全 文 ：Ｊ．ＳＨＡＮＸＩ　ＡＧＲＩＣ．ＵＮＩＶ．（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
学报（自然科学版）２０１４，３４（４） ００３１５４
收稿日期：２０１４－０４－０１　　　修回日期：２０１４－０４－２９
作者简介：张利军（１９７４－），女（汉），山西大同人，博士，副教授，研究方向：昆虫分类与有害生物综合治理。
通讯作者：曹挥，教授，硕士生导师。Ｔｅｌ：０３５４－６２８８３４４；Ｅ－ｍａｉｌ：Ｌｉｕｓｑ７１＠１６３．ｃｏｍ
基金项目：山西省留学人员重点科研资助项目（２０１３－重点６）；中原区核桃高效生产关键技术研究与示范（２００３ＢＡＤ１４Ｂ０１０２）
地肤子提取物毒杀螨的蛋白组双向电泳分析
张利军１，王海香２，李生才１，李玲１，曹挥１
（１．山西农业大学 农学院，山西 太谷０３０８０１；２．山西农业大学 林学院，山西 太谷０３０８０１）
摘　要：山楂叶螨是一种世界性的重要害螨，地肤子提取物对其有很好的杀螨活性。本文通过２－ＤＥ技术分析了１ｍｇ·
ｍＬ－１地肤子提取物处理后山楂叶螨蛋白质表达的变化。结果表明，处理组和对照的蛋白双向电泳银染图谱Ｐａｔｔｅｒｎ
非常相似，对照胶和处理胶平均匹配率分别为４３．８％和４２．３％，对照胶有蛋白点１１３９±１０２个，处理胶有蛋白点１１８３
±１０６个，这些蛋白多数集中于等电点５．０～９．０之间，分子量２０～７０ｋｕ的区域。通过ＰＤ－ＱＵＥＳＴ软件搜索和数据
的统计分析，发现地肤子提取物触杀山楂叶螨会引起蛋白显著性变化（Ｐ＜０．０５）。有２６２±２３个蛋白点在表达量上
有显著变化，其中１４２±１３个点是２倍上调的点，另外１２０±１１个点是下调的点，介于两者之间的点有２３７±２１个。
同时处理胶增加３２２±２９个蛋白点，分子量主要集中在３０～７０ｋｕ，等电点集中在ｐＨ（５～６）和ｐＨ（７．５～９．０）之间。
并推断试验中显著性变化的蛋白有可能是地肤子提取物的靶标蛋白。
关键词：Ｔ－ＤＥ；地肤子；山楂叶螨；蛋白组
中图分类号：Ｓ４８２．５＋２　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１６７１－８１５１（２０１４）０４－０３２０－０５
２－ＤＥ　Ｐｒｏｔｅｏｍｉｃ　Ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｎ　Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｃｉｎｎａｂａｒｉｎｕｓ （Ｂｏｉｓｄｕｖａｌ）ｋｉｌｅｄ　ｂｙ　Ｋｏｃｈｉａ　ｓｃｏｐａｒｉａ　Ｅｘ－
ｔｒａｃｔ
Ｚｈａｎｇ　Ｌｉｊｕｎ１，Ｗａｎｇ　Ｈａｉｘｉａｎｇ２，Ｌｉ　Ｓｈｅｎｇｃａｉ　１，Ｌｉ　Ｌｉｎｇ１，Ｃａｏ　Ｈｕｉ　１
（１．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｓｈａｎｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ　Ｓｈａｎｘｉ　０３０８０１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｆｏｒｅｓｔｒｙ，
Ｓｈａｎｘｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉｇｕ　Ｓｈａｎｘｉ　０３０８０１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｍｉｔｅ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　Ｚａｃｈｅｒ）ｉｓ　ａ　ｋｉｎｄ　ｏｆ　ｉｍｐｏｒｔａｎｔ　ｐｅｓｔｓ　ｗｏｒｌｄｗｉｄｅ，ａｎｄ　Ｋｏｃｈｉａ　ｓｃｏｐａｒｉａ　ｅｘ－
ｔｒａｃｔｓ　ｈａｖｅ　ａｃａｒｉｃｉｄａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｎ　ｉｔ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｔｈｅｓｉｓ，ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｔｅ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　１ｍｇ·ｍＬ－１　Ｋ．ｓｃｏｐａｒｉａ
