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泡桐花总黄酮对小鼠肝损伤的预防保护作用



全 文 :DOI:10.7683/xxyxyxb.2016.04.009
收稿日期:2015-09-09
作者简介:刘兴霞(1970-),女,河南延津人,硕士,主治医师,研究
方向:多脏器功能不全
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本文引用:刘兴霞,靳梅.泡桐花总黄酮对小鼠肝损伤的预防保护作用[J].新乡医学院学报,2016,33(4):285
287.DOI:10.7683/xxyxyxb.2016.04.009. 【基础研究】
泡桐花总黄酮对小鼠肝损伤的预防保护作用
刘兴霞,靳 梅
(新乡医学院第三附属医院急诊科,河南 新乡 453003)
摘要: 目的 探讨泡桐花总黄酮对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法 50只小鼠随机分
为对照组、CCl4模型组、水飞蓟宾对照组、CCl4+黄酮低剂量组和CCl4+黄酮高剂量组,每组10只。对照组和CCl4模
型组小鼠给予质量分数 1%羧甲基纤维素钠(CMCNa)10mL·kg-1混悬液灌胃,水飞蓟宾对照组小鼠给予
100mg·kg-1水飞蓟宾CMCNa混悬液灌胃,CCl4+黄酮低剂量组和CCl4+黄酮高剂量组小鼠分别给予泡桐花总黄
酮CMCNa混悬液(100、200mg·kg-1)灌胃,连续 7d,末次灌胃给药 2h后,对照组小鼠腹腔注射色拉油
0.10mL·kg-1,其余4组小鼠腹腔注射0.012mol·L-1CCl4溶液10mL·kg
-1(色拉油配制)造成小鼠急性肝损伤,
16h(禁食不禁水12h)后摘眼球采血,分离血清,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)
水平及肝脏组织中丙二醛(MDA)和过氧化物歧化酶(SOD)水平。结果 与对照组比较,CCl4模型组小鼠 ALT、AST、
MDA水平显著升高,SOD水平降低(P<0.01);与CCl4模型组比较,水飞蓟宾对照组、CCl4+黄酮低剂量组和 CCl4+
黄酮高剂量组小鼠ALT、AST、MDA水平显著降低,SOD水平升高(P<0.05);CCl4+黄酮低剂量组小鼠 ALT、AST、
MDA、SOD水平与CCl4+黄酮高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05),CCl4+黄酮低、高剂量组与水飞蓟宾对照
组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 泡桐花总黄酮对CCl4造成的急性肝损伤有明显的保护作用。
关键词: 泡桐花总黄酮;四氯化碳;肝损伤;保护作用
中图分类号:R575 文献标志码:A 文章编号:10047239(2016)04028503
ProtectiveefectofflavonoidsinFructusPaulowniaeonliverdamageofmice
LIUXingxia,JINMei
(DepartmentofEmergency,theThirdAfiliatedHospitalofXinxiangMedicalUniversity,Xinxiang453003,HenanProvince,Chi
na)
Abstract: Objective ToobservetheprotectiveefectofflavonoidsinFructusPaulowniae(FFP)onacuteliverdam
ageinducedbyCCl4inmice.Methods Fiftymicewererandomlydividedintofivegroups:controlgroup,CCl4modelgroup,sili
binincontrolgroup,CCl4+FFPlowdosegroupandCCl4+FFPhighdosegroup,10miceineachgroup.Themiceincontrol
groupandCCl4modelgroupweregiven1%sodiumcarboxymethylcelulosesuspensiongavage,themiceinsilibinincontrolgroup
weregiven100mg·kg-1silybincarboxymethylcelulosesodium(CMCNa)suspensiongavage,andthemiceinCCl4+FFPlow
dosegroupandCCl4+FFPhighdosegroupweregivenflavonoidsinFFPCMCNasuspensiongavage(100,200mg·kg
-1)for7
consecutivedays.Afterthelastintragastricadministrationof2h,themiceincontrolgroupweregivensaladoil010mL·kg-1
intraperitonealinjection,themiceinotherfourgroupsreceivedintraperitonealinjection10mL· kg-1 solutionof
0.012mol·L-1CCl4(saladoilpreparation)toinduceacuteliverinjury.Eyebalbloodwasobtainedafter16h(fasting12h),
andserumalanineaminotransferase(ALT),aspartateaminotransferase(AST),malondialdehvde(MDA)andsuperoxidedis
mutase(SOD)inliverweredetected.Results Comparedwithcontrolgroup,thelevelofALT,ASTandMDAinCCl4model
groupincreasedsignificantly,butlevelofSODdecreased(P<0.01).ComparedwithCCl4modelgroup,thelevelofALT,AST
andMDAinsilibinincontrolgroup,CCl4+FFPlowdosegroupandCCl4+FFPhighdosegroupdecreasedsignificantly,butthe
levelofSODincreased(P<0.05).TherewasnosignificantdiferenceinthelevelALT,AST,MDAandSODbetweenCCl4+
FFPlowdosegroupandCCl4+FFPhighdosegroup,andalsobetweenCCl4+FFPlowdosegroup,CCl4+FFPhighdosegroup
andsilibinmcontrolgroup(P>0.05).Conclusion FFPpossessaprotectiveroleonCCl4inducedliverdamageinmice.
