全 文 ：陆英颗粒对 CCl4 致小鼠急性肝损伤保护
作用研究
曾琳玲　杨威　王茜莎　朱庆　王敏伟
【摘要】　目的　研究陆英颗粒灌胃给药对 CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用 。方法　采用急性
CCl4肝损伤模型 ,给予小鼠陆英颗粒灌胃 7d,观察其对给予 0.1% CCl4 16h后各组血清 ALT、AST、TP、
Alb、GLO、A/G、TG及肝组织 TP、TG、MDA、T-AOC、GSH、T-SOD及 Ca2+-ATPase活力的影响 。结果 　陆
英颗粒能显著对抗 CCl4致小鼠急性肝损伤导致的血清中 ALT、AST升高 ,减轻 TG在肝组织内的蓄积和
降低 MDA的含量 ,提高肝组织 T-SOD的活力及总抗氧化能力 (T-AOC),亦能提高肝细胞膜和微粒体膜
的 Ca2 +-ATPase的活性 ,减少 GSH代偿性增高的程度;病理结果也表明陆英颗粒对肝细胞损伤具有明显
的保护作用;并有较明显的量效关系 。结论　陆英颗粒对 CCl4致小鼠急性肝损伤有明显的保护作用 。
【关键词】　陆英颗粒;CCl4;急性肝损伤;脂质过氧化
ProtectiveeffectsofthegranuleofSambucuschinensisLindlonmiceacutehepaticinjuryinducedby
carbontetrachloride(CCl4 )　ZENGLin-ling, YANGWei, WANGXi-sha, etal.GuangzhouPharmaceuticalIn-
dustrialResearchInstitute, Guangzhou510240, China
【Abstract】　Objective　ToinvestigatetheprotectiveeffectsofthegranuleofSambucuschinensisLindl
onmiceacutehepaticinjuryinducedbyCCl4 .Methods　Theliver-injurymodelwasestablishedbymiceacute
hepaticinjuryinducedbyCCl4 .MicewereadministratewiththegranuleofSambucuschinensisLindlfor7days,
thenthehepaticinjurywasinducedbyintraperitoneal(ip)CCl4 of0.1% (10ml/kg).After16 hours, ALT,
AST, TP, Alb, GLO, A/GandTGofbloodserumandTP, TG, MDA, T-AOC, GSH, T-SODandCa2+-ATPaseof
livertissueweremeasured.Results　ThegranuleofSambucuschinensislindlsignificantlyreducedthelevelof
ALTandASTofbloodserumandTG, MDAandGSHoflivertissue, ontheotherhandincreasethelevelofT-
AOC, T-SODandCa2 +-ATPaseoflivertissueofmiceacutehepaticinjuryinducedbyCCl4.Conclusion　The
granuleofSambucuschinensisLindlshowedprotectiveeffectsonmiceacutehepaticinjury.
【Keywords】　GranuleofSambucuschinensisLindl;Carbontetrachloride(CCl4);Acutehepaticinjury;
Lipoperoxidation
　　中药陆英为忍冬科 (Caprofoliaceae)接骨木属
(SambucusL.)植 物 陆 英 (Sambucuschinensis
