全 文 ：2016，Vol. 33，No. 4 评价技术与方法
［基金项目］ 广西柳州市科技攻关项目(2014CD201 自)
［作者简介］ 黎军，女，硕士研究生，主管药师，研究方向:民族药单刀根的质
量标准研究。E-mail:495214343 @ qq. com
HPLC-ELSD法测定民族药单刀根多糖中葡萄糖的含量
黎军，李隽永
(广西柳州食品药品检验所，广西 柳州 545001)
［摘 要］ 目的:建立以 HPLC-ELSD法测定单刀根多糖中葡萄糖含量的方法。方法:以葡萄糖为对照品，采用 Prevail Carbohy-
drate ES(4. 6 mm × 250 mm，5μm)色谱柱，以水-乙腈 (25 ∶ 75)为流动相，柱温:35 ℃，漂移管温度 95 ℃，载气流量为 2. 5 L·
min －1。结果:葡萄糖线性关系良好，相关系数 Ｒ = 0. 9991，平均加样回收率为 97. 6%。结论:该方法简单、准确、重现性好，可用
于单刀根多糖中葡萄糖含量的测定。
［关键词］ 单刀根;HPLC-ELSD;葡萄糖;多糖
［中图分类号］ Ｒ282 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 2095 － 3593(2016)04 － 0201 － 03
Determination of Glucose in Polysaecharides of Ethnodrug Millettia
Pulchra Kurz var. Laxio(Dunn)Z. Wei. by HPLC-ELSD
LI Jun，LI Junyong
(Liuzhou Institute for Food and Drug Control，Guangxi Liuzhou 545001，China)
［Abstract］ Objective:The method to determination of glucose in polysaecharides of ethnodrug Millettia pulchra Kurz var. Laxio
(Dunn)Z. Wei. by HPLC-ELSD was establish . Methods:Using glucose as a standard，chromatography was performed on a wondasil
Prevail Carbohydrate ES(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，the mobile phase was methyl alcoho and water(25∶ 75) ，column temperature was
35 ℃，drift tube temperature was 95 ℃ ，flow rate was 1. 4 mL·min －1. Ｒesults:Glucose had a perfect linear correlation，the correlation
coefficient was 0. 9991，the recovery was 97. 6% . Conslusion:The method is simple，accurate and reproducible，which can be used as glu-
cose in polysaecharides of ethnodrug Millettia pulchra Kurz var. Laxio(r Dunn)Z. Wei.
［Key Words］ Millettia pulchra Kurz var. Laxio(Dunn)Z. Wei. ;HPLC-ELSD;Glucose ;Polysaecharides
单刀根为蝶形花科植物疏叶崖豆［Millettia pul-
chra Kurz var. Laxior(Dunn)Z. Wei］的根，为广西壮、
瑶医常用药材，民间用于治疗小儿疳积、血虚头晕、
失眠、跌打肿痛、骨折、中风性偏瘫等疾病［1］。近年
来，研究发现单刀根还具有促进生长发育、益智、抗
氧化、解酒保肝、提高大脑供氧量及提高放、化疗后
受损或低下的免疫功能［2-5］等功效。药理试验表明，
这些功效与单刀根多糖密切相关［2-5］。单刀根多糖
由葡萄糖及阿拉伯糖组成［6］。本文首次报道了采用
HPLC-ELSD 法，以萄萄糖为对照品测定单刀根多糖
中葡萄糖的含量，为控制单刀根质量、保障用药安全
有效、制定其质量标准提供科学依据。
1 仪器与试药
1. 1 仪器
Waters 2685 高效液相色谱仪;Allted ELSD2000
型蒸发光散射检测器;METTLEＲ AE240 电子天平;
AS7240BT型超声波清洗器。
1. 2 样品
6 批单刀根样品收集于广西地区，原植物经黄
成勇副主任药师鉴定均为蝶形花科植物疏叶崖豆
Millettia pulchra Kurz var. Laxior(Dunn) Z. Wei。
