全 文 ：2015 年 01 月(上)
收稿日期:2014 － 07 － 30;修回日期:2014 － 08 － 31
基金项目:长白山动植物资源利用与保护吉林省高校重点实验
室培育项目(吉农院合字［2013］第 S018 号)
作者简介:刁 磊(1982 －)，男，讲师，硕士，研究方向为新药
研究与开发，56179115@ qq． com．
通信作者:陈惠杰(1983 －)，女，讲师，硕士，研究方向为新药
研究与开发，154587699@ qq． com．
长柱金丝桃提取物对四氯化碳和酒精诱导
小鼠肝损伤的保护作用研究
刁 磊，陈惠杰
(吉林农业科技学院 制药工程学院，吉林 吉林 132101)
中图分类号:S884． 9;S865． 1 + 3;S856． 4 文献标识码:B 文章编号:1004 － 7034(2015)01 － 0151 － 03
关键词:长柱金丝桃;酒精;四氯化碳(CCl4) ;肝损伤;肝脏指数;保护作用
摘 要:为了研究长柱金丝桃提取物对四氯化碳(CCl4)和酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用，试验采
用白酒灌胃的方式建立小鼠急性酒精性肝损伤模型，腹腔注射 CCl4 建立小鼠急性肝损伤模型，检测
血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性、肝脏指数。结果表明:长柱金丝
桃乙酸乙酯部位组能极显著抑制 CCl4 肝损伤小鼠血清 ALT、AST 活性的升高(P ＜ 0． 01) ，长柱金丝
桃正丁醇部位组能显著抑制 CCl4 肝损伤小鼠血清 ALT、AST 活性的升高(P ＜ 0． 05) ，且两组均能显
著降低肝脏指数(P ＜ 0． 05);长柱金丝桃乙酸乙酯部位组能抑制酒精性肝损伤小鼠血清 ALT、AST活
性的升高(P ＜ 0． 05) ，且能降低肝脏指数(P ＜ 0． 05)。说明长柱金丝桃提取物对 CCl4 和酒精引起的
小鼠急性肝损伤具有保护作用。
金丝桃属植物在东北地区分布较少，作为药用植
物的仅有 2 种，即长柱金丝桃(Hypericum ascyron)和
乌腺金丝桃(Hattenuatum)。长柱金丝桃又名红旱
莲、湖南连翘，为藤黄科金丝桃属植物黄海棠的全草，
生于荒坡、山野、路边，我国东北地区及黄河、长江、珠
江流域均有分布 ［1］。金丝桃属植物的化学成分研究
结果表明，该属植物主要含有二蒽酮类(如金丝桃
素)、黄酮类(如金丝桃苷)、间苯三酚类(如贯叶金丝
桃素)和芳香酸类化合物等化学成分［2 － 3］，具有抗菌
消炎、收敛止血，以及治疗黄疸、肝炎及疮疖肿毒的
作用［4］。
本试验对长白山地区的长柱金丝桃进行提取、纯
化［5］，并对其不同极性部位进行抗四氯化碳(CCl4)
和酒精性肝损伤活性研究，以期为确定长柱金丝桃的
保肝、护肝物质提供理论依据。
1 材料
1． 1 试验动物
昆明种小鼠 140 只，雌雄各半，体重为(20 ±
2)g，由吉林市康乃尔药业提供。
1． 2 样品与主要试剂
长柱金丝桃，采自吉林农业科技学院左家校区山
上，对其净制，烘干，粉碎，备用;血清丙氨酸氨基转移
酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)测定试剂
盒，购自南京建成生物工程研究所;其他试剂均为分
析纯。
1． 3 主要仪器
日立半自动生化仪(型号为 KY2000) ，购自天津
开元医疗设备有限公司;电子分析天平(型号为
AB204 － N) ，购自上海梅特勒 －托利多仪器有限公
司;旋转蒸发仪(型号为 Ｒ206D) ，购自上海大颜仪器
有限公司;循环水式真空泵(型号为 SHB －Ⅲ) ，购自
上海预康科教仪器设备厂;高速台式离心机(型号为
TGL － 16C) ，购自上海安亭科学仪器厂;台式真空干
燥箱(型号为 DZG － 6000)，购自上海森信实验仪器
有限公司。
2 方法
2． 1 长柱金丝桃的提取与纯化
2． 1． 1 长柱金丝桃的提取 精密称取长柱金丝桃
50 g制成粗粉，80%乙醇浸泡过夜，溶剂的用量为
10 倍，于 80 ℃回流提取 1 h，提取 2 次，过滤并合并
滤液，浓缩，干燥，得长柱金丝桃提取物浓缩浸膏。
2． 1． 2 长柱金丝桃提取物的纯化 用水溶解长柱金
丝桃提取物浓缩浸膏，然后依次用石油醚、乙酸乙酯
和正丁醇萃取，分别得到石油醚层、乙酸乙酯层、正丁
醇层和水层，浓缩、减压真空干燥，得到不同萃取层干
151《黑龙江畜牧兽医》科技版
DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2015.0055
