全 文 :[制 剂]
柿叶黄酮的大孔吸附树脂分离提纯富集
贝伟剑1 ,2 , 彭文烈1* , 罗 杰2
(1.中山大学生命科学学院 ,广东 广州 510275;2.广州白云山中药厂 ,广东 广州 510515)
收稿日期:2004-03-25
基金项目:广州市科技局重点科技攻关项目:广州市名优中成药中药现代化研究专项(2002Z2-E5081)。
作者简介:贝伟剑(1963~ ),广西昭平县人 ,高级工程师 ,理学博士 ,研究方向:中药现代化和新药研发。电话:020-87200301 , E-mail:bwj001
@hotmail.com。
*通讯作者:彭文烈:电话:020-84113655 , E-mail:peng-wenlie@21cn.com。
关键词:柿叶;黄酮;大孔树脂吸附;聚酰胺;富集
摘要:目的:研究 8种不同类型吸附树脂对柿叶黄酮的吸附特性。方法:测试它们对柿叶黄酮的吸附率 、吸附速率 、解吸
率和产物得率及其黄酮含量。结果:发现聚酰胺和 AB-8 树脂对柿叶黄酮吸附量大 , 吸附快 、解吸容易 , 吸附后产物黄酮
含量高。结论:聚酰胺和 AB-8树脂是一种性能良好的柿叶黄酮吸附剂 ,可用于从柿叶提取物中富集制备含量达 70%以
上的柿叶黄酮 ,为柿叶黄酮的开发提供新工艺 。
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2005)03-0257-04
Enrichment of flavonoids from leave of Diospryros kaki Linn(Thunb)by macrore-
ticular resin s absorption
BEI Wei-jian1 , 2 , PENG Wen-lie1* , LOU Jie2
(1.School of Life Sciences , Zhongshan(Sun Yatsen)University , Guangzhou 510275 , China;2.Bai Yun-Shan TCM Pharmaceutical Factory , Guangzhou
510515 , China)
KEYWORDS:Diospyros kaki Linn(Thunb.);flavonoid;macroreticular resin s absorption;polyamide;accumulation
ABSTRACT:AIM:To screen macroreticular resins for isolation and purification of flavonoids from the leaves of Diospyros
kaki Linn(FLDK).METHODS:8 kinds of macroreticular resins were assayed for their adsorbability and deadsorbability
as well as the adsorption kinetics to FLDK.RESULTS:Polyamide and AB-8 resin were found with good adsorbability and
deadsorbability as well as adsorption kinetics to FLDK.CONCLUSION:AB-8 resin and polyamide could be used for pre-
paring high contents of FLDK.FLDK-P70 , a flavonoid extract contained more than 77%of flavonoids was prepared from
the extract of leaves of Diospyros kaki by polyamide adsorption column isolation.
柿叶黄酮是广州白云山中药厂生产的“脑心清”
片的原料柿叶提取物(以下简称脑心清片浸膏)中的
