全 文 ：2012 年 11 月
第 31 卷 第 11 期
绵阳师范学院学报
Journal of Mianyang Normal University
Nov．，2012
Vol． 31 No． 11
收稿日期:2012-07-03 回修日期:2012-09-10
基金项目:四川省教育厅重点项目(092A180)和绵阳师范学院科研项目(MA2009017)
作者简介:李绣菊(1991 － ) ，女，绵阳师范学院化学与化学工程学院 2009 级本科学生
* 通讯作者:罗娅君(1973 － ) ，女，教授，主要研究方向:现代分离分析。E － mail:luolaowu@ 126． com
牡荆茎叶中化学成分定量分析
李绣菊1，边清泉1，王照丽2，陈隆芳1，张琦3，罗娅君* 1
(1． 绵阳师范学院化学与化学工程学院，四川绵阳 621000;2． 成都市环境保护研究院，四川成都 610065;
3． 西南民族大学生命科学与技术学院，四川成都 610041)
摘 要:以齐墩果酸为对照品，香草醛 －冰醋酸 －高氯酸为显色剂，采用分光光度法测定牡荆茎叶乙醇提取
物中总皂苷的含量;以原儿茶酸为对照品，0． 6% FeCl3 － 0． 9%K3［Fe(CN)6］(1:0． 9)混合溶液为显色剂，采用分光
光度法测定总酚酸的含量;又以芦丁为对照品，采用三氯化铝 －醋酸钠 －醋酸显色法显色后测定总黄酮的含量。
结果表明:牡荆乙醇提物中总皂苷含量为 5． 11%，总酚含量为 4． 03%，黄酮含量为 3． 63%。实验表明:此方法简
便、快捷、准确、稳定性好、重现性好，且在一定浓度范围内均呈现较好的线性关系，加样回收率达到了 99%，为牡荆
茎叶乙醇提取物中的化学成分的研究提供了参考。
关键词:牡荆;分光光度法;总皂苷;总多酚;总黄酮;含量测定
中图分类号:Q65 文献标识码:A 文章编号:1672-612x(2012)11-0041-05
牡荆［Vitex negundo L． var． cannabifolia (Sieb． et Zucc．)Hand －Mazz］，为马鞭草科(Verbenaceae)牡荆
属(Vitex)落叶小乔木或灌木，是传统的药用植物，具有祛痰、止咳、平喘、治疗风寒感冒、祛风解表、除湿、杀
虫、治痢疾、脚气等多种功能［1 － 3］，由它制成的牡荆油胶丸已被载入《中国药典》［4］。牡茎属植物的许多种
类为传统的药用植物，人们对其化学成分、生物活性［5］、药理作用与临床应用［6 － 7］已经进行了一定的研究，
但对牡荆茎叶中总皂苷、总酚酸、总黄酮的具体含量测定作者未见文献报道。本研究参考相关文献［8 － 11］，
分别以齐墩果酸和芦丁为对照品，采用分光光度法，测定牡荆茎叶中总皂苷、总多酚和总黄酮的含量。
1 仪器与试剂
FW －177 中草药高速粉碎机(天津市泰斯特仪器由有限公司) ，AUY120 电子分析天平(SHIMADZU
CORPORATION JAPAN) ，T6 新世纪紫外可见分光光度计(2004(C)北京普析通用仪器有限公司) ，RE －
5203 旋转蒸发器(上海荣亚生化仪器厂)。牡荆 －采自于绵阳森林公园，经中国科学院成都分院生物所植
化研究室鉴定为牡荆。对照品齐墩果酸、原儿茶酸、芦丁均由中国药品生物制品检定所提供，其余试剂均
由成都科龙试剂有限公司提供的分析纯试剂。
准确称取干燥至恒重的牡荆粉末 30 g，分别用 12 倍量、10 倍量、8 倍量的 75%的乙醇超声回流提取 3
次，时间分别为 55 min、45 min、45 min，温度为 55 ℃，合并提取液，并减压浓缩，干燥后得干浸膏 5． 34 g 。
2 对照品溶液的制备
2． 1 齐墩果酸对照品溶液的配制
在 25 mL量瓶中，准确称取对照品齐墩果酸(干燥至恒重)5． 1 mg，用甲醇溶解，稀释至 25 mL，混匀，
得 0． 204 mg·mL －1的标准溶液，备用。
2． 2 原儿茶酸对照品溶液的配制
在 500 mL容量瓶中，精密称取原儿茶酸对照品 11． 0100 mg，无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得
22． 02 μg·mL －1的对照品溶液。
2． 3 芦丁对照品溶液的配制
在 25 mL 量瓶中，准确称取对照品芦丁(干燥至恒重)5． 000 mg，用甲醇溶解，稀释至 25 mL，混匀得
DOI:10.16276/j.cnki.cn51-1670/g.2012.11.013
0． 2 mg·mL －1的标准溶液，备用。
2． 4 供试品溶液的配制
在 50 mL量瓶中，加入牡荆干浸膏 0． 1081 g，甲醇溶解，稀释到刻度，混匀，得 2． 162 mg·mL －1的溶液。
采用分光光度法测定总皂苷和总黄酮的含量。
在 50 mL量瓶中，加入牡荆干浸膏 0． 1330 g，加水溶解，稀释至 50 mL，混匀，得 2． 66 mg·mL －1的供试
