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收稿日期：$$ % $& % !’
作者简介：纪莉莲 ( !#)) % *女，副教授，在读博士，主要从事植物及微生物次生物质结构与功能研究。
$$+，,-./ ’，0-/ +!营养卫生
摘 要! 首次以柿叶提取物对七种常见的食品腐败菌及致病菌进行抑菌试验。结果表明，柿叶具有较强的拮抗食品腐
败菌与致病菌的活性；对各供试菌的最低抑菌浓度 (123 *和最低杀菌浓度 (143*为 $/ +!+5 6 7.和 $/ )&5 6 7.，抑菌率
达到 #$8以上。对柿叶的活性成分进行分离与鉴定，它们分别为挥发油、总黄酮、香豆素及有机酸。
关键词!柿叶；抑菌活性；分离与鉴定；食品腐败菌与致病菌
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中图分类号：NO/ P! 文献标识码：4 文章编号：!$$ % ))+$ ($$+ *$+ % $!# % $+
柿叶抗菌活性的研究及活性成分的分离鉴定
纪莉莲 !L张强华 !L崔桂友
( !/ 淮阴工学院生物工程系L淮安 +$$! *
(/ 扬州大学旅游烹饪学院L扬州 &$$! *
柿叶为双子叶柿树科柿树属柿 ( !#$%&’#$ ()(
*+ ,+ * 的叶。柿叶含有多种生理活性物质及营养成分，
如维生素 3、! %胡萝卜素、必需氨基酸、生物态碘、黄
酮类化合物、生物碱、多糖、挥发油等，因而柿叶除具有
食用价值外，还具备了抗癌、抗氧化、降血脂、止血、抗
菌等功效。近几年来国内外对柿叶的研究多集中于其
抗癌、抗氧化及对心血管系统的作用等方面，而对柿叶
的抗食品腐败菌及致病菌的研究以及生物活性成分的
研究报道甚少。我国柿的栽培面积约为 / $ Q !$&R7，
温、热带地区均多产，因而柿叶原料极其丰富 S !L T。为了
进一步开发利用柿叶，我们对柿叶的抗菌活性及其活
性成分进行了研究。
! 材料与方法
!/ ! 实验材料
柿叶 江苏江宁产柿柿叶，自然风干后粉碎至 O$
目，密闭封存备用。
测试菌 七种食品腐败与致病菌菌种 -$./0’./)
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及 6’#40’$ <51=)’$L 由中国药科大学提供。所有供试菌
株活化两代后分别接入试管斜面培养基备用；取一斜
面，无菌挑取两环，用无菌水制成含菌数约 !$O 3UV 6
7.的菌悬液。
培养基 牛肉膏、蛋白胨培养基；豆芽汁培养基；
马铃薯培养基。
!/ 实验方法
!/ / ! 柿叶浸膏的制备
在柿叶粉中加入 O倍体积的 P&8乙醇，&$W恒温
回流提取 !$G，萃取液减压浓缩成浓稠的膏状物。
!/ / 柿叶浸膏抗菌活性测定
抑菌圈测定 采用滤纸片法和双层平板法，即预
先配制好含 !/ &8琼脂的底层培养基和上层培养基。
先将底层培养基在平皿上浇一层 (约 !$7. *，铺平凝
固；另取上层培养基置于锥形瓶中，按 环 6 !$$7.的
量加入供试菌种，摇匀，立即倒在底层平板，铺平待
凝。取经高压灭菌干燥的滤纸圆片，置于不同浓度的柿
叶浸膏稀释液中浸泡 !$7<:，对照用柿叶浸膏稀释剂；
将滤纸片真空抽干，平贴于上层平板表面，每种菌做 +
皿，每皿放 ) 个滤纸片，阳性对照用山梨酸钾液
!# $##，%&’( $)，*&( !营养卫生
抑菌率 +, - . / !##,
0 1 2
0
表 $ 柿叶浸膏的 345和 325+ 6 7 8’ -
菌种
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325