主要药效成分。柿叶黄酮具有抗急性脑缺血损伤神
经保护作用 。它们可以抗缺氧缺血清损伤 、抗氧化
应激和抗兴奋性谷氨酸毒性损伤 、上调抗氧化基因
bcl-2表达 、改善神经细胞氧化还原状态;调节神经
元L 型钙通道 、改善细胞钙稳态和抑制淋巴细胞与
神经细胞的粘附等方面来发挥其抗脑缺血损伤和神
经保护作用;对心血管系统有扩冠增加冠脉流量 、降
低血压 、降低心肌耗氧量 、改善全身血液循环 、增加
小鼠对窒息性缺氧的耐力及对大鼠急性心肌缺血有
一定的保护作用 。此外 ,柿叶黄酮还有抗氧化清除
自由基作用 、抗炎 、抗菌作用 、抗肿瘤等功能 ,在防治
中老年人脑动脉硬化 、预防脑血栓形成 、脑中风后遗
症康复治疗辅助 、防治老年人痴呆和其它神经退行
性疾病 、防治用脑过度引起的脑功能不全 、皮肤抗衰
老美容等方面有广泛开发应用前景[ 1] 。
分离纯化富集获得高纯度的柿叶黄酮是新药和
保健品开发的重要步骤 。目前一般采用酒精提取后
用不同有机溶剂反复萃取的方法分离而得一定含量
的柿叶黄酮[ 2] ,也有用水代替酒精提取 ,然后采用
YF-大孔吸附树脂吸附其有效成分的方法从柿叶中
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分离黄酮类物质[ 3] ,但所得产物黄酮含量均不够高 ,
无法进行更深入的药效药理研究。本研究通过测定
分析 8种不同类型吸附树脂对柿叶黄酮的吸附特
性 ,从吸附率 、吸附速率 、解吸率和产物得率及其黄
酮含量等多方面因素综合考虑 ,发现聚酰胺树脂和
AB-8树脂对柿叶黄酮吸附量大 ,吸附快 、解吸容易 ,
吸附后浸膏黄酮含量高 ,是性能良好的柿叶黄酮吸
附剂 ,可用聚酰胺树脂从柿叶提取物中富集制备含
量达70%以上的柿叶黄酮 ,为柿叶黄酮的进一步开
发打下基础。
1 实验材料与仪器
1.1 仪器 美国Thermo Finnigan公司 LCQ-DECAXP
液相色谱质谱(HPLC-MS)联用仪;Agilent-1100 系列
高效液相色谱仪 ,DAD-G1315B可见-紫外检测器 ,德
国Micromeriiics 760泵 。UV-1700紫外可见分光光度
计(Shimadzu , Japan 、Pharmacspec UV-1700UV 、visible
Spectrophotometer)、精密酸度计(METTLER TOLEDO
320pH Meter)、吸附柱(自制):7.5 cm×80 cm 层析
柱。HZQ-Q电动振荡仪(哈尔滨东联电子技术开发
公司)。
1.2 试剂
标准品:槲皮素 、山柰酚;芦丁对照品 ,中国药品
生物制品检定所提供;
AB-8 、S-8大孔树脂(Macroporous Adsorption Res-
in),天津南开大学树脂厂生产;HPD100 、130 、300 、
400 、600型大孔吸附树脂 ,河北沧洲宝恩化工公司出
品 、聚酰胺粉(14 ~ 30 目)为上海润捷化工公司出
品。
甲醇 、磷酸:色谱纯;95%工业酒精为广州市酒
精厂生产。无水乙醇 、醋酸乙酯等均为 AR ,广州化
学试剂厂生产。
1.3 柿叶提取物干浸膏粉 由广州白云山中药厂
提供 ,为柿叶经水煮醇沉醋酸乙酯萃取制得 ,总黄酮
含量约25%(HPLC检测)。
2 试验方法
2.1 树脂的预处理
各树脂经筛选后 ,先用 95%乙醇浸泡充分溶
胀 ,然后用乙醇洗至洗出液加适量水无白色浑浊现
象 ,再用去离子水洗尽乙醇 ,最后转入酸碱处理(用
4倍体积的 5%HCl溶液 ,以 5 倍体积/小时的流速
通过树脂层 ,并浸泡 3 h ,而后用去离子水以同样流
速洗至出水 pH 值为中性;用 4 倍体积的 5%NaOH
溶液 ,以 5倍体积每小时的流速通过树脂层 ,并浸泡
3 h ,而后用去离子水以同样流速洗至 pH值中性 ,滤
取 ,室温晾干 ,即得 。
装柱:以 95%乙醇湿法装柱 ,继续用乙醇在柱
上流动清洗至流出乙醇与水混合(1∶5)不呈白色为
止 ,然后用蒸馏水洗至无醇味 ,备用。
当树脂使用一定周期后 ,吸附能力降低或受污