品溶液，备用，采用分光光度法测定牡荆中总多酚的含量。
3 方法与结果
3． 1 总皂苷的定量测定
3． 1． 1 波长选择
齐墩果酸对照品溶液、供试品溶液均用香草醛 －冰醋酸 －高氯酸显色，然后在紫外可见分光光度计上
400 ～ 800 nm范围内扫描，最大吸收均为 550 nm。因此，选择 550 nm为测定波长，测定结果以齐墩果酸为
标准计算总皂苷含量。
3． 1． 2 标准曲线绘制［12 － 14］
在 6 只具塞试管中，分别加入齐墩果酸对照品溶液 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5、0． 6 mL，挥去甲醇，精确加
入 0． 2 mL的 5%香草醛 －冰醋酸溶液(新鲜配制) ，0． 8 mL高氯酸，混匀，60℃水浴加热 15 min后，于冰浴
中冷却。然后加 5 mL冰醋酸，摇匀，立即在 550 nm处测定吸光度(A) ，试剂空白做参照。以浓度(C)为纵
坐标，吸光度(A)为横坐标，绘制标准曲线并计算线性回归方程。得齐墩果酸对照品的回归方程为:C =
0． 0754A － 0． 0076，R2 = 0． 9961，齐墩果酸在 0． 0034 ～ 0． 0204 mg·mL －1间呈良好的线性关系。
3． 1． 3 精密度试验
精确量取 0． 3 mL齐墩果酸对照品溶液，按 3． 1． 2 所述条件操作并显色，测其 A 值，平行测定 5 次，
RSD为 0． 88%。
3． 1． 4 重现性试验
分别取牡荆干浸膏 5 份，按 2． 3 法配制供试品溶液，按 3． 1． 2 所述条件操作并显色，550 nm处测定吸
光度值，代入线性方程，计算总皂苷含量，RSD为 0． 914%，表明该方法重现性较好。
3． 1． 5 稳定性试验
取同一供试品溶液，按 3． 1． 2 所述方法操作并显色，测定不同时间的吸光度值。结果表明，吸光度在
10 min ～ 35 min内稳定，说明测定时间应在 10 ～ 35 min内完成。
3． 1． 6 加标回收率实验
在 5 只具塞试管中，精确吸取 0． 2 mL已知总皂苷含量的供试品溶液，分别加入 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5
mL的 0． 2 mg·mL －1齐墩果酸标准溶液，按 3． 1． 2 所述方法操作并显色，测定其吸光度值，重复 5 次，结果
见表 1，总皂苷的加标回收率为 99． 0%，RSD为 3． 21%。
表 1 总皂苷测定的加标回收率实验(n = 5)(μg)
Tab． 1 Recovery of determination in total saponins(n = 5) (μg)
试品量 加入量 测得量 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
12． 4 20． 4 33． 1 101． 5
12． 4 40． 8 51． 2 95． 1
12． 4 61． 2 72． 5 98． 1
12． 4 81． 6 96． 5 103． 0
12． 4 102． 0 11． 8 97． 5
99． 0 3． 21
3． 1． 7 样品测定
在具塞试管中，精确加入 0． 5 ml的供试品溶液，挥去甲醇，照 3． 1． 2 所述方法操作并显色，测定样品吸
光度值，代入线性方程，计算总皂苷含量。结果如表 2。
·24·第 31 卷 绵阳师范学院学报(自然科学版)
表 2 牡荆茎叶中化学成分定量分析结果总表
Tab． 2 Determination of chemical composition in the leaves and stems of Vitex negundo L． var． cannabifolia
测定次数(No) 总皂苷含量 /% 总酚酸含量 /% 总黄酮含量 /%
1 5． 11 4． 32 3． 632
2 5． 07 4． 18 3． 622
3 5． 26 4． 17 3． 632
4 5． 00 4． 12 3． 632
5 5． 11 4． 20 3． 642
平均值 5． 11 4． 20 3． 632
3． 2 总多酚的定量测定
3． 2． 1 波长选择
在 25 mL的比色管中，精密移取对照品溶液 1． 00 mL，加无水乙醇至 5 mL，0． 3%十二烷基硫酸钠溶液
2． 00 mL，0． 6% FeCl3 － 0． 9%K3［Fe(CN)6］(1:0． 9)显色剂 1 mL，暗处放置 5 min，加 0． 1 mol·L
－1HCl至刻
度，摇匀，暗处放置 30 min，以试剂为空白，在 190 ～ 1000 nm波长范围内测定吸收光谱。结果表明对照品溶
液在 725 nm处有最大吸收峰，
3． 2． 2 标准曲线绘制
