全 文 ：金樱根多糖含量测定及提取工艺优选
郭巧玲１，田素英２＊
（１．广东省新兴中药学校，广东 新兴５２７４００；２．广东药学院 中山校区，广东 中山５２８４５８）
摘　要：目的：为开发利用金樱根多糖及制定其质量标准提供依据。方法：采用超声波强化碱水水浴提
取法，通过单因素和正交实验对提取工艺进行优选，考察氢氧化钠浓度、料液比、提取温度、提取时间对
多糖得率的影响，多糖含量测定采用硫酸－苯酚法。结果：优选的提取工艺为氢氧化钠浓度２．５％，料
液比１∶９０，提取温度１００℃，提取时间２．５ｈ。多糖含量测定得标准曲线回归方程为 Ｙ＝７．７８４　２Ｘ＋
０．０００　９，ｒ＝０．９９９　３。结果表明，在溶液浓度为０～０．０５ｍｇ／ｍＬ范围内测定葡萄糖吸光度呈良好线性。
平均回收率为９４．７０％，ＲＳＤ＝２．５１％（ｎ＝６）。各因素对金樱根多糖得率的影响由大到小依次为：料液
比＞提取时间＞氢氧化钠浓度。多糖得率（１２４．５９３　８±６．１５０　６）ｍｇ／ｇ。结论：采用超声波强化碱水水
浴提取法，多糖提取完全，提取工艺设计合理，稳定可行，操作简便。
关键词：金樱根；多糖；提取工艺；含量测定
中图分类号：Ｒ２８４．２　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１１）０７－００２８－０２
收稿日期：２０１１－０４－１８
作者简介：郭巧玲（１９７４－），女，广东省新兴中药学校实验师，研究方向为药用植物学与中药鉴定；田素英（１９６８－），女，硕
士，广东药学院中山校区高级实验师，研究方向为中药开发与应用。
　　金樱根为蔷薇科植物金樱子Ｒｏｓａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　Ｍｉｃｈｘ．的
干燥根、根皮，最早入药记载见于《日华子本草》，为临床常
用中药，有清热解毒，凉血活血，祛瘀止痛，固精涩肠等功
用，临床应用广泛，已被制成多种制剂，临床效果良好［１］。
多糖类化合物是多种中草药的有效成分之一，具有多种生
物活性。近年来研究显示高等植物中所含多糖具有提高和
恢复机体免疫功能、抗心肌缺血、抗应激、抗肿瘤等［２］功用。
本实验对金樱根多糖提取工艺与含量进行研究，为开发利
用金樱根多糖，制定其质量标准提供科学依据。
１　主要仪器与材料
ＫＱ－５００型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公
司）；ＴＥ５２ＣＳ旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；恒温水浴
锅Ｂ－２２０（上海亚荣生化仪器厂）；ＭＶ１１０２紫外可见分光光
度计（上海天美科学仪器有限公司）。金樱根 （批号：
０９０２１０、０９０９０１、１００６２８４，均经广东药学院房志坚副教授鉴
定为蔷薇科植物金樱子Ｒｏｓａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　Ｍｉｃｈｘ．的干燥根）；
（＋）葡萄糖（ＡＲ，天津市津东天正精细化学试剂厂）；其他
试剂均为分析纯。
２　方法与结果
２．１　含量测定
（１）对照品溶液的制备。精密称取１０５℃恒温干燥至恒
重的葡萄糖６０ｍｇ，用蒸馏水溶解并定容至１００ｍＬ。摇匀，
静置。
（２）供试品溶液的制备。取金樱根粗粉２ｇ，加石油醚—
乙醇（１∶２）混合液１５０ｍＬ，置２５０ｍＬ 锥形瓶中，超声
２０ｍｉｎ，过滤，取药渣挥干后，置锥形瓶中，加０．５％氢氧化钠
水溶液１００ｍＬ，超声２０ｍｉｎ。加稀盐酸至提取液呈中性，置
１００℃水浴加热２０ｍｉｎ，过滤，滤液加纯水定容至１００ｍＬ。
（３）最大波长测定。分别精密移取标准溶液和样品液
