全 文 ：食 品 科 技
FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY 食品安全与检测
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枣(Ziziphus Jujuba Mill.)和酸枣(Ziziphus jujuba
Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chow)为鼠李科
(Rhamnaceae)枣属植物，原产于我国。其中枣是一
种栽培历史悠久的干果，也被国家列为药食两用
收稿日期：2014-07-23 *通讯作者
基金项目：国家林业公益性行业科研专项(201304708)。
作者简介：李喜悦(1990—)，女，河北衡水人，硕士研究生，研究方向为功能食品化学。
品种，其研究多集中于果实的营养和保健方面。
而酸枣目前以野生为主，其开发与利用的重点主
要集中在酸枣仁的药用方面。
枣叶为枣属植物的叶子，据《日华子本草》
李喜悦，高 哲，安小楠，崔 璨，王荣芳，崔 同*
(河北农业大学食品科技学院，保定 071000)
摘要：建立了一种测定枣叶中酸枣仁皂苷B含量的高效液相色谱分析方法，色谱条件为：色谱
柱Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)；流动相为乙腈:水(35:65，v/v)，加入甲酸0.05%；
流速为0.8 mL/min；柱温30 ℃；检测波长204 nm。结果表明：酸枣仁皂苷B在20~1000 μg/mL
范围内具有良好的线性关系(r2=0.9999)，平均加标回收率为100.1%，最低检出限1.1 μg/mL。
采用开发的高效液相色谱法对14个品种的大枣及酸枣的幼叶中酸枣仁皂苷B的含量进行了测
定，其含量在0.91~2.67 mg/g之间。
关键词：枣叶；酸枣仁皂苷B；高效液相色谱(HPLC)
中图分类号：O 657.7+2 文献标志码：A 文章编号：1005-9989(2014)12-0299-04
Determination of jujuboside B in jujube leaves by HPLC
LI Xi-yue, GAO Zhe, AN Xiao-nan, CUI Can, WANG Rong-fang, CUI Tong*
(College of Food Science and Technology, Agricultural University of Hebei, Baoding 071000)
Abstract: The purpose was to establish a method for determining jujuboside B in jujube leaves using
HPLC. The samples were separated on Hypersil BDS C18 column (4.6 mm×250 mm, 5 μm), the mobile
phase consisted acetonitrile:water (35:65, v/v) and 0.05% formic acid, the fl ow rate was 0.8 mL/min, the
detection wavelength was 204 nm. The developed method exhibited good linearity over the range from
20~1000 μg /mL with a correlation of 0.9999. The average recovery rate for jujuboside B was 100.1%, the
minimum detection limit was 1.1 μg/mL. By this method we analysed young jujube leaves from 14 different
varieties, the content of jujuboside B was between 0.91 and 2.67 mg/g.
Key words: jujube leaves; jujuboside B; HPLC
高效液相色谱法测定枣叶中酸枣仁
皂苷B的含量
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2014.12.063
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记载，枣叶性味“温，无毒”。而据《本草纲
目》记载，酸枣叶可“敛疮解毒，治胫臁疮”。
民间有将酸枣叶加工成茶叶，冲泡饮用的习惯，
据认为它具有利尿、助眠等多种保健功效[1-2]。
另有研究报道，酸枣叶的水提物具有明显的镇
静、安神作用[3-4]，作为一种新兴的保健茶，它
的加工已有很多报道，然而有关枣叶安神作用活
性成分的分析方面却鲜有报道。Yoshikawa[5]曾经
从枣的新鲜叶子中分离出9种皂苷类物质，称为
jujubasaponins Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ；zizyphus皂草
苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ；以及酸枣仁皂苷B。其中zizyphus
皂草苷Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ最早是从枣果中分离的，而酸
枣仁皂苷B则是在酸枣的种仁中发现的，它是酸枣
仁镇静催眠作用的主要成分之一，对睡眠的改善
有很好的效果[6-9]。目前为止，酸枣仁中酸枣仁皂
苷的分析检测已有很多报道[10-12]，而枣叶中酸枣
仁皂苷的定量分析却未见任何报道。为此，本研
究拟开发一种用于枣叶中酸枣仁皂苷B定量分析的
高效液相色谱(HPLC)分析方法，并对枣属植物的
代表性品种春季幼叶中的含量进行分析比较，为
这种潜在生物资源的开发提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料与仪器
共计14个品种(敦煌大枣、金丝小枣、大酸
枣、串铃、梨枣、板枣、赞皇大枣、冬枣、大木
枣、晋枣、无核枣、宣城圆枣、茶壶枣、连县木
枣)的枣叶样品均于2013年5月7日采自河北省沧
县国家枣树良种繁育基地，采回后经真空冷冻干
燥，放置在真空干燥器中备用。
酸枣仁皂苷B标准品：上海顺勃生物工程有
限公司；色谱流动相用乙腈为色谱纯；水为纯净
水；其余试剂均为分析纯。
Agilent 1200型高效液相色谱仪(由在线脱气
机，单元输液泵，光电二极管阵列检测器，及
Agilent Chemstation色谱工作站组成)、LC-MS系统
(由Agilent 1200型LC、Agilent 6310型MS检测器、
ESI电离源组成)：安捷伦公司，美国加州帕罗阿
托市；配用CO-3010柱恒温控制箱：天津美瑞泰
克科技有限公司；RE-52CS旋转蒸发仪：上海亚
荣生化仪器厂；TB-215D微量分析天平：德国赛
多利斯股份有限公司；SK5200H超声振动仪：上
海波龙电子设备有限公司。
1.2 试验方法
1.2.1 样品前处理 准确称取冻干的枣叶样品0.5
g，放入研钵中，加少量的石英砂研磨，研细后用
10 mL 95%乙醇转移至具塞锥形瓶中，在超声波振
荡器中振荡提取30 min，于离心机上4000 r/min离
心5 min，收集上清液，滤渣再用95%乙醇重复提
取一次，将2次上清液合并，在真空旋转蒸发仪中
浓缩至干，用1 mL甲醇回溶，经0.45 μm滤膜过
滤，用于HPLC测定。
1.2.2 HPLC分析条件 色谱柱：Hypersil BDS
C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)；柱温度：30 ℃；
流动相：乙腈:水=35:65(v/v)，加入0.05%甲酸；流
速：0.8 mL/min；检测波长：204 nm；进样量：10
μL。
1.2.3 LC-MS分析条件 LC条件：色谱柱为
Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)；柱温
度：30 ℃；流动相：乙腈:水=39:61(v/v)，加入
0.05%甲酸；流速：0.6 mL/min；检测波长：204
nm；进样量：5 μL。
MS条件：ESI离子源，阴离子检测模式，喷
雾器压力：45 psi；干燥气体温度：350 ℃，干燥
气(N2)流速：12 L/min；离子阱质量分析器扫描
范围：m/z=100~1500。
1.2.4 标准溶液的配制与曲线的绘制 精密称取
1.00 mg酸枣仁皂苷B，溶解于1 mL甲醇中，并配
制成浓度为1 mg/mL的储备液。精密吸取储备液，
分别稀释成500、200、100、50、20 μg/mL，置于
样品瓶中，4 ℃保存待用。按照上述色谱条件进
行HPLC测定，以进样浓度(X，μg/mL)为横坐标，
以峰面积(Y，mv·s)为纵坐标，求出直线回归方
程，绘制标准曲线。
2 结果与分析
2.1 样品前处理条件的优化
酸枣仁中酸枣仁皂苷的样品处理方法一般较
复杂，由于酸枣仁中含有一定量的脂肪，采用甲
醇提取、石油醚脱脂、水饱和正丁醇萃取、正丁
醇饱和氨水萃取等处理步骤[12]，我们曾按照类似
的方法处理枣叶样品，结果表明这不仅会增加方
法的操作步骤，而且也同样会引入操作误差，使
得操作重现性差；接下来我们考察了不同的溶剂
95%乙醇、甲醇、70%乙醇对酸枣仁皂苷B的提取
效果，结果显示提取率为95%乙醇=甲醇﹥70%乙
醇，考虑到甲醇的毒性，采用95%乙醇作为提取
溶剂。
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2.2 HPLC条件的优化
2.2.1 色谱柱的选择 比较了Hypersil BDS C18(4.6
mm×250 mm，5 μm)、Hypersil BDS C18(4.6
mm×200 mm，5 μm)、Sino Chrom ODS C18(4.6
mm×200 mm，5 μm)三根色谱柱的分离度、峰
对称性和拖尾情况，衡量两峰的分离效果，结果
发现同样规格大小的ODS和BDS柱，BDS柱分离
出来的色谱峰其峰型和分离度都较ODS柱好，色
谱图中色谱峰峰宽更窄，峰高更高；较短的色
谱柱使酸枣仁皂苷B的保留时间提前，同时实现
了酸枣仁皂苷B与其他杂峰的良好分离，故确定
Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)为本