在 5 只 25 mL比色管中，精密吸取原儿茶酸对照品溶液(22． 02 μg·mL －1)0． 5 mL，1． 0 mL，1． 5 mL，
2． 0 mL，2． 5 mL和 3． 5 mL，分别加无水乙醇至 5 mL，同 3． 2． 1 操作，以试剂为空白，用分光光度计在 725 nm
波长处测定吸光度 A，以浓度 C(μg·mL －1)为横坐标，吸收度 A为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程
为 A =0． 4026C + 0． 3121(R2 = 0． 9991)。原儿茶酸含量在 0． 4404 ～ 3． 0828 μg·mL －1范围内呈现良好的线
性关系。
3． 2． 3 精密度试验
精确量取 2 mL原儿茶酸对照品溶液，按 3． 2． 2 所述条件操作并显色，测其 A 值，平行测定 5 次，RSD
为 0． 71%。
3． 2． 4 重现性实验
分别取牡荆干浸膏 5 份，按 2． 3 法配制供试品溶液，精确吸取 1 mL的供试品溶液，置于 25 mL的具塞
试管中，按 3． 2． 2 所述条件操作并显色，3 代入线性方程，计算总多酚含量，RSD为 0． 76%，表明该方法重现
性较好。
3． 2． 5 稳定性实验
取同一供试品溶液，按 3． 2． 2 所述方法操作并显色，测定不同时间的吸光度值。结果表明，吸光度在
25 ～ 60 min内稳定。
3． 2． 6 加标回收率试验
在 6 只 25 mL具塞试管中，精确吸取 0． 5 mL已知总多酚含量的供试品溶液，分别加入原儿茶酸对照品
溶液 22． 02 μg·mL －10． 3 mL，0． 5 mL，0． 7 mL，1． 0 mL，1． 2 mL，1． 5 mL，然后按“3． 2． 2 测定方法”进行操
作，测定 A值，重复测定 5 次，结果见表 3，计算得总多酚加标回收率为 99． 17%，RSD为 3． 11%。
表 3 总多酚测定的加样回收率实验结果(n = 5)(μg)
Tab． 3 Recovery of determination in total polyphenols(tannin) (n = 5)(μg)
试品量 加入量 测得量 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
38． 86 6． 606 45． 447 99． 71%
38． 86 11． 010 49． 586 97． 42%
38． 86 15． 414 53． 82 97． 05%
38． 86 22． 020 61． 45 102． 59%
38． 86 26． 424 65． 18 99． 61%
38． 86 33． 030 71． 43 98． 61%
99． 17 3． 11
3． 2． 7 总多酚含量的测定
在 25 mL具塞试管中，精确加入 0． 5 ml的供试品溶液，照 3． 2． 2 所述方法操作并显色，测定样品吸光
·34· 李绣菊等:牡荆茎叶中化学成分定量分析 第 11 期
度值，代入线性方程，计算总多酚含量。结果见上表 2 中。
3． 3 总黄酮的定量测定
3． 3． 1 波长选择
芦丁对照品溶液、供试品溶液均用 AlCl3 显色，然后在紫外可见分光光度计上 200 ～ 600 nm 范围内扫
描。结果对照品与供试品溶液均在 415 nm处有最大吸收，因此测定波长选择为 415 nm，测定结果以芦丁
为标准计算总黄酮的含量。
3． 3． 2 标准曲线绘制在 5 只 10 mL试管中，分别加入芦丁对照品溶液 1． 0、1． 25、1． 5、1． 75、2． 0 mL，再分
别加 2． 0 ml 的 0． 1 mol·L －1氯化铝溶液和 3 mL的 0． 1 mol·L －1醋酸钠 －醋酸溶液，用甲醇稀释至 10 mL，
摇匀，静置 10 min后，用甲醇试剂为空白，在 415 nm波长处测定 A值，以 C 为纵坐标，A为横坐标，得芦丁
对照品的回归方程为:C =0． 0819A + 0． 0039(r2 = 0． 9993) ，芦丁在 0． 020 ～ 0． 040 mg·mL －1间呈良好的线
性关系。
3． 3． 3 精密度试验
精确量取 1． 5 mL芦丁对照品溶液，按 3． 3． 2 所述条件操作并显色，测其 A 值，平行测定 5 次，RSD 为
0． 14%。
3． 3． 4 重现性实验
分别取牡荆干浸膏 5 份，按 2． 3 法配制供试品溶液，在 25 mL的具塞试管中，精确加入 0． 6 mL的供试
品溶液，按 3． 3． 2 所述条件操作并显色，415 nm处测定吸光度值，平行测定 5 次，代入线性方程，计算总黄
酮含量，RSD为 0． 99%，表明该方法重现性较好。
3． 3． 5 稳定性试验
取同一供试品溶液，按 3． 3． 2 所述方法操作并显色，测定不同时间的吸光度值。结果表明，吸光度在
45 min内稳定，因此测定时间应控制在 45 min内完成。
