全 文 ：畜牧兽医学报　２０１３，４４（６）：９５２－９５９
Ａｃｔａ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ　ｅｔ　Ｚｏｏｔｅｃｈｎｉｃａ　Ｓｉｎｉｃａ
ｄｏｉ：１０．１１８４３／ｊ．ｉｓｓｎ．０３６６－６９６４．２０１３．０６．０１８
毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺超微结构及
免疫功能的影响
王占彬１，王亚锴１，赵德明２，张自强１
（１．河南科技大学动物科技学院，洛阳４７１００３；２．中国农业大学动物医学院，北京１００１９３）
摘　要：为研究毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺超微结构的影响，将１２０只昆明种小白鼠随机分为４组：对照组（灌
服０．３ｍＬ·ｄ－１含０．５％ＣＭＣ－Ｎａ的ＰＢＳ）、黄酮Ⅰ组［４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮］、黄酮Ⅱ组［１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄
酮］和黄酮Ⅲ组［３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮］，每组３０只（雌雄各半），采用灌胃法按体重每日给小鼠灌服毛泡桐花黄
酮建立实验动物模型，在处理后第２８天处死小鼠，采集脾和胸腺，计算脏器指数，ＭＴＴ法检测刀豆素Ａ（ＣｏｎＡ）诱
导的小鼠脾淋巴细胞增殖转化、中性红试验测定小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能，并采用扫描电镜观察小鼠脾和胸腺
结构。结果表明，不同剂量的毛泡桐花黄酮均能显著提高小鼠胸腺和脾指数及淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞
吞噬功能（Ｐ＜０．０５），且呈现一定的剂量依赖性；毛泡桐花黄酮高、中、低３个剂量组小鼠脾和胸腺中成熟淋巴细胞
数量均较对照组增多，特别是高剂量组成熟淋巴细胞数量最多。提示，毛泡桐花黄酮通过增加小鼠免疫器官质量、
免疫器官中成熟淋巴细胞数量等影响其超微结构。毛泡桐花黄酮通过提高脾Ｔ淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细
胞吞噬能力，对小鼠免疫功能具有一定的调控作用。
关键词：毛泡桐花；黄酮；扫描电镜；小鼠；脾；胸腺
中图分类号：Ｓ８５２．１６　　　　文献标志码：Ａ　　　　文章编号：０３６６－６９６４（２０１３）０６－０９５２－０８
收稿日期：２０１２－１２－１０
基金项目：河南省科技攻关项目（１３２１０２３１０２７９）
作者简介：王占彬（１９６４－），男，河南省嵩县人，博士，副教授，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｚｈａｎｂｉｎ３６９６＠１２６．ｃｏｍ
Ｔｈｅ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＰａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　Ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ
ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｅ　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　Ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｅ
ＷＡＮＧ　Ｚｈａｎ－ｂｉｎ１，ＷＡＮＧ　Ｙａ－ｋａｉ　１，ＺＨＡＯ　Ｄｅ－ｍｉｎｇ２，ＺＨＡＮＧ　Ｚｉ－ｑｉａｎｇ１
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｌｕｏｙａｎｇ４７１００３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｉｎａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｆ　Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａ－
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ，１２０Ｋｕｎｍｉｎｇ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｆｏｕｒ
ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝３０，ｈａｌｆ　ｍａｌｅ　ａｎｄ　ｈａｌｆ　ｆｅｍａｌｅ）．Ｕｓｉｎｇ　ｄａｉｌｙ　ｉｎｔｒａｇａｓｔｒｉｃ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｆｒｏｍＰａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｆｌｏｗｅｒ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｗｅｉｇｈｔ　ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｎｉｍａｌ
ｍｏｄｅｌ：Ｍｉｃｅ　ｉｎ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｇｒｏｕｐⅠ，ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｇｒｏｕｐⅡａｎｄ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｇｒｏｕｐⅢ ｗｅｒｅ　ｄｒｅｎｃｈｅｄ
