全 文 ：含羞草总黄酮对四氯化碳致小鼠
急性肝损伤的保护作用
伍小燕 , 唐爱存
(广西中医学院第一附属医院 , 广西 南宁 , 530023)
　　摘　要:目的　研究含羞草总黄酮(T FM)对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法　用四氯化碳建立小
鼠肝损伤模型 ,相应药物灌胃后测定小鼠血清ALT 、AST 的活性 ,血清白蛋白(Alb)含量以及总抗氧化能力(T-AOC);并测定
肝匀浆丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性 ,同时观察肝脏组织病理学变化。结果　与模型对照组相比 ,含羞
草总黄酮(T FM)各剂量组 ALT 、AST 和M DA含量均明显降低(P<0.05或 P<0.01), Alb含量和 T-AOC活性均明显增加(P
<0.05或 P<0.01), SOD 活力明显增强(P<0.05或 P<0.01)。结论　含羞草总黄酮(TFM)能明显改善肝组织病理损伤程
度 ,对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤具有明显的保护作用。
关键词:含羞草总黄酮;肝损伤;四氯化碳;CCl4
中图分类号:R 575　　文献标识码:A　　文章编号:1672-2353(2010)19-0009-03
Protective effects of total flavonoids of Mimosa
pudica L on CCl4-induced acute liver injury in mice
WU Xiao-yan , TANGAi-cun
(First Af filiated Hospital of Guangx i Medical College , Nanning , Guang xi , 530023)
　　ABSTRACT:Objective　To study the protective ef fect of total f lavonoids from Mimosa pudica
L on CCl4-induced acute liver injury in mice.Methods　A liver injury model was induced by admin-
ist ration of carbon tet rachloride(CCl4)into mice.After the administ ration of drug , the activities of
serum alanine aminot ransferase (ALT)and aspate aminot ransferase(AST)were tested;the activi-
ties of serum albumin and total antioxidant capabili ties(T-AOC)were mearsured , the contents of
malondialdehyde (MDA)and the activity of superoxide dismutase(SOD)in hepatical tissues in mice
w ere also mearsured , and hepat ic pathological tissue w ere observed.Results　Compared with the
model g roup , the contents of ALT , AST and MDA were obviously decreased(P<0.05 or P <0.
01), the activities of Alb and T-AOC were obviously increased(P <0.05 or P <0.01), and the
SOD act ivity w as obviously improved (P <0.05 or P <0.01).Conclusion　By observation of