各０．５ｍＬ，分别置２０ｍＬ容量瓶加纯水定容。精密吸取各
溶液２ｍＬ置具塞试管，分别加入４％苯酚水溶液１ｍＬ，摇匀
后迅速加入浓硫酸７ｍＬ，摇匀，放入４０℃温水水浴３０ｍｉｎ，
取出，冷却１０ｍｉｎ，于４００～５２０ｎｍ处波长扫描，读取吸光度
值，确定吸收峰，得到最大波长为４８５．０ｎｍ（见表１）。
表１　样品最大波长紫外测定结果
样品 ＷＬ（ｎｍ） ＡＢＳ 峰数量
标准溶液 ４８６．０　 ０．１２０　 １个
样品溶液 ４８４．０　 ０．３７５　 １个
　　（４）标准曲线制备［３］。精密移取对照品溶液０．２ｍＬ、
０．４ｍＬ、０．６ｍＬ、０．８ｍＬ、１．０ｍＬ、１．２ｍＬ、１．４ｍＬ，分别置于
２０ｍＬ容量瓶，加纯水定容。精密吸取各溶液２ｍＬ置具塞试
管，按最大波长测定法于最大波长４８５ｎｍ处，以蒸馏水为空
白，测定吸光度，以吸光度 Ａ为纵坐标，对照品溶液浓度Ｃ
（ｍｇ／ｍＬ）为横坐标制作标准曲线。得标准曲线回归方程为
Ｙ＝７．７８４　２Ｘ＋０．０００　９，ｒ＝０．９９９　３。结果表明，在溶液浓度
为０～０．０５ｍｇ／ｍＬ范围内测定葡萄糖吸光度呈良好线性。
（５）显色稳定性考察。精密移取对照品溶液和供试品
溶液各０．８ｍＬ，分别置２０ｍＬ容量瓶加纯水定容。以冷水
水浴１０ｍｉｎ，开始为０ｍｉｎ，每隔１０ｍｉｎ记录１次。ＲＳＤ为
１．５８％（ｎ＝９），结果表明，在１０～９０ｍｉｎ区间内显色稳定性
良好（见图１）。
（６）精密度考察。精密移取对照品溶液０．２ｍＬ置于
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２０ｍＬ容量瓶，加纯水定容，测定吸光度值。结果ＲＳＤ％为
０（ｎ＝５），结果表明该精度良好。
（７）多糖含量测定。按上述制备方法取三批次样品制
成供试品溶液，分别精密移取各供试品溶液０．５ｍＬ，分别用
纯水定容至２０ｍＬ。按标准曲线中苯酚—硫酸显色法显色，
并记录吸光度。代入标准曲线中计算总含糖量（１２４．５９３　８
±２．１５０　６）ｍｇ。
多糖得率（ｍｇ／ｇ）＝多糖质量／原料质量
图１　显色稳定性考察结果
（８）加样回收试验。精密称取已知多糖含量的粗多糖
溶液１ｍＬ　３份，依次加入不同量的葡萄糖标准贮备液，按上
述操作方法测定供试品溶液的吸光度值，计算多糖回收率
为９４．７０％，ＲＳＤ为２．５１％（ｎ＝６）。
２．２　提取工艺的优选
２．２．１　单因素考察（超声提取温度６０℃，提取时间
２０ｍｉｎ）
　　氢氧化钠溶液浓度选择：精密称量约１ｇ／份的金樱根粗
粉共５份，按上述方法制备溶液，分别以浓度为１％、１．５％、
２．０％、２．５％、３％的氢氧化钠为提取液５０ｍＬ超声提取，再
用１００℃水浴提取２ｈ，过滤。吸取各滤液０．５ｍＬ，用纯水定
容至２０ｍＬ。测定含糖量。结果表明，氢氧化钠溶液浓度对
金樱根多糖的提取结果有影响，且２．５％浓度的氢氧化钠提
取结果较好。
料液比选择：精密称量约１ｇ／份的金樱根粗粉共５份，
按上述方法制备溶液，分别以料液比为１∶３０、１∶４０、１∶
５０、１∶６０、１∶７０，浓度为２．５％的氢氧化钠溶液为提取液进
行超声提取，再用１００℃水浴提取２ｈ，过滤。吸取各滤液
０．５ｍＬ，用纯水定容至２０ｍＬ。测定含糖量。结果表明，随
着料液比的提高糖的提取量也提高。
提取温度选择：精密称量约１ｇ／份的金樱根粗粉共５
份，按上述方法制备溶液，以２．５％氢氧化钠溶液５０ｍＬ超
声提取后，再分别６０℃、７０℃、８０℃、９０℃、１００℃水浴提取
２ｈ，过滤。吸取各滤液０．５ｍＬ，用纯水定容至２０ｍＬ。测定
含糖量。结果表明，提取温度对多糖的提取结果有影响，且
随着水浴温度的提高，糖含量也相应提高。可能是因为随
着温度的提高，金樱多糖的溶解度不断升高，所以，提取温