（ｏｎｃｅ　ｄａｉｌｙ　ｆｏｒ　２８ｄａｙｓ）ｗｉｔｈ　４０，１２０ａｎｄ　３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｍｉｃｅ　ｉｎ
ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗｅｒｅ　ｇａｖａｇｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｑｕａｌ　ｖｏｌｕｍｅ　ＰＢＳ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　０．５％ＣＭＣ－Ｎａ．Ｏｎ　ｔｈｅ　２８ｔｈ　ｄａｙ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｓｐｌｅｅｎｓ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓｅｓ　ｗｅｒｅ　ｃｏｌｅｃｔｅｄ　ａｎｄ　ｏｒｇａｎ　ｉｎｄｅｘ　ｗａｓ　ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ．Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｐｌｅｅｎ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＣｏｎＡ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ｍｅｔｈｏｄ．
Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ　ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｗａｓ　ｔｅｓｔｅｄ　ｂｙ　ｎｅｕｔｒａｌ　ｒｅｄ　ｔｅｓｔ．Ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ
ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓｅｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ
　６期 王占彬等：毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺超微结构及免疫功能的影响
ｔｈａｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｓｅｓ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＰａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａｆｌｏｗｅｒｓ　ｃａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｍｐｒｏｖｅ　ｔｈｅ
ｔｈｙｍｕｓ　ａｎｄ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ（Ｐ＜０．０５）ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ－ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ
ｍａｎｎｅｒ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｍａｔｕｒｅ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ
ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｉｎ　ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ
ｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｕｇｇｅｓｔ　ｔｈａｔ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ａｆｆｅｃｔ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａ－
ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　ｉｍｍｕｎｅ　ｏｒｇａｎ　ｑｕａｌｉｔｙ，ｉｍｍｕｎｅ　ｏｒｇａｎｓ　ｍａｔｕｒｅ　ｌｙｍ－
ｐｈｏｃｙｔｅ　ｎｕｍｂｅｒ．Ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ，ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ，ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏ－
ｍｅｎｔｏｓａｆｌｏｗｅｒｓ　ｈａｓ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｂｙ　ｒｅｉｎｆｏｒｃｉｎｇ　ｔｈｅ
Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｏｆ　ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｃｅｌｕｌａｒ　ｉｍｍｕｎｅ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｆｌｏｗｅｒｓ；ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ；ｓｃａｎｎｉｎｇ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ；ｍｉｃｅ；