Keywords: flavonoidsinFructusPaulowniae;CCl4;liverdamage;protectiveefect
  乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)感染呈
世界流行,全球约3.5亿人为慢性感染者,严重危害
人类健康[1],而我国是 HBV感染的重灾区,严重危
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第33卷 第4期
2016年4月
            新乡医学院学报
JournalofXinxiangMedicalUniversity
           Vol.33 No.4
Apr.2016
 
网络出版时间:2016-04-07 14:04:57
网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1186.R.20160407.1404.032.html
害了我国人民的身体健康。泡桐花主要成分为挥发
油、总黄酮、熊果酸等,其中总黄酮含量较丰富[2],
近年来研究发现其具有抗炎、抗哮喘的作用。本实
验观察泡桐花总黄酮对小鼠急性肝损伤是否具有保
护作用,为筛选新的抗肝损伤药物提供一些思路。
1 材料与方法
1.1 实验动物 健康昆明种小鼠 50只,体质量
(26.3±2.1)g,雌雄不限,购于河南省实验动物中
心,许可证号:SYXK(豫)20140038。
1.2 主要试剂与仪器 泡桐花总黄酮提取参照文
献[3],用体积分数70%乙醇,料液比114,浸提
温度80℃,浸提时间1h,然后过滤、萃取;四氯化碳
(CCl4)购自天津东丽区天大化学试剂厂,用前用色拉
油配成0.012mol·L-1的溶液;丙二醛(malondialde
hyde,MDA)、过氧化物歧化酶(superoxidedismutase,
SOD)检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所;全
自动生物化学分析仪购自美国杜邦公司;BA210光学
显微镜购自麦克奥迪实业集团有限公司;TG16G离
心机购自江苏常州百密思仪器有限公司。
1.3 实验分组与方法 50只小鼠随机分为对照
组、CCl4模型组、水飞蓟宾对照组、CCl4+黄酮低剂
量组和CCl4+黄酮高剂量组,每组10只。对照组和
CCl4模型组小鼠给予质量分数1%羧甲基纤维素钠
(sodium carboxymethylcelulose,CMCNa)混悬液
10mL·kg-1 灌胃,水飞蓟宾对照组小鼠给予
100mg·kg-1水飞蓟宾CMCNa(10mL·kg-1)混悬
液灌胃,CCl4+黄酮低剂量组和CCl4+黄酮高剂量组
小鼠分别给予泡桐花总黄酮(100、200mg·kg-1)
CMCNa(10mL·kg-1)混悬液灌胃,连续灌胃7d,
末次灌胃给药 2h后,对照组小鼠腹腔注射色拉油
10mL·kg-1,其 余 4 组 小 鼠 腹 腔 注 射
0.012mol·L-1CCl4溶液10mL·kg
-1(色拉油配
制)造成小鼠急性肝损伤,16h(禁食不禁水12h)
后摘眼球采血,分离血清,检测血清丙氨酸氨基转移
酶(alanineaminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基
转移酶(aspartateaminotransferase,AST)等水平。
1.4 MDA、SOD水平检测 各组小鼠取同一部位
的肝脏加9倍生理盐水匀浆,6000r·min-1离心
