全 文 ：特 产 研 究 SP e c il aW l id Eo cn o而 cn i Am l an ad P ln at R s e er ach
文章编号 :1 0 01 一4 2 71 ( 2 0 0 8) 0 4 一01 0 6 一3 0
往芒水溶性多糖的提取与含量测定
李清民 ` , 李平亚 2 , 赵岩 2 , 刘金平 “嫩
( 1
. 吉林大学药学院药学实验中心 ,吉林 长春 13 0 2 1 ; 2 . 吉林大学再生医学科学研究所新药研究室 ,吉林 长春 13 0 2 1 )
摘要 : 目的 从往芒中分离出粗多糖 ,并建立其含 t 测定方法 。 方法 沸水提取注芒、醉析 、 se v ag 法脱蛋白 ,分离出粗多精 ,采
用慈酮 一硫酸法制得有色糖醛衍生物 ,用分光光度法进行含 t 测定 。 结果 该法平均回收率为 98 .5 % ,相对标准偏差为 1 .68 %
( n 二9 )
。 往芒中多糖含 t 为 .3 14 % 。 结论 方法简便易行 、稳定 、快捷 ,可作为注芒多糖的质里控制。
关扭询 :左芒 ; 多糖 ; 提取 ;含里侧定
中圈分类号 : 5 56 7 . ;l 2R 84 .2 文献标识码 : A
E x t ar ict o n a n d C o n t饥 t D e t e n 肚 in a it o n o f W a t e r es s o t ul le
P o ly s a 七c h a ir d e in s触nI 即伪貂祖 e s毋功aer e
L l Qin g 一而n ` , L l R n g一 y aZ , Z H A O Y an Z , L UI J in 一 p in g Z嫩
( 1
.
C en etr o f hP an acr eu
it e ia L a b o ar yr
,
S e h o l o f hP
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,
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,
Ch an g ch un 13X() 2 1
C ih n a ;
.2 D e P田力. e n t of N e w D ur g , nI ist ut et of orF int er M ide cal Sd en ce
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,
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,
C h an gc hun 13 0 21
,
C h i n a)
A卜内 , tC : O bj e c七ve oT xe it , ct an d e s . lb il hs m州自团 5 for het d助阂面 n硒on op fy二 ch iar da it on of in 决。 n c o s证 s op he aer .
M e ht do s Tb
e op ly s翻尤 h iar de w e r e ex O Z e et d w iht ho t w a te r 助 d P砚尤 I Pi at et d iw ht al c ho ul an d r e们n o v de p or et in by Sve ag m e ht do . hT e
c o n et n st of op ly s aC c h a ir业~
d e et r in n de b y s u伍们c 耐d- an ht or n e m e ht do us in g 62 5 lun 勿 U V s户戈的 ph o ot m e ytr . Res ul et Tb e
n 沈。 v 。甲业 w as 98 . 5 % iw ht 1 . 68 % o f RDS ( n = 9 ) . 丁七e e o ent nt o f op ly s畔 h iar de in aCS : 她 s叩 he ar L . w as 3 . 14 % . C o n c lu s io n
丁七e s u】fo ir c 耐 d 幼ht 拍 cn m e ht do C an be u “ 月 as q u心 yt co n tI O l fo r 反砒 n c as s沁 s op he aer .
K叮 , 。 n如 : 凡。 n c as 沁 s op he aer ; oP ly~ h iar 北 ; xE 讼aC 6On ; D e et r in n iat on
在芒 (& me n c sQ :诚 : op he aer )为豆科植物往芒决
明 ( asC : 她 s oP he ar L . )的干燥成熟种子 。 据《中国药学大
辞典》记载 : “注芒 ,原名左芒决明 ,性质甘 、平 、 无毒 ,其
茎叶味甘而滑 ,可作酒曲 ,嫩时采以为蔬及点茶食也 ,
均甚香美 ,具有调中除痰 、消渴 、令人不睡 、久服轻身等
功效 , ” 是一味民间沿用历史悠久的降血糖药用植物 。
近代研究表明 ,注芒决明含铁、 锌 、钙 、硒等多种矿物质
成分及脂肪 、蛋白质 、 多种氨基酸 、膳食纤维等成分 ,其
降血糖的主要活性成分为多糖类化合物 。 为此 ,首次对
左芒多糖进行了提取分离 , 并利用慈酮 一硫酸法制得
醛糖衍生物 l, 刀 ,采用分光光度法对往芒多糖进行了含
量测定 ,为茬芒多糖的质量研究奠定基础 。
1 原料 、仪器及试剂
1
.