染严重时需强化再生 ,其方法是在容器内加入高于
树脂层 10 cm的 3%~ 5%盐酸溶液浸泡 2 ~ 4 h ,然
后进行淋洗通柱 。继用 3 ~ 4倍树脂体积同浓度的
盐酸溶液通柱 ,然后用净水洗至接近中性;再用 3%
~ 5%的 NaOH 溶液浸泡 4 h。最后淋洗通柱 ,用同
浓度的 3 ~ 4倍树脂体积的氢氧化钠溶液通柱 ,最后
用净水清洗至 pH值为中性 ,备用。
2.2 柿叶总黄酮含量测定
分析方法根据研究要求 ,本文总黄酮含量测定
采用以芦丁为对照品的分光光度法[ 4] ,取样后立即
测定。
标准曲线的测定 精密称取干燥至恒重的标准
对照品芦丁约5mg ,于25mL 量瓶中 ,以95%乙醇溶
解 ,并稀释至刻度 ,精密吸取 1.0 , 2.0 , 3.0 , 4.0 ,5.0
mL置于 10 mL量瓶中 ,取 95%乙醇加至 7.0 mL ,再
精密加水至 10 mL ,摇匀。同时另取 7.0 mL 乙醇加
水至10 mL作空白对照 ,在 250 nm 波长处测定吸收
度 。处理数据 ,回归方程为:C=76.753A-5.977(C:
浓度μg/mL ,A光吸收度);R =0.9994。标准曲线的
线性范围为 20 ~ 100μg·mL-1 。
提取物中总黄酮含量的测定 精密称取各种柿
叶提取物干浸膏粉末 25 mg 放入 50 mL 量瓶中 ,加
入 25 mL 95%乙醇;置超声波发生器中振荡使其溶
解 ,冷却后加乙醇稀释至刻度 、摇匀 ,吸取 2.5 mL于
25 mL量瓶中 ,加 65%乙醇至刻度 、摇匀 ,取 2.5 mL
乙醇同样稀释作空白对照 ,在 250 nm 波长测定吸收
度 。最后从标准曲线上换算出总黄酮含量 。并根据
出膏率和浸膏中总黄酮含量换算出得率。
2.3 树脂对柿叶黄酮的吸附率测定
树脂单位质量的吸附黄酮量是设备设计的重要
参数并影响到生产成本 。选择 8种不同极性的树脂
进行吸附率的测定比较。测定方法为:准确称取经
预处理的树脂各1 g 于50mL具塞磨口三角瓶中 ,精
密加入柿叶总黄酮水溶液 20 mL(黄酮浓度为 2.0
mg·mL-1)置电动振荡机上振荡 24 h ,振荡频率为
220次 min ,充分吸附后滤过 ,测定滤液中剩余黄酮
浓度 ,按下式计算各树脂室温下的吸附量(mg/g);Q
=(C0-Cr)V W 式中:Q—吸附率(mg/g),C0 —初始
浓度(mg/mL), Cr—剩余浓度(mg/mL), V—溶液体
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积(mL),W—树脂质量(g)。
2.4 树脂的解吸率的测定
吸附树脂在分离植物有效成份时的应用是利用
吸附的可逆性(即解吸)。由于树脂极性不同 ,对柿
叶黄酮吸附作用力强弱不同 ,解吸难易也会不一样 。
因此 ,生产上希望树脂不仅吸附量大 ,还要求解吸率
高 ,以保证有效成份最大限度回收 。解吸率测定是
树脂试验的重要环节 。按 2.3项方法取充分吸附后
的树脂 1 g ,精密加入 95%的乙醇 50 mL ,浸泡振摇
12 h ,滤过 ,测定滤液黄酮浓度 ,根据黄酮解吸量计
算解吸率(%)。
2.5 树脂的吸附动力学特性测定
树脂的吸附动力学特性与吸附操作的生产效率
密切相关。根据吸附率和解吸率的测定比较 ,选择
3种较理想的树脂测定吸附速率。在有充分时间吸
附的情况下 ,有些树脂可能具有相近的饱和吸附量 ,
但是由于各树脂化学和物理结构的差别 ,其吸附动
力学过程是有差异的 。因此 ,通过试验比较各树脂
的吸附动力学过程。按照 2.3项的方法 ,测定各树
脂在 t时刻内(t=1 , 2 ,3 , 5 , 8 h)达到平衡时的吸附
量Qt和Qe(mg/g),以Qt对 t作图 ,得各树脂对柿叶
黄酮的吸附的动力学曲线 。
2.6 大孔吸附树脂分离柿叶黄酮
取干柿叶 ,加水煎煮 3次 ,每次 1.5 h ,合并煎
液 ,滤过 , 滤液浓缩至相对密度为 1.15 ~ 1.20
(60℃),加乙醇至含醇量达 70%,静置过夜 ,滤取上
