全 文 ：·中药化学 ·
HPLC法测定沙漠嘎种子中两种二氢黄酮的含量
张媛媛 乔延江#
　张媛媛 ,女 ,硕士
#通讯作者:乔延江 ,博士 ,教授 ,博士生导师 , E-mail:yjqiao@ 263.net
(北京中医药大学中药学院 北京 100102)
摘要:目的 　建立沙漠嘎种子中两种二氢黄酮异樱花素和圣草酚 -7-甲醚的含量测定方法。
方法　采用 ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱(250mm×4.6mm, 5μm);柱温:30℃;流动相为乙腈
-0.1%甲酸水溶液(40∶60);流速:1mL/min;检测波长:288nm。结果　异樱花素和圣草酚 -7-甲
醚的平均回收率分别为 100.1%、99.8%, RSD为 0.82%、2.34%(n=6)。结论　本法操作简便 、
准确 ,可作为沙漠嘎种子的质量控制方法之一 。
关键词:沙漠嘎;异樱花素;圣草酚-7-甲醚;高效液相色谱法;含量测定
中图分类号:R284.1
DeterminationoftwoflavononesinseedsofArtemisiahalodendronTurcz.
byHPLC
ZHANGYuan-yuan, QIAOYan-jiang#
(SchoolofChinesePharmacology, BeijingUniversityofChineseMedicine, Beijing100102)
Abstract:Objective　 ToestablishaHPLC methodforthedeterminationoftwoflavonones,
isosakuranetinanderiodictyol-7-methylether, inseedsofArtemisiahalodendronTurcz..Method　A
ZORBAXEclipseXDB-C18 column(250 mm×4.6 mm, 5 μm)wasused.Themobilephasewas
CH3CN-0.1%CH3COOH(40∶60)withtheflowrate1.0 mL· min-1.Thedetectingwavelengthwas
288nmandthecolumntemperaturewas30℃.Results　Theaveragerecoveriesofisosakuranetinand
eriodictyol-7-methyletherwere100.1%(RSD=0.82%, n=6)and99.8%(RSD=2.34%, n=6)
respectively.Conclusion　Themethodissimpleandaccurate, andcanbeusedtocontrolthequalityof
seedsofArtemisiahalodendronTurcz..
Keywords:ArtemisiahalodendronTurcz.;isosakuranetin;eriodictyol-7-methylether;highpressure
liquidchromatography;quantitativedetermination
　　沙漠嘎原植物为菊科蒿属植物差把嘎蒿 Arte-
misiahalodendronTurcz.,别名沙蒿[ 1] ,具有止咳祛
痰平喘 、解表祛湿的功效 ,经临床实践证明对于慢性
支气管炎 、哮喘具有良好的疗效。其药用部位为枝
叶 ,但民间多用种子。同时沙漠嘎作为防风固沙的
保护植物 ,对其种子的深入研究具有重要意义 。目
前对于沙漠嘎种子的系统研究尚无报道 ,我们曾对
沙漠嘎种子祛痰平喘活性成分的研究进行追踪 ,发
现其有效部位为总黄酮 ,其中异樱花素和圣草酚-7-
甲醚含量较高 [ 3-8] 。为了深入研究沙漠嘎种子的药
效物质基础 ,控制其内在质量 ,我们首次建立了其有
效成分异樱花素和指标成分圣草酚-7-甲醚的高效
