全 文 ：西 南 园 艺 SouthwestHorticulture 2006年9月 第34卷第5期:9-12
枇杷花腐病病原菌的初步研究
肖 宇 1 崔远超 1 曾祥渝 1 窦彦霞 2
(1重庆市九龙坡区果树站,400051;2西南大学植物保护学院,重庆 400715)
摘 要:初步研究了枇杷花腐病在不同发病时期及不同组织的病原菌种类及其致病性,结果表明:(1)细菌不是引起花
轴维管束变褐的最初病原菌,它是在维管束变褐之后寄生上去,引起花轴表皮腐烂的病原菌。(2)灰葡萄孢菌是在花腐
病的中后期腐生上去的,应该不是引起花穗腐烂的关键性致病病原菌。(3)引起枇杷花腐病最初发病的病原可能与2种
真菌有关,一种是引起灰斑病的拟盘多毛孢菌(PestalotiaeriobofoliaDesm),另一种是长出粘孢团的真菌(尚待鉴定)。(4)
室外接种拟盘多毛孢菌的花穗发生明显花腐症状的比例显著高于对照,该菌可能是引起枇杷花腐的病原菌之一;而接
种粘孢团的处理与对照差异不明显,它可能不是引起花穗腐烂的关键性致病病原菌。
关键词:枇杷;花腐病;病原菌;致病性;真菌
中图分类号:S667.3+S436.67 文献标识码:A 文章编号:1008-1488(2006)05-009-04 收稿日期:2006-05-14
StudyonthePathogenofRotenDiseaseofLoquatFlower
XiaoYu1,CuiYuanchao1,ZenXiangyu1,andDouYanxia2
(1FruitStationofJiulongpoDistrict,Chongqing400051China;2ColegeofPlantProtection,SouthwestUniversity,
Chongqing400715China)
Abstract:(1)Bacteriumisnotthekeypathogenthatcausedvascularbundleturningbrownprimarily,becauseitcausedcuticle
rotenafterthevascularbundlebecomingbrown.(2)Botrytiscinereacameintobeinginthemiddleandlaterperiodsofthe
disease,soitmightnotbethekeypathogencausingtherotendisease.(3)Theinitialpathogen,whichfirstcausedtheroten
diseaseofloquatflower,mightberelatedtoPestalotiaeriobofolia(thepathogenofgrayspeckdisease)andanotherpathogen
sporodochia.(4)Thetwomainfungiwereinoculatedintheexperiment.Theresultsshowedthatflowerclusterinoculatedwith
Pestalotiaeriobofoliahadobvioussymptomofrotenflowerdiseaseanditsproportionarehigherthancontrol,soPestalotia
eriobofoliamightbeoneofthepathogenscausingtherotendiseaseofloquatflower.Thedisposalaftersporodochiainoculated
arenotobviousthanthecontrol.So,thepathogen,whichcanexcretesporodochia,mightnotbethekeypathogenoftheroten
diseaseofflower.
Keywords:Loquat;Rotendiseaseofflower;Pathogen
枇杷具有很高的经济栽培价值。重庆作为近年来
新发展起来的枇杷基地,枇杷面积已达1.319万hm2,
位列国内省区第五。随着重庆地区的枇杷基地陆续进
入投产期后,以大五星和龙泉一号为主的枇杷园花腐
病发生严重,并由此造成大幅减产,有的果园甚至绝
收,给枇杷生产带来相当大的威胁。由于目前对引起
枇杷花腐病的关键致病病原菌还不了解,很难针对其
进行有效防治。因此,分离鉴定引起枇杷花腐病的关
键致病病原菌,显得迫切重要。我们于2005年12月
至2006年12月期间,与西南大学植物病理研究室共
同开展了对枇杷花腐病致病病原菌的初步研究。
1 材料与方法
1.1病原菌的分离培养
1.1.1采样及材料处理
2004年12月21日、2005年10月24日及12月
7日共3次,在九龙坡区金凤镇枇杷示范园与西彭镇
枇杷示范园采集大五星及龙泉一号 2个品种上出现
的腐烂花穗。2004年12月21日采集的是发病中后
期的腐烂花穗,2005年 2次采集的是发病初期的
花穗。
将采集的腐烂花穗放入无菌透气纸袋,带回实验
室保存。选择小梗变黑,有腐烂迹象,变黑部向小梗基
部延伸,维管束变褐,但基部未变黑腐烂的标样。取发
病的花序小梗,用刀片将表皮毛和腐烂组织轻轻削
去,取变色小梗0.3cm×0.5cm的小片组织进行病原
菌的分离培养。
1.1.2真菌分离
将分离材料用75%酒精浸泡3～4s后,放入0.1%
升汞中30～60s进行表面消毒。然后依次放入3个盛
有无菌水的培养皿各清洗2～5min,用双层无菌滤纸
将组织上的水完全吸干,最后放入清水洋菜培养基中
9. .
