全 文 ：不同产地连钱草中三萜酸类及黄酮类成分的分析与
评价
王庆1 ,段金廒2 ,钱大玮3 ,孔铭3 ,杨念云3
(1宁夏药品检验所 , 宁夏 银川　750004;2 南京中医药大学 , 江苏 南京　210029;3 江苏省中医药研究院 , 江苏 南京　
210028)
摘要:目的　连钱草中化学成分分析及品质评价。方法　运用 HPLC-ELSD、固相萃取预处理等方法首次建立了连钱草
中三萜酸类 、黄酮类成分的分析测定方法。结果　不同产地连钱草中熊果酸与齐墩果酸的含量分析结果表明:江苏盱眙
产者含量高于安徽固始 ,其中熊果酸含量显著高于齐墩果酸 ,同产地野生品含量高于栽培品;不同产地 、不同来源样品中
黄酮类成分分析表明:黄酮含量差别较大 ,同产地野生品与栽培品含量无明显差异。 结论　以三萜酸及其主成分熊果
酸 、总黄酮及其主成分木犀草素和芹菜素多指标分析评价了不同产地 、不同来源连钱草的品质 , 对保证其药材质量 、指导
其栽培生产 ,以及相关制剂产品的质量控制具有重要意义和应用价值。
关键词:连钱草;化学成分;品质评价;三萜酸类;黄酮
中图号:R284.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1000-5005(2006)01-0044-03
　　连钱草为唇形科活血丹属植物活血丹 Gle-
choma longituba(NaKai)Kupr.的干燥地上部分 ,为
《中华人民共和国药典》(2005年版)一部收载品
种。该植物除西北部地区外 ,我国大部分地区有
分布 ,尤以江苏产量大 ,质量优 ,为江苏产地道药
材。因其具有利湿通淋 ,清热解毒 ,散瘀消肿之功
效 ,用于热淋 、石淋 、湿热黄疸等疾病的治疗[ 1] ,习
称为“苏金钱” 、“金钱草” ,入药配方或作为中药制
药的原料。文献报道连钱草含有黄酮类 、三萜类
以及挥发油 、无机盐等化学成分[ 2 ,3] 。本文较为
系统地对其所含主要成分三萜酸及黄酮类进行分
析测定和品质评价 ,为连钱草药材及其制剂产品
的检验 、质量控制提供分析方法与评价依据。
1　三萜酸类成分分析
连钱草中含有三萜酸类成分主要为熊果酸 ,
其次尚含有齐墩果酸 。本文采用HPLC-ELSD检
测器检测 ,首次建立连钱草中熊果酸 、齐墩果酸的
含量测定方法 ,结果显示该法灵敏 ,准确 ,重现性
好。
1.1　仪器 、样品及试药
Waters-2695型液相色谱仪(四元泵系统 ,自
动进样 、在线脱气系统), Alltech-2000型蒸发光
散射检测器 , Empower色谱工作站 。空气压缩机
(北京 ,中兴汇利),Millipore-Q纯水器 ,梅特勒百
万分之一及万分之一电子天平 。
熊果酸(批号:110742 -200314)、齐墩果酸
(批号:09-9803)对照品由中国药品生物制品检
定所提供 。甲醇为色谱纯 ,冰醋酸为分析纯 。
野生连钱草采自江苏盱眙县铁山寺附近 ,栽
培品采自盱眙县王店乡 ,依外观将采自安徽固始
县大别山附近连钱草老草 、嫩草称为红茎草 、青茎
草 ,采集时间均为 9月底。其它市售 6批药材由
南京同仁堂药厂提供 ,其中 3 批(批号:050430 、
050509 、050528)购自江苏盱眙县 , 4 批(批号:
050318 、050319 、05424 、0506124)购自安徽固始县。
药材均由段金廒博士鉴定为唇形科植物活血丹
Glechoma longituba(NaKai)Kupr.的干燥地上部分 。
收稿日期:2005-10-15;修稿日期:2005-11-09
基金项目:江苏省科技厅科技“三药”攻关项目(BE2003055)
作者简介:王庆(1974-),女 ,宁夏银川人 ,宁夏药品检验所主管药师。 ＊通讯作者:025-85811116
—44— 南京中医药大学学报 2006 年 1月第 22 卷第 1 期JOURNALOF NANJINGTCMUNIVERSITY Vol.22 No.1 Jan.2006
DOI :10.14148/j.issn.1672-0482.2006.01.015
1.2　方法与结果
1.2.1　色谱条件及系统适应性
色谱柱:汉邦 Lichrospher5-C18柱(4.6 mm×
250 mm ,5μm),柱温:30℃,流动相:甲醇∶水∶冰醋
酸(83∶17∶0.1), 流速:1.0 mL/min , ELSD 检测器
漂移管温度:72℃,气体流速 1.9 L/min。理论塔
板数按熊果酸 、齐墩果酸峰计算应不低于 20 000。
1.2.2　对照品溶液的配制
精密称取减压干燥至恒重的熊果酸 、齐墩果
酸对照品适量 ,制成浓度为1.409 2 mg/mL , 0.263