, 原料
左芒由大连上方投资有限公司提供 。
1
.
2 仪器及试剂
收藕 日期 : 2仪犯 - 0 7刊刃
` 金项目 :吉林省科技厅科研基金资助项目 ( 2《x又砚哭x摊 - 15)
作者简介 :李清民 ( 19以卜 ) ,男 ,吉林省长春市人 ,主管技师 ,主要从事药学实验研究。
班通讯作者 :卜m ` 1: il uj p@j .lu de .u cn elT : 0 43 1一56 19 80 3
DOI : 10. 16720 /j . cnki . tcyj . 2008. 04. 004
特 产 2创犯年第 4期
5 71一 GW型分光光度计 (中华人民共和国上海分
析仪器厂 ) , 8 0 0 型电动离心机 (江苏省金坛市江南仪器
厂 ) 。 无水葡萄糖 、葱酮 、浓硫酸均为分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 往芒多粉的提取阁
取左芒粉末 (过 4D 目筛 ) 适量 , 加 3 倍量水于
10 ℃煎煮 3 次 ,每次 45 nIY
, 合并煎液 ,滤过 ,浓缩至
干 ,粉碎 ,即得狂芒水提物。 取左芒水提物于 105 ℃干
操至恒重 ,称取适量 ,加 10 倍体积的水 ,水浴加热使溶
解 ,减压抽滤 ,除去不溶物。 滤液在不断搅拌下 ,缓缓加
入 95 %乙醉至含醇量为 80 % , 4℃静止 48 h 。 减压抽滤
得棕色沉淀 , 以无水乙醇洗涤 3 次 , 60 ℃干燥 。 经水复
溶 、脱蛋白、干燥后获往芒粗多糖 ,得率为 .4 5% 。
2 2 醉 一S ve a g 法除蛋白
将上述所得棕色粉末溶于水中 ,制成约 10 m岁mL
的多糖水溶液 。称取链酶蛋白酶 l o m g 溶于 l o m L 蒸
馏水中 , 以 1 : 10 体积比加入多糖水溶液中 ,于 37 ℃
水浴中恒温 h6 , 再用 s ve ag 法按 1 :l 的体积加 s ve ag
液 (氛仿与正丁醇体积比 4 : l) , 充分振荡 30 m i n ,
3以阅耐而 n 离心 20 m in 除去蛋白质胶状沉淀 l4] 。 重复 5
次以上直至无蛋白层 。 紫外分析无 2 80 n m 、 2 60 n m 杂
蛋白和核酸吸收卿习。
.2 3 最佳醉沉体积分数的确定
精密称取注芒水提物 1 . 09 5份 , 按照 .2 1所述方
法 , 加入 95 % 乙醇至含醇最分别为 40 % 、 50 % 、 60 % 、
70 %
、
8 0%
, 以得粗多糖的重量判断茬芒多糖的最佳醇
沉体积分数 ,结果表明最佳醇沉体积分数为 80 % 。
.2 4 测定条件的选择圈
.2 4
.