液相色谱测定方法 ,为沙漠嘎种子的新药研发提供
基础药学资料 。
1　仪器与试药
Agilent-1100高效液相色谱仪:包括四元泵 、
·58·
北京中医药大学学报
JournalofBeijingUniversityofTraditionalChineseMedicine　 　
第 31卷第 1期 2008年 1月
Vol.31 No.1 Jan.2008
自动进样器 、柱温箱 、二级管阵列检测器 、Agilent
chemstation;METTLERAE240型电子分析天平;
KQ-500B型超声波清洗器 。异樱花素 、圣草酚 -7-
甲醚对照品为自制 ,经光谱分析和 HPLC面积归
一化法测定纯度均在 98%以上 。乙腈为色谱纯 ,
水为娃哈哈纯净水过滤 ,其他试剂均为分析纯 。
沙漠嘎采自内蒙古哲里木盟奈曼旗 ,经中国
科学院沙漠研究所奈曼沙漠化研究站的赵学勇
教授和广州市同和南方医科大学中医系马骥教
授鉴定为菊科蒿属植物差把嘎蒿 Artemisiahalo-
dendronTurcz.。
2　方法与结果
2.1 对照品溶液的制备
精密称取异樱花素和圣草酚-7-甲醚对照品适
量 ,分别加入 80%乙醇制备成 0.045、0.055 g/L的
溶液作为对照品溶液 。
2.2 供试样品溶液的制备
取沙漠嘎种子粉末(过 40目筛)约 2 g,精密称
定 ,精密加入 50 mL80%乙醇 ,称重 ,超声提取 20
min,滤过 ,放冷 , 补足重量后再次滤过 ,续滤液以
0.45μm微孔滤膜过滤 ,作为供试品溶液。
2.3　色谱条件
色谱柱 EclipseXDB-C18 (250 mm×4.6 mm, 5
μm);流动相:乙腈 -0.1%甲酸水溶液(40∶60);流
速:1 mL/min;检测波长:288nm;柱温:30 ℃。在上
述色谱条件下异樱花素和圣草酚 -7-甲醚与其他成
分分离良好 ,结果见图 1。
2.4　标准曲线的绘制
精密吸取异樱花素对照品溶液 2.0、4.0、6.0、
8.0、10.0、12.0、14.0、16.0 μL按上述色谱条件进
样 ,测定峰面积(A)。以异樱花素色谱峰峰面积为
纵坐标 ,对照品进样量为横坐标 ,绘制标准曲线并进
行线性回归 ,得回归方程为 Y=2 465.5X-2.978 1,
r=0.999 9(n=8)。结果表明 ,异樱花素在 0.09 ～
0.72μg范围内与其色谱峰峰面积呈良好的线性
关系。
精密吸取圣草酚 -7-甲醚对照品溶液 1.0、2.
0、4.0、6.0、 8.0、 10.0 μL按上述方法得回归方
程为 Y=391 1X+1.446 8 , r=0.999 9(n=6)。
结果表明 ,圣草酚 -7-甲醚在 0.06 ～ 0.55 μg范围
内与其色谱峰峰面积呈良好的线性关系 。
2.5 精密度试验
取沙漠嘎种子粉末(过 40目筛)约 2g,精密称
A圣草酚-7-甲醚对照品色谱图　B异樱花素对照品色谱图
　C样品色谱图　1圣草酚-7-甲醚　2异樱花素
图 1　对照品与样品色谱图
定 ,按照 2.2项下方法制备供试品溶液 ,依法测定 ,
进样量 10 μL,连续进样 6次 ,测得异樱花素和圣草
酚-7-甲醚峰面积 RSD值分别为 0.57%、1.70%,结
果证明仪器精密度良好 。
2.6 稳定性试验
取沙漠嘎种子粉末(过 40目筛)约 2 g,精密
称定 ,按照 2.2项下方法制备供试品溶液 , 分别
在制备后 0、4、8、12、16、20、24 h依法测定 ,进样
量 10 μL,异樱花素和圣草酚 -7-甲醚峰面积 RSD
值分别为 1.17%和 1.46%。结果表明样品溶液
在 24 h内稳定 。
2.7 重复性试验
精密称取 2 g沙漠嘎种子粉末(过 40目筛)6
份 ,按照 2.2项下方法制备供试品溶液 ,依法测
定 ,得异樱花素和圣草酚 -7-甲醚峰面积 RSD值
分别为 2.20%和 1.38%。结果表明方法的重复
性良好 。
2.8 回收率试验