8min后取上清液,按照南京建成生物工程研究所
提供的试剂盒说明,分别采用硫代巴比妥酸法和黄
嘌呤氧化酶法来测定MDA和SOD水平。
1.5 小鼠肝脏病理学检测 各组小鼠取同一叶肝
脏部位大致相同的小块肝脏组织进行病理组织学检
查,经体积分数 10%甲醛固定、流水冲洗、乙醇脱
水、二甲苯透明后行石蜡包埋、切片、苏木精伊红
(hematoxylineosin,HE)染色,光学树脂胶封片,普
通光学显微镜观察。
1.6 统计学处理 应用 SPSS12.0统计软件进行
数据处理,数据以均数±标准差(珋x±s)表示,组间比
较采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 泡桐花总黄酮对小鼠血清 ALT、AST水平的
影响 结果见表1。与对照组比较,CCl4模型组小
鼠ALT、AST水平显著升高,差异有统计学意义
(P<0.01);与 CCl4模型组比较,水飞蓟宾对照组、
CCl4+黄酮低剂量组和 CCl4+黄酮高剂量组小鼠
ALT、AST水平显著降低,差异有统计学意义(P<
005);CCl4+黄酮低剂量组小鼠 ALT、AST水平与
CCl4+黄酮高剂量组比较差异无统计学意义(P>
0.05),CCl4+黄酮低剂量组、CCl4+黄酮高剂量组
小鼠ALT、AST水平与水飞蓟宾对照组比较差异无
统计学意义(P>0.05)。
表1 5组小鼠血清ALT、AST水平比较
Tab.1 Comparisonofserum levelsofALTandASTof
miceinthefivegroups (珔x±s)
组别 n ALT/(U·L-1) AST/(U·L-1)
对照组 10 78.30±12.28 183.03±64.45 
CCl4模型组 10 427.38±99.74a 803.65±218.51a
水飞蓟宾对照组 10 262.38±65.97b 359.85±72.51b
CCl4+黄酮低剂量 10 283.62±58.47b 570.10±81.58b
CCl4+黄酮高剂量 10 274.28±62.59b 359.32±55.56b
  注:与对照组比较aP<0.01;与CCl4模型组比较bP<0.05。
2.2 泡桐花总黄酮对小鼠肝组织中MDA、SOD水
平的影响 结果见表2。与对照组比较,CCl4模型
组小鼠肝组织中 MDA水平升高,SOD水平降低,差
异有统计学意义(P<0.01);与 CCl4模型组比较,
水飞蓟宾对照组、CCl4+黄酮低剂量组和 CCl4+黄
酮高剂量组小鼠肝组织中 MDA水平降低,SOD水
平升高,差异有统计学意义(P<0.05);CCl4+黄酮
低剂量组小鼠肝组织中MDA、SOD水平与CCl4+黄
酮高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05),
CCl4+黄酮低剂量组、CCl4+黄酮高剂量组小鼠肝
组织中MDA、SOD水平与水飞蓟宾对照组比较差异
无统计学意义(P>0.05)。
表2 5组小鼠肝组织中MDA、SOD水平比较
Tab.2 ComparisonofSODandMDAlevelsinlivertissues
ofmiceinfivegroups (珔x±s)
组别 n MDA/(μmol·g-1)SOD/(×103U·g-1)
正常对照组 10 6.78±0.69  294.13±55.94 
CCl4模型组 10 8.09±1.01a 200.98±52.76a
水飞蓟宾对照组 10 6.38±0.87b 289.32±43.27b
CCl4+黄酮低剂量组 10 6.69±0.85b 261.87±63.67b