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+#( L, -；各皿置于 NO下培养 )PH后，观察有无抑菌
圈，并测量抑菌圈直径。
最低抑菌浓度 +345 - 测定 采用二倍稀释法，即
先将柿叶浸膏配成每 8’含 !#6固形物的药液，再按倍
比稀释法依次将药液稀释成 !# Q #( #PR6 7 8’ 的稀释
液。取组织培养板 + RK孔 -，每孔加入 !R#!’相应浓度
的柿叶浸膏稀液及 !#!’菌悬液，同时做稀释及无菌水
对照。培养板置于 NO下培养 )PH，无菌生长的那一孔
药液的浓度即为最低抑菌浓度。
最低杀菌浓度 +325-及抑菌率测定 分别取各供
试菌最小抑菌浓度下的柿叶浸膏稀释液 !##8’，分别
加入相应的菌悬液 L8’，在 !、)、P、!K、$H培养后与空
白对照在 3S培养基上倒平皿，NO下 )PH培养，观察
细菌生长情况，计菌落数，计算抑菌率。无菌落生长的
培养物中柿叶提取物的浓度为其最低杀菌浓度。抑菌
率按下列公式计算：
式中 0、2分别为对照皿菌落数和试验皿菌落数。
!( $( 活性成分分离与鉴定
采用溶剂萃取及色谱法分离活性单体，用显色法、
薄层层析法及波谱分析法鉴定活性单体的化学结构。
$ 结果与分析
$( ! 柿叶的抑菌活性
$( !( ! 柿叶浸膏的抑菌圈
从表 !可知，柿叶粗提物对常见的 N种腐败菌与
致病菌均有抑制作用，且抑菌活性具有量效关系，在
浓度达到 #( )6 7 8’时抑菌活性已达到强档。其中，柿
叶对 ! #$%&、’ ()*+),、- ,)./&%&,和 0 1)%2(*&,四种菌
的拮抗作用最强，在浓度达到 !( #6 7 8’时与 #( L,的
山梨酸钾溶液相当。
$( !( $ 柿叶浸膏的最低抑菌浓度 +345 - 和最低杀菌
浓度 +325-
表 $结果表明，柿叶对 ! #$%&、’ ()*+),、- ,)./&%&,
和 0 1)%2(*&, 四种菌的 345 和 325 值均为 #( !6 7
8’，对 0 3%)$*+,#+4,、’ /567&8)*&)8和 - #+*+),的 345
为 #( K$L6 7 8’，而对此 种菌的 325值高于 345值。
$( !( 柿叶浸膏的抑菌率
由图 !可知，在相同浓度下，随着培养时间增加，
柿叶粗提物的抑菌率逐渐增大，在 !KH基本达到最大
抑菌率，此后保持抑菌率的基本稳定。柿叶粗提物在
345 值下对 ’ ()*+), 的最大抑制率达到了 RR( P#,，
对 ! #$%&、 - ,)./&%&,、 0 1)%2(*&, 的抑制率均达到了
RL,以上，体现了较为快速的强抑菌力。
$( $ 柿叶抗菌活性成分
柿叶浸膏先用硅胶层析柱粗分，以不同配比的甲
醇和氯仿混合溶剂进行洗脱，得 K 个部位。将此 K个
部位的粗组分再做抑菌活性试验，得图 $。由图 $可
表 ! 柿叶浸膏对 N种供试菌的抑菌圈
不同浓度 + 6 7 8’ -柿叶提取物的抑菌圈直径 +88-
菌种
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’ ()*+),
0 3%)$*+,#+4,
’ /567&8)*&)8
- ,)./&%&,
- #+*+),
0 1)%2(*&,
无菌水
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山梨酸钾
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收稿日期：#$$# % $& % !’
