全 文 ：中国药物应用与监测 2008年第5卷第3期
论 著
藤茶双氢杨梅树皮素对实验性慢性肝损伤的保护作用
郑作文 1，胡远燕 1，2（1广西中医学院，南宁，530001；2海南大学公共实验中心，海口，570228）
摘要 目的：探讨从藤茶提取的双氢杨梅树皮素（APS）对慢性肝损伤的保护作用。方法：采用四氯化碳（CCl4）建立小鼠慢性肝损
模型，并给予 APS观察其对实验鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT），天门冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，总蛋白（TP），白蛋白
（ALB），透明质酸（HA）含量和肝组织羟脯氨酸（HyP）含量的影响及肝组织病理改变的影响。结果：APS明显降低血清ALT，
AST活性，血清HA含量和肝组织HyP含量，明显增高血清TP和ALB含量，同时可减轻实验鼠肝组织病理改变的程度。结论：
APS对CCl4所致实验性慢性肝损伤具有明显的保护作用。
关键词 双氢杨梅树皮素；四氯化碳；慢性肝损伤
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1672-8157（2008）03-0012-03
StudyonprotectiveefectofAPSonchronicliverinjuryinwistarrats
ZHENGZuo-wen1,HUYuan-yan1,2(1GuangxiColegeofTraditionalChineseMedicine,Nanning,530001;2PublicLabCenterofHainanUni-
versity,Haikou,570228)
ABSTRACT Objective:ToinvestigatetheprotectiveefectofAPSonchronicliverinjuryinrats.Methods:Thechronicliver
injurymodelofratswereinducedbycarbontetrachloride(CCl4).Tomeasurethechangesofactivityofserumalanineaminotrans-
ferase(ALT),aspartateaminotransferase(AST),albumin(ALB)andthehydroxyproline(HyP)inhepatictissue,andobservethepatho-
logicchangesofhepatictissue.Results:APScoulddecreasetheconcentrationofserumALT,AST,HAandHyP,increasethecon-
centrationofserumTPandALB,andimprovethepathologicchangeofhepatictissueinratssignificantly.Conclusion:APShas
protectivefunctionsonratswithchronicliverinjurysignificantly.
KEY WORDS APS;Carbontetrachloride;Chronicliverinjury
双氢杨梅树皮素（Ampelopsin,APS）是从藤茶[Am-
pelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang]中提取的
白色细针状结晶，是藤茶黄酮中含量较多的单体成分
之一[1]。目前研究发现，藤茶APS对CCl4、D-GalN所致
小鼠急性肝损伤有明显的保护作用[2]。本文采用CCl4
造模的方法研究APS对小鼠慢性肝损伤的保护作用，
现报告如下。
1材料
1.1药品
APS由中药化学教研室从藤茶提取分离，经高效
液相色谱仪测定，APS的曲线下面积为99.956%；联苯
双酯（浙江医药有限公司新昌制药厂，批号031209）。
1.2试剂
HyP试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号2004
0609）；CCl4（广东西陇化工厂，分析纯，批号20020054）；
ALT、AST试剂盒（上海科华-东菱诊断用品有限公司，
批号20030816）；TP、ALB试剂盒（上海科华-东菱诊断
用品有限公司，批号 20041102）；HA试剂盒（上海海
军医药研究所生物技术中心，批号20041001）。
1.3动物
昆明种小鼠，体重（20.0±2.0）g，雌雄各半，由广