清液备用;沉淀用 70%乙醇洗涤 2次 ,收集洗涤液 ,
静置 ,吸取上清液与前上清液合并 ,回收乙醇 ,所得
浸膏加水溶解 ,滤过 ,滤液用醋酸乙酯提取 5次 ,合
并醋酸乙酯液 ,回收醋酸乙酯 ,稠膏加水溶解 ,上聚
酰胺柱 ,用蒸馏水洗至洗脱液无色 ,用 70%乙醇洗
脱 ,调节流速为5 ~ 10 mL·min-1 ,收集洗脱液 ,低压
低温回收酒精 、浓缩 ,减压喷雾干燥即得 。用 HPLC
法测定各制备样品的黄酮含量。
3 结果及分析
3.1 树脂对柿叶黄酮的吸附率
用 8种树脂对柿叶黄酮粗提液进行处理 ,在初
始浓度均为 2.0 mg·mL-1的条件下 ,测其吸附后平
衡浓度(即树脂充分吸附后 ,吸附液的剩余浓度),可
得不同树脂对柿叶黄酮的吸附率和经吸附分离处理
后浸膏中黄酮的含量见表 1 ,表 1 的结果说明树脂
聚酰胺 、AB-8 、S-8具有较大的吸附量 。
表 1同时表明用聚酰胺 、AB-8 、S-8 、HPD-600树
脂吸附处理后 ,吸附量较大 ,其浸膏黄酮含量较高 ,
均在 70%以上 ,约为原料脑心清片用干浸膏总黄酮
含量的 3倍 ,树脂吸附分离对提高浸膏黄酮含量具
有显著效果 。
3.2 各种树脂吸附柿叶黄酮后的解吸附率
1g树脂充分吸附柿叶黄酮后 ,再利用 95%的乙
醇 ,在V=50 mL ,T =25 ℃的条件下进行解吸 ,各型
号树脂的解吸率实验数据见表 2。
从表2结果表明 90%乙醇能将约 90%以上吸
附于树脂上的黄酮解吸下来 ,解吸比较完全。但 S-8
型树脂解吸率较低 ,约为 78.47%。
表 1 吸附树脂对柿叶黄酮的吸附率及吸附分离处理后浸膏中黄酮含量(25°C)mg·g-1
Tab.1 Macroreticularresin s absorption rate of FLDK and flavonoid s content in extracts
树脂种类 聚酰胺 AB-8型 S-8 HPD600 HPD300 HPD400 HPD130 HPD100
平衡浓度(mg·mL-1) 1.01 1.31 1.32 1.34 1.36 1.71 1.71 1.71
吸附率(mg·g -1) 19.66 13.67 12.87 10.72 9.29 5.83 5.74 5.86
浸膏黄酮含量% 86.6 80.2 73.2 73.9 53.7 49.4 44.8 59.0
表 2 90%乙醇对柿叶黄酮的解吸率(25°C)%
Tab.2 90% EtOH Desorption rate to FLDK
树脂种类 聚酰胺 AB-8型 S-8 HPD600 HPD300 HPD400 HPD130 HPD100
解吸前吸附黄酮量 mg 19.66 13.67 12.87 10.72 9.29 5.83 5.74 5.86
解吸液浓度(mg·mL-1) 0.364 0.255 0.202 0.204 0.172 0.11 0.109 0.115
解吸量(mg) 18.20 12.75 10.10 10.20 8.60 5.50 5.45 5.30
解吸率 % 92.57 93.27 78.47 95.15 92.57 94.34 94.95 91.38
3.3 树脂对柿叶黄酮吸附动力学
通过以上吸附和解吸附实验和分析 ,可见聚酰
胺和AB-8和PHD600 3种树脂较为适合柿叶黄酮的
吸附分离。选择聚酰胺和 AB-8和HPD600 3种树脂
进行吸附动力学实验 ,结果见表 3;各树脂对柿叶黄
酮的吸附的动力学曲线见图 1和图 2。
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图 1 3种树脂的静态吸附动力学曲线
Fig.1 The static-absorption dynamic curve of Poly-
amide and AB-8 and HPD600
树脂∶吸附液=1∶50 ,溶液初始浓度为 0.911 mg·mL-1 。
图 2 聚酰胺 、AB-8 和 HPD600树脂对柿叶黄酮
吸附率与时间的关系