3． 3． 6 加标回收率实验
在 5 只 10 mL具塞试管中，精确吸取 0． 5 mL已知总黄酮含量的供试品溶液，分别加入 0． 2 mg·mL －1
的芦丁标准溶液 0． 1、0． 2、0． 3、0． 4、0． 5 mL，按 3． 3． 2 所述方法操作并显色，测定 A值，重复测定 5 次，结果
见表 4，计算得总黄酮加标回收率为 99． 2%，RSD为 2． 35%。
表 4 总黄酮加样回收率实验结果(n = 5)(μg)
Tab． 4 Recovery of determination in total flavonoids(n = 5) (μg)
试品量 加入量 测得量 回收率 /% 平均值 /% RSD /%
220． 6 20 240． 9 101． 1
220． 6 40 261． 3 101． 8
220． 6 60 280． 1 99． 3
220． 6 80 297． 3 96． 0
220． 6 100 318． 7 98． 1
99． 2 2． 35
3． 3． 7 样品测定
在 10 mL具塞试管中，精确加入 0． 5 ml的供试品溶液，照 3． 3． 2 所述方法操作并显色，测定样品吸光
度值，代入线性方程，计算总黄酮含量。结果见上表 2 中。
4 讨论
本文以齐墩果酸为对照品，香草醛 －冰醋酸 －高氯酸为显色剂，在波长 550 nm处有最大吸收，因此选
择 550 nm为测定波长。在 550 nm 波长处测定了牡荆茎叶中总皂苷的含量，结果表明:齐墩果酸浓度在
0． 0034 ～ 0． 0204 mg·mL －1范围内与吸光度呈良好线性关系，线性方程为:C =0． 0754A －0． 0076，平均加样
回收率为 99． 0%(n = 5) ，RSD =3． 21%，精密度为 0． 78%，其总皂苷含量为 5． 11%。
以原儿茶酸为对照品，十二烷基硫酸钠 －铁氰化钾 －三氯化铁为显色剂，对照品与供试品溶液均在
725nm处有最大吸收，因此选择 725 nm为测定波长，测定牡荆茎叶中总多酚的含量。结果表明:原儿茶酸
浓度在 0． 4404 ～ 3． 0828 μg·mL －1范围内与吸光度呈良好线性关系，线性方程为:A = 0． 4026C + 0． 3121
(R2 = 0． 9991) ，平均加样回收率为 99． 17%(n = 5) ，RSD = 3． 11%，精密度为 0． 71%，其总酚酸含量为
·44·第 31 卷 绵阳师范学院学报(自然科学版)
4． 20%。
然后以芦丁作对照品，采用三氯化铝显色法显色，对照品与供试品溶液均在 415 nm处有最大吸收，因
此选择 415 nm为测定波长。在 415 nm处用紫外分光光度法测定了牡荆乙醇提取物中总黄酮的含量。测
定结果显示:芦丁在 0． 020 ～ 0． 040 mg·mL －1范围内与吸光度呈良好线性关系，线性方程为:C = 0． 0819A
－0． 003，平均加样回收率为 99． 2%(n = 5) ，RSD =2． 65%，精密度为 0． 14%其，总黄酮含量为 3． 623%。
本实验结果表明，所用 3 种方法均具有操作简便，精密度高，稳定性和重现性好，测定结果可靠等优点，
适用于牡荆茎叶中总皂苷、总多酚及总黄酮的定量分析，可为牡荆总皂苷、总多酚和总黄酮抗氧化性和抗
炎作用的研究提供参考实验。
参考文献:
［1］ 全国中草药汇编编写组． 全国中草药汇编(上册) ［M］． 北京:人民卫生出版社，1975:767．
［2］ 顾琼，江志勇，张雪梅，等． 牡荆属植物的化学成分及生物活性［J］． 国外医药·植物药分册，2004，19(5) :188 －
189．
［3］ 艾铁民． 药用植物学［M］． 北京:北京大学医学出版社，2004:313 － 314．
［4］ 国家药典委员会，中国药典，Ⅰ部［S］．北京:人民卫生出版社，1978:292．
［5］ 顾琼，江志勇，张雪梅，等． 牡荆属植物的化学成分及生物活性［J］． 国外医药． 植物药分册，2004，19(5) :188 －
189．
［6］ 刘树根，刘悉生，傅杰青． 牡荆属植物的化学成分及其药理作用与临床应用［J］． 江西医药，1984，6:40 － 49．
［7］ Kobayakawa J，Sato2Nishimori F，MoriyasuM，et al． G2 － M arrestand antimitotic activity mediated by casticin，a flavonoid
isolatedfrom Viticis Fructus (Vitex rotundifolia Linne fil．) ［J］． CancerLett，2004，208(1) :59 － 64．
［8］ 侯蕾，石海峰，唐玲，等． 西南山茶植物不同部位化学成分的定量分析［J］． 华西药学杂志，2010，25(1) :040 － 043．