度越高，提取的多糖的量也就越多。由于水浴的最高温度
为１００℃，故正交实验考察最佳提取条件时不再考察温度，
直接用１００℃进行水平提取。
提取时间选择：精密称量约１ｇ／份的金樱根粗粉共５
份，按上述方法制备溶液，以２．５％氢氧化钠溶液５０ｍＬ超
声提取后，再分别０．５ｈ，１ｈ，１．５ｈ，２．０ｈ，２．５ｈ，１００℃水浴提
取，过滤。吸取各滤液０．５ｍＬ，用纯水定容至２０ｍＬ。测定
含糖量。结果表明，２．５ｈ糖含量较多，有可能是在水浴过程
中多糖链断裂成单糖碎片，提高了多糖的溶解度。
２．２．２　正交试验
根据金樱根的提取性质考察了氢氧化钠浓度、料液比、
提取温度和提取时间４个因素，并结合单因素试验结果，设
置３因素３水平正交试验。根据因素水平表，以糖总含量为
评价指标，采用Ｌ９（３３）安排试验，结果见表２。
表２　正交试验优选因素水平与结果
Ｎｏ．
因素Ａ
氢氧化钠浓度
因素Ｂ
料液比
因素Ｃ
提取时间
试验结果
Ｙｉ（Ａ）
１　 １（１．５％） １（１：７０） １（１ｈ） ８６．５５０２
２　 １　 ２（１：８０） ２（１．５ｈ） ２４．１３０８
３　 １　 ３（１：９０） ３（２ｈ） １２１．２３０９
４　 ２（２％） １　 ２　 ６０．２５６３
５　 ２　 ２　 ３　 ８０．４７６２
６　 ２　 ３　 １　 １５１．０３０５
７　 ３（２．５％） １　 ３　 ８５．４９９６
８　 ３　 ２　 １　 １１３．７３７３
９　 ３　 ３　 ２　 １３１．３３６２
Ｋ１ ２３１．９１１９　 ２３２．３０６２　 ３５１．３１８０
Ｋ２ ２９１．７６３１　 ２１８．３４４４　 ２１５．７２３４
Ｋ３ ３３０．５７３１　 ４０３．５９７７　 ２８７．２０６７
ｋ１ ７７．３０３９　 ７７．４３５４　 １１７．１０６０
ｋ２ ９７．２５４３　 ７２．７８１５　 ７１．９０７８
ｋ３ １１０．１９１０　 １３４．５３２６　 ９５．７３５５
Ｒ　 ３２．８８７１　 ６１．７５１１　 ４５．１９８２
Ｔ＝∑Ｙｉ＝
８５４．２４８３
表３　方差分析
因素 偏差平方和 Ｆ比 显著性
Ａ　 ０．４０２　 １
Ｂ　 ９．１６２　 ２２．７９１ ＊
Ｃ　 ５．１０９　 １２．７０９ ＊
误差 ０．４
注：Ｆ０．０５（２，２）＝１９。
实验结果表明，对金樱根多糖含量结果的影响因素显
著性顺序为：料液比＞提取时间＞氢氧化钠浓度。金樱根
多糖的提取最优工艺为：料液比１∶９０，提取时间１ｈ，氢氧
化钠浓度为２．５％。
３　讨论
（１）本实验同时采用单因素与正交试验法优选提取工
艺，结果获得的最佳提取工艺条件为提取液氢氧化钠浓度
为２．５％，料液比为１∶９０，１００℃水浴提取１ｈ。单因素考察
的结果表明，料液比、提取温度、提取液浓度和提取时间均
对提取结果有影响，且在各因素所选的５个水平基础上，各
因素对结果影响的显著性顺序为：料液比＞提取温度＞提
取时间＞氢氧化钠浓度。
（２）本实验采用超声提取和水浴提取相结合，实验结果
表明采用此提取方法提取时间对提取结果影响较小，可在
较短时间内提取完成。与传统的提取方法中２０ｈ以上的回
流提取时间相比，大大缩短了提取时间。且超声提取和水
浴提取较简便安全，为提取金樱多糖的较佳提取方法。
参考文献：
［１］　黄泰康．现代本草纲目［Ｍ］．上卷．北京：中国医药科技出版
社，２００１：６１．
［２］　吴梧桐，高美凤，吴文俊，等．多糖的抗肿瘤作用研究进展
［Ｊ］．中国天然药物，２００３，１（３）：１５．
［３］　任浩娜．中药北沙参多糖与单糖组成和含量测定方法研究
［Ｄ］．沈阳：沈阳药科大学，２００８．
（责任编辑：王尚勇）
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