培养,每个平板均匀放3～4个组织,25℃恒温培养。
当分离材料上长出的菌丝已扩展至培养基时,转移到
PDA培养基上培养纯化。
1.1.3细菌分离
将分离材料用 75%酒精浸泡 3～4s后,放入
0.1%升汞中30～60s进行表面消毒。然后依次放入3
个盛有无菌水的培养皿各清洗 2～5min,再用灭菌研
钵将材料捣碎成糊状,并静止30min。用玻璃棒蘸取
捣碎后的组织浸出液,并在NA平板上画线,30℃下
培养。1周后看有无细菌长出。
1.2病原菌的接种试验
根据植物病理学的理论,所有侵染性病害的诊断
与病原物的鉴定都必须按照柯赫氏法则来验证。按
照柯赫法则,在从感病植株上分离纯化出的病原菌,
进行纯培养后,要将纯培养接种到相同品种的健株上
的相同部位上,看是否表现出相同症状的病害,以测
定病原菌的致病性[1]。为对从大五星枇杷花腐病穗上
分离到的2种主要真菌进行进一步的鉴定,研究其对
枇杷花穗腐烂的致病作用,于2005年12月底在九龙
坡区进行了枇杷花腐病病原菌的接种实验。
1.2.1接种材料
为 2005年 12月初从九龙坡区大五星枇杷上采
集的花腐病初期病穗中分离、纯化出来的2种主要真
菌,一是引起灰斑病的拟盘多毛孢菌(Pestalotia
eriobofoliaDesm),二是一种形成粘孢团的真菌。
1.2.2接种方法
接种试验点2个,分别在金凤镇枇杷示范园和铜
罐驿镇倒石桥枇杷果园。接种时间分别在2005年12
月28日、29日。1个病原菌为1个处理,每处理重复
3次,每个接种点接种6株树。接种试验树品种为大
五星,选取树龄树势一致、大部分花穗还处在花蕾现
白即将开放的枇杷树,田间随机排列。每株树选取10
穗健康无病、即将开放的花穗作为接种穗,其中 5穗
接种病原菌,另5穗接种清水作为对照,每穗经疏花
后留3个支轴,在3个支轴上进行接种处理。
接种时,将试管中的病原菌纯培养连同培养基一
同取出,放于无菌的培养器皿中,将其切分成约
5mm×10mm的小块。接种时,将接种针在酒精灯上
消毒后,立即浸入酒精液中冷却,然后用接种针在花
轴上刺出明显伤口,挑取病原菌的小块,将其长菌丝
的一面贴于伤口之上,并用打湿了无菌水的棉条缠绕
在上面进行保湿。为保证接种穗不感染外界病原,以
及接种后水份不很快散失,接种后2d内将接种穗套
上塑料薄膜袋,用橡皮筋扎紧袋口,进行密封保湿和
环境隔离,2d后再将塑料袋换成白色纸袋。清水处
理与接种处理,同样要进行针刺、缠棉条保湿及套袋
处理。
1个月之后,去除纸袋对接种的试验穗所表现的
症状进行调查记录。
2 结果与分析
2.1细菌分离结果
2006年12月7日最后 1次采样,将其表皮毛和
腐烂组织完全清洗干净,对刚开始变色的维管束组织
进行分离,1周后全部平板上均无细菌长出,即未分
离培养出细菌菌落。由此可见,细菌不是引起维管束
变色的病原菌,只是引起腐烂的病原菌。而从该病害
发生发展的过程来看,病症最初的表现是维管束变
褐,花轴的腐烂现象发生在维管束变褐之后,引起花
轴发生病变的最初病原菌有可能就是引起维管束变
褐的病原菌。初步推断细菌不是最初引起花轴病变
的病原菌,它是在维管束变褐之后寄生上去,引起花
轴组织表皮腐烂的病原菌。
2.2真菌分离结果
2004年 12月底的样本中分离培养出来的病原
菌经显微镜镜检,以引起灰霉病的病原菌灰葡萄孢菌
(BortytiscinereaPers)为主。在保湿培养中,也观察到
该病原菌。但在后2次(2005年10月底和12月初)