5 mg/mL 的对照品溶液 。
1.2.3　样品处理
取本品粉末约 2 g(过 40目筛),精密称定 ,置
索氏提取器中 ,加氯仿 100 mL ,加热回流提取至
近无色(6 h),回收溶剂 ,残渣加甲醇溶解 ,移至 10
mL 量瓶中 ,用甲醇定容至刻度。
1.2.4　方法考察
1.2.4.1　线性关系的考察
取上述对照品溶液分别进样不同体积 ,以上
述HPLC色谱条件测定 ,以浓度的常用对数为横
坐标 ,以峰面积的常用对数为纵坐标 ,绘制标准曲
线 ,得熊果酸的回归方程为:lgA =1.66lgC +
4.04 , r=0.999 2 ,结果表明熊果酸在 4.227 6 ～
42.276 0 μg范围内呈良好线性关系 。齐墩果酸的
回归方程为:lgA=1.63lgC+5.44 , r=0.999 4 ,齐
墩果酸在 0.790 5 ～ 7.905 0μg 范围内呈良好线性
关系 。
1.2.4.2　精密度试验
取对照品溶液按上述 HPLC 色谱条件连续进
样6 次 ,测定各峰面积 ,计算熊果酸 、齐墩果酸
RSD 分别为 2.7%、2.8%。
1.2.4.3　重复性试验
取同一批药材精密称取 5份 ,按上述方法测
定 ,得熊果酸的平均含量为 0.23%, RSD 为
1.6%;齐墩果酸的平均含量为 0.02%, RSD 为
2.2%。
1.2.4.4　稳定性试验
取连钱草药材供试品溶液 ,在室温放置 0 ,2 ,
4 ,8 ,12 ,24 h后分别进样 ,以上述色谱条件测定 ,
计算两者峰面积值 , RSD 分别为 2.6%、3.2%。
结果表明供试品溶液在 24 h之内稳定 。
1.2.4.5　回收率试验
取连钱草药材 1 g ,精密称定 ,另外精密吸取
浓度为 1.028 0 mg/mL 熊果酸对照品溶液 、浓度
为0.102 4 mg/mL齐墩果酸对照品溶液各 1 mL ,
分别加入每份样品中 ,照供试品溶液的制备方法
制得溶液 ,测定 ,计算回收率 ,熊果酸的平均回收
率为 95.69%, RSD 为 2.8%(n=6),齐墩果酸的
平均回收率为 94.71%, RSD 为 2.9%(n=6)。
1.2.5　样品测定
取不同连钱草药材按上述制备方法制得供试
品溶液 ,在上述 HPLC 色谱条件下进样 20 μL 测
定 ,按外标两点法对数方程计算 ,结果见表 1。
表 1　连钱草药材中熊果酸 、齐墩果酸的含量
测定结果(n=3)
产地 样品名称 熊果酸含量(%) 齐墩果酸(%)
江苏盱眙 栽培品 0.263 0.018
野生品 0.326 0.032
050430 0.170 0.013
050509 0.213 0.020
050528 0.196 0.017
安徽固始 红茎草 0.247 0.017
青茎草 0.234 0.016
050318 0.252 0.025
050319 0.167 0.014
050424 0.246 0.027
0506124 0.250 0.033
2　黄酮成分木犀草素 、芹菜素的分析
连钱草的化学成分研究表明其含有丰富的黄
酮[ 2] 。本文采用 HPLC -DAD检测器检测 ,并通
过固相萃取(SPE)预处理 ,纯化了样品 ,优化了色
谱条件[ 4] ,首次建立连钱草中木犀草素 、芹菜素的
含量测定方法 ,同时依据文献对总黄酮进行了测
定[ 5] 。
2.1　仪器 、样品及试剂
996型二极管阵列检测器 ,其它仪器同 1.1。
SUPELCO C18固相萃取小柱(3 mL)。
木犀草素 、芹菜素对照品由江苏省中医药研
究院中药化学室杨念云博士提供(归一化法测定
含量达 98%以上)。乙腈为色谱纯 ,磷酸为分析
纯。药材来源同1.1。
2.2　方法与结果
2.2.1　色谱条件及系统适应性
色谱柱:汉邦 Lichrospher5-C18柱(4.6 mm×
250 mm ,5μm),柱温:30℃,流动相:乙腈∶0.5%磷
酸水(28∶72),流速:1.0 mL/min ,检测波长:340
nm 。理论塔板数按木犀草素 、芹菜素计算应不低
于 10 000。
2.2.2　对照品溶液的配制
分别精密称取减压干燥至恒重的木犀草素 、
—45—王庆 , 等:不同产地连钱草中三萜酸类及黄酮类成分的分析与评价　第 1期
芹菜素对照品适量制成浓度为 102.5μg/mL、75.0
μg/mL的混合对照品溶液 。
2.2.3　样品处理
取本品药材粉末约 2.5 g(过 40目筛),精密
称定 ,精密加入70%甲醇50 mL ,加热回流 1 h ,放
冷 ,用 70%甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,精
密量取续滤液 30 mL ,蒸干 ,加 40%甲醇 2 mL 溶
