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《中国医学创新》第 11 卷 第 17 期（总第 299 期）2014 年 6 月　　中医药研究 Zhongyiyaoyanjiu
Medical Innovation of China Vol.11, No.17 June,2014
差异有统计学意义（P<0.01），说明耳穴贴压联合五音
疗法能明显缓解AMI患者的焦虑程度。已有研究显示，
应用耳穴贴压可明显减轻肛肠科围手术期患者的焦虑
程度，减轻患者痛苦，促进术后恢复 [7-9]。而音乐疗法
被广泛应用于身心疾病和心理疾病，疗效显著。本研
究采用耳穴贴压联合五音疗法，并施以恰当手法，能
疏通经络、运行气血、调整脏腑功能，改善患者的精
神状态，起到镇静安神、抗疲劳、抗焦虑的功效，缓
解患者的不良情绪，提高治疗的依从性，有利于疾病
的转归，对治疗有积极的促进作用，可提高患者的生
活质量。
　　耳穴贴压和五音疗法是祖国传统中医特色护理技
术，操作简单方便易行，无任何副作用，患者易于接受，
具有广泛的应用前景，值得进一步推广。
参 考 文 献
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（收稿日期：2014-04-21）　（本文编辑：蔡元元）
①解放军第 91 中心医院　河南　焦作　454000
②郑州人民医院
通信作者：管玉成
金刷把中多糖含量测定方法的研究
管玉成①　李静②
　　【摘要】　目的：建立一种稳定、简便的金刷把多糖含量的测定方法。方法：采用蒽酮 - 硫酸法测定金刷把
多糖中多糖的含量，于 630 nm 处测定。结果：用此方法测定用葡萄糖的标准曲线 R2=0.9993，平均加样回收率
97.6%。结论：方法线性关系良好、准确，适用于金刷把中多糖含量测定。
　　【关键词】　金刷把；　多糖；　含量测定；　蒽酮 - 硫酸法
　　Research on Polysaccharide Content Determination Method for Lethariella Zahlbruckneri/GUAN Yu
cheng，LI Jing.//Medical Innovation of China，2014，11（17）：107-109
　　【Abstract】　Objective： To establish a easy method for determination of polysaccharide from Lethariella
zahlbruckneri. Method： The content of polysaccharide was determined by anthrone sulfuric acid method at 630 nm.
Result： The linear relationship of this method was well and the average recovery was 97.6%. Conclusion： This method is
accurate and can be used for quality control of polysaccharide in Lethariella zahlbruckneri.
　　【Key words】　Lethariella zahlbruckneri；　Polysaccharide；　Determination；　Anthrone sulfuric acid method
　　First-author’s address：NO.91 Central Hospital of Liberation Army，Jiaozuo 454000，China
　　doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2014.17.037
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中医药研究 Zhongyiyaoyanjiu　　《中国医学创新》第 11 卷 第 17 期（总第 299 期）2014 年 6 月
Medical Innovation of China Vol.11, No.17 June,2014
　　金刷把为松萝科植物金丝刷Lethariella cladonioides
（Nyl.） Krog 的枝状体，苦，平；镇静，消炎，止痛。
主治癫痫、精神分裂、神经衰弱、头目眩晕等症；主
产于陕西、四川、安徽、西藏、云南、河南等省，着生
于海拔 3000 米以上枯木上。是陕西民间常用中草药 [1]，
临床应用广泛，历史悠久。
　　金刷把作为地衣类药材，含有地衣酸、地衣多糖