Fig.2 The relation between FLDK s absorption rate and time
for different macroreticular resin
树脂∶吸附液=1∶50 ,溶液初始浓度为 0.911 mg·mL-1 。
表 3 10小时内各时刻的树脂吸附柿叶黄酮量(mg·g-1)
Tab.3 The absorbed flavonoid contents of the
resins at different time
时间(h) HPD600 AB-8 聚酰胺
0 0 0 0
1 8.54 9.86 14.82
2 9.20 11.62 16.55
3 9.25 12.20 17.85
5 9.95 12.80 18.89
8 10.45 13.26 19.50
表3为聚酰胺 、AB-8和HPD600树脂 8h内各时
刻吸附柿叶黄酮的吸附量 ,可以看到 3种树脂起始
阶段吸附量都较大 ,在 1 h 内吸附量分别为14.82 、
9.86 、8.54 mg·g-1 ,分别为各树脂平衡时吸附量的
76%、74%、81.72%,应属于快速吸附类树脂 。
从以上各吸附条件的结果综合分析可知 ,聚酰
胺和AB-8树脂对柿叶黄酮具有良好的吸附动力学
特性 ,并有较好的解吸附率 ,较其他种类树脂更适宜
提纯得到高含量的柿叶黄酮。
3.4 大孔吸附树脂分离柿叶黄酮
用聚酰胺型大孔树脂柱吸附分离法 ,可分离制
备得到总黄酮含量高达 77%(HPLC)以上的柿叶黄
酮提取物 。见表 4。
表 4 大孔树脂分离纯化的高含量的柿叶黄酮提取物
Tab.4 Flavonoids contents of different extract of FLDK
isolated with macroporous absorption resin
样品 总黄酮苷含量
槲皮素类黄
酮苷含量
山柰素类
黄酮苷含量
产率
(%) 备注
脑心清片
用干浸 26.56 12.32 19.114 12.0
水煮醇沉 、乙酸
乙酯萃取
FLDK
-P701 86.30 38.15 48.15 3.5
聚酰胺柱 , 70Et
洗脱 , 020628
FLDK
-P70 77.35 34.63 42.72 3.9
聚酰胺柱 , 70Et
洗脱 , 020624
所得的柿叶黄酮提取物经高效液相色谱-质谱
(HPLC-MS)检测 ,从保留时间和 M -的质量进行分
析 ,与以酒精抽提 ,醋酸乙酯萃取方法获得的柿叶提
取物相比 ,二者均含有槲皮素 、山柰酚两种苷元及其
苷金丝桃苷 、异槲皮苷和黄芪苷等成分 ,与文献报道
所含金丝桃苷 、异槲皮苷和黄芪苷等黄酮成分相
符[ 2 , 3] 。
4 讨论与小结
大孔树脂吸附法近年来已广泛应用于各种植物
和草药的黄酮类分离纯化。特别是弱极性和极性的
AB-8 、S-8 、聚酰胺树脂已广泛用于黄酮苷类成分分
离纯化 ,以提高提取物黄酮成分的含量[ 5] 。近年研
究文献报道表明 ,树脂 S-8 、聚酰胺 、AB-8起始阶段
吸附量较大 ,然后吸附量逐渐增加 ,达到平衡时间较
长 ,为中快速吸附类型树脂;从吸附量和时间的关系
来看 ,树脂 S-8 、AB-8 、聚酰胺的吸附性能是比较好
的 。
树脂的极性(功能基)和空间结构(孔径 、比表
面 、孔容)是影响吸附性能的重要因素 。实验所用树
脂为聚苯乙烯型 ,有极性 、非极性 、弱极性 3种类型。
从表 1 可见 , 极性或弱极性的树脂对柿叶黄酮
(FLDK)吸附量较大 ,如树脂 S-8 、聚酰胺 、AB-8 等。
这是由于柿叶黄酮具有酚羟基和糖苷链 ,有一定的
极性和亲水性 、生成氢键的能力较强 ,有利于弱极性
和极性树脂的吸附 。相对来说非极性树脂对柿中黄
酮的吸附量偏小 。另外 ,在某些情况下吸附作用力
强 ,解吸起来就会困难 ,如 S-8树脂吸附量大但解吸
率较低(表 2),不适用于分离。
D101型树脂近年来曾较多用于中药黄酮类成
分的纯化富集 ,特别是葛根总黄酮和橙皮苷的纯化
精制[ 6, 7] ,这是一种非极性树脂 ,与本实验所选用的