解 ,以 1.5 mL/min流速通过预活化好的固相萃取
小柱 ,用 40%甲醇 10 mL洗脱 ,弃去 ,再用 60%甲
醇洗脱 ,收集洗脱液 5 mL 置容量瓶中 ,作为供试
品溶液。
2.2.4　方法考察
2.2.4.1　线性关系的考察
取上述对照品溶液分别进样不同体积 ,以上
述HPLC色谱条件测定 ,以浓度为横坐标 ,以峰面
积为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,得木犀草素的回归方
程为:A =3.11×106C-1.09×105 , r =0.999 9 ,
芹菜素的回归方程为:A =4.09×106C -1.15×
105 , r =0.999 9 , 结果表明木犀草素在 0.308 ～
2.563 μg ,芹菜素在 0.225 ～ 1.875 μg 范围内呈良
好线性关系。
2.2.4.2　精密度试验
取对照品溶液按上述 HPLC 色谱条件连续进
样6次 ,测定各峰面积 ,两者 RSD 均为 1.2%。
2.2.4.3　重复性试验
取同一批药材精密称取 5份 ,按上述方法测
定 ,得木犀草素的平均含量为 0.049 5 mg/g , RSD
为3.79 %,芹菜素的平均含量为 0.046 0 mg/g ,
RSD 为3.47%。
2.2.4.4　稳定性试验
取连钱草药材供试品溶液 ,在室温放置 0 ,2 ,
4 ,8 ,12 ,24 h后分别进样 ,以上述色谱条件测定 ,
峰面积值的 RSD 分别为 2.6 %、2.5%。结果表
明供试品溶液在 24h之内稳定 。
2.2.4.5　回收率试验
取已知含量的连钱草药材 1 g ,精密称定 ,另
外精密吸取一定浓度的木犀草素 、芹菜素混合标
准品溶液 0.7 mL ,分别加入每份样品中 ,照供试
品溶液的制备方法制得溶液 ,测定 ,计算回收率 ,
木犀草素的平均回收率为 94.20%, RSD 为
0.65%,芹菜素的平均回收率为 94.13%, RSD 为
0.69%(n=6)。
2.2.5　样品测定
取不同连钱草药材按 2.2.3制备方法制得供
试品溶液 ,按 2.2.1“HPLC 色谱条件下”进样 30
μL测定 ,按外标两点法计算 ,结果见表 2。
表 2　连钱草药材中木犀草素 、芹菜素
的含量测定结果(n =3)
产地 样品名称 木犀草素/mg·g-1 芹菜素/mg·g -1
江苏盱眙 栽培品 0.04 0.05
野生品 0.05 0.05
050430 0.02 0.02
050509 0.14 0.07
050528 0.04 0.04
安徽固始 红茎草 0.01 0.01
青茎草 0.01 未检出
050318 0.01 0.01
050319 0.03 0.02
050424 未检出 未检出
0506124 0.04 0.04
3　讨论
(1)熊果酸和齐墩果酸均属三萜酸 ,结构相
似 ,在植物中多同时存在 ,用薄层及比色法测定 ,
容易产生干扰 ,建立 HPLC-ELSD法测定含量 ,可
消除末端吸收的影响 。测定结果准确可靠 ,快速 ,
灵敏 ,重现性好 。
(2)经固相萃取预分离 ,解决了前处理的繁琐
操作 ,纯化了样品 ,优化了色谱分离条件 ,使测定
结果准确可靠 ,快速 ,灵敏 。
(3)不同产地连钱草中熊果酸与齐墩果酸的
含量分析结果表明:江苏盱眙产连钱草两者含量
高于安徽固始药材 ,其中熊果酸含量显著高于齐
墩果酸 ,同产地野生品含量高于栽培品 。黄酮类
成分分析结果表明:不同产地连钱草中黄酮含量
差别较大 ,同产地野生品与栽培品含量无明显差
异。
(4)以三萜酸及其主成分熊果酸 、总黄酮及其
主成分木犀草素和芹菜素多指标分析评价了不同
产地 、不同来源连钱草的品质 ,对保证其药材质
量 、指导其栽培生产 ,以及相关制剂产品的质量控
制具有重要意义和应用价值。
参考文献:
[ 1]国家药典委员会.中华人民共和国药典·2005 年版一
部[ M] .北京:化学工业出版社 , 2005.117 , 57(附录).
[ 2] 中华本草编委会.中华本草[ M] .上海:上海科学技术
出版社 , 1998.7 , 6058.
[ 3] 杨念云 ,段金廒 , 李萍 ,等.连钱草中的总黄酮类化学成
分[ J] .中国药科大学学报 , 2005 , 36(3):210.
[ 4] 祝德秋 ,罗启剑 , 崔岚 ,等.连钱草中总黄酮的含量测定
[ J] .药学服务与研究 , 2003 , 3(1):62.[ 5]黄齐慧 , 陈小英.不同采收期对连钱草中总黄酮的影
响[ J] .国际医药卫生导报 , 2004 , 10(18):160.
(编辑:李伟东)
—46— 南京中医药大学学报 2006年 1 月第 22卷第 1 期