ｅｘｔｒａｃｔ　ｗａｓ　ａｎａｌｙｚｅｄ　ｂｙ　ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２－ＤＥ）．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　２－ＤＥ　ｓｉｌｖｅｒ
ｓｔａｉｎｉｎｇ　ｐａｔｔｅｒｎ　ｉｓ　ｖｅｒｙ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ＣＫ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｍａｔｃｈｉｎｇｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｔｗｏ　ｇｒｏｕｐｓ　ａｒｅ
４３．８％ａｎｄ　４２．３％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ＣＫ　ｇｅｌ　ｈａｓ　１１３９±１０２ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｏｉｎｔｓ　ｗｈｉｌｅ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｈａｓ　１１８３±１０６，ａｎｄ
ｍｏｓｔ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ａｒｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｐｏｉｎｔ　ｏｆ　５～９ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　２０～７０ｋｕ．Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔ　ａｌｓｏ　ｓｈｏｗｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｉｔｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　Ｋ．ｓｃｏｐａｒｉａｅｘｔｒａｃｔｓ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｈａｎｇｅｄ（Ｐ＜０．０５）ｂｙ
ＰＤ－ＱＵＥＳＴ　ｓｅａｒｃｈ　ａｎｄ　ｄａｔａ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　２６２±２３ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｐｏｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ｏｆ
ｗｈｉｃｈ　１４２±１３ｐｏｉｎｔ　ｉｓ　２ｆｏｌｄ　ｕｐ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｏｉｎｔ，ｉｎ　ａｄｄｉｔｉｏｎ　ｔｏ　１２０±１１ｐｏｉｎｔｓ　ｄｏｗｎ　ｔｈｅ　ｐｏｉｎｔ，ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅ　ｔｗｏ
ｐｏｉｎｔｓ　ｉｓ　２３７±２１．Ａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｔｉｍｅ，ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｂｙ　３２２±２９ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｐｏｔｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｉｎ　３０～７０ｋｕ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｓｏｅｌｅｃｔｒｉｃ　ｐｏｉｎｔ　ｏｎ　ｐＨ （５～６）ａｎｄ　ｐＨ（７．５～９．０）．Ｓｏ，ｗｅ　ｔｈｉｎｋ　ｔｈａｔ
ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｈａｎｇｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｇｅｌ　ｍａｙ　ｂｅ　ｔｈｅ　ｔａｒｇｅｔ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　Ｋ．ｓｃｏｐａｒｉａｅｘｔｒａｃｔｓ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２－ＤＥ）；Ｋｏｃｈｉａ　ｓｃｏｐａｒｉａ；Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　Ｚａｃｈｅｒ；
Ｐｒｏｔｅｏｍｅ
　　山楂叶螨（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　Ｚａｃｈｅｒ）属
蛛形纲（Ａｒａｃｈｎｉｄａ）螨目（Ａｃａｒｉｆｏｒｍｅｓ）叶螨科（
Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｉｄａｅ），是我国北方果区核桃、苹果、梨、
樱桃、山楂树的主要害螨，常造成叶片枯焦早落，削
DOI:10.13842/j.cnki.issn1671-8151.2014.04.008
弱树势，影响产量［１］。目前，对该螨的控制主要依
赖化学农药，已经产生了严重抗性［２］。
植物源杀虫剂对环境污染小、害虫较难产生抗
药性，对有益生物较安全，还有降低害螨迅速产
生农药抗性的潜能［３］。已有研究表明，瑞香狼毒、
河蒴荛花、牵牛子、旋覆花、砂地柏、百部、苦艾等的
活性成分对成、若螨有较好的防效，有的具有杀卵
活性甚至熏杀毒力，部分混用还有增效作用［４～１０］。
地肤子（Ｋｏｃｈｉａ　ｓｃｏｐａｒｉａ）是藜科１年生草本植
物，俗名扫帚苗、扫帚菜。地肤子提取物有很好的
杀螨活性［１１］，地肤子提取物处理后，螨体内解毒酶
和消化酶的含量均有所变化［１２］。但地肤子活性成
分作用的靶标蛋白区域究竟在哪里，目前尚没有相
关研究。
蛋白质是生命功能的执行体，蛋白质组学在蛋
白水平上定量、动态、整体地研究生物体，阐明生物
体全部蛋白的表达模式及功能模式［１３］。通过比较
正常体与病变体，给药前后蛋白图谱的变化，药物
蛋白组学可提供药物作用和药物反应的分子机制
信息［１４］。目前蛋白组研究主要是利用双向聚丙烯
酰胺电泳 （Ｔｗｏ－ｄｉｍｅｎｓｉｏｎａｌ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，２－
ＤＥ）来分离复杂的蛋白组分。近年来，２－ＤＥ被广
泛应用于医学、农业和微生物学等研究领域［１５，１６］。
在昆虫学研究方面，２－ＤＥ应用于碟蛹金小蜂卵黄
蛋白、家蚕雄性附腺及其 Ｎｇ突变体蛋白质、抗性
家蝇蛹期蛋白和冈比亚按蚊唾液蛋白［１７～２０］。在药
物蛋白组学中，２－ＤＥ也为定量和定性评价具有不
同表型或基因型的组织细胞之间、正常与病理状
态、给药与不给药时蛋白质表达差异提供了可
能［２１］。多项研究结果显示，毒性效应可以通过蛋
白的方式显示出来［２２，２３］。
蛋白组学研究有害螨报道较少，本文通过２－
ＤＥ技术分析给药与不给药时山楂叶螨蛋白质表
达差异，研究药物靶标识别和确认、药物的行为机
理，为开发利用杀虫植物地肤子防治山楂叶螨奠定
理论基础。
１　材料与方法
１．１　供试材料
　　山楂叶螨来自山西农业大学试验果园核桃树
上饲养的敏感品系，地肤子氯仿提取物由山西农业
大学植物病理实验室提供。
１．２　方法
将供试山楂叶螨分对照组和处理组放在不同的
培养皿内，分别用清水和１ｍｇ·ｍＬ－１地肤子提取物
喷洒在山楂叶螨体表，５ｓ后吸净体表液体，２４ｈ后
用液氮快速冷冻并转移到离心管中，称其重备用。
参照Ｔａｌ等［２４］的方法提取总蛋白，用 Ｂｒａｄ－
ｆｏｒｄ法测定蛋白质浓度，等电聚焦采用胶内加样
法，第一向等电聚焦电泳ｐＨ　３～１０，线性固化ＩＰＧ
干胶条长度１７ｃｍ，蛋白加样量为２００μｇ。ＳＤＳ－
ＰＡＧＥ分离胶浓度为１２．５％，浓缩胶浓度为５％，
电泳后凝胶染色银染色，银染色采用Ｙａｎ　ｅｔ　ａｌ．的
方法［２５］。图像扫描后用ＰＤＱｕｅｓｔ　２－ＤＥ　８．０．１软