及多种微量元素等。其中地衣多糖和异地衣多糖作为
地衣菌丝细胞壁的主要成分是所有地衣都含有的化学
成分 [2]。从 20 世纪 70 年代以来对地衣多糖的抗肿瘤
活性研究实验证明，绝大多数地衣种类中所含的地衣
多糖均具有极高的抗癌活性，特别值得重视的是地衣
多糖的抗癌机理，不是直接杀伤细胞来抑制癌细胞的
病态增殖，而是通过增强宿主的免疫防御系统来发挥
作用的 [3-9]。它可以激活机体内的巨噬细胞，被激活的
巨噬细胞不损伤健康细胞，只溶解、破裂或吞噬癌细胞。
因而克服了在化疗中健康细胞受损的严重副作用，既
所谓的“中间宿主免疫性”[10-11]。金刷把具有药物及
食品保健的开发潜力，但以往由于缺乏质量标准，其
临床应用受到很大限制，因此本实验建立了一种分光
光度法测定金刷把多糖含量的测定方法，为制定金刷
把药材标准和进一步开发利用提供科学依据。
1　 材料
1.1　仪器与试剂　AR1140 型电子天平（梅特勒 - 托
利多仪器（上海）有限公司），科伟恒温水浴锅（余姚
长丰仪表厂）；双光束紫外分光光度计 UV-2550 型（日
本岛津）；离心机 Z200A 型（德国 Laboriechnik 公司）；
SHZ-3 型循环水真空泵（河南省巩义市英峪仪器厂）；
SB 3200 DT 超声波清洗机（宁波新芝生物科技股份有
限公司）；乙醇、浓硫酸、蒽酮等均为分析纯；无水
葡萄糖对照品（38075-200709）；药材采自陕西省宝
鸡市太白山，由西安市药检所鉴定。
1.2　溶液制备
1.2.1　对照品溶液　精确称取于 105 ℃干燥至恒重的
无水葡萄对照品 100 mg，置 100 mL 容量瓶中，以蒸
馏水溶解并稀释至刻度，再精密吸取 10 mL 置 100 mL
量瓶中稀释至刻度，摇匀，即得标准品贮备液。
1.2.2　硫酸 - 蒽酮溶液的制备　精密称取蒽酮 0.10 g，
放入 100 mL 棕色容量瓶中，逐渐加入浓硫酸溶液至刻
度，摇匀使溶解完全，冷却至室温备用，注意避光保存。
1.2.3　供试品溶液的制备　称取破碎后的金刷把 1 g，
放置于 500 mL 圆底烧瓶中，加 50 倍量水，置沸水浴
中回流提取3次，每次提取1.5 h，趁热用布氏漏斗抽滤，
合并滤液。滤液转移至 250 mL 容量瓶中，加水稀释
至刻度，摇匀；精密量取 10 mL，加 95% 乙醇 60 mL，
摇匀，放置于 4 ℃下静置 24 h，离心，倾去上层液体，
沉淀加水充分溶解并转移至 25 mL 容量瓶中，定容摇
匀。精密量取 2.5 mL 置 25 mL 容量瓶中，定容摇匀作
为待测溶液。
2　方法及结果
2.1　测定波长的选择　分别精确吸取 2 mL 葡萄糖对
照品溶液和试品溶液分别置 2 只具塞试管中，并加入
蒽酮 - 硫酸试剂 6 mL，充分振摇后静置 10 min，再放
入冰水浴中冷却 10 min，取出。另以未加葡萄糖的溶
液为空白液，于 400~700 nm 波长范围扫描。测得对照
品和样品的最大吸收波长均为 630 nm，故选择 630 nm
波长测定。
2.2　硫酸用量的选择　精密吸取葡萄糖标准品溶液
2 mL，分别置于具塞试管中，并加入蒽酮 - 硫酸试剂
4.0、6.0、8.0 mL，充分振摇后静置 10 min，再放入冰
水浴中冷却 10 min，取出。在分光光度仪上 630 nm 处
测定吸光度值。结果表明：浓硫酸用量为 6.0 mL 时，
反应即可完全，见表 1。
表1　浓硫酸用量实验结果
浓硫酸 4.0 mL 6.0 mL 8.0 mL
吸光度值 0.175 0.182 0.199
2.3　标准曲线的制作　吸取葡萄糖标准品溶液 0、0.2、
0.4、0.6 、0.8、1.0 mL 于具塞试管中，各准确加入蒸
馏水 1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0 mL，再加硫酸蒽酮试
剂 8 mL，摇匀后静置 10 min，冰水浴中冷却 10 min，
取出。于 630 nm 处测定吸光度值。以吸光度（Y）对
葡萄糖浓度（x）得出回归方程 Y=0.9707x+0.0089，
R2=0.9993。在范围 20~100 μg/mL 范围内与吸光度呈
良好线性关系。
2.4　稳定性实验　精密吸取标准品及样品溶液各1 mL，
照标准曲线制备项下方法，依法测定吸光度，自冰水
浴中取出后，每隔 0.5 小时测定一次，连续 3 h 测定吸
光度考察其稳定性，计算得 RSD=1.98%，表明样品溶
液至少在 3 h 内稳定性良好。
2.5　精密度实验　取对照品溶液 1 mL，按供试品
测定项下操作测吸光度，平行测定 6 份。计算得
RSD=1.33%（n=6），表明仪器精密度良好。
2.6　重复性实验　精密称取样品粉末6份，每份约1 g，