［9］ 国家药典委员会． 7502565248 89738 － 2005 中国药典［S］． 北京． 化学工业，2005．
［10］张华，朱晓薇，王新春，等． 比色法测定刺山柑巴布剂总酚酸含量［J］． 西北药学杂志，2011，26(2) :109 － 111．
［11］崔涛，夏伟军，彭玲芳． 七叶莲提取物中总黄酮和槲皮素的含量测定［J］．药物分析杂志，2011，31(11) :2054 － 2057．
［12］史丽颖，于大永，冯宝民，等． 葫芦茶根和叶中化学成分定量分析［J］．中草药(增刊) ，2009，40:289 － 292．
［13］吴小娟，林红景，唐玲，等． 山茶种子抗骨质疏松有效部位群化学成分的含量测定［J］．中南药学，2007，5 (2) :107 －
110．
［14］侯蕾，唐玲，史丽颖，等． 西南山茶花化学成分的定量分析［J］． 云南中医学院学报，2010，33(2) :25 － 28．
Quantitative Analysis of chemical composition in
Leaves ＆ Stems of Vitex negundo var． cannabifolia
LI Xiu － ju1，BIAN Qing －quan1，WANG Zhao － li2，CHEN Long － fang1，ZHANG Qi3，LUO Ya － jun1＊
(1． School of Chemistry ＆ Chemical Engineering ，Mianyang Normal University，Mianyang，Sichuan 621000;
2． Chengdu Academy of Environmental Protection，Chengdu，Sichuan 60015;
3． School of Bio － science ＆ Technology，Southwest University for Nationalists，Chengdu，Sichuan 610065)
Abstract:The content of total polyphenol，expressed as oleanolic acid equivalents，was measured by using
the Vanillin － ice CH3COOH － HClO4 colorim colorimetric assay in the leaves and stems of Vitex negundo L． var．
cannabifolia ethanol． The content of total phenolic acids，expressed as protocatechuic acid equivalents，was meas-
ured by using the 0． 6% FeCl3 － 0． 9%K3［Fe(CN)6］(1:0． 9)colorimetric assay． And the content of total fla-
vonoids，expressed as rutin equivalents，was measured by using the AlCl3 － CH3COONa － CH3COOH colorimet-
ric assay． The results show that the contents of total saponin，total polyphenol and total flavonoids were 5． 11%，
4． 03% and 3． 63%，respectively． The method is simple and accurate，with excellent，accurate stability and re-
producibility． The good linearity between concentrations and absorbances was found，and the average recovery has
achieved above 99% ． They are suitable for the determination of chemical composition in the leaves and stems of
Vitex negundo L． var． cannabifolia．
Key words:Vitex negundo L． var． cannabifolia (Sieb． et Zucc． )Hand － Mazz ;spectrophotometry;total
saponin;total polyphenol(tannin) ;total flavonoids;Content determination
·54· 李绣菊等:牡荆茎叶中化学成分定量分析 第 11 期