离度、
分析时间及峰形等因素，乙腈-0. 1%甲酸水溶液梯
度洗脱为最佳。
在供试品溶液制备中过程，采用超声提取方
法，分别考察了提取溶剂(水，30%，50%，70%，
90%甲醇，100%甲醇)和超声时间(30，45，60，75，
90 min)对结果的影响。结果表明，甲醇浓度为
70%时，提取有效成分的峰面积最大，效果最好;超
声处理 60 min已基本提取完全。综合确定用 70%
甲醇，超声提取 60 min制备供试品溶液。
综上所述，本研究所建立的方法简便、快速、准
确，可作为胆木药材中原儿茶酸、绿原酸、短小舌根
草苷、3-表短小舌根、异常春花苷内酰胺和喜果苷
活性成分的质量控制。
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