作者简介：李德远，男，博士，军事经济学院营养食品所副主任。
#$$，()*+ #,，-)+ !营养卫生
知，!、、#和$部位均有强抑菌活性，其抑菌活性相
当于或高于柿叶浸膏，说明抑菌活性成分主要集中在
此四个部位。!粗组分用水蒸汽蒸馏约 # . /0，得到精
油 1不饱和脂肪酸 2；#粗组分经显色反应确定为粗黄
酮，以 345鉴定此粗黄酮的组成，即将粗黄酮溶于甲
醇，点样于硅胶 6层板上，用正丁醇 %乙酸 %水 1 ,7 #7
! 2为展开剂，展层后用紫外灯观察，测定各黄色斑点的
89值，并与标样对照，鉴定出黄芪甙 1 :;<=:>*?@ 2、异槲皮
素 1 ?;)ABC=D?<=?@ 2、 槲 皮 素 1 ABC=DC1 E:CFG9C=)* 2、杨梅树皮甙 1FH=?D?<=?@ 2 五个黄酮单体；
粗组分用 ICG0:JCK 4L % #$凝胶柱进行分离，甲醇
作洗脱剂，得到 #个纯的活性组分，通过波谱分析鉴定
为莨菪亭 1 ;D)G)*C=?@ 2、M %羟基 % & %甲氧基香豆素，它
们都属于香豆素类化合物；$粗组分同样在 ICG0:JCK
4L % #$ 凝胶柱上反复分离，得到丁香酸 1 ;H=?@>?D
:D?J 2、对羟基苯甲酸 1 G % 0HJ=)KHNC@O)?D :D?J 2、原儿茶
酸 1 G=)<)D::D?J 2,个有机酸化合物。
讨 论
+ ! 柿叶具有较强的拮抗食品腐败菌与致病菌的活
性，其对各种供试菌的最低抑菌浓度为 $+ !> P F*和
$+ M#/> P F*，在 !M0可达到最大抑菌率 1 ’$Q左右 2，表
明柿叶作为食品原料和药用原料的良好潜力。
+ # 柿叶中含有多种抑菌成分，包括挥发油、总黄
酮、香豆素及有机酸类化合物，其中总黄酮和有机酸起
了主要抗菌作用，它们对供试菌的 RS5均低于柿叶浸
膏，由此可见，柿叶中多种成分的协同作用赋于了柿叶
较强的抗菌活性。从柿叶总黄酮中分离得到的活性单
体为黄芪甙、异槲皮素、槲此素、山萘酚、杨梅树皮甙
等；柿叶中含有的抗菌有机酸为丁香酸，为羟基苯甲
酸、原儿茶酸及吲哚醋酸。
+ 柿叶的上述活性成分同时具有抗氧化、降血脂、
抗癌、增强免疫等功效，因而以柿叶开发食品防腐剂或
抗菌药物具有一举多得的效果。
参考文献：
T ! U 阴健 + 中药现代研究与临床应用 TR U + 北京：中医古籍出
版社，!’’&+
T# U 盛教伟等 + 柿叶的药用 T V U + 河南中医药学刊，!’’/，!M
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!’’W，!’ 1 2：,$ % ,#+
T, U 王理达等 + ! 种生药提取物及化学成分的抗真菌活性筛
选 T V U + 中草药，#$$!，# 1 2：#,! % #,+
T/ U 李仪奎 + 中药药理实验方法学 TR U + 上海：上海科技出版
社，!’’!+ #WM+
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摘 要：昆明种小鼠，分组经口给予 #> P F*枸杞汁和 /Q的枸杞粉饲料，连续饲养 !/J，各组照射，观察 $J存活率；另取
小鼠，分别经口给予 #> P F*枸杞汁和 /Q的枸杞粉饲料，连续饲养 !$J后，分别尾尖采血，照射，以常规显微计数法测定
辐射前、辐射后白细胞 1X^52及淋巴细胞数 1X % I55 2；取小鼠经口给予 #> P F*枸杞汁和 /Q的枸杞粉饲料，另腹腔注
射 /$F> P E>环磷酰胺，连续喂养 !#J后照射，MJ后眼眶采血，以血球分析仪测定 X^5及 X % I55，并取肝、脾组织、小
鼠附睾及胸骨髓涂片分别测定过氧化脂质 1 4\a2、嗜多染红细胞微核及精子畸变率等。结果表明：预先给予枸杞汁和枸
枸杞抗辐射效应研究
李德远 !，汤 坚 !，刘建峰 #，颜望星 #，许如意 #，胡安胜 #
1 !+ 江南大学食品科学与工程博士后流动站，无锡 #!,$M 2
1#+ 军事经济学院军需系_武汉 ,$$/ 2