Lindl.)的干燥全草 ,又称接骨草 、臭草 。味甘 、微苦 、
性平 ,早在《神农本草经》中就有记载 ,是我国民间常
用草药 ,产于全国各地 ,资源丰富 。有疏肝健脾 ,祛
风利湿 ,活血散淤 ,消炎止痛 ,镇痉消肿之功效 ,主要
用于急性病毒性肝炎 、肾性水肿 、风湿 、跌打损伤 、骨
折等症 [ 1, 2] ;陆英颗粒为陆英提取物制成的颗粒剂 ,
临床用于急性病毒性肝炎 ,但目前尚无有关陆英颗
粒的基础实验研究 , 本文研究了陆英颗粒对 CCl4致
　　基金项目:辽宁省科技攻关项目(项目编号:2004226008-1);
沈阳市科技局(项目编号:1041002-1-07)
作者单位:510240 广州市医药工业研究所
小鼠急性肝损伤的保护作用 ,初步探讨了其作用机
理 ,为其在肝病方面临床应用药提供基础实验研究
依据。
1　材料和方法
1.1　材料
1.1.1　药品和试剂　陆英颗粒:批号 , 041101, 1 g
陆英颗粒相当于陆英生药 1.5 g,由江西汇仁药业有
限公司提供;联苯双酯滴丸:锦州九天药业有限公
司 ,批号:041002;CCl4:天津四友生物医学科技有限
公司 批号:605315043, 临用前以花生油配制成
0.1%的溶液 。TG、MDA、T-AOC、GSH、T-SOD、Ca2+-
ATPase、总蛋白(考马斯亮蓝法)试剂盒均购自南京
建成生物工程研究所;日立 7020型全自动生化分析
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仪用 ALT、AST、TP、Alb试剂为英国朗道试剂公司
产品。
1.1.2　实验仪器　日立 7020型全自动生化分析
仪;OLYMPUS生物显微镜 , Y89-I型电动玻璃匀浆
机:宁波新芝科器研究所;UV-9100型紫外-可见分
光光度计:北京瑞利分析仪器厂;BZKW-C型电子恒
温水浴锅:北京光明医药仪器厂;DL-4000B冷冻离
心机:上海安亭科学仪器厂;精密分析天平:上海精
科天平 。
1.1.3　实验动物　昆明种雄性小鼠:体质量 20 ～ 22g,
由沈阳药科大学实验动物中心提供 , 合格证号:
SCXK(辽)2003-008。
1.2　方法 　陆英颗粒抗 CCl4 致小鼠急性肝损伤
实验
1.2.1　动物及分组　昆明种小鼠 72只 ,雄性 ,体质
量 20 ～ 22 g,随机均衡分为 6组 ,每组 12只 ,即空白
对照组 、模型对照组 、阳性药对照组 、陆英颗粒低 、
中 、高剂量组。空白组与模型对照组给予等量的溶
媒(0.5%CMC-Na),阳性药对照组给予联苯双酯滴
丸 150mg/kg,陆英颗粒低 、中 、高剂量组分别给予不
同剂量的陆英颗粒 12、24、48 g/kg(生药量),给药容
积 0.2ml/kg, 1次 /d,连续给药 7 d。
1.2.2　血清与肝匀浆样本的制备 　小鼠末次给药
1.5h后 ,给予 0.1%的 CCl4花生油溶液(给药容积
10 ml/kg)腹腔注射(i.p),空白组 i.p给予等量的溶
媒(花生油),禁食 16h后 ,眼眶取血 , 3 000r/m离心
10min,取血清冷藏待测;采血后立即处死小鼠取肝
做匀浆 ,根据需要离心后取上清夜备用;另取肝右叶
浸泡于福尔马林溶液中 ,以备组织切片观察。
1.2.3　样本的检测　日立 7020型全自动生化分析
仪测定血清 ALT、AST、TP、Alb;按试剂盒说明测定血
清 TG(三酰甘油)及肝匀浆 TG、MDA(丙二醛)、T-
AOC(总抗氧化能力)、GSH(谷光甘肽)、T-SOD(总
超氧化物歧化酶)、Ca2 +-ATPase,肝匀浆 TP(总蛋
白)用考马斯亮蓝法测定 。
1.2.4　病理学观察　肝组织切片经 HE染色 ,显微
镜下观察肝细胞损害程度 。
1.3　统计分析　实验数据均采用均数 ±标准差
(x±s)表示 ,用 SPSS软件进行分析。
2　结果
2.1　对血清中 ALT、AST的影响 　结果见表 1表