见表 1。
表 1 单刀根样品信息表
样品编号 采集来源地或者购买地 采集时间或者购买时间
01 鹿寨县铁道口边 2015. 07
02 柳江县成团镇 2015. 07
03 北流市塘岸镇 2015. 06
04 玉林市仁厚镇 2015. 06
05 玉林市药材市场 2015. 07
06 柳江县拉堡镇 2015. 08
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2016 年第 33 卷第 4 期
1. 3 试剂与试药
葡萄糖对照品(中国食品药品检定研究院，批
号:110833-200503);甲醇(色谱纯);乙醇、硫酸均为
化学纯;蒸馏水和双蒸水为本实验室自制。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
采用 Prevail Carbohydrate ES(4. 6 mm ×250 mm，
5 μm)色谱柱;以水-乙腈 (25∶ 75)为流动相;进样量
20 μL，柱温:30 ℃，流速 1. 0 mL·min －1。ELSD6000
蒸发光散射检测器，漂移管温度 95 ℃，载气为空气，
气流量 2. 5 L·mim －1。在该条件下色谱峰可达到良
好分离。
2. 2 溶液制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二
磷干燥过的葡萄糖对照品适量，加水溶解、稀释、定
容，制得含葡萄糖 100 μg·mL －1的对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 取单刀根粉末(过四号
筛)1. 0 g，精密称定，置 150 mL锥形瓶中，加乙醇 50
mL水浴(90 ℃)回流 30 min，趁热过滤，滤渣挥干乙
醇，精密加水 50 mL，称定重量，超声处理 30 min，用
水补足减失的重量，过滤，精密量取滤液 5. 0 mL，加
硫酸溶液(1 mol·mL －1)1. 5 mL，密封，100 ℃水解
30 min，冷却，用饱和氢氧化钡调 pH 至中性，离心
(8000 转 /min，5 min)，取上清液至 25 mL容量瓶，残
渣用水洗 2 次，每次 5 mL，离心，上清洗液移入容量
瓶，用水定容至刻度，摇匀，经 0. 45 μm 微孔滤膜，
即得。
2. 3 线性关系的考察
标准曲线:精密称取经五氧化二磷干燥过的葡
萄糖对照品 10. 42 mg，置 50 mL量瓶中，加入一级水
溶解并稀释至刻度，得 208. 4 μg·mL －1的标准溶液，
依次稀释为 156. 3、104. 2、52. 1、26. 05 μg·mL －1的
标准溶液。分别吸取上述标准溶液分别进样 20μL，
测定峰面积，以葡萄糖浓度的对数 lg(cv)为横坐标，
葡萄糖峰面积的对数 lg(A)为纵坐标，得到线性方
程:y = 1. 9675x + 1. 7704，Ｒ2 = 0. 9991。
2. 4 精密度试验
精密吸取葡萄糖标准溶液(104. 2 μg·mL －1)，
重复进样 6 次，测定葡萄糖峰面积，其峰面积 ＲSD为
1. 71%，表明该仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验
取同一份供试品液，分别于制备后 0、2、4、6、8、
10 h 进行测定，葡萄糖峰面积 ＲSD 为 4. 9%。说明
供试品液在 10 h内基本稳定。
2. 6 重复性试验
取单刀根样品 6 份，按 2. 2. 2 方法制备供试品溶
液，进样，测定样品中葡萄糖含量，葡萄糖含量 ＲSD
为 0. 76%。表明该方法重复性良好。
2. 7 加样回收率试验
精密称取已知含量的单刀根粉末(编号 05，含量
1. 11%)0. 5 g，共 6 份，分别精密加入葡萄糖对照品，
按“2. 2. 2”方法操作，得加样回收供试品溶液。分别
吸取对照品溶液 10、20 μL，加样回收供试品溶液
20 μL，进样，依照本文色谱条件测定，据外标两点法对
数方程计算葡萄糖含量，并计算回收率，结果见表 2。
表 2 含量测定结果及回收率
取样量
(g)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测定量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
ＲSD
(%)
0. 5003 5. 5533 5. 75 11. 1481 97. 3
0. 5057 5. 6133 5. 70 11. 1309 96. 8
0. 5015 5. 5666 5. 82 11. 2527 97. 7 97. 6 3. 1
0. 5060 5. 6166 5. 61 11. 0695 97. 2
0. 5072 5. 5579 5. 48 10. 8077 95. 8
0. 5063 5. 6199 5. 86 11. 5151 100. 6