件进行分析。
２　结果与分析
２．１　对照和处理蛋白质组图谱
　　供试山楂叶螨从培养到双向电泳各重复３次，
供试药剂处理山楂叶螨和对照的蛋白双向电泳银
染图谱如图１所示，其Ｐａｔｔｅｒｎ非常相似。对照胶
得出蛋白点１１３９±１０２个，处理胶得出点１１８３±
１０６个。这些蛋白点等电点和分子量分布范围广，
但多数集中于等电点５．０～９．０之间，分子量２０～
７０ｋｕ的区域。从对照凝胶中选取一个图谱做蛋
白点匹配实验，使处理凝胶中蛋白点与对照胶中的
对应起来，与对照胶中同一蛋白点相匹配的点为同
一种蛋白质，匹配结果显示两块胶相匹配的蛋白点
为５００±４５个，对照胶和处理胶平均匹配率分别为
４３．８％和４２．３％。对照的匹配率稍高于处理胶，
这与把它选做参考胶有关。
２．２　对照和处理蛋白组的表达变化
以对照胶作为参照，通过ＰＤ－ＱＵＥＳＴ软件搜
索和数据的统计分析，发现有２６２±２３个蛋白点在
表达量上有显著变化（Ｐ＜０．０５），其中１４２±１３个
点是２倍上调的点，另外１２０±１１个点是下调的
点，介于两者之间的点有２３７±２１个。与对照相比
处理蛋白组差异表达谱见图２。同时３２２±２９个
点只在处理胶中，其中蛋白点参数（等电点和分子
量）见表１，蛋白点主要集中区如图２中框１所示。
表１显示蛋白分子量主要集中在３０～７０ｋｕ，等电
点集中在ｐＩ（５～６）和ｐＩ（７．５～９．０）之间。发生变
化的蛋白是中等分子的蛋白，在ｐＩ（５～６）区处理
胶明显增加了一些蛋白。
１２３３４（４） 张利军等：地肤子提取物毒杀螨的蛋白组双向电泳分析
图１　供试药剂对山楂叶螨蛋白影响双向凝胶电泳图谱
Ｆｉｇ．１　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　２－ＤＥ　ｍａｐｓ　ｏｆ　Ｔ．ｖｉｅｎｎｅｎｓｉｓ　Ｚａｃｈｅｒ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ａｇｅｎｔｓ
注：两图中间数值是 Ｍａｋｅｒ标记的分子量。
Ｎｏｔｅ：Ｔｈｅ　ｖａｌｕｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｉｄｄｌｅ　ｉｓ　ｔｈｅ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｗｅｉｇｈｔ　ｏｆ　Ｍａｋｅｒ　ｍａｒｋｅｒｓ．
图２　对照和处理叠加的蛋白比较
Ｆｉｇ．２　Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　２－ＤＥ　ｍａｐｓ　ｏｎ　ｓｕｐｅｒｐｏｓｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　ｇｅｌｓ
注：红色点（网络版中）代表对照胶蛋白，绿色点代表处理胶蛋白，粉框代表蛋白明显变化的区域。
Ｎｏｔｅ：Ｒｅｄ　ｄｏｔｓ　ａｒｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ＣＫ，ｇｒｅｅｎ　ｄｏｔｓ　ａｒｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｏｆ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｐｏｗｄｅｒ　ｂｏｘ　ｍｅａｎｓ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｃｈａｎｇｉｎｇ　ａｒｅａ．
２２３ 山 西 农 业 大 学 学 报（自然科学版） ２０１４
表１　药剂处理凝胶中增加蛋白质点的参数
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｐａｒａｍｅｔｅｒ　ｏｆ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｓｐｏｔｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｇｅｌ
蛋白索引号
Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｄｅｘ
分子量／ｋｕ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｗｅｉｇｈｔ／ｋｕ
等电点
ｐＩ
蛋白索引号
Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｄｅｘ
分子量／ｋｕ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｗｅｉｇｈｔ／ｋｕ
等电点
ｐＩ
蛋白索引号
Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎｄｅｘ
分子量／ｋｕ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ
ｗｅｉｇｈｔ／ｋｕ
等电点
ｐＩ
ＳＳＰ　７０３３　 １２．３６　 ８．９６ ＳＳＰ　７５２１　 ３５．５１　 ８．７７ ＳＳＰ　０６２０　 ５１．７５　 ４．８９
ＳＳＰ　６１１７　 １４．３６　 ８．４９ ＳＳＰ　８５１７　 ３５．９１　 ９．４７ ＳＳＰ　１６２５　 ５２．４５　 ５．４３
ＳＳＰ　８１３６　 １５．４３　 ９．２５ ＳＳＰ　５５２２　 ３７．３６　 ７．８３ ＳＳＰ　３６１８　 ５２．５２　 ７．０６
ＳＳＰ　８１４３　 １７．０６　 ９．４８ ＳＳＰ　１５１８　 ３７．３７　 ５．７４ ＳＳＰ　０６３０　 ５２．８３　 ５．４１
ＳＳＰ　８１３７　 １７．１６　 ９．３２ ＳＳＰ　６５２４　 ３７．６４　 ８．４５ ＳＳＰ　０６２２　 ５３．２３　 ５．２５
ＳＳＰ　３１０８　 １７．１７　 ７．１８ ＳＳＰ　３５２８　 ３７．７１　 ７．２２ ＳＳＰ　６６２４　 ５３．３１　 ８．６１
ＳＳＰ　８１４２　 １７．３６　 ９．４７ ＳＳＰ　９５１７　 ３８．３１　 ９．５４ ＳＳＰ　４６２２　 ５３．９５　 ７．６８
ＳＳＰ　９２２１　 １７．８９　 ９．６３ ＳＳＰ　８５１２　 ４０．１２　 ９．０７ ＳＳＰ　８６２１　 ５４．３８　 ９．３７
ＳＳＰ　８２３１　 １９．４５　 ９．３１ ＳＳＰ　５５２５　 ４０．３４　 ８．０７ ＳＳＰ　８６１６　 ５４．７４　 ９．１８
ＳＳＰ　８２２７　 １９．４８　 ９．２６ ＳＳＰ　２６３０　 ４４．２７　 ６．９１ ＳＳＰ　４６２０　 ５５．６２　 ７．６２
ＳＳＰ　８２３８　 １９．７０　 ９．４５ ＳＳＰ　８６０９　 ４４．９２　 ９．０９ ＳＳＰ　５７２１　 ５６．４９　 ７．９７
ＳＳＰ　８２２９　 １９．７３　 ９．２８ ＳＳＰ　１６３５　 ４４．９３　 ６．３５ ＳＳＰ　４７３０　 ５６．７８　 ７．７０
ＳＳＰ　８２３７　 ２０．１６　 ９．４４ ＳＳＰ　３６２５　 ４５．４２　 ７．１３ ＳＳＰ　０７１５　 ５６．９９　 ５．３８
ＳＳＰ　８２３６　 ２０．４０　 ９．４３ ＳＳＰ　３６２９　 ４６．６７　 ７．２０ ＳＳＰ　１７４５　 ５７．１６　 ６．３８
ＳＳＰ　８２３４　 ２０．７２　 ９．４３ ＳＳＰ　７６１０　 ４７．２５　 ９．０８ ＳＳＰ　１７３９　 ６１．８８　 ５．６６
ＳＳＰ　８３１５　 ２３．５６　 ９．１１ ＳＳＰ　８６１４　 ４７．６７　 ９．２５ ＳＳＰ　３７４７　 ６２．８９　 ７．１６
ＳＳＰ　９３１２　 ２４．５７　 ９．６１ ＳＳＰ　８６１３　 ４８．２６　 ９．１９ ＳＳＰ　０７１２　 ６３．７６　 ５．２８
ＳＳＰ　４３３８　 ２５．５３　 ７．７０ ＳＳＰ　４６２４　 ４８．６３　 ７．７０ ＳＳＰ　４７３２　 ６５．５１　 ７．７２
ＳＳＰ　５３１８　 ２６．３０　 ７．８１ ＳＳＰ　３６１９　 ４８．６８　 ７．０６ ＳＳＰ　０７１４　 ６６．９４　 ５．２６
ＳＳＰ　８３２４　 ２６．３３　 ９．４７ ＳＳＰ　３６３０　 ４８．９７　 ７．２１ ＳＳＰ　１７４３　 ６７．１１　 ６．２４
ＳＳＰ　３４２６　 ２７．２１　 ７．０６ ＳＳＰ　４６２１　 ４９．３８　 ７．６４ ＳＳＰ　１７４１　 ６７．７４　 ５．６５
ＳＳＰ　８４３０　 ２８．１６　 ９．４９ ＳＳＰ　０６２５　 ４９．５１　 ５．３１ ＳＳＰ　４７２５　 ６７．８４　 ７．４５
ＳＳＰ　８４２６　 ２８．３１　 ９．３０ ＳＳＰ　８６１２　 ４９．５５　 ９．１６ ＳＳＰ　４７３３　 ６８．１４　 ７．７２