HPD100型是不同厂家对应型号 , 但实验结果表明
HPD100型树脂对柿叶黄酮的吸附效果并不理想 ,这
可能是不同中药提取液的黄酮成分及非黄酮成分组
成不同 ,相同的树脂对不同中药的黄酮成分吸附分
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离效率不同之故 。
柿叶中含有酚性有机酸 、香豆素及黄酮(多为黄
酮糖苷 ,其苷元 5 ,7 ,4′三羟基黄酮醇类的槲皮索 、山
柰酚 、杨梅树黄素的单 、双糖苷)等酚性成分[ 8 , 9] ,这
些成分结构较为相近 ,且同是多酚类化合物 ,均有一
定极性和水溶性。由于分子量和化学性质相近 ,有
机溶剂萃取和分子筛等手段都难于将这 3类成分很
好分离。因此不便于进行这三类成分的药效作用作
比较 ,阻碍了柿叶提取物进行中药现代化研究 。
通过分析 8种吸附树脂对柿叶黄酮的吸附特
性 ,综合考虑吸附率 、吸附速率 、解吸率和产物得率
及其黄酮含量等多方面因素 ,聚酰胺树脂和AB-8树
脂具有一定的极性 、适当的孔径 ,较大的比表面积 ,
对柿叶黄酮吸附量大 ,解吸容易 ,吸附后浸膏黄酮含
量高 ,是一种性能良好的柿叶黄酮吸附剂 ,可用于制
备高含量的柿叶黄酮 ,为药效筛选提供不同需要的
样品 ,为今后改良脑心清生产工艺打下基础。
致谢:广西中医学院药学系实习生曾胜 、盛伟同
学参加部分研究工作。
参考文献:
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纯化γ-亚麻酸甲酯化工艺条件选择
刘凤霞1 ,2 , 薛 刚2 , 高秋华1 , 高伟霞2 , 张立华3
(1.华中科技大学 ,湖北 武汉 430074;2.南阳理工学院生物与化学工程系 ,河南 南阳 473004;3.河南南阳普
康药业有限公司 ,河南 南阳 473004)
收稿日期:2004-02-20
作者简介:刘凤霞(1960~ ),女 ,副教授 ,主要从事生化研究。电话:13623995386。
关键词:甲酯;γ-亚麻酸;γ-亚麻酸甲酯;正交实验
摘要:目的:优选甲酯化的条件和研究甲酯化后尿素包合次数 , 真空分馏温度 , 萃取时的 pH 值对纯度和提率的影响。方
法:正交试验设计 , 优选甲酯化的工艺组合为 A2B2C2 。结果:不同纯度的γ-亚麻酸经甲酯化后其纯度提高达到显著水
平 ,获得纯度大于 90%及纯度在 80~ 90%的γ-亚麻酸的正交实验最佳组合为 A4B2C1D2 和 A1B1C1D2 。结论:优化甲酯化
工艺组合为A2B2C2 。
中图分类号:R284.2 文献标识码:A 文章编号:1001-1528(2005)03-0261-03
国内合成前列腺 E1(Prostaglandin E1)是以月见
草油为原料经富集得到γ-亚麻酸 ,以此为前体物合
成二高γ-亚麻酸 ,最后合成了前列腺 E1[ 1] ,只有含
量大于 90%的γ-亚麻酸(γ-linolenic acid ,GLA)才能
合成高纯度的二高γ-亚麻酸 。同时γ-亚麻酸和γ-
亚麻酸甲酯只要纯度达到 90%以上都可以合成高
纯度二高γ-亚麻酸 ,虽然目前报道富集γ-亚麻酸的
方法有银离子树酯层析法 ,有机溶剂萃取法 ,真空精
馏法 ,冷冻结晶法 ,尿素包合法及超临界 CO 2 萃取
法等[ 2] ,但国内最常用的是尿素包合法。有报道从
月见草油中富集 γ-亚麻酸其纯度达不到 90%以
上[ 3] ,而且产率较低 ,但经 3次包合后需要条件控制
好纯度也可达到 90%以上 。而在实际操作中往往
会出现一些纯度不高的γ-亚麻酸。对于甲酯化工
艺也有文献报道 ,但得到的γ-亚麻酸甲酯纯度只有
80%,收率只有 50%[ 4] 。也有用酯交换法提高月见
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2005年 3 月
第 27卷 第 3 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
March 2005
Vol.27 No.3