patholog ical slices , TFM could improve hepatic pathological changes distinct ly.TFM could protect
the acute hepatic injury induced by CCl4 in mice.
KEY　WORDS:total flavonoids of M imosa pudica L ;liver injury ;CCl4
　　含羞草为豆科含羞草属植物含羞草(M imosa
pudica L)的全草 ,别名知羞草 、怕羞草 、感应草 、惧
内草等。生于旷野 、山溪边 、草丛或灌木丛中 ,主
要分布于西南及福建 、广东 、广西 、海南等地。具
有凉血解毒 、清热利湿 、化痰止咳 、安神止痛之功
效 ,临床多用于急性肝炎 、支气管炎 、感冒 、小儿高
热疳积 、神经衰弱 、失眠 、结膜炎 、跌打损伤等
症[ 1] 。国外报道了含羞草中含有游离黄酮 、黄酮
苷 、酚酸类等成分[ 2-3] , 袁珂等[ 4]研究了含羞草中
化学成分 ,也证实含羞草中含有游离黄酮 、黄酮碳
苷 、黄酮苷等成分。黄酮类化合物具有抗脂质过
氧化 、抗衰老 、清除自由基 、抗菌抑菌 、增强免疫力
等作用。本实验探讨了含羞草总黄酮对四氯化碳
所致小鼠急性肝损伤的保护作用 ,为进一步开发
收稿日期:2010-06-20
2010 年第 14卷第 19 期 实 用 临 床 医 药 杂 志
Journal of Clinical Medicine in Practice · 9 ·
应用含羞草总黄酮提供实验依据。
1　材料与方法
1.1　药品和试剂
含羞草饮片(经广西中医学院一附院药学部
鉴定),含羞草总黄酮采用最佳提取工艺提取[ 5] ;
四氯化碳(CCl4), 广东合山化工厂产品 ,分析纯 ,
批号 20091228;联苯双酯滴丸:浙江医药股份有
限公司新昌制药厂 , 批号 091106;AST 、ALT 、
Alb 、T-AOC 、MDA 、SOD检测试剂盒均购自南京
建成生物工程研究所 。
1.2　实验动物
昆明种小鼠 , 60只 , SPF 级 ,雌雄各半 ,体质
量(20±2)g , 由广西医科大学实验动物中心提
供。试验动物生产许可证:SCXKG 桂 2003-
0003 , 试验动物使用许可证:SYKG 桂 2003-
0005 。
1.3　主要仪器
可见光分光光度计:上海精密科学仪器有限
公司 , 型号 722S;电子天平:Starto rius 公司 ,
BP190S;高速冷冻离心机:上海安亭科学仪器
厂 ,型号 TGL-16G-A;三用电热恒温水箱:北京
长源实验设备厂 ,型号 SHH.W21.Cr600。旋转
蒸发仪:上海亚荣生化仪器厂 , 型号 RE-52AA;
WA-812型微波提取仪;DZF -250 型微波真空
干燥箱。
1.4　方法
取昆明种小鼠 60只 ,随机分成 6组 ,每组 10
只 ,即:正常对照组 、CCl4 模型组 、联苯双酯(150
mg/kg , BPDC)阳性对照组 , 含羞草总黄酮高 、
中 、低剂量组 ,各组的剂量分别为 400 、200 、100
mg/kg 。正常对照组和CCl4 模型组用 0.02 mL/g
的给药容量生理盐水灌胃 ,给药组小鼠灌胃相应
药物 ,按 0.02 mL/g 灌胃给药 ,每日 1次 ,共 7 d。
末次给药后 1 h , 正常对照组除外 ,其余各组皮下
注射 0.1%CCl4花生油(0.01 mL/g)。禁食不禁
水 16 h后 ,摘眼球取血 ,分离血清 ,取血后立即脱
颈处死小鼠 ,剖取肝脏 ,在肝右中叶相同部位取
0.1 g肝组织 ,放入置有生理盐水的匀浆器中 ,在
冰浴中制备成 100 g/L 肝匀浆。按试剂盒说明测
定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的
活性 、血清白蛋白(Alb)含量以及总抗氧化能力
(T-AOC);肝匀浆丙二醛(MDA)含量 、超氧化物
歧化酶(SOD)的活性。取肝脏左叶相同部位 ,用
10%甲醛溶液固定 ,作病理组织学检查 , HE 染色