ｓｐｌｅｅｎ；ｔｈｙｍｕｓ
　　黄酮类化合物广泛存在于自然界的植物体中，
是药用植物中主要活性成分之一［１－２］。在畜禽生产
中还发现，该化合物具有提高畜禽机体免疫力、抗菌
消炎、提高抗氧化能力和保健等作用［３－８］。
毛泡桐（Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｓｔｅｕｄ）为玄参科
泡桐属植物，目前，在中国广泛种植。毛泡桐花的药
用价值在中国古代史书中就有记载。现代研究表明
毛泡桐花中含有一定量的黄酮类化合物，不但可用
于心脑血管疾病、糖尿病、高血压等疾病的治疗，而
且还具有重要的抗癌功效［７，９－１２］。但有关毛泡桐花
黄酮对小鼠免疫器官超微结构及免疫功能影响的研
究至今尚未见报道。本试验旨在研究毛泡桐花黄酮
对小鼠脾和胸腺超微结构及免疫功能的影响，为进
一步探讨毛泡桐花黄酮能否作为一种绿色饲料添加
剂应用于畜禽生产以提高畜禽免疫力及预防、治疗
畜禽免疫缺陷性疾病等提供形态学依据。
１　材料与方法
１．１　材料
毛泡桐花黄酮样品纯化物：由河南科技大学动
物科技学院中心实验室纯化并制备，纯化物中总黄
酮的含量为９８．２５％。
１．２　实验动物
１２０只２１日龄昆明种小白鼠（由河南省实验动
物中心提供），饲养于清洁级动物房，自由饮水和进
食，每日１２ｈ光照，温度２２～２５℃。
１．３　仪器与试剂
ＡＧ２０４型电子天平（上海精密科学仪器公司）；
ＳＹ３２００－Ｔ型超声波清洗器（上海声源超声波仪器
设备有限公司）；澳柯玛 ＡＭ－Ｃ２３ＣＶ型微波炉（青
岛澳柯玛股份有限公司）；ＥＬＸ８００ＵＶ酶标仪（美国
ＢｉｏＴｅｋ公司）；ＫＹＫＹ－ＥＭ３２００型数字化扫描电子
显微镜（苏州瑞测精密仪器有限公司）。羧甲基纤维
素钠、戊二醛为国产分析纯。
１．４　试验设计
将１２０只试验小白鼠预饲１周后，随机分为４
组，每组３０只（公母各半）。即空白对照组（Ａ组）、毛
泡桐花黄酮纯化物低、中、高３个剂量组（Ｂ、Ｃ、Ｄ组），
试验组每日１５：００灌胃黄酮，Ｂ、Ｃ、Ｄ试验组灌胃剂量
分别为４０、１２０、３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１，具体是毛泡桐花
黄酮溶于０．５％的羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎａ）配制成
所需浓度的溶液，每只灌胃０．３ｍＬ·ｄ－１。对照组
只灌胃等量的溶剂。试验期间小鼠自由采食和饮
水。试验期注意观察动物（如活动情况、进食情况、
精神状态等），每周称１次动物体重。试验期２８ｄ
结束时，处死小鼠并解剖取胸腺、脾称重，戊二醛固
定，待制备电镜样品。
１．５　测定指标
在实验处理第２８天，经脱臼处死小鼠（每组随
机选取１０只），迅速剖开腹腔取出胸腺和脾，除去脂
肪组织后称重，并计算胸腺指数和脾指数
免疫器官指数（ｇ·ｋｇ－１）＝免疫器官鲜重（ｇ）／
宰前活重（ｋｇ）。
１．６　脾淋巴细胞增殖反应测定
处死小鼠（每组随机选取５只）后，参照李媛
等［１３］方法制备脾细胞悬浮液，同时调整细胞浓度为
１×１０９·Ｌ－１。于９６孔的培养板上每孔分别加入
脾细胞悬浮液１００μＬ，再加入１００μＬ含ＣｏｎＡ（Ｃｏ－
ｎＡ终质量浓度５ｍｇ·Ｌ－１）的ＲＰＭＩ１６４０培养液，
保持每份３个复孔，３７℃、５％ＣＯ２ 培养箱培养４８
ｈ，终止培养前４ｈ每孔加入５ｇ· Ｌ－１　ＭＴＴ　１０μＬ
振荡后继续培养，离心去上清，加酸化异丙醇１２０
３５９
畜　牧　兽　医　学　报 ４４卷　
μＬ，在酶标仪５７０ｎｍ处测Ａ值，结果以３个复孔Ａ
的均值表示。
１．７　腹腔巨噬细胞吞噬能力测定
小鼠处死（每组随机选取５只）后，参照运晨霞
等［１４］的方法制备小鼠腹腔巨噬细胞，用ＲＰＭＩ１６４０
培养液调整细胞浓度至１×１０９· Ｌ－１，采用中性红
法测定小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力，结果以酶标
仪５７０ｎｍ处吸光度均值表示。
１．８　电镜样本制备
将组织用双面刀片切成边长约３ｍｍ×５ｍｍ
的小方块。放入盛有２．５％戊二醛的小瓶内，将小
瓶放入盛有３００ｍＬ水的培养皿中，在微波炉内（火
力２０，额定输出功率约１５０Ｗ，下同），固定３ｍｉｎ。
具体过程：将装有材料的小瓶放在盛有水的培养皿
中，同时在炉内放一盛９００ｍＬ水的烧杯用于吸收
微波炉产生的多余热量，防止材料温度升高。固定
后将小瓶中的戊二醛倒出，然后加入缓冲液，在微波
炉内清洗３次，火力４０，每次１ｍｉｎ。清洗后材料用
３０％、５０％、７０％、８０％、９０％、１００％的乙醇依次梯度
脱水，每次在微波炉内处理１ｍｉｎ，火力４０。脱水后
将乙醇倒出，加入醋酸异戊脂，然后放在微波炉内处
理，每次１ｍｉｎ，火力４０。
１．９　数据处理
试验数据采用ＳＡＳ８．０２ 软件包方差分析和
Ｄｕｎｃａｎ＇ｓ多重比较，数据用“ｘ±ｓ”表示，Ｐ＜０．０５
表示差异显著，Ｐ＜０．０１表示差异极显著。
２　结　果
２．１　毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺脏器指数的影
响
　　毛泡桐花黄酮对小鼠脾、胸腺脏器指数均具有
一定的影响。各试验组小鼠脾指数，与对照组相比
毛泡桐花黄酮的低剂量组、中剂量组、高剂量组分别
比对照组提高２５．０４％（Ｐ＜０．０５）、２８．４６％（Ｐ＜
０．０５）、２８．８４％（Ｐ＜０．０５），且３个试验组之间差异
不显著（Ｐ＞０．０５）；各试验组小鼠胸腺指数，与对照
组相比毛泡桐花黄酮的低剂量组、中剂量组、高剂量
组分别比对照组提高２４．４５％（Ｐ＜０．０５）、３９．１６％
（Ｐ＜０．０５）、４４．０５％（Ｐ＜０．０１），且３个试验组之