1 最大吸收波长的选择 取对照品溶液和供试品
溶液与葱酮 一硫酸试剂显色 ,以等量的蒸馏水作空白 ,
于 《 犯一 70 n m 范围内扫描 ,测注芒多糖的最大吸收波
长 。 对照液及供试液均在 6 25 mn 波长处具有最大吸收
峰 ,故选择 6 25 lun 为测定波长 。
.2 .4 2 葱酮浓度 的选择 选择 .0 05 % 、 .0 1% 、 .0 2% 、
.0 3% 的硫酸葱酮溶液分别与等量的供试品溶液显色 ,
测定吸光度 。 选择吸光度最高的浓度 。 结果表明 , 0 . 1%
的硫酸葱酮溶液与供试品溶液显色后的吸光度值最
高 , 故选择 0 . 1% 的硫酸葱酮溶液 。
.2 .4 3 硫酸浓度的选择 选择 75 % 、 o8 % 、 90 % 、 10 %
均与同t 的供试品溶液显色 ,测定吸光度 。 选择吸光度
最高且稳定的浓度。 结果当硫酸浓度为 75 % 时 ,蕙酮析
出。 结果表明 ,硫酸浓度为 80 %时吸光度最高且稳定 ,
故硫酸浓度选择为 80 % 。
.2 .4 4 硫酸葱酮溶液加入童对吸光度的影响 选择加
入 .4 o m工 、 .5 om L 、 .6 o m L 、 .7 0功工的硫酸葱酮溶液分别
与等量的供试品溶液显色 ,测定吸光度 。 选择吸光度最
高的加入量 。 结果表明 ,加入 .6 o m L 的硫酸葱酮溶液与
供试品溶液显色后的吸光度值最高 , 故选择硫酸葱酮
溶液的加入量为 .6 omL 。
.2 .4 5 水浴加热时间的考察 选择水浴加热 1 0 n l in 、 15
而 n 、 20 而 n 、 25 而 n ,分别测定吸光度 。 选择吸光度最高
的加热时间 。 结果表明 ,水浴力田热15而 n 后的吸光度值
最高 ,故选择水浴加热 15而 n 。
.2 5 单旅定性鉴别实验
取左芒粗多糖 .2 om g置小瓶中 ,加水 ZmL 于水浴
中加热使溶解成透明溶液 , 加 I l n L 碱性酒石酸铜试
液 。 于水浴中加热 ,观察有无红色沉淀产生 。 有则表明
含有单糖 ,无则表明无单糖 。 实验结果表明 , 无红色沉
淀产生 。
.2 6 往芒多精的含 t 测定
.2 6
.
1 对照品溶液的制备 精密称取 1 05 ℃干燥至恒
重的葡萄糖对照品适量 ,加水制成每 lmL 含 o
.
lmg 的
溶液 ,即得。
.2 .6 2 供试品溶液的制备 精密称取 1 05 ℃干燥至恒
重的左芒粗多糖适量 ,加水制成每 l mL 含 0
.
l m g 的溶
液 ,即得 。
.26 3 硫酸葱酮溶液的制备 精密称取葱酮 .0 19 , 加
80 %的硫酸溶液 l o o m L 使溶解 ,摇匀 ,置于棕色瓶中。
l右用前现配 。
.2 .6 4 标准曲 线的制备 分别精密吸取对照品溶液
02
1n L
、
.0 4m L
、
.0 6m L
、
.0 s m L
、
1
.
o m L
、
12 m L
,置 10m L 具塞
试管中 ,加水至 2.o m L ,精密加入硫酸葱酮溶液 6 m L ,摇
匀 ,置水浴中加热 1 5而 n ,取出 ,放入冰浴中冷却 15秘 ,以相应的试剂为空白 , 按紫外一可见分光光度法 门 ,在
62 5 lun 波长处恻定吸光度 。 以吸泪纪的胜标 ,浓度为横
坐标 ,绘制标准曲线。 回归方程 A=0 ·03 245 x + .0 0 34 6
,
:
=0
.
, 为 2。 实验表明 .无水葡萄糖在 4O 一 120 卜 g之间符
合 B er 定律 ,呈良好的线形关系 。
.2 .6 5 德定性实验 取标准曲线制备方法操作 , 每隔
40 而 n 测定 1次吸收度 ,共测定 120 而 n 。 结果表明 ,对
照液的吸光度和样品液的吸光度基本无明显变化 ,
R
SD %均小于 2% 。 说明供试液在 120 而 n 内稳定 。
.2 .6 6 回收率实脸 精密称取已知供试样品 9 份 , 分
别加入无水葡萄糖对照品 ,照上述测定法测定 ,结果表
明 : 方法的回收率平均值为 98 . 5% , 相对标准偏差为
1
.
68 % (
n
=9 )
。
2
.
6 7 样品测定 精密量取供试品溶液 1刀川上 ,置 1 0m上
(下转第 70 页 )
特 产 2以犯 年第4 期
黄酮含里 ,结果见表 1。
衰 1 加样回收率实脸结果
序号 样品总黄酮 t 加入 t 侧定t 回收率 均值 R S D
(m g) (m g ) (m g ) (% ) 怀 ) (% )
1 29
.