明:对照组血清中 ALT、AST远远高于空白组 ,与空
白组比较差异有统计学意义(P<0.001)。陆英颗
粒中 、高剂量组均能显著对抗 CCl4致小鼠急性肝损
伤导致的血清中 ALT、AST升高(与对照组比较 P<
0.05或 P<0.01或 P<0.001),低剂量组也有降低
趋势 ,各剂量组呈现较好的剂量相关性。阳性药联
苯双酯亦能显著对抗 CCl4致小鼠急性肝损伤导致
的血清中 ALT、 AST升高 (与对照组比较 P<
0.001)。
表 1　陆英颗粒对小鼠血清中 ALT、AST的影响(x±s)
药物 剂量(g/kg) 动物数 ALT(U/L) AST(U/L)
空白组 - 12 87.5±28.1 105.3±31.5
对照组 - 12 839.4±211.5### 897.5±247.5###
联苯双酯 0.15 12 254.6±79.7＊＊＊ 398.6±188.7＊＊＊
陆英颗粒低 12 12 593.2±207.8 625.2±220.6
陆英颗粒中 24 12 506.8±156.8＊ 496.3±171.6＊＊
陆英颗粒高 48 12 377.6±97.4＊＊＊ 428.3±103.5＊＊＊
　　注:与空白组比较 , ###P<0.001;与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001
2.2　对血清中 TP、Alb、GLO及 A/G的影响　结果
见表 2表明:与空白组比较 ,其他各实验组血清 TP、
Alb、GLO及 A/G的数据与对照组接近 ,差异均无统计
学意义(P>0.05),提示当一次 i.p给予昆明种小鼠
0.1%的 CCl4花生油溶液(给药容积 10 ml/kg)造成
急性肝损伤模型时 ,给 CCl4后 16 h采血检测对小鼠
血清 TP、Alb、GLO及 A/G无明显影响 。
表 2　陆英颗粒对小鼠血清中 TP、Alb、GLO及 A/G的影响(x±s)
药物 剂量(g/kg) 动物数 TP(g/L) Alb(g/L) GLO(g/L) A/G
空白组 - 12 61.9±5.9 29.7±1.6 32.3±5.7 0.96±0.24
对照组 - 12 62.1±4.1 29.4±2.4 32.6±4.4 0.92±0.19
联苯双酯 0.15 12 60.4±7.4 28.7±2.1 31.6±7.7 0.96±0.23
陆英颗粒低 12 12 61.0±8.3 29.1±2.3 32.0±9.2 0.97±0.25
陆英颗粒中 24 12 61.5±4.8 31.1±1.7 30.4±4.6 1.05±0.20
陆英颗粒高 48 12 61.0±4.8 28.9±2.4 32.7±5.5 0.91±0.17
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2.3　对血清 TG与肝匀浆 TG的影响　结果见表 3
表明:与空白组比较 ,其他各实验组血清 TG的数据
与对照组接近 ,差异均无统计学意义 (P>0.05)。
但对照组肝组织 TG含量明显高于空白组 ,与空白组
比较有差异有统计学意义(P<0.01),陆英颗粒中 、
高剂量组及联苯双酯均能显著对抗 CCl4致小鼠急
性肝损伤导致的肝组织 TG含量升高(与对照组比较
P<0.05)。提示当一次 i.p给予昆明种小鼠 0.1%
的 CCl4花生油溶液(给药容积 10 ml/kg)造成急性
肝损伤模型时 ,给 CCl4后 16 h采血检测 ,发现其对
小鼠血清 TG无明显影响 ,但可导致肝组织 TG含量
明显升高 ,陆英颗粒能对抗这种改变 。
表 3　陆英颗粒对小鼠血清 TG与肝匀浆 TG的影响(x±s)
组别 剂量(g/kg) 动物数 血清 TG(mg/dl) 肝匀浆 TG(mg/10g肝脏)
空白组 - 12 76.3±12.1 89.7±29.3
对照组 - 12 81.3±14.2 176.8±31.5##
联苯双酯 0.15 12 75.3±9.9 137.6±28.7＊