采集的初发病花穗中,未分离到灰葡萄孢菌。由于后
2次是发病初期的样本,还未严重腐烂,结果未分离
到灰霉病的病原菌;而第1次采样时间偏晚,腐烂程
度很重,已属花腐病的发病晚期,则分离到了灰霉病
的病原菌。由此可以推断,灰霉病的病原菌灰葡萄孢
菌是在花腐病的中后期才腐生上去的,它应该不是引
起花穗腐烂的关键性致病病原菌。
2005年的 2次分离结果又略有不同,10月底所
采样本的分离物以引起灰斑病的拟盘多毛孢菌为主。
而12月7日所采样本的分离物主要有2种,一种仍
然是拟盘多毛孢菌,而另一种真菌则在平板上长出粘
孢团,它可能是某种病原菌的分生孢子器,由于平板
上这种粘孢团不容易成熟,其结构特征不显著,因此
目前还难以鉴定它是哪种病原菌的分生孢子器,需找
到合适的培养基,待其长出明显的结构特征,才能作
进一步鉴定。因此,从这2次的分离结果来看,拟盘
多毛孢菌为占主要群落的病原菌,第二次结果中占主
要群落的病原菌还新出现了一种长出粘孢团的病原
菌,初步认为,引起枇杷花腐病最初发病的病因可能
与这2种病原有关,但主要病因究竟是哪种真菌,还
西 南 园 艺 肖 宇,崔远超,曾祥渝,窦彦霞:枇杷花腐病病原菌的初步研究
10. .
2个接种试验点的调查表明,接种了拟盘多毛孢
菌的花穗不同程度地发生了变褐、变褐腐烂、变褐裂
口、变褐下陷及变褐干缩等症状(参见封三彩图)。除
变褐裂口外,其它几种症状都与田间花穗腐烂的病症
表现相同,因此将变褐、变褐软腐、变褐下陷及变褐干
缩等这几种病状表现归为发生了明显花腐病症的一
类,而略变褐的花穗只是较正常花轴的颜色有轻微的
变褐,但在后期并无进一步变化,因此将略变褐的归
于正常一类。金凤镇枇杷园接种拟盘多毛孢的花穗支
轴中,有33.43%的支轴表现出了明显的花腐症状,而
对照(接种清水)表现出明显花腐症状的只有8.88%;
倒石桥果园接种拟盘多毛孢的花穗有59.52%的表现
出明显花腐症状,对照为39.54%。2个试验点的结果
都表明接种了拟盘多毛孢菌的花穗发生明显花腐症
状的比例显著高于对照。因此初步推测,拟盘多毛孢
菌可能是引起枇杷花腐的关键性病原菌之一。
接种粘孢团的花穗支轴也有变褐、变褐腐烂、变
褐干缩等花腐的病症,但其所占比例很低,金凤镇试
验园中接种粘孢团的花穗中只有 8.89%的表现出明
显花腐病症,而清水对照表现明显花腐病症的为
15.56%,接种处理比对照还低;与此相似,倒石桥试验
园中接种了粘孢团的花穗中有16.28%的表现出明显
的花腐症状,而清水对照为23.81%。表明接种了粘孢
团处理的病变发生率并不高于对照,因此推测这种产
生粘孢团的病原菌可能不是引起花穗腐烂的关键性
致病病原菌。同时,从前面分离培养病原菌的试验来
看,这种病原菌是在第2次的病穗中分离得到的,它
可能是在发病的中期腐生上去,起到加重花轴变褐、
腐烂的作用。
3 讨论
以前的一些报道认为枇杷花腐病的病原菌是细
菌性的,和灰霉病性质的[1],但并没有对它们在花腐病
的整个动态发展过程中的所起的作用进行研究。从本
实验分离培养的结果来看,在发病初期的病变组织中
并未分离到引起灰霉病的灰葡萄孢菌,而只是在发病
中后期的病变组织中才分离到,这说明了灰葡萄孢菌
是在花腐病发展到中后期时才腐生上去的,它应该不
是引起花穗腐烂的关键性致病病原菌,它对枇杷花穗
腐烂所起的是次要作用。而细菌也只是在发生了腐烂
的组织上分离到,而在刚发生维管束变色的组织中则
未分离到,说明细菌只是引起花轴表皮腐烂的病原