340 2 7卫6 2 56 .6 2 10 . 1
2 3 0
.
5 1 4 2 7二巧2 5 7. 38 0 9 8 . 5
3 29
.幻 3 2 7.肠 2 56 . 64 2 9 . 1 (万)二亏( ) 1 . :弓一)
4 29
.肠日 2 7 . 26 2 56 . 78 7 98 .7
5 30
.
45 5 2 7二沽2 57.口期 ) 9 7 . 7
6 2 9
.
9 2 7 2 7
.
2 6 2 5 7
.
6 3 7 1 0 1
.
6
.2 9 样品的含l 训定
按含里测定方法 ,对 3批样品进行测定 ,结果见表 o2
衰 2 样品的含 t 侧定 (% )
样品 含 t 样品 含 t
1 63
.
9 4 6 1
.
5
2 63 .7 5 65 3
3 6 5
.
6 6 6 2
.
3
平均含t 63 7
3 结论
笔者曾分别以懈皮素和芦丁为对照品测定分某葱
头中总黄酮的含量 , 结果表明以芦丁为对照品进行侧
定的方法重现性好 、 精密度高、 稳定性也较好 ,平均回
收率为 9 3 0 % ,可以用于东北特产分草葱头总黄酮含
量的测定 。 该研究成果为分菜葱头的进一步开发以及
质量控制提供了参考依据。
参 考 文 献
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具塞试管中 ,按标准曲线制备项下的方法 , 自“精密加入
硫酸慈酮溶液 6mL ”起 ,依法测定吸光度 ,从标准曲线上
读出供试品溶液中含葡萄糖的重量 (m g ) ,计算 ,即得 。
取 3 批供试品 ,照上法操作 ,在 6 25 nr 处测定吸
光度 , 从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重
t ( 卜 g ) 。 结果见表 l 。
裹 , 3批样品多公含 . 的侧定结果
祥品 吸光度 ( A ) 荀萄精 (卜目 多糖 (% ) 平均含 t (% )
1 0 2 4 7 65
.
4 5 65
.
4 5
2 0
.
2 7 7 7 4
.
70 74
.
7 0 6 9
.
8 7
3 .0 2 60 6.9 46 69
.
46
以上结果表明供试品中多糖的平均含量为
69 .8 7%
, 由于左芒中粗多糖的得率为 .4 5% ,故左芒中
多精含 t 为 1 x .4 5% x 69 . 87 % =3 . 14 % 。
3 讨论
本实验采用水提醇沉法提取左芒多糖 。 由于蛋白
质对葱酮 一硫酸法有一定干扰网 ,而茬芒多糖含有大量
的结合蛋白。 因此 ,在测定样品前应事先去除蛋白质 。
本试验采用酶 一s ve ag 法除蛋白 ,与单纯的 s ve ag 法相
比 ,酶结合 se vag 法除蛋白的处理次数明显减少 ,节省
了很多的时间 。
目前 ,糖类的定里测定方法主要有苯酚 一硫酸法 、
地衣酚 一硫酸法 、 so m o gy i一 Ne is on 法 、 葱酮 一硫酸法
等网 。 葱酮 一硫酸法的基本原理是多糖水解生成单糖 ,
单糖可与浓硫酸共热生成糠醛或糠醛衍生物 , 可与葱
酮试剂缩合产生有色络合物 ,反应后溶液呈蓝绿色 。 于
62 5n m 处有特征吸收 ,其颜色深浅与糖的浓度成正比 ,
进行比色定量 ,间接求出多糖的含童。 由于单糖同样存
在显色反应 ,单糖的存在会使结果偏高 ,故必须在测定
前作有无单糖的定性鉴别 lq 。 试验表明 ,在芒水提物中
含单糖较少 ,用乙醇一次沉淀即可除净 。
实验结果表明 , 多糖与葱酮生成绿色衍生物 ,颇色
稳定 ,重复性好 ,操作简便 ,方法可行。 本法可作为左芒
中多糖的含量测定方法。
参 考 文 献
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