全 文 ：第 5卷 第 4期
2009年 4月
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific T raditiona l Medicine
Vol.5 No.4
Apr.2009
收稿日期:2009-02-10
作者简介:陈铭祥(1983-),男 ,广东清远人 ,广东药学院硕士研究生 ,研究方向为天然药物化学活性成分;王定勇(1967-), 男 ,
湖南洞口人 ,博士 , 广东药学院教授 ,研究方向为天然药物化学。
HPLC法测定杨梅树皮中杨梅醇的含量
陈铭祥 ,王定勇＊ ,刘恩桂
(广东药学院 药科学院 ,广东 广州 510006)
摘　要:目的:检测杨梅树皮中杨梅醇的含量。方法:采用高效液相色谱法进行测定。结果:采用高效液相色谱法
测定杨梅树皮中杨梅醇的含量 ,其灵敏度高 , 分离度和精密度均好 ,该成分在杨梅树皮中含量高达 2.18%。结论:
该方法为制定杨梅的质量标准提供了一个可控的方法 , 同时也为进一步合理开发和综合利用该药用植物提供了
一定的参考依据。
关键词:杨梅醇;含量测定;高效液相色谱法
中图分类号:R284.1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-2197(2009)04-0019-02
　　杨梅(Myrica ruba(Lour .)Sieb.et Zucc.)系杨梅科杨
梅属植物 ,杨梅树皮味苦 、性温 , 具有散瘀止血 、止痛之功
效 , 民间用于治疗跌打损伤 、骨折 、痢疾 、胃和十二指肠溃
疡 、牙痛等[ 1] 。杨梅中所含的化学成分主要为黄酮类 、三萜
类以及环状二芳基庚烷类化合物 。近年来的研究发现 ,二
芳基庚烷类化合物由于其独特的化学结构 ,具有多种生物
活性 ,除可用作食品调味剂外 , 还有抗肿瘤 、抗肝毒 、抗氧
化 、消炎 、排胆汁 、解肝毒 、杀虫等方面的生物活性[ 2] 。杨梅
醇是二芳基庚烷类化合物的一种 ,我们通过实验发现其在
杨梅树皮中的含量很高 ,且根据文献检索 ,杨梅树皮中化学
成分的含量测定目前尚无研究报道 ,杨梅作为一种民间良
药 ,资源广泛 ,对其进行进一步的研究能为综合开发利用该
植物提供一定的科学依据和参考 。
1　材料与仪器
杨梅树皮于 2004年 10月采自湖南省洞口县 ,经广东药
学院中药学院曾令杰博士鉴定为杨梅的树皮 。杨梅醇对照
品为自制 ,从杨梅树皮中提取分离得到 ,纯度在 98 %以上 ,
见图 1。提取用的试剂为分析纯 ,其它试剂均为色谱级。
T U-1810紫外可见分光光度计 , sartorius BP211D电子
天平 ,水浴锅 , JL-180DTH 超声波清洗器 , Waters HPLC
(Binary HPLC Pump:Waters 1525;Autosampler:Waters
717 plus;Dual λAbsorbance Deteror:Waters 2487)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件的选择
色谱柱:Dima ODS柱(4.6 mm×250 mm);流动相:乙
腈-水(80∶20);流速:1.0 mL/min;柱温:25 ℃;检测波长:
254 nm ;进样体积:20 μL。
在此条件下 ,杨梅醇获得较好的分离 ,理论塔板数按杨
梅醇峰计算应不低于 3000 。对照品与供试品在约 4 min相
同时间有一色谱峰(见图 1 、图 2)。
2.2　提取条件的选择
2.2.1　提取溶剂的选择
杨梅醇为二芳基环庚烷类化合物 ,选择甲醇 、乙酸乙
酯 、氯仿为提取溶剂。分别精密称取杨梅树皮约 20 g共 3
份 ,置具塞锥形瓶中 ,各加入上述溶剂 100 mL ,称定重量 ,
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Asia-Pacific T raditiona l Medicine
Vol.5 No.4
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超声处理 30 min ,放至室温 ,加溶剂补足重量 ,滤过 ,取续滤
液作为供试品溶液;另取杨梅醇对照品适量 ,加甲醇制成每
1 mL含 0.638 mg的对照品溶液。吸取上述供试品溶液和
对照品溶液各 20 μL ,分别注入液相色谱仪中 ,测得杨梅醇
含量分别为 0.0209 , 0.0143 , 0.0195 mg/g。甲醇提取物中
杨梅醇的含量最高 ,故采用甲醇作为提取溶剂。
2.2.2　提取时间的考察
精密称取杨梅树皮各 20 g 共 4份 ,分别置锥形瓶中 ,各
加入甲醇 100 mL ,称定重量 ,超声处理 20 , 30 , 45 , 60 min ,放
至室温 ,加溶剂补足重量 ,滤过 ,取续滤液作为供试品溶液 ,
结果测定分别为 0.0095 , 0.0148 , 0.0216 , 0.0213 mg/g。
45 min与 60 min提取效果最好 ,选用 45 min提取时间 。
2.3　线性关系的考察
精密称取干燥至恒重的杨梅醇对照品 31.90 mg ,置 50
mL容量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得(每
1mL含杨梅醇 0.638 mg)。液相自动进样仪分别吸取 4 、8 、
12、16、20 μL注入液相色谱仪中 ,按上述色谱条件测定对