西中医学院实验动物中心提供，合格证号：桂医动字
第11004号。
1.4仪器
高效液相色谱仪（Agilent1100series）；万分之一
克电子天平（德国赛多利斯，型号：BP211D）；倒置显微
镜（德国 LEICABMIRB）；80-2离心机（上海手术器
械厂）；半自动生化仪（德国）；座式自动电热压力蒸汽
[基金项目] 广西科技厅自然基金（桂科自0542100）
[作者简介] 郑作文，男，教授，硕士生导师，研究方向：中药药理。
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中国药物应用与监测 2008年第5卷第3期
表1APS对小鼠慢性肝损的保护作用.n=14,x±s
注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01
组别 剂量/g·kg-1 ALT/U·L-1 AST/U·L-1 TP/U·L-1 ALB/U·L-1 HyP/mg·g-1 HA/!g·L-1
正常对照组 - 68.6±14.7** 160.2±42.6** 68.6±14.7** 26.3±2.3** 1.0±0.1** 202.3±40.2**
模型组 - 290.3±60.9 382.9±87.0 63.2±4.2 23.9±2.0 1.9±0.2 387.7±47.6
阳性组 0.2 108.5±16.5** 241.2±58.6** 67.6±3.1** 25.4±0.9* 1.3±0.1** 294.1±46.1**
DHM高 0.4 207.5±36.7** 295.6±56.8** 71.8±5.8** 26.3±1.6** 1.3±0.1** 303.2±41.3**
DHM中 0.2 226.4±31.2** 327.9±56.5 70.4±6.2** 25.9±1.7** 1.5±0.2** 334.9±38.3*
DHM低 0.1 239.1±42.6* 364.8±80.9 69.3±5.0** 25.0±1.6 1.6±0.2** 378.8±38.9
论 著
灭菌器（上海申安医疗器械厂）；722光栅分光光度计
（上海第二分析仪器厂）；SZ-97自动三重纯水蒸馏
器（上海亚荣生化仪器厂）。
1.5统计学处理
各组数据比较均采用两组资料秩和检验的方法。
2方法[3]
2.1小鼠慢性CCl4肝损伤模型的建立
将CCl4溶解于新鲜花生油中制成25%的花生油
溶液，第1天给药时小鼠背部皮下注射25%CCl4花生
油溶液2mL·kg-1，以后每隔3d注射1次。禁食，不
禁水。
2.2动物分组与治疗
将小鼠随机分为6组，即正常对照组、模型组、联
苯双酯组、APS高、中、低剂量组。除正常对照组外，其
他5组均按2.1方法制备慢性肝损伤模型。正常对照
组和模型组给水，其余各组ig给予相应药物，给药容
积为0.02mL·g-1。每天1次，连续5周。于实验第5
周末眼眶静脉丛取血，取血前禁食12h，自由饮水，分
离血清并取肝脏样本，进行相关指标ALT、AST、HA、
HyP、TP、ALB值的测定。
2.3指标检测
2.3.1血清生化指标测定 采用连续监测法测定ALT、
AST、TP，采用溴甲酚绿法测定ALB。
2.3.2肝组织羟脯氨酸（HyP）含量的测定 末次给药
1h后处死小鼠，取肝组织加冷生理盐水制成10%肝
组织匀浆，取肝组织按HyP试剂盒说明书方法，采用比
色法测定HyP的含量。
2.3.3肝组织切片制作 末次给药1h后处死小鼠，取
肝大叶相同部位的一小块肝组织固定于10%福尔马
林，常规法制作组织切片，HE染色和胶原纤维染色后，
在光镜下观察肝细胞变性坏死程度、肝间质纤维增生
程度。
3结果
3.1APS对血清ALT、AST活性和血清TP、ALB、HA
含量及肝组织HyP含量的影响
与模型组比较，APS高、中、低剂量组可显著降低
血清ALT的活性（P<0.05~0.01）；高剂量组可降低血
清AST活性（P<0.01）；高、中、低剂量组可显著升高血
清 TP含量（P<0.01）；高、中剂量组可升高血清 ALB
含量（P<0.01）；高、中、低剂量组可显著降低肝组织
HyP含量（P<0.01）；APS高、中剂量组可显著降低血
清HA含量（P<0.05~0.01）。其抗慢性肝损伤的作用
与联苯双酯相当。
具体结果见表1。
3.2病理学检查（光镜观察）
正常对照组肝细胞结构正常，未见有脂肪变、肿
胀、纤维组织增生等明显的病理组织学改变。
模型组大部分肝组织间质有不同程度的纤维组织
增生，以汇管区为中心，随后延伸到小叶区，小叶结构
紊乱，形成大小不等的假小叶；肝组织间质有肝细胞
气球样变，因肿大的肝细胞压迫肝窦，肝窦变窄，纤维