精密称取 2g已知含量的沙漠嘎种子粉末(过 40
目筛)6份 ,适量加入对照品溶液 ,按照 2.2项下方法制
备供试品溶液 ,依法测定 ,计算回收率 ,结果见表 1、
表 2。
·59·第 1期 张媛媛等　HPLC法测定沙漠嘎种子中两种二氢黄酮的含量
表 1 异樱花素回收率试验结果
样品量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /% RSD/%
1.590 0 0.765 0 2.372 5 100.7
1.597 5 0.765 0 2.380 3 100.7
1.635 0 1.530 0 3.186 5 100.7 100.1 0.82
1.665 0 1.530 0 3.184 1 99.7
1.597 5 2.295 0 3.842 0 98.7
1.537 5 2.295 0 3.830 2 99.9
表 2　圣草酚-7-甲醚回收率试验结果
样品量
/mg
加入量
/mg
测定量
/mg
回收率
/%
平均回
收率 /% RSD/%
0.848 0 0.405 4 1.218 3 97.2
0.852 0 0.405 4 1.221 5 97.1
0.872 0 0.810 8 1.728 8 102.7
0.888 0 0.810 8 1.727 8 101.7 99.8 2.34
0.852 0 1.216 2 2.311 1 99.4
0.820 0 1.216 2 2.309 7 100.9
2.9 样品测定结果
分别精密称取 2批样品 ,按照 2.2项下方法制
备供试品溶液 ,计算异樱花素和圣草酚 -7-甲醚的含
量 。结果见表 3。
表 3 样品含量测定结果(n=3)
指标成分 批号 含量 /(mg/g) RSD/%
异樱花素 1 0.75 1.17
2 0.66 2.01
圣草酚-7-甲醚 1 0.40 1.69
2 0.40 0.59
3　讨论
供试品溶液制备方法的考察:考察了回流提取
3h与超声 30min2种方法 ,结果无显著差异。进一
步又考察了超声 10、20、30 min后异樱花素和圣草
酚 -7-甲醚的含量 ,经测定 ,超声 20 min已经提取完
全 , 30 min与 20 min无显著差异 , 故采用超声 20
min的提取方法 。
检测波长的选择:分别将异樱花素和圣草酚-7-
甲醚对照品溶液进样分离后 ,利用 DAD检测器在 200
～ 400nm扫描其吸收光谱 , 2种二氢黄酮均在 288nm
处有最大吸收 ,因此选定 288 nm作为检测波长。
色谱条件的选择:考察了 DiamonsilTMC18色谱柱
和 ZORBAXEclipseXDB-C18色谱柱的谱图特征 ,共
选择了 3种流动相系统:甲醇 -0.2%磷酸水溶液;乙
腈 -水;乙腈 -0.1%甲酸水溶液。结果表明 , ZORB-
AXEclipseXDB-C18色谱柱 、乙腈 -0.1%甲酸水溶液
方法为最好 , 2种二氢黄酮与其他成分可以得到较好
的分离。峰纯度检查 ,纯度符合要求 。
沙漠嘎的同科同属植物沙蒿 Artemisiadesertorum
Spreng.,为食用胶的提取原料 ,其形态与沙漠嘎极易
混淆 ,以上述方法对沙蒿种子进行了分析 ,发现沙蒿
中也含有异樱花素和圣草酚-7-甲醚 ,含量分别为 0.
18、0.10mg/g,为沙蒿的进一步开发提供参考。
本文首次建立了沙漠嘎种子药效成分异樱花素
和指标成分圣草酚 -7-甲醚的反相高效液相色谱测定
方法 ,并对精密度 、稳定性 、重复性和回收率进行了考
察 ,都得到良好结果。证明此法可作为控制沙漠嘎种
子内在质量的指标之一 ,为该药材的进一步开发奠定
了基础。
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(收稿日期:2007-06-04)
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