膏。长柱金丝桃提取物纯化的工艺流程见图 1。
图 1 长柱金丝桃提取物纯化的工艺流程
2． 2 分组与给药
2． 2． 1 试验动物分组 将 140 只小鼠随机分为
CCl4 肝损伤组和酒精性肝损伤组，每个模型组 70 只
小鼠，并设 7 个小组，每个小组 10 只小鼠(雌雄各
半) ，分别为空白对照组、模型对照组、阳性对照组
(水飞蓟素)、长柱金丝桃石油醚部位组、长柱金丝桃
乙酸乙酯部位组、长柱金丝桃正丁醇部位组、长柱金
丝桃水溶性部位组。
2． 2． 2 药物溶液的配制 分别称取乙酸乙酯干膏、
正丁醇干膏、石油醚干膏和水溶性干膏适量，用
0． 1%羧甲基纤维素钠溶液配制成浓度为 10 mg /mL
混悬液;另称取水飞蓟素适量，用纯化水配制成浓度
为2 mg /mL的溶液。
2． 2． 3 抗小鼠急性 CCl4 肝损伤试验 给药组按体
重 250 mg /kg灌胃给药，阳性对照组按体重 50 mg /kg
灌胃给药，空白对照组和模型对照组按体重
250 mg /kg灌胃给予纯化水，以上各组每日给药 1 次，
连续 7 d。于第 7 天给药后 6 小时，除空白对照组外，
其余组均按体重 10 mL /kg 腹腔注射 0． 2% CCl4 油
溶液，于 24 小时摘眼球取血(取血前禁食 16 h) ，分
离血清测定 ALT、AST活性，同时剖检取肝脏，称重后
计算肝脏指数。
2． 2． 4 抗小鼠急性酒精性肝损伤试验 给药组按体
重 250 mg /kg灌胃给药，阳性对照组按体重 50 mg /kg
灌胃给药，空白对照组和模型对照组按体重
250 mg /kg 灌胃给予纯化水，以上各组每日给药1 次，
连续 7 d。于第 7 天给药后 6 小时，除空白对照组外，
其余组均按体重给予 12 mL /kg白酒，于 12 h 后摘眼
球取血(取血前禁食 16 h)，分离血清测定 ALT、AST
活性，同时剖检取肝脏，称重后计算肝脏指数。
2． 3 检测指标
2． 3． 1 小鼠血清中 ALT 和 AST 活性的测定 采用
赖氏法按照相应试剂盒说明书测定 ALT 和 AST
活性。
2． 3． 2 小鼠肝脏指数的测定 取各组小鼠肝脏，称
重，计算肝脏指数。计算公式:肝脏指数(%)=(肝
脏重量 /体重)× 100 %。
3 结果与分析
3． 1 长柱金丝桃提取物对 CCl4 致小鼠急性肝损伤
的影响(结果见表 1)
表 1 长柱金丝桃提取物对 CCl4 致小鼠急性肝损伤
的影响(x ± s，n = 10)
组别
剂量 /
(mg·kg － 1)
动物
只数
ALT/
(U·L － 1)
AST/
(U·L － 1)
肝脏指数 /%
空白对照组 － 10 59． 17 ± 22． 68 149． 17 ± 54． 63 4． 77 ± 0． 56
模型对照组 － 10 260． 00## ± 80． 99 481． 17## ± 112． 18 5． 51## ± 0． 73
阳性对照组 50 10 142． 50* ± 17． 25 291． 50＊＊ ± 95． 12 5． 12＊＊ ± 0． 69
长柱金丝桃石油醚部位组 250 10 264． 67 ± 77． 07 492． 83 ± 159． 27 5． 40 ± 0． 49
长柱金丝桃乙酸乙酯部位组 250 10 170． 00＊＊ ± 62． 61 304． 17＊＊ ± 107． 26 5． 38* ± 0． 79
长柱金丝桃正丁醇部位组 250 10 225． 33* ± 89． 90 342． 50* ± 125． 89 5． 40* ± 0． 67
长柱金丝桃水溶性部位组 250 10 288． 33 ± 94． 06 483． 33 ± 154． 78 5． 67 ± 0． 61
注:与空白对照组比较，数据肩标 ##表示差异极显著(P ＜ 0． 01) ;
与模型对照组比较，数据肩标* 表示差异显著(P ＜ 0． 05) ，＊＊表示差
异极显著(P ＜ 0． 01)。
由表 1 可知:模型对照组与空白对照组比较血清
ALT、AST活性极显著升高(P ＜ 0． 01) ，说明急性肝损
伤模型制备成功;与模型对照组相比，长柱金丝桃乙
酸乙酯部位组血清 ALT、AST 活性极显著降低(P ＜
0． 01) ，长柱金丝桃正丁醇部位组血清 ALT、AST活性
显著降低(P ＜ 0． 05) ，说明长柱金丝桃乙酸乙酯部位
组和正丁醇部位组可以减轻 CCl4 导致的小鼠急性肝
损伤。与空白对照组比较，模型对照组肝脏指数极显