后在显微镜下观察肝组织病理改变 。
2　实验结果
2.1　含羞草总黄酮对小鼠血清ALT 、AST 的
影响
与模型组比较 ,含羞草总黄酮各剂量组能显
著降低小鼠血清 ALT 、AST 活性(P <0.01), 表
明含羞草总黄酮各剂量组对 CCl4 致小鼠肝损伤
均有显著保护作用。小鼠血清 ALT 、AST 活性变
化见表 1。
表 1　小鼠血清 AST、ALT的活性变化( x±s , n=10)
组别 剂量(mg/kg) ALT AS T
空白对照组 - 42.38±11.03 151.61±27.36
模型组 - 251.11±20.82■■ 226.31±30.81■■
阳性组对照组 150 97.16±13.46＊＊ 168.08±22.15＊＊
含羞草总黄酮
高剂量 400 56.25±10.53＊＊ 161.06±22.11＊＊
中剂量 200 66.55±10.37＊＊ 175.67±28.79＊＊
低剂量 100 72.97±13.09＊＊ 186.29±22.45＊＊
　　　注:与空白组比较 , ■■P<0.01;
　与模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01。
2.2　含羞草总黄酮对小鼠血清Alb含量以及
T-AOC的影响
与模型组比较 ,含羞草总黄酮高 、中剂量组能
显著增加小鼠血清 Alb含量和 T-AOC 水平(P <
0.05或 P<0.01), 表明含羞草总黄酮能增加肝
组织中总抗氧化能力 ,结果见表 2。
表 2　小鼠血清 Alb含量以及 T-AOC活性的变化
( x±s , n=10)
组别 剂量(mg/kg) Alb T-AOC
空白对照组 - 0.68±0.21 2.02±0.42
模型组 - 0.33±0.06■■ 0.67±0.16■■
阳性组 150 0.62±0.21＊＊ 1.89±0.41＊＊
含羞草总黄酮
高剂量 400 0.61±0.22＊＊ 1.78±0.42＊＊
中剂量 200 0.52±0.16＊ 1.20±0.33＊＊
低剂量 100 0.39±0.06 0.81±0.21＊
　　　注:与空白组比较 , ■■P<0.01 ,
　与模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01。
2.3　含羞草总黄酮对肝匀浆 MDA 含量和 SOD
活性的影响
与模型组比较 ,含羞草总黄酮各剂量组能显
著降低肝匀浆 MDA含量(P <0.01), 增加超氧
化物歧化酶(SOD)的活性(P<0.01), 上述作用
·10· 实 用 临 床 医 药 杂 志 第 14 卷
呈现剂量依赖性 ,结果见表 3。
表 3　小鼠肝脏 MDA含量和 SOD 活性的变化( x ±s , n=10)
组别 剂量(mg/kg) MDA SOD
空白对照组 - 10.06±1.77 166.38±29.19
模型组 - 31.18±5.10■■ 108.74±20.31■■
阳性组 150 9.69±2.30＊＊ 156.05±20.72＊＊
含羞草总黄酮
高剂量 400 8.77±1.95＊＊ 152.51±22.53＊＊
中剂量 200 9.76±2.25＊＊ 146.41±24.22＊＊
低剂量 100 11.87±2.47＊＊ 139.03±18.20＊＊
　　　注:与空白组比较 , ■■P<0.01 ,
　与模型组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01。
2.4　含羞草总黄酮对肝损伤小鼠肝组织病理
变化的影响
观察结果显示 , NC组肝小叶结构正常 ,无肿
胀 ,无明显水肿 、脂肪变性 ,肝小叶内及汇管区无
炎细胞浸润 、无纤维结缔组织增生;模型组肝小叶
结构紊乱不清 ,肝细胞明显肿胀 ,体积增大 ,广泛
水肿变性及气球样变性 ,小区出现肝细胞片状坏
死伴多量炎细胞浸润 ,汇管区大量炎细胞浸润及
明显纤维结缔组织增生;BPDC 组和含羞草总黄
酮高 、中剂量组均无明显坏死 ,小鼠肝小叶病理组
织变化见图 1。
图 1　小鼠肝小叶病理组织变化　　HE , 200倍