陆英颗粒低 12 12 78.3±11.3 154.3±45.3
陆英颗粒中 24 12 74.9±13.8 132.4±41.2＊
陆英颗粒高 48 12 80.6±14.8 123.8±34.6＊
　　注:与空白组比较 , ##P<0.01;与对照组比较 , ＊P<0.05
2.4　对肝匀浆 TP、MDA、T-SOD的影响 　结果表
明:与空白组比较 ,其他各实验组肝组织 TP含量的
数据与对照组接近 , 差异均无统计学意义 (P>
0.05)。但对照组 MDA显著高于空白组 (P<
0.001),而 T-SOD显著低于空白组(P<0.01),陆英
颗粒中 、高剂量组均能显著降低 CCl4致小鼠急性肝
损伤时所导致的肝脏 MDA含量升高(与对照组比较
P<0.05或 P<0.001)和显著抑制 CCl4致小鼠急性
肝损伤时所导致的肝组织 T-SOD含量的降低(与对
照组比较 P<0.05或 P<0.01),并体现一定的剂量
相关性 ,见表 4。
表 4　陆英颗粒对小鼠肝匀浆 TP、MDA及 T-SOD的影响(x±s)
组别 剂量(g/kg) 动物数 TP(mg/g) MDA(nmol/mgprot) T-SOD(U/mgprot)
空白组 - 12 52.9±5.2 4.5±1.3 86.1±8.6
对照组 - 12 54.6±5.1 11.8±3.2### 73.2±7.8##
联苯双酯 0.15 12 53.3±5.6 6.4±2.3＊ 80.1±10.9
陆英颗粒低 12 12 54.4±5.9 8.9±2.9 76.4±10.1
陆英颗粒中 24 12 55.0±5.7 6.8±1.7＊ 82.3±8.9＊
陆英颗粒高 48 12 55.7±5.3 5.6±1.5＊＊＊ 83.9±8.3＊＊
　　注:与空白组比较 , ##P<0.01, ###P<0.001;与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001
2.5　对肝匀浆 T-AOC、GSH及 Ca2+-ATPase活力的
影响　结果表明:与空白组比较 ,对照组肝组织 T-
AOC和 Ca2+-ATPase活力显著低于空白组(P<0.01
或 P<0.001), 而 GSH显著高于空白组 (P<
0.001)。陆英颗粒中 、高剂量组均能显著对抗 CCl4
致小鼠急性肝损伤时所导致的肝组织 T-AOC和
Ca2+-ATPase活力降低(与对照组比较 P<0.05或 P
<0.01或 P<0.001)和显著改善 CCl4致小鼠急性
肝损伤时所导致的肝组织 GSH含量的升高(与对照
组比较 P<0.05或 P<0.01),并体现一定的剂量相
关性 ,见表 5。
表 5　陆英颗粒对小鼠肝匀浆 T-AOC、GSH及 Ca2+-ATPase活力的影响(x±s)
组别 剂量(g/kg) 动物数 T-AOC(U/mgprot) GSH(mg/mgprot) Ca2+-ATPase(μmolPi/mgprot· h)
空白组 - 12 1.24±0.39 41.4±3.7 0.51±0.05
对照组 - 12 0.54±0.27## 53.4±8.1### 0.21±0.06###
联苯双酯 0.15 12 0.83±0.45 46.6±5.4＊ 0.34±0.10
陆英颗粒低 12 12 0.80±0.38 52.0±10.8 0.29±0.07
陆英颗粒中 24 12 0.97±0.41＊ 45.2±7.0＊ 0.37±0.10＊
陆英颗粒高 48 12 1.46±0.43＊＊＊ 44.3±4.4＊＊ 0.43±0.11＊＊
　　注:与空白组比较 , ##P<0.01, ###P<0.001;与对照组比较 , ＊P<0.05, ＊＊P<0.01, ＊＊＊P<0.001
2.6　对肝组织病理变化的影响　与正常组比较 ,对
照组小鼠肝细胞损伤主要表现为:弥漫性肝小叶中
心带中间带肝细胞气球样变伴小叶中心管肝细胞胞