菌,而不是最初引起花轴维管束变褐的病原菌。
试验还发现,枇杷花腐病的发生和发展是个动态
的过程,在病害的发生初期、中期及后期,其主要病原
菌种类有可能不同,且各种病原菌在病害的发生发展
过程中所起的作用也有所不同。因此需要进一步开展
相关试验,研究这种引起腐烂的细菌究竟是哪一类的
细菌,它和引起维管束变褐的病原菌,在整个枇杷花
穗腐烂的过程中,各自起到什么样的作用。
从发病初期的病穗中,分离出来的病原菌占主要
群落的有2种,一种是引起灰斑病的拟盘多毛孢菌,
另一种则是在平板上长出粘孢团的病原菌(待鉴定),
因此初步认为引起枇杷花腐病最初发病的病因可能
与这2种病原有关。而从对这2种真菌进行田间接种
的试验结果来看,接种拟盘多毛孢菌的花穗发生明显
花腐症状的病穗率明显高于清水对照,因此初步推
测,拟盘多毛孢菌可能是引起枇杷花腐的关键性病原
菌之一。但要最终确认,还需按柯赫氏法则,在接种表
现出相同症状后,从接种发病的植物上再分离到其纯
培养,看其性状与原来分离纯化得到的纯培养是否相
同[2]。本试验未能继续对接种的发病花穗分离纯培养。
有待今后进一步开展相关试验。接种粘孢团的花穗发
生明显花腐症状的病穗率并不高于清水对照,初步推
断这种产生粘孢团的病原菌不是在发病初期起关键
性致病作用的,它可能是在发病的中期腐生上去,起
到加重花轴变褐、腐烂的作用。
需作进一步的研究。
2.3病原菌接种试验结果
1个月后,去除纸袋对接种的试验穗所表现的症
状进行调查记录,两试验点调查结果见表1和表2。
接种
处理
正常
略
变褐
变褐
变褐
腐烂
变褐
裂口
变褐
下陷
明显花腐症
状总和※
拟盘
多毛孢
6.67 53.33 26.67 2.32 6.67 4.44 33.43
对照 66.67 24.44 4.44 4.44 0.00 0.00 8.88
粘孢 44.44 46.67 8.89 0.00 0.00 0.00 8.89
对照 68.89 15.56 15.56 0.00 0.00 0.00 15.56
表1 重庆市九龙坡区金凤镇枇杷园接种花腐病
病原菌的病变发生比例(%)
注:明显花腐病症状总和为变褐、变褐腐烂、变褐下陷的总和。
接种
处理
正常
略
变褐
变褐
变褐
腐烂
变褐
下陷
变褐
干缩
明显花腐症
状总和※
拟盘
多毛孢
14.28 26.19 0.00 7.14 16.67 35.71 59.52
对照 51.16 11.63 2.33 16.28 9.30 11.63 39.54
粘孢 69.76 13.95 2.33 4.65 0.00 9.30 16.28
对照 71.43 4.76 0.00 2.38 0.00 21.43 23.81
表2 重庆市九龙坡区铜罐驿镇倒石桥枇杷园接种
花腐病病原菌的病变发生比例(%)
注:明显花腐病症状总和为变褐、变褐腐烂、变褐下陷及变褐干缩
的总和。
西 南 园 艺 肖 宇,崔远超,曾祥渝,窦彦霞:枇杷花腐病病原菌的初步研究
11. .
本次接种试验的病原菌只是选取了可能引起维
管束变褐的 2种真菌,并未接种引起表皮腐烂的细
菌,或是进行复合接种。倘若要做系统全面的研究,
还应当从各个发病时期分离到的病原菌分别进行单
独接种,同时将几种病原菌进行复合接种,以观察这
些病原菌在整个花腐过程中各自的作用,及相互之间
是如何影响,造成最终的花穗腐烂的。
参考文献
[1]邓琼芳.枇杷主要病虫害的防治方法[J].四川农业科技,2004,
(8):31.