照品峰面积 ,将进样量与峰面积进行回归处理 ,回归方程为
y=1727590.56x -996567.50 ,杨梅醇对照品进样量在
2.552～ 12.76 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,结果
见表 1 。
表 1　标准曲线的测定结果
杨梅醇
含量
(μg/mL)
2.552 5.014 7.656 10.208 12.76
峰面积
积分值 3373891 7914665 12154913 16661162 21044698
线性范围:2.552～ 12.76μg　　　　　　相关系数:R2 =1.00
　　自动吸取供试品溶液 20 μL , 按上述色谱条件重复进
样 5次 ,记录色谱图及峰面积积分值 ,结果 RSD=1.39%
<2%(n=5),表明仪器精密度良好 ,测定结果见表 2。
表 2　仪器精密度试验结果
进样次数 1 2 3 4 5
峰面积 6535723 6535732 6535728 6535739 6535715
平均值:6535727.4　　(RSD=1.39 %)
2.4　稳定性试验
自动吸取供试品溶液 20μL ,按上述色谱条件 ,每隔
0.5h测定供试品溶液中杨梅醇峰面积 ,共测定到第 3小
时 ,计算供试品溶液中杨梅醇峰面积相对标准差。表明二
氢杨梅素在供试品溶液制备 3h内基本稳定 ,RSD=1.27%
<2%(n=7),可以满足试验的分析要求 ,结果见表 3。
表 3　稳定性试验结果
放置
时间(h) 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3
峰面
积积
分值
6535728 6535735 6535729 6535731 6535740 6535721 6535746
峰面积平均值:6535732.9　　(RSD=1.27%)
2.5　加样品回收率试验
精密称取已知含量的样品 5份 ,每份约 100g 。分别置
于 5个锥形瓶中 ,精密加入杨梅醇对照品(0.638 mg/mL)3
mL ,再精密加入甲醇 500 mL ,称定重量 ,超声处理 45 min ,
放至室温 ,加溶剂补足重量 ,滤过 ,取续滤液 ,按含量测定项
下色谱条件 ,仪器自动吸取 20 μL ,注入液相色谱仪中进行
含量测定 ,计算回收率 ,结果平均回收率为 99.38%,RSD
=1.25%,表明 HPLC 法用于本品的质量控制具有良好的
准确性 ,结果见表 4 。
表 4　加样回收率试验结果
试验
号
供试品
取量(g)
杨梅醇的
含量(mg)
加入对
照品(mg)
测出杨梅
醇量(mg) 回收率
1 100.1548 2.183 1.914 3.996 97.53
2 100.0981 2.182 1.914 4.115 100.46
3 100.4157 2.189 1.914 4.124 100.51
4 100.3504 2.188 1.914 4.095 98.83
5 100.2528 2.186 1.914 4.082 99.56
平均回收率:99.38%　　(RSD=1.25%)(n=5)
2.6　重复性试验
精密称取样品 5份各 10 g ,照样品测定项下实验方法
制成供试品溶液 ,按样品测定项下色谱条件进行测定 ,含量
的相对标准偏差为 1.56%,表明该方法重现性良好 ,结果
见表 5 。
表 5　重现性试验结果
试验号 1 2 3 4 5
含量(%) 2.14 2.18 2.16 2.23 2.19
平均含量:2.18%　　(RSD=1.56%)
2.7　样品测定
称取干燥的杨梅树皮 5份各约 20 g ,按供试品制备方
法制备 ,依上述方法操作 ,测定结果表明药材中杨梅醇的平
均含量为 2.18%,见表 6 。
表 6　样品中杨梅醇的含量
试验号 取样量(g) 杨梅醇的含量(mg) 含量(%) 平均含量
1 20.0059 0.4321 2.16
2 20.0156 0.4704 2.35
3 20.0021 0.4080 2.04
4 20.0078 0.4402 2.20
5 20.0045 0.4261 2.13
2.18%
3　结论
上述以自制分离得到的杨梅醇做对照品 ,采用 HPLC
法测定杨梅树皮中杨梅醇的含量 ,其灵敏度高 ,分离度和精
密度均好。该成分在杨梅树皮中含量高达 2.18%左右 ,化
学性质较稳定 ,有药理实验证明 ,杨梅醇及其衍生物具有一
定的药理活性 [3] ,该方法为制定杨梅的质量标准提供了一
个可控的方法 ,同时也为进一步合理开发和综合利用该药
用植物提供了一定的参考依据 。
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2009年 4月
亚 太 传 统 医 药
Asia-Pacific T raditiona l Medicine
Vol.5 No.4
Apr.2009
收稿日期:2008-12-05
作者简介:盛伟(1966-), 男 ,长春市二道区人民医院副主任药师 ,研究方向为中药质量控制及标准化研究;王淑敏 , 女 , 吉林德惠
人 ,博士 , 长春中医药大学教授 ,硕士生导师 , 研究方向为中药质量控制及标准化研究。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院.中药大辞典(上册)[ M ] .上海:上海科学技术出
版社 , 2000:1042-1043.