2. 8 样品测定
取上述 6 批单刀根药材样品，按“2. 2. 2”方法制
备供试品溶液，按拟定的色谱条件进行测定，分别进
样 20μL，用外标两点法对数方程分别计算葡萄糖的
含量，结果见表 3，色谱图见图 1。
表 3 样品含量测定结果(n =4)
样品编号 葡萄糖含量(%) ＲSD(%)
01 1. 66 1. 69
02 0. 97 3. 61
03 1. 02 2. 12
04 1. 30 1. 76
05 1. 11 2. 34
06 1. 19 2. 03
3 讨论
单刀根多糖由葡萄糖及阿拉伯糖组成［6］，故本
文以样品多糖的酸性水解产物葡萄糖为指标性成
分，通过测定葡萄糖含量，间接地评价单刀根中多糖
含量。样品加乙醇回流 30 min，目的是除去脂溶性
成分和色素［7］。
研究表明，用超声提取法可提高多糖的提取率，
并能缩短提取时间，减少料液比，降低提取液粘度和
表面张力，降低生产成本［8］。本文尝试采用超声
·202·
2016，Vol. 33，No. 4 评价技术与方法
图 1 单刀根药材色谱图
a. 对照品图;b. 样品图
提取法提取多糖，并通过正交实验确定提取、水解条
件，即:超声时间 30min、硫酸用量 1. 5 mL、水解时间
30 min。
本实验考察了高效液相法中流动相的 3 种流
速:0. 6、0. 8、1 mL·min －1，结果:流速对分离效果没
有显著影响，流速 0. 6 mL 会有拖尾现象，流速 1 mL
出峰时间过早，所以选择 0. 8 mL为佳。使用水-乙腈
作为流动相，发现水-乙腈 25∶ 75 能较好地分离。
由表 2 可知，各产地的单刀根多糖含量差异较
大，可能与生长环境、生长年限有关，使用药材时应
关注这些因素，以保证疗效。
本研究首次建立了高效液相色谱-蒸发光散射检
测法测定单刀根多糖中葡萄糖的含量，所建方法简
单易行，方法学验证符合要求，可作为民族药单刀根
药材中糖类成分的测定依据。
参考文献
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用［J］． 右江民簇医学院学报，2004，26(4):463．
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KB /MIT及耐药乳腺癌细胞株 MCF-7 /ADＲ与逆转作用［J］． 广西医科大
学学报，2003，20(4):495．
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伤的保护作用［J］． 中国药房，2006，17(15):1132．
［6］ 林兴，蒋伟哲，焦杨，等． 单刀根多糖化学成分的研究［J］． 中成药，2009，
31(6):903-905
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珍国医国药，2012，23(3):567-569．
(收稿日期:2016-03-15)
·警戒与通报·
加拿大评估 α硫辛酸的低血糖风险
加拿大卫生部对科学文献中发表的有关使用 α硫辛酸引起低血糖发作的病例报告实施了一次安全性审查。在携带某种遗
传变异的个体使用口服 α硫辛酸产品后，机体自身防御系统开始攻击胰岛素，称为胰岛素自身免疫综合征(IAS)，该综合征可导
致携带该特殊遗传变异的个体出现低血糖。
α硫辛酸是某些天然保健产品中的药物成分，作为抗氧化剂用于保持人体良好的健康状况和 /或促进葡萄糖的生理性分解。
此外，在某些天然保健产品中，α硫辛酸还作为防腐剂(非药物成分)使用。截止至本次审查时，加拿大卫生部已向超过 800 种
含有 α硫辛酸(也称为硫辛酸)的天然保健产品发放了许可证，作为人体使用的药物成份。
国际上已有数篇关于患有 IAS的个体因服用含 α硫辛酸的口服产品引发低血糖发作的病例报告发表，这些低血糖病例在
停用 α硫辛酸后立即好转。在本次审查中，在加拿大本土地区尚未收到因使用 α硫辛酸引起低血糖发作的报告。科学证据表
明有 IAS遗传易感性的个体在使用口服 α硫辛酸后有低血糖发作的风险。尽管病例大多来自这些遗传变异情况更常见的亚
洲，近来在欧洲也出现了病例报告。
加拿大卫生部安全性审查后得出的结论认为，α硫辛酸可能引发一种被称为胰岛素自身免疫综合征(IAS)的疾病，该疾病可导
致低血糖。此副作用可能比较罕见，且报告的病例发生于携带某种特殊遗传变异的个体中，在停用 α硫辛酸后可立即好转。
消费者在使用 α硫辛酸前可能会不了解药品的此类风险，因此加拿大卫生部将更新含 α硫辛酸产品的说明书相关内容，以
告知消费者如果出现了低血糖症状，如出汗、脸色苍白、寒战、头痛、头晕、意识混乱等，应停止使用该产品并咨询医务人员。另
外，加拿大卫生部还将在 Health Product InfoWatch上发表相关文章，以提高人们对该潜在风险的认识。
(来源:加拿大卫生部网站)
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