[2]许志刚,郑小波,李怀方,等.普通植物病理学[M].北京:中国农业
出版社,2000.
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
针对苹果花期冻害的疏花疏果方法
李兴敏
(河南省三门峡市园艺工作总站,472000)
近年来,苹果花期冻害给生产带来了很大的经济
损失,特别是对采取“以花定果”的果园可产生灾害性
危害,甚至局部出现绝收现象。对此,经过2年的观
察和试验,我们总结出针对苹果花期冻害的“及早疏
花序、及早疏幼果、适期迟定果”方法,收效甚好,现简
介如下。
1 及早疏花序
“及早”的含义不仅强调了仍要“疏花”,而且突出
说明要提早。即改变原来疏花的时间,把生产中安排
在花序分离时开始的疏花工作,提前到花序伸长时期
进行。而“疏花序”,是指改变原来的疏花朵为疏花序,
把原来的“以花定果”修正为“以花序定果”。因为根
据近年来花期冻害会对已进行“以花定果”疏花的果
园造成危害,而对未疏花的果园则不造成危害或危害
较轻的现象,我们通过多次调查分析,认为进行过疏
花的果园不耐低温的原因,主要是“以花定果”的疏花
措施对所保留的花朵造成了近距离的伤口,低温对伤
口的冷冻危害延伸影响到所保留的花朵或幼果,进而
造成脱落。为此,我们改进设计了整序疏留的疏花技
术措施,其要领是按照疏花疏果的总体要求,在需要
留果的位置上,把整个花序全部留用,其上的花朵
一个也不要疏除;对那些不需要坐果的花序,则整花
序疏除,一个花朵也不要留。本改进技术经试验收到
了较好效果,基本可以避免或减轻晚霜冷冻害对适期
开展疏花果园的危害。
2 及早疏幼果
变“以花定果”为“以花序定果”后,会使留用的花
序上着果很多,不能有效控制着果数量,因此,还需把
多余的幼果及时疏掉。其技术要领是当坐果稳定,预
计天气不会再出现较严重的冷空气(寒流)时,就要适
时开展疏果。一般在河南西部地区,疏果保险期应确
定在4月底5月初。过早,对再遭遇寒流天气有顾
虑;过迟,则会由于过量的幼果消耗营养,抑制随之而
来的花芽分化,降低下年产量,并影响已保留果实的
前期生长发育。因此,在已经考虑适期进行果实套袋
的因素的情况下,一般要求“及时疏幼果”工作在5月
上中旬结束。此次疏幼果,应在所保留的花序上仅留
用1个最大、最端正,未受病虫危害的果实。
3 适期迟定果
在前期进行的疏花疏果过程中,为了保险起见,
一般会多留用20%左右的幼果,这部分多保留的幼
果,到后来也是要疏除的。我们通过实践认为,定果
的时期应适当推迟。因为若过早完成定果,势必因时
间关系会加大不合格果品的留用数量,强调“迟定果”
主要是为了保证提高当年优质果品的比率。生产中
定果时间可推迟到6月底7月初。
欢迎订阅2007年《河南农业科学》
《河南农业科学》是河南省农业科学院主办的综合性农业科技期刊,主要报道粮食作物、经济作物、土壤肥料、植物保护、果
树蔬菜、畜牧兽医、特种种植及养殖等方面的研究成果和先进技术。多年来,深受省内外农业科技人员,农业院校师生,基层干部
和农民的喜爱,曾多次得到有关部门的奖励,连续被评为“全国中文核心期刊”、“全国优秀农业期刊”,连续获“河南省优秀科技
期刊一等奖”。2006年被评为“中国科技核心期刊”。为了进一步扩大信息量,满足多层次读者的需求,本刊将进一步突出创新
性、学术性、指导性;进一步加大对重大、重点项目以及基金项目、创新性成果的报道力度。同时,继续加强对科技新动态、生产
新动向、市场新需求的报道。
本刊为月刊,国际标准16开本,120页,彩色封面,每期定价5.00元,全年60元。各地邮局均可订阅,邮发代号:36-32。
如错过订期,可直接与本刊编辑部联系订阅。 地址:郑州市农业路1号 邮编:450002
E-mail:hnnykx@163.com hnny@chinajournal.net.cn 电话:0371-65739041 传真:0371-65712747
西 南 园 艺 SouthwestHorticulture 2006年9月 第34卷第5期
12. .