浆凝聚 ,可见嗜酸性变和嗜酸性小体 ,肝细胞点状坏
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死 ,严重的炎症细胞浸润 ,肝中央静脉扩张 。陆英颗
粒各剂量组上述表现均明显减轻 ,其中高剂量组仅
可见个别肝小叶中心散在单个细胞气球样变及小点
状炎症细胞浸润。上述病变以 “ +”表示轻度损伤 ,
以 “ ++”表示中度损伤 ,以 “ +++”表示重度损
伤 ,以 “ ±”表示正常;炎症修复以 “ +”表示阳性;以
“ -”表示阴性 ,则结果见表 6。
表 6　陆英颗粒对小鼠肝组织病理变化的影响(x±s)
组别 肝细胞变性 中央静脉扩张 肝细胞坏死 炎症修复
空白组 ± ± ± -
对照组 ++～ +++ ++～ +++ +++ -
联苯双酯 +～ ++ + ±～ + +
陆英颗粒低 ++ ++ ++ +
陆英颗粒中 ++ + +～ ++ +
陆英颗粒高 + ±～ + + +
3　讨论与结论
在小鼠 CCl4急性肝损伤模型中 ,脂质过氧化是
其主要的肝损伤形成机制。 CCl4进入肝细胞后 ,在
肝微粒体酶和细胞色素 P450激活下生成自由基
· CCl3及 ·Cl,通过氢吸附而攻击内质网膜上的磷
脂分子 ,引发膜的脂质过氧化作用增强 , · CCl3继而
与膜脂质和蛋白质大分子进行共价结合引起膜结构
和功能完整性的破坏 , 使肝细胞损伤 , 细胞质内
ALT、AST渗入血液 ,导致血清 ALT、AST活性迅速升
高 。同时由于线粒体膜脂质溶解 ,影响线粒体结构
和功能 ,导致酶蛋白合成减少 ,造成酶的破坏 ,因而
影响代谢功能和能量的生成 , 致使肝细胞变性坏
死 [ 3] 。另外 , · CCl3与蛋白质共价结合也导致蛋白
质合成抑制和脂质分泌能力降低 (急性肝损伤时
TP、Alb、GLO及 A/G检测结果多无明显异常),加重
肝细胞的损伤 ,而脂质分泌能力降低导致肝细胞内
TG的蓄积 [ 4] 。 MDA是脂质过氧化作用的代谢产
物 ,其含量与脂质过氧化成正比 , SOD对机体的氧化
与抗氧化平衡起着至关重要的作用 ,机体的防御系
统抗氧化能力(AOC)强弱与健康程度存在着密切的
关系;由于· CCl3及 · Cl能够过度增强膜的脂质过
氧化作用导致肝细胞损伤 ,过度增强肝线粒体膜脂
质过氧化能导致硫代巴比妥酸反应物生成量急剧增
加 ,这将能导致肝组织 MDA含量增加而 SOD活性
降低[ 5] ,本文结果还表明 CCl4 中毒小鼠肝组织 T-
AOC(总抗氧化能力)降低 。 GSH是以半胱氨酸 、谷
氨酸与甘氨酸为原料的多肽物质 ,具有多种生理功
能 ,解毒功能是其中之一 ,很多能形成亲电子代谢产
物的化学毒物能直接或间接打击 GSH,使其耗竭 ,但
以较低剂量的 CCl4染毒时可出现肝脏 GSH含量代
偿性增高。也有人研究认为· CCl3还可抑制细胞膜
和微粒体膜上钙泵的活性 ,使 Ca2+内流增加 ,从而引
起细胞中毒死亡 [ 6] 。
本文研究结果表明:陆英颗粒能显著对抗 CCl4
致小鼠急性肝损伤导致的血清中 ALT、AST升高 ,减
轻 TG在 CCl4中毒小鼠肝组织内的蓄积和降低 MDA
的含量 ,提高 CCl4中毒小鼠肝组织 T-SOD的活力及
总抗氧化能力(T-AOC),亦能提高 CCl4中毒小鼠肝
细胞膜和微粒体膜的 Ca2+-ATPase的活性 , 减少
GSH代偿性增高的程度;病理结果也表明陆英颗粒
对肝细胞损伤具有明显的保护作用;并且在不同剂
量的陆英颗粒之间存在较明显的量效关系。
本研究还表明本模型对小鼠血清 TP、Alb、GLO
及 A/G、TG无明显影响。
综上所述 ,陆英颗粒对 CCl4致小鼠急性肝损伤
有明显的保护作用 ,其保肝作用可能与陆英颗粒中
有效成分对抗脂质过氧化 、保护肝线粒体和提高肝
细胞膜和微粒体膜钙泵的活性有关 。说明陆英颗粒
可能会有较好的应用前景 。
参　考　文　献
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