A.正常对照组;B.模型组;C.阳性对照组;D.低剂量组;E.中剂量组;F.高剂量组
3　讨　论
肝细胞损伤时 ,其胞质液成份 ALT 、AST 释
放 ,血清 ALT 、AST 活性增高 ,且其活性的高低在
一定范围内可反映肝细胞损伤程度的大小[ 6-7] 。
MDA是体内自由基攻击脂质产生脂质过氧化物
的代谢最终产物 ,并可对细胞产生进一步破坏作
用 ,不仅是反映脂质过氧化的敏感指标 ,还可间接
反映出细胞损伤的程度 。T-AOC 指的是机体氧
化防御体系的整体状态 ,该防御体系有酶促和非
酶促两个体系 ,主要通过三条途径发挥防御氧化
的作用:一是消除自由基和活性氧以免引发脂质
过氧化;二是分解过氧化氢物 ,阻断过氧化链;三
是除去起催化作用的金属离子 。
黄酮类化合物具有抗脂质过氧化 、抗衰老 、清
除自由基 、抗肿瘤 、降低血脂 、抗菌抑菌 、增强免疫
力等多种生物活性[ 8] , 对动物实验性肝损伤有保
护作用[ 9] 。本实验研究显示 ,含羞草总黄酮能明
显降低损伤小鼠血清 ALT 、AST 活性 ,增加血清
Alb含量 、T-AOC 水平 ,降低肝匀浆 MDA 含量 ,
增加超氧化物歧化酶(SOD)的活性 。其机制可能
是通过增加 SOD 、T-AOC 的活性 ,加快体内自由
基的清除 ,从而抑制 MDA 的产生。
(下转第 20面)
·11·第 19 期 伍小燕等:含羞草总黄酮对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用
3　讨　论
紫杉醇的抗癌疗效可靠 ,其机制主要是通过
结合到微管蛋白上 ,促进微管蛋白的聚合 ,并阻滞
其解聚成亚单位 , 从而冻结有丝分裂的纺锤
体[ 5] , 使细胞停滞于 G2M 期 ,诱导细胞凋亡[ 6] ,
本实验结果与之一致 ,但紫杉醇可引起过敏 ,血管
刺激 ,心脏毒性及神经毒性等 ,使其应用受到限
制。现在 ,大量体内外实验及临床研究表明 ,黄芪
多糖具有显著增强机体免疫 、扩张冠状动脉 、改善
心脏功能 、增强抗氧化能力 、防止脂质过氧化 、改
善肾脏功能 、防止肝糖原减少 、抗衰老等多种功能
及药理功效[ 7] 。近年来 ,有关黄芪多糖抗肿瘤方
面的研究较多 ,多数认为可能与黄芪多糖的免疫
增强作用有关:① 抑制肿瘤细胞的生长及使
TNF-α和 IFN-γ活性升高。 ②对肿瘤细胞周期 、
血管生成 、凋亡相关蛋白 Bcl-2端粒酶活性等产
生影响。 ③黄芪多糖和其他化疗药物联合应用时
具有协同抗肿瘤作用[ 8] 。
本实验以黄芪多糖为研究对象 ,观察其对胃
癌细胞 MKN45的体外生长抑制作用发现:黄芪
多糖能抑制 MKN45 细胞的生长增殖 ,在一定范
围内呈浓度和时间依赖性 ,当浓度<2.0 mg/mL
时作用很弱 ,浓度 >5.0 mg/mL 时作用明显增
强 ,同时随着作用时间的延长 ,抑制作用增强 ,表
明黄芪多糖对肿瘤细胞有直接杀伤作用 ,同时诱
导肿瘤细胞凋亡 ,可将细胞周期阻滞于 G0/G1
期 ,但黄芪多糖对肿瘤细胞的抑制作用显著弱于
紫杉醇。
人Bcl-2 是一个定位于核膜 、部分内质网和
线粒体外膜的癌蛋白 ,可保护细胞免于凋亡 ,使细
胞寿命延长[ 9] , 在成熟的细胞或处于将被消除阶
段的细胞中 , Bcl-2 的表达下降 ,其同源基因 Bax
可拮抗 Bcl-2的保护效应而使细胞趋于凋亡。研
究表明 ,黄芪多糖和紫杉醇均可下调 Bcl-2蛋白
表达 ,并上调Bax 蛋白表达;表明黄芪多糖和紫杉
醇诱导胃癌细胞凋亡的分子作用可能是通过上调
促凋亡蛋白和下调抑制凋亡蛋白实现的 ,但黄芪
多糖虽然能诱发肿瘤细胞凋亡及下调 Bcl-2蛋白
的表达 、上调Bax 蛋白的表达 ,然而作用效果却显
著弱于紫杉醇 ,说明诱发肿瘤细胞凋亡是黄芪多
糖抗肿瘤的一条途径 。
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(上接第 11面)
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·20· 实 用 临 床 医 药 杂 志 第 14 卷