按供试品测定项下操作测吸光度，考察操作方法的重
现性，计算得 RSD=0.75%（n=6）。
2.7　加样回收率实验　精密称取 3 份样品溶液 0.4 mL
置于具塞试管中，依次加入 0.1 mg/mL 的葡萄糖溶液
0.36、0.30、0.24 mL，并加入蒸馏水使总体积为 1 mL，
每个梯度各 3 份，空白对照为蒸馏水 1.0 mL。按供试
品溶液制备项下方法制备溶液，依法测定吸光度，在
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《中国医学创新》第 11 卷 第 17 期（总第 299 期）2014 年 6 月　　中医药研究 Zhongyiyaoyanjiu
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标准曲线中读出含量，计算得平均加样回收率 97.6%，
RSD=1.44%。
2.8　样品含量测定　精密称取 5 份金刷把样品，每份
1 g，按照“1.2.3”项下所述方法制备供试品溶液，吸
取待测液各 2 mL 置于具塞试管中，按照“2.3”项下
所述方法测定吸光度，由回归方程计算，结果见表 2。
最后计算样品中多糖的平均含量为 37.98 mg/L。
表2　样品含量试验测定数据　　　　　mg/L
批次 样品多糖 总黄酮平均含量
1 39.5850 37.98
2 34.8662
3 41.6838
4 38.4738
5 35.2749
3　讨论
　　多糖是由 10 个以上的单糖基通过苷键连接而成的
极性大分子化合物，常用的提取方法有水浸提法、酸碱
浸提法、酶法、盐析法，微波提取法等，而植物多糖提
取，以水浸提法最为普遍。多糖提取之后，还有许多杂
质要除去，一般利用多糖难溶于有机溶剂的特性，用乙
醇或丙酮进行反复沉淀洗涤。因为首次对金刷把多糖进
行研究，故选用最普遍简单的水提醇沉法制备金刷把多
糖。下一步研究可针对浸提温度、时间、乙醇浓度、醇
沉时间、醇沉次数等条件进行多糖制备工艺优化。
　　多糖检测方法也有很多，如苯酚 - 硫酸法、蒽酮 -
硫酸法、DNS 法、地衣酚法、Feling 滴定法、间接碘
量滴定法等，本实验所用蒽酮 - 硫酸比色法是最常用
的多糖测定方法之一，基本原理是多糖在浓硫酸的作
用下，水解成单糖，然后脱水形成呋喃环结构的糠醛
衍生物，糠醛衍生物可以和许多芳胺、酚类以及具有
活性次甲基的化合物缩合生成有色的化合物，在一定
范围内颜色深浅与糖浓度成正比，从而可比色测定其
含量。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，
不但可以测定戊糖与己糖，而且可以测所有寡糖类和
多糖类，其中包括淀粉、纤维素等，所以用蒽酮 - 硫
酸法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可
溶性碳水化合物总量。在金刷把多糖初步研究中，用
蒽酮 - 硫酸法可以一次测出多糖总量，省去许多麻烦，
因此，有特殊的应用价值。糖类与蒽酮反应生成的有
色物质在可见光区的吸收峰为 630 nm，故在此波长
下进行比色。本实验反应过程中颜色稳定，在波长
630 nm 处和一定浓度范围内，吸光度与样品中多糖含
量成正比，符合朗伯 - 比尔定律。实验简便准确，而
且通过精密度、稳定性、加样回收率等试验来验证了
这一方法的准确可靠性。
　　在测定过程中，则应注意切勿将样品的未溶解残
渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半
纤维素等与意酮试剂发生反应而增加了测定误差。同
时在实验中发现蒽酮硫酸试剂一定要现用现配，一次
配够量，配制时硫酸试剂要用同一批号，加入显色试
剂后需充分摇匀，冰水冷却时间严格把握，否则操作
过程中的这些差异均会影响测定结果。
　　多糖作为地衣类药材的主要成分之一，已被发现
地衣多糖具有多种生物活性，如免疫促进、抗肿瘤
等 [11-13]。而目前对地衣多糖的研究还在不断深入，所
以建立一种简便、快速、准确的多糖含量测定方法对
于金刷把的质量评价和开发利用具有重要的意义。对
金刷把多糖含量进行了初步研究后发现金刷把中总多
糖含量为 37.98%，金刷把中地衣多糖含量如此之高，
可能跟其生长环境有关，地衣生长速度极其缓慢，在
体内会产生积累大量具有生物活性的代谢产物，可以
看出金刷把是一种非常有潜力的药物资源，在新型药
物研究中具有广远前景和重要意义，有望被开发成为
新型药物。本实验为金刷把进一步的质量研究和开发
利用提供了方法和依据。
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（收稿日期：2014-01-25）　（本文编辑：蔡元元）