[ 2] 　黄初升 ,白素平 ,李英.天然线性二芳基庚烷类化合物[ J] .天然
产物研究与开发 , 1997(9):98-105.
[ 3] 　JUNKO I , M UTSUO , HUI -KANG W , et al.An ti-tumor
p rom oting ef fect s of cy clic diarylhep tanoids on Epstein-Barr vi-
rus act ivation and tw o s tage mouse skin carcinogenesi s [ J] .
Cancer Let ters , 2000 , 159(2):135-140.
(责任编辑:曾楚华)
前列舒通胶囊薄层色谱鉴别研究
盛　伟1 ,王　丽1 ,徐　云2 ,齐　放2 ,王淑敏2＊
(1.长春市二道区人民医院 ,吉林 长春 130031;2.长春中医药大学 ,吉林 长春 130117 )
摘　要:目的:建立前列舒通胶囊中药材的薄层色谱鉴别方法。方法:用薄层色谱法对前列舒通胶囊中当归 、赤
芍 、甘草 、柴胡等药材进行定性鉴别。结果:各薄层色谱斑点专属性强 , 重现性好 , 可行性强。结论:该方法能较好
地控制产品的质量。
关键词:前列疏通胶囊;薄层色谱;鉴别
中图分类号:R286.0　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1673-2197(2009)04-0021-02
　　前列舒通胶囊处方由黄柏 、赤芍 、三棱 、柴胡 、当归 、泽
泻 、甘草等十三味药组成 ,具有清热利湿 、化瘀散结之功效。
用于慢性前列腺炎 ,前列腺增生属湿热瘀阻证。为有效的
控制产品的质量 ,保证临床疗效的稳定 ,采用薄层色谱法对
该药全方药材进行了定性鉴别。
1　仪器与试药
KQ2500E 型医用数控超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);芍药苷对照品(批号:110713-200208 ,供含量测
定用)由中国药品生物制品检定所提供;硅胶G(青岛海洋
化工厂);所用各试剂均为分析纯;方中各药材均采购于吉
林大药房 。
2　薄层色谱鉴别
2.1　当归的鉴别
取本品内容物 2g , 研细 , 加乙醚 30mL , 超声处理
20min ,滤过 ,滤液挥干(药渣备用),残渣加无水乙醇 1mL
使溶解 ,作为供试品溶液 。另取当归对照药材 0.5g ,加乙
醚 20mL ,同法制成当归对照药材溶液 。另按处方比例和
制法 ,制得不含当归的样品 ,同法制成当归阴性对照液 。按
照薄层色谱法(中国药典 2005年版一部附录 Ⅵ B)试验 ,吸
取上述 3种溶液各 5μL ,分别点于同一硅胶 G薄层板上 ,以
正己烷-醋酸乙酯(8∶2)为展开剂 ,展开 ,取出 ,晾干 ,喷以
3%香草醛硫酸溶液 ,在 105℃加热至斑点显色清晰。供试
品色谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同颜色的
紫色斑点 ,阴性对照无干扰 ,见图 1 。
1 、2-当归药材;3、4、5-供试品;6-阴性对照品
图 1　当归薄层色谱
2.2　赤芍的鉴别
取 2.1项下乙醚提取后的药渣 ,加甲醇 30mL ,超声处
理 30min ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣加水 15mL使溶解 ,用水饱
和的正丁醇提取 3 次(20mL , 20mL , 10mL),合并正丁醇
液 ,用氨试液洗涤 3次(20mL , 20mL , 10mL),再用正丁醇
饱和的水洗涤 3次(20mL , 20mL , 10mL),取正丁醇液蒸
干 ,残渣加甲醇 2mL使溶解 ,通过大孔树脂 D101 柱(2cm
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