试验的色谱柱。
2.2.2 流动相的选择 甲醇的最大吸收波长为210
nm，乙腈的最大吸收波长为190 nm，酸枣仁皂苷
B的最大吸收在204 nm，考虑到甲醇在低波长处
有较强的末端吸收，为减少干扰，提高信噪比，
选择乙腈为流动相，可在消除背景干扰时保证基
线较平稳和检测的灵敏度。由于皂苷类化合物在
中性或碱性条件下易电离，采用甲酸调整流动
性的酸碱性。通过对流动相分离条件进行选择后
发现，等度洗脱的分离效果并不亚于梯度洗脱方
式。最终选择乙腈-水体系，并用甲酸调节流动相
的酸碱性，等度洗脱方式。
2.3 HPLC分析方法的评价
2.3.1 精密度试验 准确吸取0.5 mg/mL酸枣仁皂苷
B标准液10 μL，按1.2.2中的色谱条件进样分析，
平行进样5次，统计色谱峰面积，计算相对标准偏
差以评价方法的精密度，连续5次测定的试验结果
见表1，结果表明相对标准偏差(RSD)为0.82%，说
明本方法具有良好的精密度。
表1 精密度试验
组分
名称
峰面积测定值
峰面积平均值 RSD/%1 2 3 4 5
酸枣仁
皂苷B 1198 1213 1224 1209 1227 1214 0.82
2.3.2 方法的回归方程、线性范围和最低检出限
取1.2.4配制的酸枣仁皂苷B的系列标准溶
液，按1.2.2色谱条件进样分析，求得线性回归方
程、相关系数和线性范围。最低检出限以3倍信噪
比所对应的进样质量求得，结果列于表2。结果表
明，响应值与进样量之间具有良好线性相关性，
最低检出限在ng数量级，可以满足常规样品的定
量分析。
表2 酸枣仁皂苷B的标准曲线和最低检出限
成分 回归方程 相关系数
线性范围
/(μg/mL)
最低检出限
/(μg/mL)
酸枣仁
皂苷B Y=2.4104X+9.9545 0.9999 20~1000 1.1
2.3.3 加标回收率的测定 参照未加标样品中酸枣
仁皂苷B的含量水平，精确称取0.4 mg酸枣仁皂苷
B标准品加入到0.5 g枣叶样品中，按1.2.1所述样
品处理方法进行处理，平行做5份，并对加标样
品按1.2.2中的色谱条件进行分析。与未加标样品
含量比较，计算每份样品的加标回收率，并进行
统计。结果表明，酸枣仁皂苷B的平均回收率为
100.1%，相对标准偏差为4.53%。
从方法评价的结果来看，此方法具有较好的
灵敏度、精密度和准确度，可用于枣叶样品中酸
枣仁皂苷B的含量分析。
2.4 不同品种枣叶中酸枣仁皂苷B含量分析
按照1.2所述的方法，对春季采集的14个品种
枣叶中酸枣仁皂苷B的含量进行分析，酸枣仁皂苷
B标准品和枣叶样品的色谱图见图1。
注：1.酸枣仁皂苷B。
图1 酸枣仁皂苷B标准品(A)和枣叶样品(B)的HPLC色谱图


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由图1可以看到，在选定的分析条件下，样品
中的目标峰酸枣仁皂苷B与其他杂峰在15 min内实
现了良好分离。对枣叶样品按LC-MS条件进行了
负离子模式分析，图2表示枣叶样品中酸枣仁皂
苷B的质谱图。由图2可以看出，枣叶样品给出了
m/z=1043.7的质谱峰，这与酸枣仁皂苷B[M-H]－的
结构相一致。不同品种枣叶中酸枣仁皂苷B的含量
测定结果见图3。
由图3可以看出，14个品种的枣叶中酸枣仁皂
苷B的含量存在较大差异。其中冬枣和晋枣中酸枣
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仁皂苷B的含量较高，达2.5 mg/g，其他品种的枣
叶中含量相差不大。与13个品种的大枣叶含量的
平均值(1.47 mg/g)相比，所选测的酸枣叶中的含量
(1.16 mg/g)并没有表现出更高的趋势。
在0.91~2.67 mg/g之间，远高于酸枣仁中酸枣仁皂苷
A、B之和[12]。这不仅揭示了枣幼叶是一种潜在的酸
枣仁皂苷B的优质生物资源，而且也为具有镇静安
神作用的枣叶茶的开发提供了重要的科学依据。
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注：1.敦煌大枣；2.金丝小枣；3.大酸枣；4.串铃；5.梨枣；6.板枣；
7.赞皇大枣；8.冬枣；9.大木枣；10.晋枣；11.无核枣；12.宣城圆枣；
13.茶壶枣；14.连县木枣。
图3 不同品种枣叶中酸枣仁皂苷B的含量(n=5)





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图2 枣叶样品中酸枣仁皂苷B的负离子模式质谱图
3 讨论
本研究开发了一种简便的等度淋洗高效液相
色谱分析法，用于枣叶中酸枣仁皂苷B的定量分析
可以获得比较满意的分析结果。方法具有很高的
精密度，但实际样品的加标回收率RSD为4.53%，
这可能与204 nm下共存的紫外吸收干扰成分有
关，如果考虑通过样品前处理进行纯化[13]，试验
结果表明并不理想。酸枣仁皂苷B是一种具有镇
静催眠作用的药效成分，以往有大量报道[14-15]其
存在于酸枣仁中。本研究发现枣以及酸枣的幼叶
中均有高含量的酸枣仁皂苷B，对14个品种枣叶样
品的实际分析结果表明，其中酸枣仁皂苷B的含量
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