间差异不显著（Ｐ＞０．０５），说明毛泡桐花黄酮的低
剂量组、中剂量组、高剂量组对小鼠脾和胸腺具有明
显的刺激增生作用，具体见表１。
表１　毛泡桐花黄酮对小鼠脾、胸腺脏器指数的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＰａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｎ　ｓｐｌｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
脾指数／（ｍｇ·ｇ－１）
Ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｄｅｘ（ｍｇ·ｇ－１）
胸腺指数／（ｍｇ·ｇ－１）
Ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｄｅｘ（ｍｇ·ｇ－１）
空白对照组Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ［０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］ ５．２７±０．２３ｂ　 ２．８６±０．３２Ｂｂ
低剂量组Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ［４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］ ６．５９±０．３４ａ ３．５６±０．３５ａ
中剂量组 Ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ［１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］ ６．７７±０．２６ａ ３．９８±０．２６ａ
高剂量组 Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ［３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］ ６．７９±０．３１ａ ４．１２±０．３３Ａａ
同列数据肩标字母相同表示差异不显著（Ｐ＞０．０５），不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），不同大写字母表示差异极显著
（Ｐ＜０．０１）。下表同
Ｉｎ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｒｏｗ，ｖａｌｕｅｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｌｅｔｔｅｒ　ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ　ｍｅａｎ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＞０．０５），ｗｈｉｌｅ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｍａｌ
ｌｅｔｔｅｒ　ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ　ｍｅａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃａｐｉｔａｌ　ｌｅｔｔｅｒ　ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔｓ　ｍｅａｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｄｉｆｆｅｒ－
ｅｎｃｅ（Ｐ＜０．０１）．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ａｓ　ｂｅｌｏｗ
２．２　毛泡桐花黄酮对小鼠脾淋巴细胞增殖反应和
腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
　　与正常对照组相比，毛泡桐花黄酮各剂量组脾
淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞吞噬能力均提
高，特别是中剂量和高剂量组与对照组相比差异极
显著（Ｐ＜０．０１），具体见表２。
４５９
　６期 王占彬等：毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺超微结构及免疫功能的影响
ａ１、ａ２、ａ３．对照组（１　０００×、２　５００×和５　０００×）；ｂ１、ｂ２、ｂ３．４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组（１　０００×、２　５００×和５　０００
×）；ｃ１、ｃ２、ｃ３．１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组（１　０００×、２　５００×和５　０００×）；ｄ１、ｄ２、ｄ３．３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组
（１　０００×、２　５００×和５　０００×）；添加毛泡桐花黄酮组小鼠胸腺中成熟淋巴细胞数量均较对照组增多，特别是黄酮
３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１组成熟淋巴细胞数量最多
ａ１，ａ２，ａ３．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×ａｎｄ　５　０００×）；ｂ１，ｂ２，ｂ３．Ｔｈｅ　４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×ａｎｄ　５　０００×）；ｃ１，ｃ２，ｃ３．Ｔｈｅ　１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×