组织可见有炎症细胞，肝细胞和汇管区的分界不清，
同时伴有肝细胞碎片状坏死。
与模型组比较，APS各剂量组小鼠肝组织病理损
伤程度明显减轻。APS高、中剂量组肝细胞肿胀和肝
纤维化程度明显减轻；APS低剂量组肝纤维化程度减
轻，肝细胞肿胀程度稍有减轻。
4讨论
CCl4致慢性肝损伤的主要机制是CCl4在肝细胞
内产生三氯甲基自由基，引起脂质过氧化以及直接的
膜溶解作用，使肝细胞坏死。CCl4可经肝内微粒体酶
活化生成自由基，通过脂质过氧化物作用损伤破坏肝
细胞，致使血清ALT、AST水平显著增高。
实验结果表明，小鼠慢性肝损伤实验动物模型建立
（下转第16页）
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（上接第13页）
成功。小鼠长期给予CCl4后，损伤的肝细胞进一步发
生纤维化，使肝脏中HyP含量升高。HyP是体内胶原
组织的主要成分，其含量的高低可直接反映肝纤维化
程度。模型组正常肝小叶结构破坏，有广泛的脂肪变
性，肝细胞血清TP、ALB含量的高低可反映肝脏合成
蛋白质的功能，ALB是肝细胞特异分泌的功能性蛋
白，肝细胞受损，合成蛋白质功能障碍，血清 ALB减
少。肝纤维化时，肝内主要增加的成分为胶原纤维，
HyP为胶原纤维所特有的氨基酸成分，其在肝中的含
量可反映胶原代谢的变化情况，与肝纤维化程度相平
行[4]。血清HA主要由肝内皮细胞摄取分解，当肝组织
损害时，对HA的降解减少，导致血清中 HA水平升
高，在肝纤维化时血清HA升高幅度与肝纤维化程度
相关[5]。血清HA能较好的反映肝纤维化的发生、发展
和预后。长期反复多次给予CCl4可使肝内结缔组织
异常增生形成肝纤维化，肝纤维化是慢性肝损伤的重
要病理特征，也是进一步向肝硬化发展的主要中间环
节。实验结果表明，APS可显著降低小鼠血清ALT和
AST的活性，提高TP和ALB含量，降低肝组织中HyP
和血清HA含量的作用，并能显著减轻肝组织的病理
变化损伤程度，使肝组织胶原纤维形成减少，提示APS
可能是通过保护肝细胞结构和功能的完整，促进肝功
能恢复，抑制胶原纤维合成或促进其降解而发挥抗慢
性肝损伤的作用。
本实验结果显示，APS对小鼠慢性CCl4肝损伤模
型具有很好的保护作用，明显减轻慢性肝损伤程度，
抑制肝纤维化的发展。尽管其作用机制还不清楚，但
APS毒性小、具有多种生物活性，有较好的临床应用前
景，可深入开发成为保肝护肝新药。
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（收稿日期：2008-01-21）
院内感染致病菌流行病学调查表明，其耐药性较
高，并存在多重耐药现象。ICU患者由于抵抗力低下，
医疗操作几率大，广谱抗菌药物应用广泛，导致ICU院
内感染不仅发病率高，而且耐药程度也大大高于其他
院内感染。
本研究中铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药率
均较高，其中亚胺培南、美罗培南均超过65%，氟喹诺
酮类超过60%，氨基糖苷类在50%左右；三代头孢中，
头孢哌酮与头孢他啶抗菌活性相差明显，可能与头孢
哌酮及碳青霉烯类药物过度应用有关，值得进一步研
究。该结果提示，抗菌药物轮作是解决细菌耐药问题
的一个手段。酶抑制剂复合制剂哌拉西林/他唑巴坦
较哌拉西林提高约10%，表明产酶不是铜绿假单胞细
菌耐药的主要机制。不动杆菌属是医院感染重要条件
致病菌，近年来临床分离率日益增多，并且呈现多重
耐药现象，其耐药机制复杂，包括所有四种常规的耐
药机制。本研究中，不动杆菌属对亚胺培南也出现一
定的耐药性，耐药率为15.22%，其主要机制可能是产
生碳青霉烯酶[4]。院内感染分离的革兰阳性致病菌中，
最重要的耐药菌是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，尤其
ICU中因感染所致的死亡率中有50%归因于MRSA或
凝固酶阴性链球菌[5]。由于ICU分离的MRSA往往对
多种抗菌药物耐药（不论是否为β-内酰胺类），万古霉
素和替考拉宁已成为治疗MRSA的一线治疗药物。本
研究分离的金黄色葡萄球菌中，仅1株为MSSA，23株
为MRSA，对绝大多数抗菌药物耐药率均在90%以上，
对四环素类药物耐药率相对较低，尤其对米诺环素耐
药率为21.74%。
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（收稿日期：2007-12-25）
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