著升高(P ＜ 0． 01) ;与模型对照组比较，长柱金丝桃
乙酸乙酯部位组和正丁醇部位组肝脏指数显著降低
(P ＜ 0． 05)。
3． 2 长柱金丝桃提取物对酒精致小鼠急性肝损伤的
影响(结果见表 2)
表 2 长柱金丝桃提取物对酒精致小鼠急性肝损伤
的影响(x ± s，n = 10)
组别
剂量 /
(mg·kg － 1)
动物
只数
ALT/
(U·L － 1)
AST/
(U·L － 1)
肝脏指数 /%
空白对照组 － 10 40． 83 ± 18． 50 104． 50 ± 75． 46 4． 55 ± 0． 44
模型对照组 － 10 83． 33# ± 41． 08 207． 83# ± 104． 60 5． 02# ± 0． 42
阳性对照组 50 10 64． 67* ± 30． 15 105． 83* ± 38． 63 4． 72＊＊ ± 0． 51
长柱金丝桃石油醚部位组 250 10 80． 50 ± 43． 05 198． 50 ± 95． 39 4． 98 ± 0． 45
长柱金丝桃乙酸乙酯部位组 250 10 69． 00* ± 28． 77 120． 83* ± 72． 14 4． 75* ± 0． 44
长柱金丝桃正丁醇部位组 250 10 76． 00 ± 27． 21 190． 00 ± 94． 08 5． 00 ± 0． 39
长柱金丝桃水溶性部位组 250 10 79． 67 ± 50． 19 205． 83 ± 111． 96 4． 85 ± 0． 45
注:与空白对照组比较，数据肩标 #表示差异显著(P ＜ 0． 05) ;与
模型对照组比较，数据肩标* 表示差异显著(P ＜ 0． 05) ，＊＊表示差异
极显著(P ＜ 0． 01)。
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Heilongjiang Animal Science
and Veterinary Medicine № 01 2015
2015 年 01 月(上)
由表 2 可知:与空白对照组比较，模型对照组血
清 ALT、AST 活性显著升高(P ＜ 0． 05) ;与模型对照
组比较，长柱金丝桃乙酸乙酯部位组血清 ALT、AST
活性显著降低(P ＜ 0． 05)，说明长柱金丝桃乙酸乙酯
部位组可以减轻酒精导致的小鼠急性肝损伤。与空
白对照组比较，模型对照组肝脏指数显著升高(P ＜
0． 05) ;与模型对照组比较，长柱金丝桃乙酸乙酯部
位组肝脏指数显著降低(P ＜ 0． 05)。
4 结论
本试验以长白山地区长柱金丝桃为主要药材，对
其进行乙醇提取，经不同有机溶剂萃取获得长柱金丝
桃提取物的不同萃取部位，然后进行抗肝损伤保护作
用研究。CCl4 所致小鼠急性肝损伤试验结果表明，长
柱金丝桃乙酸乙酯部位组和正丁醇部位组可以减轻
CCl4 导致的小鼠急性肝损伤。酒精所致小鼠急性肝
损伤试验结果表明，长柱金丝桃乙酸乙酯部位组可以
减轻酒精导致的小鼠急性肝损伤。这为长白山地区
长柱金丝桃的应用奠定了理论基础。
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4 讨论
由本试验结果可以看出，板黄口服液对常见的几
种细菌均有很好的抑制作用，其中对鸡葡萄球菌的抑
制效果最佳，MIC为 125 mg /mL，对牛巴氏杆菌、禽巴
氏杆菌、鸡白痢沙门杆菌、肺炎克雷伯菌、牛大肠杆菌
的 MIC 均为 250 mg /mL，其体外抑菌效果与该制剂
的临床治疗效果基本一致。
目前，有关于采用试管二倍稀释法测定中草药
MIC的报道，但其观察结果易受药液自身色泽的影
响，本试验采用的杯碟法和琼脂稀释法最大限度地消
除了上述影响，提高了结果的可信度。
中药复方的用药原理在于君臣佐使的配伍及其
对机体的调理，因此在中药抑菌试验中应重视对复方
的研究。本试验研究了中药复方制剂在体外的抑菌
作用，取得了较为理想的效果，但对体内的抑菌作用
还需进一步研究。
中草药的抑菌作用主要是通过破坏菌体的细胞
膜、细胞壁，抑制蛋白质的合成、表达，或直接作用于
DNA结构阻碍其正常发挥功能，使细胞各项生命活
动受到影响［3 － 4］，从而影响微生物的正常生长和繁
殖［5 － 6］，最终导致菌体死亡［7 － 9］而发挥作用的。中药
复方是中医辨证论治理论精髓的具体体现，其所含有
的化学成分复杂，药理作用具有多靶点、多层次的特
点［10］，从而最大限度地达到从整体上治疗疾病的
目的。
参考文献:
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