ａｎｄ　５　０００×）；ｄ１，ｄ２，ｄ３．Ｔｈｅ　３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×ａｎｄ　５　０００×）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｍａｔｕｒｅ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆｌａ－
ｖｏｎｏｉｄ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｇｒｏｕｐ
图１　毛泡桐花黄酮对小鼠胸腺超微结构的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｙｍｕｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
５５９
畜　牧　兽　医　学　报 ４４卷　
Ａ１、Ａ２、Ａ３．对照组（１　０００×、２　５００×和５　０００×）；Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３．４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组（１　０００×、２　５００×和５　０００
×）；Ｃ１、Ｃ２、Ｃ３．１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组（１　０００×、２　５００×和５　０００×）；Ｄ１、Ｄ２、Ｄ３．３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组
（１　０００×、２　５００×和５　０００×）。添加毛泡桐花黄酮组小鼠脾脏中成熟淋巴细胞数量均较对照组增多，特别是黄酮
３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１黄酮组成熟淋巴细胞数量最多
Ａ１，Ａ２，Ａ３．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×ａｎｄ　５　０００×）；Ｂ１，Ｂ２，Ｂ３．Ｔｈｅ　４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×ａｎｄ　５　０００×）；Ｃ１，Ｃ２，Ｃ３．Ｔｈｅ　１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×
ａｎｄ　５　０００×）；Ｄ１，Ｄ２，Ｄ３．Ｔｈｅ　３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｇｒｏｕｐ（１　０００×，２　５００×ａｎｄ　５　０００×）．Ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｍａｔｕｒｅ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｈｒｅｅ　ｆｌａ－
ｖｏｎｏｉｄ－ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐｓ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｇｒｏｕｐ
图２　毛泡桐花黄酮对小鼠脾超微结构的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｐａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａ　ｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｓｐｌｅｅｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
６５９
　６期 王占彬等：毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺超微结构及免疫功能的影响
表２　毛泡桐花黄酮对小鼠脾淋巴细胞增殖及腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ　ｆｒｏｍＰａｕｌｏｗｎｉａ　ｔｏｍｅｎｔｏｓａｆｌｏｗｅｒｓ　ｏｎ　ｓｐｌｅｅｎ　Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
脾淋巴细胞增殖
Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｓｐｌｅｅｎ（Ａ５７０ｎｍ）
腹腔巨噬细胞吞噬能力
Ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌ
ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ（Ａ５７０ｎｍ）
空白对照组
Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ［０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］
０．４６２±０．０２８Ｂ　 ０．４４１±０．０２６ｂ
低剂量组
Ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ［４０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］
０．４７１±０．０３１Ｂ　 ０．５０３±０．０５１Ａａ
中剂量组
Ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ［１２０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］
０．５３２±０．０４７Ａ　 ０．５４３±０．０３９Ａ
高剂量组
Ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐ［３６０ｍｇ·（ｋｇ·ｄ）－１］
０．５９４±０．０５３Ａ　 ０．５６５±０．０４３Ａ
２．３　毛泡桐花黄酮对小鼠胸腺超微结构的影响
小鼠胸腺扫描电镜图片（图１）显示：正常对照
组（ａ１、ａ２和ａ３）小鼠胸腺淋巴细胞呈圆形，细胞数
量相对较少，细胞之间不规则排列，个别细胞与周围
间质脱离呈现出空洞现象，有的淋巴细胞与周围间
质彻底脱离而呈现出一个明显的凹痕。毛泡桐花黄
酮高剂量组（ｄ１、ｄ２和ｄ３）小鼠胸腺Ｔ淋巴细胞呈
圆形且数量明显增多，各细胞排列规则，没有细胞与
其周围细胞间质脱离及细胞脱落现象，细胞体积较
对照组也有所增大，说明高剂量组胸腺中成熟淋巴
细胞数量明显比对照组增多，胸腺发育较好。低剂
量组（ｂ１、ｂ２和ｂ３）和中剂量组（ｃ１、ｃ２和ｃ３）小鼠胸
腺中 Ｔ淋巴细胞呈圆形，细胞与周围间质吻合较
好，胸腺空洞现象不明显，其所含成熟淋巴细胞数量
介于对照组和高剂量组之间，说明淋巴细胞数量与
黄酮添加剂量呈正相关。
２．４　毛泡桐花黄酮对小鼠脾超微结构的影响
小鼠脾扫描电镜图片（图２）均显示脾之脾小梁
及成熟的淋巴细胞（包括Ｂ细胞、Ｔ细胞）、少量散
在的巨噬细胞。正常对照组（Ａ１、Ａ２和Ａ３）和毛泡
桐花黄酮低剂量组（Ｂ１、Ｂ２和Ｂ３）小鼠脾淋巴细胞
呈圆形，细胞数量较少，细胞与周围间质有脱离现
象，相邻细胞之间的细胞间质凹凸不平，中剂量
（Ｃ１、Ｃ２和Ｃ３）和高剂量组（Ｄ１、Ｄ２和Ｄ３）脾中淋巴
细胞数量明显增多，特别是高剂量组淋巴细胞数量
最多，有发达的脾小梁及大量成熟的表面有微绒毛
的Ｂ细胞，各个细胞及间质组织排列致密，少有细
胞空隙。
３　讨　论
胸腺和脾是机体内的重要免疫器官。其中胸腺
对动物免疫功能的建立及其免疫能力丧失后免疫调
控功能的恢复具有重要作用，胸腺产生的大量胸腺
细胞在Ｔ淋巴细胞不足时可作为Ｔ淋巴细胞的后
备完成其免疫调控功能，成熟的胸腺细胞还可以随
血液到达机体外周的免疫器官协助Ｂ淋巴细胞发
挥体液免疫作用。脾是有机体内体积较大的免疫器
官，对各类瘤细胞、有害微生物等均有一定的过滤作
用，脾还是机体淋巴细胞的居留地和增殖场所，除
此，机体的特异性免疫反应大都发生在脾［１５］。一般
认为，免疫器官的质量降低为免疫抑制所致，而免疫
器官的质量增加则为免疫增强的表现［１６］。王洪武
等［１７］研究表明，淫羊藿黄酮可增加免疫力低下小鼠
的体重，虽对免疫器官脾的质量无明显增加作用，但
能够明显增加脾细胞的绝对数量及每克脾组织中细
胞的相对数量，因而淫羊藿黄酮对免疫低下小鼠的
细胞免疫功能具有显著的恢复作用，同时对体液免
疫有显著增强作用。本研究结果表明，毛泡桐花黄
酮通过促进小鼠胸腺和脾的发育调控小鼠的免疫功
能，这可能与黄酮促进机体代谢，改善钙离子通道有
关［１８－２０］。毛泡桐花黄酮对小鼠脾和胸腺指数的影响
随着其剂量的增加不断增强，呈现出一定的剂量依
赖性。
胸腺是动物的中枢免疫器官，能分泌多种胸腺
７５９
畜　牧　兽　医　学　报 ４４卷　
激素参与调节机体的免疫功能，特别是参与机体的
细胞免疫功能，增强机体抗肿瘤、抗感染的能力，胸
腺还是Ｔ细胞发育分化和成熟的场所，近年来的研
究表明，胸腺中初始Ｔ细胞的数量能代表胸腺中Ｔ
细胞的增殖潜能，其功能状态直接决定着机体的细
胞免疫功能，并影响机体的体液免疫功能［２１］。本试
验中扫描电镜显示，随着毛泡桐花黄酮剂量的加大，
胸腺中成熟淋巴细胞数量逐渐增加，成熟淋巴细胞
的生理状态和细胞内细胞器的数量和形态发生改
变，进而调控机体的免疫功能。
脾作为机体的重要免疫器官，在机体的各种免
疫应答中发挥着重要作用。脾的实质包括红髓、白
髓及边缘区。白髓中淋巴细胞尤为密集，脾小体作
为白髓的主要结构单位，富含大量的Ｂ淋巴细胞，
而动脉周围淋巴鞘则密集有大量的 Ｔ淋巴细胞。
红髓中白细胞较多。在脾的边缘区中富含大量巨噬
细胞及少量Ｂ淋巴细胞、Ｔ淋巴细胞，当有机体受
到抗原刺激后，抗原经巨噬细胞加工处理后，在 Ｔ
细胞的协同作用下，脾小体中Ｂ型淋巴细胞增殖产
生大量的效应Ｂ细胞即浆细胞，分泌抗体参与体液
免疫。本试验脾淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞
吞噬能力及扫描电镜结果表明，不同剂量的毛泡桐
花黄酮均能提高脾中Ｔ淋巴细胞的增殖反应及腹
腔巨噬细胞的吞噬能力、增加成熟淋巴细胞的数量，
特别是高剂量组效应更加明显，这说明毛泡桐花黄
酮的添加量与脾淋巴细胞增殖反应、腹腔巨噬细胞
吞噬能力及成熟淋巴细胞的数量呈正相关，试验结
果显示，毛泡桐花黄酮可能通过不同途径影响脾超
微结构和免疫功能进而改善小鼠的免疫功能。
淋巴细胞增殖反应被认为是反映机体免疫功能
的重要检测指标之一［２２］。巨噬细胞作为机体天然
免疫的组成部分，不仅对机体的屏障机能起着重要
作用，并且参与免疫应答，还可产生多种生物活性物
质，如ＩＬ－２、ＴＮＦ－α等。在产生特异性细胞免疫和
体液免疫之前发挥防御作用。毛泡桐花黄酮可提高
脾淋巴细胞增殖反应和腹腔巨噬细胞吞噬能力并提
高免疫器官质量、影响免疫器官中成熟淋巴细胞数
量，提示，不同剂量的毛泡桐花黄酮不仅影响免疫器
官脾、胸腺的超微结构而且对小鼠的免疫功能也具
有一定的调控作用。
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＋ Ｔ　ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ　ｔａｒｇｅｔ　ＮＳ１，ＮＳ３ａｎｄ　ＮＳ５ｉｎ　ｉｎｆｅｃ－
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