ＳＳＰ　８４２３　 ２８．３１　 ９．２４ ＳＳＰ　０６１９　 ５０．０５　 ４．９０ ＳＳＰ　１７４６　 ６９．７１　 ６．３７
ＳＳＰ　８４２８　 ３０．６３　 ９．３７ ＳＳＰ　３６２０　 ５０．１２　 ７．０７ ＳＳＰ　３７３６　 ７１．８７　 ６．９９
ＳＳＰ　７４２１　 ３０．７１　 ８．７５ ＳＳＰ　４６１９　 ５０．３６　 ７．５７ ＳＳＰ　５７１７　 ７８．３０　 ７．７７
ＳＳＰ　８４１７　 ３１．４２　 ９．１２ ＳＳＰ　０６２１　 ５０．４５　 ５．１１ ＳＳＰ　１８０９　 ８１．９０　 ６．２４
ＳＳＰ　１４１５　 ３１．７５　 ６．３１ ＳＳＰ　０６２４　 ５０．４８　 ５．２８ ＳＳＰ　１８１１　 ８２．０４　 ６．３１
ＳＳＰ　８４２１　 ３１．９９　 ９．２１ ＳＳＰ　３６２６　 ５１．２６　 ７．１４ ＳＳＰ　１８０７　 ８３．２５　 ６．２３
ＳＳＰ　７４２３　 ３２．０１　 ８．８８ ＳＳＰ　４６１８　 ５１．２７　 ７．５８ ＳＳＰ　１８１３　 ８６．３７　 ６．３８
ＳＳＰ　８４１６　 ３２．４３　 ９．０６ ＳＳＰ　３６３１　 ５１．３７　 ７．２１ ＳＳＰ　１８１０　 ８６．８６　 ６．２８
ＳＳＰ　８４１９　 ３２．４３　 ９．１２ ＳＳＰ　１６２６　 ５１．３９　 ５．４４ ＳＳＰ　１８０８　 ８７．１９　 ６．２３
ＳＳＰ　７５２２　 ３４．９２　 ８．８６ ＳＳＰ　１６２９　 ５１．７１　 ５．５０ ＳＳＰ　３８２２　 ９１．０６　 ７．１２
ＳＳＰ　８５１４　 ３５．４３　 ９．２６ ＳＳＰ　０６２３　 ５１．７３　 ５．２８
３　讨论与结论
蛋白质组学在药物研究中主要应用于受体或
标志物的鉴定、受体的评价及毒理学、蛋白质相互
作用及其功能的研究、药物代谢产物的研究等方
面［２６］。有人运用蛋白质组学２－ＤＥ技术研究过杀
虫剂对有害昆虫的毒理，如 Ｓｈａｒｍａ等研究了
ｐＨ３．５～７．０和ｐＨ６．０～１０．０氨基甲酸酯类杀虫
剂对褐飞虱的毒性机理［２７］，他指出被氨基甲酸酯
类农药处理后所有的细胞骨架蛋白被引起上调，而
这些蛋白是神经化学物质的重要靶标之一。本试
验采用地肤子提取物触杀山楂叶螨，引起其蛋白显
著性变化（Ｐ＜０．０５），显著性变化的蛋白有可能是
地肤子提取物的靶标蛋白。
曹挥等［２８］研究表明，地肤子提取物处理后，山
楂叶螨体内蛋白含量、蛋白酶活性有所升高，谷胱
甘肽－Ｓ－转移酶和羧酸酯酶被激活，ＳＯＤ活性显著
增高；乙酰胆碱酯酶、Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力受到一定
程度的抑制。并推断地肤子活性成分可能通过抑
制山楂叶螨体内的酯酶同工酶活性来降低其消化
代谢，通过降低单胺氧化酶的活性来降低其解毒代
谢，通过抑制乙酰胆碱酯酶活性阻断其神经传递，
再加上自由基毒害引起螨过度兴奋，最终导致螨体
的死亡。而本试验中研究发现地肤子提取物触杀
３２３３４（４） 张利军等：地肤子提取物毒杀螨的蛋白组双向电泳分析
螨可引起中等分子量酸性蛋白质增加。ＳＷＩＳＳ－
２ＤＰＡＧ数据库显示乙酰胆碱酯酶的前体的等电
点在ｐＩ（５．１７～５．２６）之间［２９］，处理胶酸性蛋白的
增加恰是在ｐＩ（５～６），可能存在乙酰胆碱酯酶受
到抑制，其前体不能正常转化，停留在前体状态积
聚起来，同时引发了与其相关的一系列蛋白的错误
表达。同时，谷胱甘肽－Ｓ－转移酶的分子量为５５
ｋｕ，等电点ｐＩ（４．５～４．８）作为昆虫解毒代谢作用
和动物组织损伤的敏感指标，其升高也可能造成组
织内蛋白的表达混乱。如果这种假设正确，恰好和
酶活性测定的结果相吻合，但是这种假设需要进一
步研究验证。
蛋白质是基因表达的产物，它的形成要经过基
因组的转录后加工、翻译调控以及翻译后加工修饰
等许多步骤，每个蛋白可产生多种蛋白异构体，极
大丰富了蛋白质的数量，增加了复杂性。但是，试
验结果说明运用蛋白技术在分子水平研究杀虫剂
的毒性是可能的，部分蛋白的研究将有助于目标基
因的鉴定和功能的预测。因此需要进一步采用其
他方法或手段深入地研究鉴定这些蛋白，并了解它
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（编辑：武英耀）
４２３ 山 西 农 业 大 学 学 报（自然科学版） ２０１４