CCl4+黄酮高剂量组 10 6.54±0.89b 276.06±55.41b
  注:与对照组比较aP<0.01;与CCl4模型组比较bP<0.05。
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2.3 泡桐花总黄酮对小鼠肝脏组织学变化的影响
 组织学光镜观察,CCl4模型组小鼠肝小叶结构紊
乱、细胞肿胀、炎细胞浸润增多;水飞蓟宾对照组小
鼠肝小叶结构尚完整,细胞肿胀较轻;CCl4+黄酮低
剂量组和CCl4+黄酮高剂量组小鼠肝小叶结构尚
完整,细胞肿胀较轻,炎细胞浸润明显减少,与水飞
蓟宾对照组基本一致。
A:对照组;B:CCl4模型组;C:水飞蓟宾对照组;D:CCl4+黄酮低剂量组;E:CCl4+黄酮高剂量组。
图1 泡桐花总黄酮对小鼠肝脏组织学变化的影响(HE染色,×20)
Fig.1 EfectofflavonoidsinFructusPaulowniaeonliverhistologicalchangeofmice(HEstaining,×20)
3 讨论
泡桐为玄参科泡桐属植物,起源于我国,有很多
品种,如白花泡桐、毛泡桐等,由于该植物能够耐盐
碱耐干旱、气候适应范围广泛、生长快速、生态价值
极高,广泛分布于我国多个省市。毛泡桐的根、花、
叶、果等部位均可入药,具有抗炎、消肿、止咳化痰、
抗肿瘤、抗氧化及免疫增强等作用[4]。通过现代分
离技术及波谱技术的应用,发现泡桐花的主要成分
有三萜类、精油类及黄酮类物质,其中黄酮类物质具
有很多药理作用,如抗自由基、抗氧化等。有研究证
实,毛泡桐花总黄酮对猪油的抗氧化作用有剂量效
应关系,即随着毛泡桐花总酮加入量增大,其抗氧化
效果增强[5]。泡桐花总黄酮可使哮喘小鼠血中嗜
酸性细胞数明显下降,抑制支气管黏膜嗜酸性细胞
的增加和浸润,可明显减少哮喘小鼠支气管黏膜、固
有膜、肺间质及肺泡腔内嗜酸性细胞等部位炎细胞
的浸润,能够减轻支气管管壁平滑肌的增生,减轻气
道上皮的断裂及脱落变性[6]。这些结果提示泡桐
花总黄酮具有抑制 C57BL/6哮喘小鼠气道过敏性
炎症反应的作用,能够明显延长卵清白蛋白所致哮
喘小鼠的诱喘潜伏期。
水飞蓟宾是一种从植物大蓟种子中提取的黄酮
类物质,具有保肝、抗自由基损伤、抗脂质过氧化等
作用[7],由于其研究较多,作用明显,已应用于临
床,所以本研究中选用作阳性对照。腹腔注射 CCl4
引起的肝损伤模型复制稳定、病理特征明显,更有利
于考察受试物的作用和机制[8]。本研究中,在小鼠
腹腔注射一定浓度的CCl4油溶液后,血清酶学改变
明显,血清ALT、AST水平迅速升高,与对照组比较
差异有统计学意义;组织学方面,CCl4模型组小鼠
肝小叶结构紊乱、细胞肿胀、炎性细胞浸润增多,说
明用CCl4造模是成功的。
对健康昆明种小鼠预防性用药后,能明显降低
小鼠血清ALT、AST水平,并使小鼠肝组织中 MDA
水平降低,SOD水平升高,CCl4低剂量黄酮组和
CCl4高剂理黄酮组小鼠肝组织损伤也明显减轻,提
示泡桐花黄酮对小鼠急性肝损伤有保护作用,其作
用机制可能主要是通过抗自由基和抗氧化作用,从
而减轻肝细胞损伤,对于其确切机制还有待进一步
探讨。水飞蓟宾是经典的从植物中提取的肝损伤修
复药,本研究中泡桐花黄酮组与水飞蓟宾组比较差
异无统计学意义,提示泡桐花总黄酮的作用还是很
明显的。
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(本文编辑:杨 博 英文编辑:杨 博)
·782·第4期               刘兴霞,等:泡桐花总黄酮对小鼠肝损伤的预防保护作用